原发性肝癌研究进展2012-PPT文档资料

hap基因
肝癌细胞DNA 整合侧
HBVDNA
2.HBV对肝细胞的反式激活作用
HBV感染期间，产生的一种或多种病毒 基因产物，结合到肝细胞DNA的调控位点， 以改变肝细胞蛋白表达的方式参与肝细胞的 转化和癌变过程。
HBV-DNA在肝细胞中的整合，为病毒基 因产物的表达提供了模板作用，使之能持续 不断地产生病毒基因产物,持续不断地反式激 活肝细胞癌基因,其中重要的是HBx基因。
HBV-DNA含有4个不同的启动子和2个增强子, 任何 一个区段整合在肝细胞基因调节位点, 都 可以使该基因表达失控。 如S基因的启动子片 段整合到RAB-ß受体基因的启动子区段, 使 RAB-ß高表达。
HBV-DNA整合时可发生基因重排。常发生病 毒DNA短肽链羧基末端部分丢失, 重排的短肽 链中一部分有促进肝细胞原癌基因(myc或fos) 转录的功能。
肝细胞癌 胆管细胞癌 混合型肝癌
肉眼分型：
早期肝癌（小肝癌）---φ＜3cm，或结节数目≤2 个，其直径总和＜3cm。
中晚期肝癌（1）巨块型（2）多结节型（3）弥 漫型。
四、肝癌的病理诊断
（一）肝细胞癌（HCC）
1 概述
人体最常见的恶性肿瘤；男性多见， 可发生于任何年龄，高发年龄30～ 50岁。
临床常表现右上腹疼痛、腹水、黄 疸及肝脏肿块。
血清AFP常升高。
2 巨检
巨块型：单个巨大结节，直径常>10cm，质 硬，切面可见出血坏死。
结节型：最常见，为多个结节，直径常为数 毫米至数厘米，肿瘤周围组织常为肝硬化。
弥漫型：肿瘤呈无数小结节弥漫分布于肝脏。 早期肝癌（小肝癌）：单个癌结节直径<3cm
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➢ 免疫组化表型
Hep Par1：几乎所有HCC均阳性，认为其敏感性 和特异性位于各种肝细胞性标记物之首。
CK-Pan：常阴性，CK8和CK18可阳性，CK7部分 阳性（约24%）。
AFP：出现约1/4的成人肝细胞癌，阳性较弱。
CEA：肝细胞癌中毛细胆管阳性。
Hep Par1
AFP
4. 特殊组织类型
✓ cyclinA异常表达或高表达:cyclinA/cdk形成→ Rb 磷酸化→细胞通过G1/S期→细胞增殖。
▪ hap基因表达
肝癌细胞DNA与HBV-DNA整合一侧有147bp的
DNA序列的hap基因，它与erb-A基因及类固醇 激素受体的DNA序列有同源性。分子杂交实验 证明,hap基因可转录一条长2.5kb的mRNA,正常 肝和胚胎肝细胞均无hapmRNA表达. 推测,hap 基因编码的产物可能是一个新的配体反应性调 节蛋白,在HCC中的异常表达可能与癌变过程有 关, 有待进一步研究
2.巨检
肿瘤可起源肝内胆管、肝门部大肝管及其 分支肝管；
肿瘤灰白、质硬，单发或多发。
3.镜检
常为高分化至中分化管状腺癌，偶尔瘤细胞呈 条索或乳头状；
具有丰富的纤维间质； 腺腔由立方、柱状、多形性上皮细胞构成，核
圆形，有小核仁； 可沿胆管壁及神经浸润生长； 癌细胞常分泌粘液，有时可见印戒细胞； 可出现局灶磷化，或腺鳞癌； 偶尔出现梭形细胞肉瘤样成分或破骨细胞样区
细胞学类型
肝细胞样细胞：最常见，形态类似于肝细胞， 核/浆比例大，核呈空泡状，核仁明显，胞浆 比正常的肝细胞更具嗜碱性，肝细胞之间常 见毛细胆管。
多形性细胞：具有多核或奇异形核，核深染，可 形成巨细胞，小梁结构不明显，可成片或形成实 性结节。
透明细胞：胞浆透亮，多数是由于含有大量的 糖原或脂滴所致，常成片存在或成板状排列， 有时与转移性透明细胞癌（如肾透明细胞癌） 难以区别。
反式激活病毒基因，促进病毒的复 制和蛋白的表达。
与肝细胞DNA整合,并激活c-myc,fos 基因转录和过度表达作用。
x基因转染3T3细胞,使3T3细胞增殖率 增加,并成瘤。
携带x基因的转基因鼠可发生肝癌。 3′截断的preS(或S)基因产物也具有反
式激活c-myc作用。
在肝癌发生过程中，HBVx基因及 其产物HBxAg，与宿主肝细胞DNA 整合及异常表达后，反式激活癌基 因可能是肝细胞恶性转化的关键， 但缺乏直接致癌的分子生物学证据。
(B链)
蛋白质 DNA
病毒DNA
蛋白质
1. HBV对肝细胞顺势激活作用
研究显示：HBV基因组中不含有明确的癌 基因(oncogene), 基本上无明确的致癌作 用。 HBV 是DNA病毒, HBV-DNA整合到宿主 肝细胞染色质DNA中是癌变的关键(80% 以上)，且发生在肝细胞癌变的前期。原 位杂交和基因分析显示肝癌细胞和慢性 HBsAg携带者肝细胞基因组中可检测到 HBVDNA。
X基因:可以编码1.7KD的多肽HBxAg 它是肝癌中稳定结合的DNA片 段，整合的HBV DNA片段中C基因和S 基因缺乏情况下，X基因仍存在，是反 式激活子(transactivator)。
X蛋白可与p53蛋白直接结合，而破 坏P53的功能，即使P53并未发生突变， 亦能使细胞核失去正常调节功能。
病毒基因整合在抑癌基因区, 使抑癌基因失活. 已发现HBV基因整合在17号染色体短臂。
HCC组织内HBV-DNA整合在细胞周期素A (cyclinA)基因内, 导致 cyclinA表达异常
✓ 正常情况：p15, p16, p21, p27(细胞周期素依赖性 蛋白激酶抑制物)→ 竞争抑制cyclinA/cdk 复合物 形成→ Rb去磷酸化 → 细胞阻滞于G1/S期。
纤维板层癌：主要见于青年人（年龄多<25 岁），血清AFP很少升高，很少有HBV感染， 无肝硬化，预后较好（5年生存率约为50%）； 肿瘤多位于肝左叶，边界清，单发。组织学 特点为癌细胞大，多角形，嗜酸性，胞浆内 常有明显的细颗粒（线粒体）；癌细胞成片 状、巢状或条索状排列，周围有丰富的纤维 间质，呈板层状包绕于癌细胞巢。
二、肝癌的病因
肝炎病毒：HBV、HCV。
HBV是亚洲国家最主要的因素；HCV是西方 国家终末期肝病的首位原因。在东南亚地区 HBV合并HCV、HIV感染尤为明显。
酗酒。 化学致癌物。 非酒精性脂肪性肝炎（代谢综合症）亦
是肝癌的高风险因素。 吸烟、肥胖和糖尿病。
三、肝癌的类型
组织学类型：
原发性肝癌研究进展
一、肝癌的发病状况
流行病学研究显示：
全球50％肝癌发生在我国，其死亡率随不同 地域而变化。江苏和广西部分地区男性肝癌 死亡率达2％，女性0.3％；岱山群岛男性肝 癌死亡率高达10％。
美籍华人肝癌发病率高于白人和黑人，但低 于中国本土和新加坡华人。
死亡率高的地区发病年龄亦较早。
（二）HCV感染与肝癌
丙型肝炎病毒（HCV）是与肝细胞 癌（HCC）发生密切相关的外部致 病因子。全球约有1.7亿的HCV感染 者和病毒携带着，可能发生肝硬化和 HCC。
• HCV的基因组结构：
由3个结构基因（C，M和E）和5个 非结构基因（NS1，NS2， NS3，NS4和 NS5）构成。
C M E NS1 NS2
高分化HCC，CD34标 记
胆管癌
有腺管样结构，腺腔由立方或柱状、多 形性上皮细胞构成；常分泌粘液。
免疫组化有助于鉴别诊断：CK-Pan、 CEA、EMA阳性；CK19常阳性，CK7 大部分阳性，CA19-9在胆管癌中阳性率 约40%。CK19和CA19-9在HCC中阴性。
CK19
转移性癌
肝细胞癌
见前
五、肝癌发生的机制
（一）乙型肝炎病毒感染与肝癌
HBV感染与肝癌发生具有明显 相关性。
对HBV致癌机理的两种解释:
❖ 顺势激活作用 ❖ 反势激活作用。
顺势激活作用(cisactivation)
某一DNA序列对宿主DNA上游或下游基因激活或 抑制,调节作用在同一条DNA链上, 对不同DNA链 则无作用。
HCC，小梁状（板状）型，细胞大于3层
假腺（腺泡）型：可由于肿瘤组织中心细 胞变性或实性小梁崩溃所致，这些假的腺 腔中为细胞碎屑、吞噬细胞及渗出物。腺 腔样结构亦可由于癌细胞之间的小胆管扩 张而成，其内含胆汁。
o 硬化型：常见于肿瘤放化疗或肝梗死之后，肿瘤 中有丰富的纤维性间质分隔，肿瘤呈条索状。以 往所谓的“硬化型肝细胞癌”部分为肝细胞癌， 部分为肝内胆管癌，故不能作为一种病理组织学 亚型。
或结节数目不超过2个，直径总和不超过3cm， 界限清楚，切面常无出血坏死。
巨块型 多结节型 弥漫型
3 鏡检
组织学类型
小梁状（板状）型：最常见，肿瘤细胞 呈不同厚度（3层以上）的条索状排列， 间隔血窦，血窦内衬扁平内皮细胞；有 时血窦扩张形成大的血管腔隙。有时瘤 细胞呈多板状排列或生长拥挤，血窦不 明显，表现为实性（团块状）。
DNA DNA
DNA
宿主 DNA 病毒DNA
反式激活作用(transactivation )
某一个基因通过其表达的RNA和蛋白质产物, 反过来作用该基因或其他基因的启动子或增 强子等序列,而发挥调节(激活或抑制)作用.故 其激活或抑制作用可在同一条DNA链上,也 可在不同的DNA链上。
(A链)
蛋白质 DNA
日本学者用HCVNS3转染NIH3T3细胞，发 现NS3蛋白有转化活性，致细胞出现恶性表 型，接种裸鼠形成肿瘤。
假腺型及透明细胞型肝细胞癌要与转移性腺 癌及肾或肾上腺癌鉴别，转移性腺癌常缺乏 肝细胞特点及血窦结构。
免疫组化：Hep Par1、AFP、CK8、CK18、 CK7、CK20、villin 、CAM5.2，抑制素和 Melan-A等。
透明细胞型肝细胞癌与转移性肾透明细胞癌： 常用抗体为Hep Par1和AFP，肝细胞癌与肾 上腺皮质癌：常用抗体为Hep Par1。
NS NS
NS3
4a 4b
NS5
结构基因
非结构基因
1. HCV的致癌性
意大利Alberti等认为HCV本身有直接致癌 能力。
HCV核心蛋白和NS5蛋白具有转录活性，可下调 P53功能；可诱导HCV感染肝细胞的氧化应激， 调节细胞凋亡。
HCV核心转基因鼠可发生肝癌。
HCV感染较HBV更发生慢性肝炎和肝硬化。
临床检查
（二）肝内胆管癌
（intrahepatic cholanglocarcinoma）
1. 概述
发病率远低于肝细胞癌； 肿瘤发生与肝硬化无直接关系，但与先天性
肝内胆管扩张、先天性肝纤维化、肝脏寄生 虫（华支睾吸虫、血吸虫）感染、接触放射 造影剂或摄入合成类固醇药物有关，亦可伴 发肝内结石； 发病年龄多为60岁以上的老年人； 临床表现常为腹部疼痛、体重减轻、黄疸； AFP水平常在正常范围。
细胞。
4.免疫组化表型
CK-Pan、CEA、EMA、CK7、CK20、 CK19、CA19-9阳性
AFP、Hep Par1阴性
CK7
5.鉴别诊断
转移性腺癌
鉴别常困难，要联系临床资料； 邻近的胆管常缺乏异型增生等癌前病变或
原位癌； 免疫组化标记对鉴别诊断十分重要，常标
记CK7、CK19、CK20、CA19-9、villin 等。胃肠道转移性腺癌常表达villin 、 CK20，而肝内胆管癌CK7、CK19常阳性。
其他细胞：如梭形细胞、类癌样细胞。肝细胞癌 中有时可见部分肿瘤细胞呈梭形，与上皮成分混 杂。若肿瘤完全由梭形细胞组成，则可能不是肝 细胞来源。
特殊染色及免疫组化
➢特殊染色 银染色：有助于显示血窦轮廓，与 正常或肝硬化相比，常缺乏网状结 构。 PAS染色：部分胞浆内包涵体（球 形玻璃样小体）阳性，富含糖原的 透明细胞阳性。
▪ HBV-DNA整合缺乏明显特异性位点, 不 同病例 HBV-DNA整合致肝细胞后,引起 宿主肝细胞DNA结构的改变都不尽相同: 基因移位; 基因重排等 。
▪ 不同病例, 病毒基因整合的类型不同:单克 隆位点的整合和由于长期病程中不断有 病毒基因整合，故更多的是多克隆位点 的整合。
HBV-DNA整合与肝癌发 生关系的可能机制
5.鉴别诊断
肝细胞腺瘤
少见；绝大多数为女性，与口服避孕药密切 相关，一般不伴有慢性肝病。
肿块常位于肝脏表面，多为单发，直径常 >10cm，边界清，有包膜，无卫星结节；切 面灰黄，棕褐色。
细胞分化良好，无异型；2-3层肝细胞板； 无浸润性生长，有出血，但坏死少见，肿块 周围为正常肝组织。
肝腺瘤