云南汉族人群CD80基因多态性与宫颈癌发生发展的相关性研究_李传印
IL-10-819位点基因多态性与汉族人群重度慢性牙周炎易感性相关性的研究
IL-10-819位点基因多态性与汉族人群重度慢性牙周炎易感性相关性的研究唐燕;章锦才;张蕴惠【期刊名称】《广东牙病防治》【年(卷),期】2004(12)1【摘要】目的探讨IL-10启动子区基因多态性与重度慢性牙周炎易感性的关系.方法收集142名重度慢性牙周炎患者和81名健康对照者的颊粘膜拭子,提取DNA,采用ASO-PCR方法检测IL-10-819位点基因多态性,比较重度慢性牙周炎患者和健康对照组中等位基因频率和基因型分布.结果 IL-10-819C/T等位基因频率和基因型分布在患者和对照组之间差异无显著性(OR=1.377,P=0.122＞0.05).结论 IL-10-819位点基因多态性与汉族人群重度慢性牙周炎遗传易感性无相关关系.【总页数】3页(P12-14)【作者】唐燕;章锦才;张蕴惠【作者单位】四川大学华西口腔医学院,四川,成都,610041;广东省口腔医院;四川大学华西口腔医学院,四川,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】R78【相关文献】1.维生素D受体Taq Ⅰ位点单核苷酸多态性与重度慢性牙周炎易感性的相关性[J], 王春先;阎玉霞;章锦才;赵红宇;范卫华;肖立民;谢宝仪;孙书昱2.VDR基因TaqⅠ位点单核苷酸多态性与宁夏回汉人群中重度慢性牙周炎易感性的相关性 [J], 张庆;彭明勇;马敏3.人类白细胞抗原DQB1*0602位点基因多态性与汉族人重度慢性牙周炎易感性关系的研究 [J], 李晓峰;杨爱玲;章锦才4.环氧合酶-2 8473 T/C位点基因多态性与中国汉族人群溃疡性结肠炎易感性的相关性研究 [J], 杨利萍;高翔;胡品津;吴开春;郭长存;张永国;李汀;张欣;袁东红;曹倩;姒健敏5.HLA-DRB_1*1501位点基因多态性与重度慢性牙周炎易感性的相关关系研究[J], 张韶君;杨爱玲;章锦才;张蕴惠;唐燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
云南汉族人群LMP基因多态性与丙型肝炎病毒慢性感染的相关性解析
㊃临床遗传学论著㊃云南汉族人群LMP基因多态性与丙型肝炎病毒慢性感染的相关性李彤㊀刘城秀㊀姚宇峰㊀俞建昆㊀史荔㊀沈云松650032昆明,云南省第一人民医院,昆明理工大学附属昆华医院(李彤㊁沈云松);650118昆明,中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室(刘城秀㊁姚宇峰㊁俞建昆㊁史荔)通信作者:沈云松,Email:shen y unson g666@DOI:10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2016.06.013㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀探讨低分子量蛋白酶体(low molecular wei g ht p ol yp e p tide,LMP)基因多态性与丙型肝炎病毒(he p atitis C virus,HCV)慢性感染的相关性㊂方法㊀选择云南地区汉族人群HCV慢性感染患者427例,健康对照者412名,采用Ta q Man探针基因分型方法对LMP2基因单核苷酸多态性(sin g le nucleotide p ol y mor p hism,SNP)rs1351383㊁rs17587㊁rs2127675和LMP7基因SNPrs2071543进行基因分型,并构建单倍型,统计LMP2和LMP7多态性位点的等位基因频率与基因型频率㊁单倍型频率,分析SNPs及单倍型与HCV慢性感染的相关性㊂结果㊀病例组和对照组LMP2基因rs1351383和rs2127675的等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05),rs1351383/rs17587/rs2127675单倍型A-G-A和C-G-G差异有统计学意义(P<0.05);其他位点基因型㊁等位基因型㊁单倍型频率在病例组和对照组中差异无统计学意义(P>0.05)㊂结论㊀在云南汉族群体中,LMP2基因SNP rs1351383C等位基因和rs2127675G等位基因可能是HCV慢性感染的易感因素,rs1351383/rs17587/rs2127675单倍型A-G-A可能是HCV慢性感染的保护因素,单倍型C-G-G可能是HCV慢性感染的危险因素㊂ʌ关键词ɔ㊀丙型肝炎病毒;㊀慢性感染;㊀单核苷酸多态性;㊀LPM2基因;㊀LMP7基因基金项目:国家自然科学基金(81160197);吴阶平医学基金(320.6750.13395)Association of LMP g ene p ol y mor p hisms with chronic HCV infection amon g ethnic Han p o p ulation fromYunnan㊀Li Ton g,Liu Chen g xiu,Yao Yu f en g,Yu J iankun,Shi Li,Shen Yunson gFirst P eo p le s Hos p ital o f Yunnan Province,A ff iliated Kunhua Hos p ital o f Kunmin g Universit y o fScience and Technolo g y,Kunmin g,Yunnan650032,China(Li T,Shen YS);Institute o f MedicalBiolo g y,Chinese Academ y o f Medical Sciences&P ekin g Union Medical Colle g e,Yunnan Ke yLaborator y o f Vaccine Research&Develo p ment f or Severe In f ectious Diseases,Kunmin g,Yunnan650118,China(Liu CX,Yao YF,Yu J K,Shi L)Corres p ondin g Author:Shen Yunson g,Email:shen y unson g666@ʌAbstractɔ㊀Ob j ective㊀To assess the association of sin g le nucleotide p ol y mor p hisms(SNPs)of the low molecular wei g ht p ol yp e p tide(LMP)g ene with chronic he p atitis C virus(HCV)infection amon g ethnicHan p o p ulation from Yunnan.Methods㊀A total of427p atients with chronic HCV infection and412health ycontrols were recruited.SNPs rs1351383,rs17587and rs2127675from the p romoter re g ion of the LMP2g ene and rs2071543from the p romoter re g ion of the LPM7g ene were g enot yp ed usin g a Ta q Man p robe.The ha p lot yp es were constructed.Fre q uencies of various alleles,g enot yp es and ha p lot yp es of the selectedSNPs were calculated,and their association with chronic HCV infection was anal y zed.Results㊀Thefre q uencies of rs1351383and rs2127675alleles of the LMP2g ene,as well as the A-G-A and C-G-Gha p lot yp es of the rs1351383/rs17587/rs2127675loci,had differed si g nificantl y between the two g rou p s(P<0.05).Conclusion㊀The C allele of the rs1351383locus and G allele of the rs2217675locus of theLMP2g ene ma y be susce p tible factors for chronic HCV infection amon g ethnic Han p eo p le from Yunnan.The A-G-A ha p lot yp e of the rs1351383/rs17587/rs2127675loci ma y confer a p rotective effect,while the C-G-G ha p lot yp e ma y be a susce p tible factor for chronic HCV infection in this p o p ulation.万方数据ʌKe y wordsɔ㊀He p atitis C virus;㊀Chronic infection;㊀Sin g le nucleotide p ol y mor p hism;㊀LMP2g ene;㊀LMP7g eneFund p ro g ram:National Natural Science Foundation of China(81160197);Wu Jie p in g Medical Foundation(320.6750.13395)㊀㊀丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒(he p atitis C virus,HCV)感染导致的传染性疾病,主要传播方式为血液传染[1]㊂约80%的患者在HCV感染后因不能及时清除病毒而发展为慢性丙型肝炎,而后者也是肝硬化㊁肝细胞癌的主要致病原因之一[2]㊂在我国,丙型肝炎感染的人数已经超过5000万人,在世界范围内属于中高度感染地区[3]㊂低分子量蛋白与基因表达酶体(low molecular wei g ht p ol yp e p tide,LMP)又称为β型蛋白酶体亚单位(p roteasome subunit beta,PSMB),由LMP2 (PSMB9)和LMP7(PSMB8)两个亚单位组成[4],参与内源性抗原加工,其蛋白可将内源性抗原降解为5~15个氨基酸的短肽,以便更好地与人类白细胞抗原分子(human leucoc y te anti g en,HLA)相结合[5]㊂LMP启动子基因某些位点的突变,可能会造成LMP基因的表达丢失或下降,从而导致蛋白酶解功能降低,使HLA-I类分子表达下调,最终影响T淋巴细胞的正常免疫应答和免疫监视功能[6]㊂近年来,有研究者报道提示LMP基因的多态性与丙型肝炎病毒感染存在关联,但由于种族和人群的差异,其结果并不完全一致[7-8]㊂我们选择云南地区汉族人群HCV慢性感染者及正常对照人群的LMP2基因单核苷酸多态性(sin g le nucleotide p ol y mor p hism, SNP)位点rs1351383(A>C),rs17587(G>A), rs2127675(A>G)和LMP7基因单核苷酸多态性位点rs2071543(G>T)进行分型比对,探讨其基因型㊁等位基因及单倍型与慢性HCV感染的遗传易感性是否存在关联㊂1㊀对象与方法1.1㊀对象㊀选择427例HCV慢性感染者作为病例组,按照中华医学会肝病学分会和传染病与寄生虫病学分会2011年制定的‘丙型病毒性肝炎防治指南“确定HCV感染,实验学检查指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)㊁谷草转氨酶(as p artate transaminase,AST)㊁丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)㊁丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)等检测阳性,并排除其他肝炎的患者㊂选择健康个体412名为对照组㊂健康对照的纳入标准为HCV诊断及实验学检查指标ALT㊁AST㊁抗HCV㊁HCV RNA等正常㊂病例组平均年龄44.41岁,对照组平均年龄44.08岁;病例组男性230例,女性197例;对照组男性220例,女性192例,两组间性别比例和年龄分布差异无统计学意义(P>0.05)㊂所有参加者均是为居住于云南地区的彼此无血缘关系汉族个体㊂本研究获得相关组织部门的批准,研究对象均签署了知情同意书㊂1.2㊀样品处理㊀采集空腹静脉血5mL,用EDTA或肝素抗凝,使用Ax y Pre p血基因组DNA小量试剂盒(康宁生命科学吴江有限公司)提取DNA㊂1.3㊀LMP2㊁LMP7基因SNP位点基因分型㊀采用实时荧光定量PCR法进行SNP分型,由美国A pp lied Bios y stems公司定制合成检测rs1351383(A>C), rs17587(G>A),rs2127675(A>G),rs2071543(G> T)位点的引物及Ta q Man探针,针对每个SNP位点所设计的2条探针分别用VIC和FAM荧光标记㊂罗氏Li g htC y cler480实时荧光定量PCR仪检测SNP 位点㊂PCR反应体积为5μL,反应条件为:95ħ10 min预变性,92ħ15s变性,60ħ1min退火,共40个循环,40ħ5min长延伸㊂以3个已知基因型(野生纯合子㊁突变纯合子㊁杂合子)的标准样品作为对照㊂应用罗氏Li g htC y cler480基因分型软件LCS4801.5.1.62进行结果分析和基因分型㊂同时,针对各个SNP 位点,应用DNASTAR软件设计4对引物,对Ta q Man分型结果进行测序验证㊂引物合成及PCR 产物测序送由上海生工生物技术有限公司完成㊂1.4㊀统计学分析㊀Hard y-Weinber g平衡检验样品的代表性㊂T检验检测对照组和病例组年龄是否有差异㊂χ2检验检测病例组和对照组性别以及LMP2㊁LMP7基因启动子SNP位点等位基因和基因型频率是否有差异(P<0.05认为有显著差异)㊂SHEsis软件程序计算连锁不平衡,构建LMP2基因启动子区域的3个SNP位点的单倍型[9-10]㊂常用D 表示,D 值为0时,连锁完全平衡;D 值为1时,连锁完全不平衡;D >0.8时,认为存在强连锁㊂2㊀结果2.1㊀研究对象的基本特征㊀病例组年龄为(44.41ʃ12.79)岁,对照组年龄为(44.08ʃ9.50)岁;病例组男性230(53.86%)例,女性197(46.14%)例;对照组男性220 (53.4%)例,女性192(46.6%)例㊂2组间的性别比例和年龄分布差异无统计学意义(P>0.05)(表1)㊂2.2㊀LMP2和LMP7多态性位点在病例组和对照组万方数据表1㊀选取样本基本信息比较临床特征年龄(岁)男性女性病例组n(%)44.41ʃ12.79230(53.86%)197(46.14%)对照组n(%)44.08ʃ9.50220(53.40%)192(46.60%) P值0.6070.867中的等位基因频率与基因型频率㊀LMP2基因3个位点SNP rs1351383(A>C)㊁rs17587(G>A)㊁rs2127675(A>G)㊁LMP7基因1个位点SNPrs2071543(G>T)基因型分布在病例组和对照组中均符合Hard y-Weinber g平衡(P>0.05)㊂其中rs1351383(A>C)和rs2127675(A>G)的等位基因频率在病例组和对照组中的差异有统计学意义(P< 0.05),其余两个位点等位基因和基因型频率的差异则均无统计学意义(表2)㊂2.3㊀LMP2多态性位点在病例组和对照组中的连锁不平衡检测结果㊀LMP2基因启动子区域3个多态性位点的连锁不平衡分析显示rs1351383(A>C)㊁rs17587(G>A)㊁rs2127675(A>G)之间存在强连锁不平衡㊂rs1351383(A>C)和rs17587(G>A)之间的D 值为0.994,r2值为0.404;rs17587(G>A)和rs2127675(A>G)之间的D 值为0.991,r2值为0.593;rs1351383(A>C)和rs2127675(A>G)之间的D 值为0.976,r2值为0.645㊂2.4㊀LMP2多态性位点在病例组和对照组中的单倍型构建及其频率㊀根据LD结果构建LMP2基因的3个SNP位点的单倍型,结果显示,单倍型A-G-A和C-G-G的频率在病例组和对照组中的分布有统计学意义(P<0.05)(表3)㊂3㊀讨论HCV属于黄病毒科,病毒体呈球形,直径小于80 nm(在肝细胞中为36~40nm,在血液中为36~62 nm),为单股正链RNA病毒,基因组全长约9.6kb㊂全球约有1.7亿人感染HCV㊂在我国健康人群抗HCV阳性率为0.7%~3.1%㊂由于HCV病毒本身的易变性和人体免疫功能等方面的因素,一经感染很难有效清除,致使80%以上患者都会发展为慢性持续感染[11]㊂适应性免疫应答是宿主控制病毒感染的重要手段㊂作为抗原加工和呈递的中枢,人类白细胞抗原(human leukoc y te anti g en,HLA)起着核心作用㊂LMP基因位于HLA-Ⅱ类基因区,由LMP2和LMP7组成[12]㊂本研究共选择了LMP2基因上的rs1351383㊁rs17587㊁rs2127675三个SNP位点和LMP7基因上的rs2071543一个SNP位点,这四个位点均位于人类染色体6p21.3区,其编码产物与内源性抗原的处理有关㊂抗原必须先经LMP水解并加工成短肽段才能被转运至内质网腔中,并与该处合成的HLA-I类分子㊁β2微球蛋白相结合成为一个牢固的三联体,在细胞表表2㊀LMP2和LMP7基因4个SNP位点的基因频率及等位基因频率分布基因SNP位点组别基因型频率P值等位基因频率P值OR值(95%CI) LMP2rs1351383AA AC CC A C病例组0.3210.4890.1900.0740.5660.4340.0440.818对照组0.3620.5050.1330.6130.386(0.673-0.994) rs17587GG AG AA G A病例组0.6070.3350.0590.6070.7740.2260.666 1.052对照组0.6090.3470.0440.7830.217(0.836-1.325) rs2127675AA AG GG A G病例组0.4310.4450.1240.0540.6530.3470.0200.784对照组0.4930.4270.0800.7060.294(0.638-0.963) LMP7rs2071543GG GT TT G T病例组0.6840.2880.0280.3700.8280.1720.298 1.141对照组0.6630.2910.0460.8080.192(0.890-1.463)表3㊀LMP2基因3个SNP位点单倍型频率在病例组和对照组中的比较(%)单倍型病例组对照组P值OR值(95%CI)A-A-A0.00(0.000) 1.28(0.002)A-A-G0.01(0.000)0.01(0.000)A-G-A478.59(0.560)501.37(0.608)0.0410.844(0.703-1.014)A-G-G 4.40(0.005) 3.33(0.004)C-A-A0.00(0.000)0.88(0.001)C-A-G192.99(0.226)176.82(0.215)0.585 1.067(0.846-1.344)C-G-A79.41(0.093)78.46(0.095)0.8680.973(0.701-1.350)C-G-G98.60(0.115)61.83(0.075)0.005 1.607(1.151-2.243)万方数据面表达提呈,最终被CD8+T淋巴细胞识别,引发一系列有效的免疫应答[13]㊂因此,LMP基因突变将直接导致HLA-I类分子不能负载抗原肽,使HLA-I类分子表达下调[14]㊂已有研究表明,LMP2㊁LMP7基因的多态性与许多疾病相关[15-16]㊂但是在不同地区㊁不同群体中结果具有明显差异性[17-19]㊂本研究结果表明LMP2基因启动子rs1351383(A>C)等位基因C和rs2127675(A>G)等位基因G在病例组中的频率高于对照组(P<0.05),提示rs1351383的等位基因C和rs2127675的等位基因G可能是HCV慢性感染的易感因素㊂对rs1351383㊁rs17587㊁rs2127675位点进行单倍型构建,A-G-A在病例组中的频率低于对照组(P <0.05),提示A-G-A单倍型可能是HCV慢性感染的保护因素,C-G-G在病例组中的频率高于对照组(P <0.05),提示C-G-G单倍型可能增加HCV慢性感染的风险㊂这与Qian等[20]在2013年对白人的黑色素瘤的研究报道中得出的结论是一致的㊂目前,已有研究表明许多自身免疫性疾病与本实验所选取的rs1351383㊁rs17587㊁rs2127675㊁rs2071543这4个SNP位点的多态性具有相关性㊂其中涉及到加拿大人群强直性脊柱炎,沙特人群白癜风,中国云南地区人群类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等[21-23]㊂但是在针对中国人群散发性大肠癌的研究发现,rs17587和rs2071543这两个位点与疾病的发生均无关联性㊂Cui 等[24]发现在中国江苏省人群中rs2071543与HCV的慢性感染具有相关性而rs17587无关,但是同样是针对中国江苏省人群,Pen g等[25]却得出相反的结论,认为rs17587是HCV慢性感染的独立相关因素,等位基因A具有保护作用,而rs2071543则与HCV的发生发展无关㊂本实验结果提示这两个位点均与HCV的慢性感染无关㊂造成结果不一致的原因可能是因为实验样本量大小不同或者实验方法不同㊂之前的同类型实验多采用限制性片段长度多态性方法,而本实验采用的是Ta q man assa y方法,其相较于RFLP方法更为精确㊂另一方面,人群的遗传背景也影响着基因多态的分布㊂在高加索人群中rs17587A等位基因频率为26%,而亚洲人群中只有21%;rs2127675G等位基因频率为34%,而亚洲人群中只有28%㊂因此,在其他人群中报道的与丙肝相关的SNP与本研究结果并不一致,可能存在其他的SNP,有待于用全基因组关联分析去发现新的易感位点㊂综上所述,在中国云南汉族群体中,LMP2基因rs1351383(A>C)等位基因C和rs2127675(A>G)等位基因G可能是HCV慢性感染的易感因素, rs1351383㊁rs17587㊁rs2127675单倍型A-G-A可能是HCV慢性感染的保护因素,单倍型C-G-G可能是HCV慢性感染的危险因素㊂LMP7基因rs2071543 (C>A)与HCV慢性感染无相关性㊂利益冲突㊀无参考文献[1]Bru g uera M,Ta p ias JMS.Global e p idemiolo gy 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CD44v7_8基因表达与宫颈癌关系的探讨
《中外医学研究》第10卷 第16期（总第168期）2012年6月 医技与临床 Yi jiyulinchuang意义重大，可作为HF 诊治的一个有效标记物。
参考文献[1] 张文武.急诊内科学[M].北京：人民卫生出版社，2007：285.[2] Lori B Daniels，Alan S Maisel.Natriuretic Peptides[J].American Coil Cardiol，2007，50(1)：2357-2568.[3] 王瑜，余焰.检测氨基末端脑钠肽前体在心力衰竭患者中的临床意义[J].国际检验医学杂志，2011，32(12)：1324-1323．[3] 张玉梅，蔡葵，廖建平.氨基末端脑钠肽前体对心力衰竭患者预后的判断价值[J].山东医药杂志，2010，50(33)：41-42．[4] 汪芳，李卫，黄杰，等.血浆N 端原脑钛钠水平对慢性心力衰竭患者长期预后的预测价值[J].中华心血管病杂志，2006，34(1)：28-32.[5] 刘迪丹，林丽明，郭谷生.N 端脑钠肽前体在心力衰竭诊断价值中的研究[J].当代医学，2010，16(32)：36-37.(收稿日期：2012-03-31) (编辑：徐睿瑞)①安宁市昆钢医院 云南 安宁 650302②云南省中医院③昆明医学院第一附属医院CD44v7/8基因表达与宫颈癌关系的探讨夏桂兰① 刘涛② 付红梅③ 【摘要】 目的：探讨CD44v7/8基因表达与宫颈癌的关系及临床意义。
方法：采用免疫组织化学染色SP 法对宫颈手术切除及宫颈活检的档蜡块标本84例，其中正常宫颈15例、宫颈癌69例中CD44v7/8的表达进行检测。
结果：正常宫颈组织中，CD44v7/8为阴性表达。
宫颈癌组织中CD44v7/8表达：鳞癌阳性率为69.70%，腺癌阳性率为66.67%；临床Ⅰ期阳性率为70.97%，临床Ⅱ期阳性率为71.05%；有淋巴结转移阳性率为85.71%，无淋巴结转移阳性率为66.67%。
云南汉族人群CD6基因多态性与非小细胞肺癌的相关性
云南汉族人群CD6基因多态性与非小细胞肺癌的相关性洪超;梁燕;周紫云;张新文;刘舒媛;陈珺;李传印;熊增平;吴克川;李玙【摘要】目的:探究云南地区汉族人群中细胞表面糖蛋白CD6基因多态性与非小细胞肺癌(NSCLC)的相关性.方法:选取云南汉族NSCLC患者467例作为病例组,选取同期健康正常人群490例作为对照组,采用Taq-Man探针基因分型方法对CD6基因的SNP位点(rs12360861、rs1 1230563及rs 17824933)进行基因分型,分析3个SNP位点等位基因和基因型在病例组和对照组间的分布差异,分析3个SNP位点在肺癌不同临床分期的中分布.结果:CD6基因的SNP位点(rs12360861、rs11230563及rs17824933)的等位基因、基因型和构建的单倍型在病例组与对照组中的分布频率比较,差异无统计学意义(P ＞0.05);CD6基因的3个SNP位点的等位基因、基因型在肺癌Ⅰ+Ⅱ期组和Ⅲ+Ⅳ期组间的分布频率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:CD6基因的rs 12360861、rs11230563及rs 17824933多态性位点可能与云南汉族人群NSCLC的发生发展无相关性.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2018(043)003【总页数】5页(P254-258)【关键词】肺肿瘤;多态性,单核苷酸;云南;汉族;细胞表面糖蛋白CD6基因【作者】洪超;梁燕;周紫云;张新文;刘舒媛;陈珺;李传印;熊增平;吴克川;李玙【作者单位】中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118;中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118【正文语种】中文【中图分类】R734.2;RZ274肺癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤，在我国已成为发病率及死亡率最高的恶性肿瘤[1]。
CDC50A在宫颈癌原代细胞中的表达及对干细胞特性的影响
CDC50A 在宫颈癌原代细胞中的表达及对干细胞特性的影响马丽萍,刘小林 (连云港市第二人民医院检验科,江苏 连云港 222023)[摘 要] 目的:探讨人宫颈癌原代细胞的分离㊁培养㊁鉴定方法以及细胞周期蛋白50A (CDC50A )对其生物学特性的维持作用㊂方法:收集2017年1月~2018年2月期间在妇科进行宫颈手术的24例宫颈癌患者和10例行子宫全切术患者的宫颈组织标本;采用蛋白酶消化法分离宫颈癌组织,通过原代培养㊁流式细胞术分选法将宫颈癌原代细胞分为CDC50A +Lin -细胞组,CDC50A -Lin -细胞组,采用MTT 法测定各表型细胞体外增殖活性以及体内成瘤能力;采用端粒重复扩增法(TRAP )结合电泳及银染法测定端粒酶活性㊂结果:①宫颈癌原代细胞表型CDC50A +Lin -的细胞仅占0.95%~5.64%;且宫颈癌组织中CDC50A 阳性表达率为87.5%,明显高于正常宫颈黏膜组织,差异有统计学意义(P <0.05);②CDC50A +Lin -细胞体外增殖活性以及集落形成能力明显高于CDC50A -Lin -细胞和未分选细胞,差异有统计学意义(P <0.05);③裸鼠皮下接种CDC50A +Lin -细胞,2周就可观察到明显的新生肿瘤块,成瘤率明显高于接种CDC50A -Lin -细胞和未分选细胞,差异有统计学意义(P <0.05);④CDC50A +Lin -细胞端粒酶相对表达强度为显著高于对照组细胞和CDC50A -Lin -细胞,差异有统计学意义(P <0.05)㊂结论:CDC50A 有可能是分选人宫颈癌干细胞的表面标志物,CDC50A +Lin -细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性㊂[关键词] 肿瘤干细胞;宫颈癌;流式细胞分选术;CDC50A ;CDC50A +Lin -细胞通讯作者:刘小林Expression of CDC 50A in primitive cells isolated from human cervical cancer and the effect on canc⁃er stem cells characteristic MA Li -ping ;LIU Xiao -lin (Linical laboratory ,The Second People ’s Hospital of Li⁃anyungang ,Lianyungang ,222023,China )Abstract :Objective To discuss the isolation and identification of human cervical cancer cells and the effect of cell divi⁃sion cycle 50A (CDC50A)on cancer stem cells (CSCs)biological characteristic.Method The human cervical cancer stem cells were obtained from fresh human cervical cancer tissue of 24patients who were diagnosed as cervical cancer from January2017to February 2018;at the same time,10cases of normal cervical tissues were obtained from patients with hysterectomy.The tumor stem cells were isolated by collagen enzyme protein separation method.CDC50A +Lin -cell and CDC50A -Lin -cells were detected by flow cytometry.The in vitro self-renewal abilities and tumorigenic abilities of CDC50A +Lin -cells and CDC50A -Lin -cells were compared.The telomerase activity was detected by telomeric repeat amplification protocol(TRAP).Results ①The rario of CDC50A +Lin -in tumor stem cells was about 0.95%~5.64%.And the positive expression rate of CDC50A in cancer tissues was 87.5%which was higher than the normal tissues by IHC (P <0.05).②And the proliferation of CDC50A +Lin -cell were higher than control cells and CDC50A -Lin -cells (P <0.05).③Wubcutaneous inoculation of CDC50A +Lin -cell in nude mice,after 2weeks,obrious new tumor mass could be observed.The tumorigenic abilities of CDC50A +Lin -cells in nude mice were higher than control cells and CDC50A -Lin -cells (P <0.05).④The telomerase activity of CDC50A +Lin -cells were higher than control cells and CDC50A -Lin -cells (P <0.05).Conclusion CDC50A could be used as the cell surface markers for isola⁃tion cervical cancer stem cells,which have biological characteristic of tumor stem cells.Key Words :Cancer stem cells;Cervical carcinoma;Fluorescence activated cell sorting;cell division cycle 50A;CDC50A +Lin -cell 宫颈癌是我国目前发病率和致死率较高的妇科恶性肿瘤之一,严重威胁女性群体的生命健康和生活质量[1]㊂近年来,随着宫颈癌筛查技术的进步以及越来越多的抗癌药物和靶向制剂出现,使得宫颈癌的治疗取得了长足的进展;但是部分患者仍然存在较高的转移或复发率,预后较差,因此寻找新的治疗途径一直是宫颈癌治疗领域长期研究的重点[3]㊂肿瘤的发生涉及诸多因素参与,是一个极其复杂的病理过程[4],所有的肿瘤都起源于组织干细胞或祖细胞,虽然干细胞在组织中所占的比例极少,但却具有强大的致瘤性㊁转移性㊁放化疗抵抗性等恶性生物学特性[5]㊂由于目前尚缺乏确切的宫颈癌干细胞的具体形态或肿瘤细胞表面特异性标记物,从而限制了肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在宫颈癌治疗领域的进展,因此寻找特异性干细胞标志分子,有效地分离㊁纯化干细胞,一直是肿瘤领域研究的热点㊂目前研究较多的CSCs特异性表面标志物包括CD44㊁CD24㊁CD133等,但是尚未发现宫颈癌干细胞表面特异性标志分子㊂有研究显示,细胞周期蛋白50A(cell division cycle50A,CDC50A)在宫颈癌侧群细胞(side population,SP)中可能呈高表达,基于此,本项研究主要探讨CDC50A在原代宫颈癌细胞中的表达以及是否具备维持肿瘤干细胞特性的功能,旨在为临床治疗提供新的研究思路㊂现报告如下㊂1 仪器与材料1.1 受试动物:Balb/c裸小鼠,8只,SPF级,雄性,4~6周龄,20~22g,购自维通利华实验动物有限责任公司,动物许可证号:SCXK(京)2007-0009㊂饲养在本实验室SPF动物房内,自由饮水进食,本次研究经过本院医学伦理委员会同意㊂1.2 组织来源:本项研究选取2017年1月~2018年2月期间我院妇科进行宫颈手术的宫颈癌患者24例,所有患者具有完整的临床资料㊂根据国际妇产科联盟(International Federa⁃tion of Gynecology et and Obstetrics,FIGO)2009临床分期标准,其中Ⅰ期5例患者,Ⅱ期13例患者,Ⅲ~Ⅳ期7例患者㊂同时选择同时期在我院行子宫全切除术的正常宫颈黏膜组织10例作为对照㊂1.3 主要试剂:DMEM/F12肿瘤干细胞培养基,美国GIBCO 公司;胰蛋白酶-EDTA细胞消化液(0.25%),北京钮因华信科技发展有限公司;FBS胎牛血清和链霉素-青霉素双抗,美国ThermoFisher公司;Trizol,美国Invitrogen公司;二甲基亚砜,美国Sigma公司;CDC50A单克隆抗体㊁IgG-PE㊁IgG-FITC㊁CD31-PE㊁CD45-PE㊁CD140a-PE㊁CD235a-PE,美国BD Phar⁃magen公司;S-P免疫组化试剂盒,DAB显色试剂盒,北京中杉金桥生物技术有限公司;磷酸盐缓冲液㊁氯仿㊁异丙醇㊁无水乙醇,国药集团化学试剂有限公司;生理盐水,安徽双鹤药业有限责任公司㊂1.4 主要仪器:HERcell1501型CO2细胞培养箱,美国Ther⁃mo Scientific公司;Eppendorf5427R台式高速冷冻离心机以及各种型号的移液器,德国Eppndorf公司;DI-CJ-2ND超净工作台,北京东联哈尔仪器制造有限公司;CX41倒置光学显微镜,日本OLYMPUS公司;电子分析天平,上海玉研科学仪器有限公司;恒温水浴摇床,北京六一仪器厂;FACS CantoⅡ型流式细胞仪,美国BD公司㊂1.5 实验方法1.5.1 宫颈癌原代细胞分离及培养:①取宫颈癌组织标本,置于无菌离心管中,加入DMEM培养液;②用无菌剪和无菌眼科镊将组织剪成碎片;加入胰蛋白酶消化,置于37℃细胞培养箱中孵育30min;③离心,弃上清;加入1ml DMEM/F12培养基重悬;④经200μm细胞筛过滤,离心,弃上清;加入1ml DMEM/F12培养基重悬;获得单细胞悬液;⑤调整细胞浓度至1×105个/ml,加入至细胞培养瓶中;⑥将获得的原代细胞培养在含有10ng/ml成纤维细胞生长因子和20ng/ml上皮生长因子的DMEM/F12细胞培养基中,将细胞置于37℃,5%CO2细胞培养箱中进行培养㊂24~48h更换培养液,48h传代一次㊂1.5.2 流式细胞术分选:①取对数期生长的细胞,加入0.25%胰蛋白酶消化2~3min后,加入PBS吹打细胞数次,直至将细胞吹散,置入5ml玻璃离心管中,100rpm离心3min,弃上清,加入PBS重悬,计数;②每组细胞分为五管,即空白对照管㊁同型对照管㊁PE补偿管㊁FITC补偿管㊁样品管;③对照组不加抗体;④同型对照:取1×106个细胞加入2μl IgG-FITC 抗体,40℃孵育30min,离心3min,弃上清,加入PBS重悬;⑤PE补偿管:取1×106个细胞加入CD31-PE㊁CD45-PE㊁CD140a-PE㊁CD235a-PE(Lin-PE)抗体各1μl,40℃孵育30min,离心3min,弃上清,加入PBS重悬;⑥FITC补偿管:取1×106个细胞加入CDC50A-FITC抗体1μl,40℃孵育30min,离心3min,弃上清,加入PBS重悬;然后加入二抗,孵育10min,离心3min,弃上清,加入PBS重悬;⑦样品管:取1×106个细胞加入CDC50A-FITC抗体㊁Lin-PE抗体各1μl, 40℃孵育30min,离心3min,弃上清,加入PBS重悬;然后加入二抗孵育10min,离心3min,弃上清,加入PBS重悬;⑧流式细胞仪进行流式检测及分选,每组细胞设置10个平行对照,每个样品重复检测三次,取平均值㊂1.5.3 免疫组织化学染色法:按照检测试剂盒说明书进行检测㊂①取宫颈癌患者肿瘤组织或正常宫颈黏膜组织病理切片进行组织脱蜡;②抗原热修复;③灭活内源性过氧化物酶;④封闭;⑤加入CDC50A一抗孵育;⑥加入二抗孵育;⑦滴加DAB试剂显色;⑦苏木精复染;⑧显微镜下观察㊂采用美国u⁃niversal imaging porporation图像分析仪统计灰度值㊂1.5.4 细胞分组:将细胞分为空白对照组(未分选细胞), CDC50A+Lin-组,CDC50A-Lin-组㊂1.5.5 MTT法检测细胞增殖:将分选后的细胞(1×103个/孔)单层接种至96孔板中,置于37℃,5%CO2细胞培养箱中进行培养,每组设置8个平行孔,培养24h㊁48h㊁72h㊁96h 后,每次取8个对照孔,每孔加入20μl MTT,置于37℃,5% CO2细胞培养箱中孵育4h后,弃除上清液,每孔加入200μl DMSO,置于振动器上震动5min,置于显微镜下观察无紫色结晶物㊂将96孔板放置于450酶标仪上,检测波长为570nm,参比波长为450nm处的吸光光度值(OD值),计算平均值㊂1.5.6 裸鼠异种移植瘤模型试验:无菌条件下,取对数期生长的CDC50A+Lin-细胞㊁CDC50A-Lin-细胞和未分选的细胞,调整细胞浓度(1×104-1×107个/ml),各取0.2ml接种于裸鼠腋下皮下,同时设未接种对照组㊂每周观察1次,共观察12周㊂1.5.7 细胞集落形成实验:将CDC50A+Lin-细胞㊁CDC50A-Lin-细胞和未分选的细胞分别置于6孔板中,250个细胞/孔,加入完全培养液,放入5%CO2㊁饱和湿度,恒温37℃细胞培养箱内培养㊂14d后,显微镜下观察细胞克隆数(>50个);计算细胞集落形成率(clony formation rate,CFR)㊂CFR=克隆数/细胞接种数㊂实验重复三次,取平均值㊂形成情况㊂1.5.8 细胞端粒酶的制备:①收集1×1010个CDC50A+Lin-细胞㊁CDC50A-Lin-细胞和未分选的宫颈癌原代细胞,置于EP 管中;②离心,弃上清;加入裂解缓冲液;③静置30min后,离心,取上清,用于测定蛋白含量㊂1.5.9 端粒重复扩增法(Telnefic Repeat Amplification Protoe⁃al,TRAP)结合电泳及银染法测定端粒酶活性:①根据NCBI 数据库获得的资料设计引物,引物由上海生工生物工程有限公司合成并提供;②50μl反应体系:10×Buffer(5μl),dNTP混合物(4μl),TaqDNA聚合酶(2U),Ts引物(2μl),加入适量ddH2O至50μl㊂混匀后置于30℃水浴中孵育10min;加入Cx 引物2μl;③95℃30s预变性,95℃5s,50℃30s,72℃90s,循环40次;④取下凝胶,置10%冰乙酸,40℃固定25min;加入去离子水清洗;⑤置于40℃0.2%硝酸银溶液中染色20min;加入去离子水清洗;⑥采用含0.02%甲醛和0.28mmol/L碳酸钠显影液显影㊂以未分选的Siha细胞端粒酶活性为1,其他待测标本的端粒酶活性相对强度=待测标本A值/未分选细胞A值㊂1.6 统计学处理:本资料采用SPSS19.0统计学软件进行处理;方差齐性采用单因素方差分析,组间比较采用t检验,方差不齐采用秩和检验;P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2 结果2.1 流式细胞术检测结果:宫颈癌原代细胞中表型CDC50A+Lin-的宫颈癌细胞仅占0.95%~5.64%㊂见图1㊂图1 7#患者肿瘤组织中提取的原代宫颈癌细胞CDC50A+Lin-死亡流式分析结果2.2 不同组织中CDC50A的表达情况:经免疫组化结果显示,宫颈癌组织中CDC50A阳性表达率为87.5%,明显高于正常宫颈黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05)㊂见表1㊂2.3 各表型细胞体外增殖情况比较:经MTT法检测结果显示,CDC50A+Lin-细胞第5天呈对数生长,CDC50A-Lin-细胞第7天才出现指数生长,倍增时间延长,而前者第5天就出现指数生长的趋势;对照组未分选原代细胞的生长能力及倍增时间介于前两者之间㊂与对照组细胞比较,CDC50A+Lin-细胞的增殖活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)㊂见表2㊂表1 不同组织中CDC50A的表达情况[例(%)]组织例数CDC50A阴性(-)阳性(+)癌组织243(12.5)21(87.5)正常组织1010(100.0)0χ2值22.885P值0.000表2 经MTT法检测各表型细胞体外增殖情况(x±s)细胞OD450nm24h48h72h96h对照组细胞0.315±0.0080.529±0.0100.834±0.0130.994±0.017 CDC50A+Lin-细胞0.310±0.0060.491±0.014①0.746±0.011①0.913±0.019①CDC50A-Lin-细胞0.382±0.006①②0.593±0.009①②0.927±0.009①②1.128±0.015①②F值356.24211.46662.45404.24P值0.0000.0000.0000.000 注:与空白对照组比较,①P<0.05;与CDC50A+Lin-细胞比较,②P<0.052.4 各表型细胞体内成瘤活性比较:经裸鼠异种移植瘤模型试验,细胞数量为1×105-1×107个/ml时,裸鼠皮下接种CDC50A+Lin-细胞,2周就可观察到明显的新生肿瘤块,成瘤率明显高于接种对照组细胞,差异有统计学意义(P<0.05)㊂而接种CDC50A+Lin-细胞,观察至12周,仍未见裸鼠形成移植瘤㊂见表3㊁见图2㊂表3 不同表型肿瘤细胞裸鼠接种成瘤能力[例(%)]细胞动物数(只)接种细胞数1×104/ml1×105/ml 1×106/ml 1×107/ml 对照组细胞802(25.0)3(37.5)3(37.5)CDC50A +Lin -细胞80000CDC50A -Lin -细胞81(12.5)6(75.0)①②7(87.5)①②8(100.0)①②χ2值2.08710.50012.68616.448P 值0.3520.0050.0020.000 注:与空白对照组比较,①P <0.05;与CDC50A +Lin -细胞比较,②P <0.05图2 裸鼠皮下接种对照组细胞㊁CDC50A +Lin -细胞和CDC50A -Lin -细胞4周后移植瘤形成情况2.5 集落形成实验:集落形成实验结果显示,培养14d 后,CDC50A +Lin -细胞集落形成率为(0.456±0.131)%显著高于CDC50A -Lin -细胞集落形成率(0.073±0.04)%,差异有统计学意义(t =9.241,P <0.05)㊂提示CDC50A +Lin -细胞克隆能力明显高于CDC50A -Lin -细胞㊂见图2㊂图2 对照组细胞㊁CDC50A +Lin -细胞和CDC50A -Lin -细胞培养14d 后细胞集落形成情况2.6 各表型细胞端粒酶活性检测:未分选的原代宫颈癌细胞端粒酶活性作为对照(相对强度为1),CDC50A +Lin -细胞端粒酶相对表达强度为4.79±0.78,显著高于对照组细胞,差异有统计学意义(P <0.05)㊂而CDC50A -Lin -细胞端粒酶相对表达强度为0.46±0.09,显著低于对照组细胞,差异有统计学意义(P <0.05)㊂见图3㊂ 注:A:对照组细胞;B:CDC50A +Lin -细胞;C:CDC50A -Lin -细胞;a 与空白对照组比较,P <0.05;b 与CDC50A +Lin -细胞比较,P <0.05图3 各组细胞端粒酶活性比较3 讨论目前,临床上关于宫颈癌的治疗仍以外科手术切除为主,配合化疗和放疗辅助治疗㊂有研究认为肿瘤干细胞既是肿瘤细胞放化疗耐受的根源所在,也是引起肿瘤细胞转移和复发的原因之一,越来越多的妇科领域专家试图通过寻找干细胞为宫颈癌的治疗开辟新的方向[6]㊂肿瘤干细胞的起源与正常干细胞一样,都涉及多步骤㊁多阶段㊁多因素的影响,同样都保持未分化状态,可自我更新和无限增殖[7]㊂但是不同的是,正常干细胞具有自我更新的反馈调节机制,增殖和凋亡处于平衡状态[8],但是肿瘤干细胞由于发生多基因突变导致细胞增殖失控,从而形成肿瘤[9-10]㊂肿瘤干细胞具有较强的耐药性和高致瘤性,因此易导致化疗失败㊂早在1997年[11],Bonnet 首先自急性粒细胞白血病患者中分离出CD 34+CD 38-细胞,被证实具有类似造血干细胞特性;但直到2001年[12],Reya 等才正式提出 肿瘤干细胞”的概念㊂在2003年,Al-Hajj 等首先分离出具有自我更新能力㊁多向分化特性以及高致瘤性的乳腺癌细胞亚型,且这些细胞显著高表达CD44㊁CD24和上皮细胞特异性抗原[13];由此认为CD 34+㊁CD44㊁CD24可能是肿瘤干细胞的表面标志分子㊂CD 34+㊁CD44和CD24都属于细胞黏附分子,广泛表达于上皮细胞㊁间质细胞或肿瘤细胞表面,与肿瘤细胞的增殖㊁分化㊁迁徙㊁转移等恶性生物学行为密切相关㊂但是目前尚没有研究确定宫颈癌干细胞表面特异性表达分子㊂前期有研究通过蛋白组学技术分析认为CDC50A 可能是某些CSCs 表面标记分子,基于此前提,笔者旨在通过本项研究检测宫颈癌干细胞表面是否高表达CDC50A㊂有研究显示,宫颈储备细胞有肿瘤干细胞具有类似的生物学特性,属于干细胞范畴的一种幼稚多潜能细胞,具有双向分化潜力[14]㊂颈管柱状上皮下的储备细胞增生和多潜能分化特性是造成宫颈上皮复杂的结构改建和病理变化的基础,也是造成宫颈癌变的病理基础[14]㊂因此,宫颈储备细胞被认为是宫颈癌细胞的起源[15]㊂宫颈癌干细胞的分离和鉴定周期较长,本项研究中,笔者首先制备宫颈癌组织原代细胞,待细胞球大量增加后,加入淋巴细胞分离液,去除碎屑杂志㊂7d 后,有部分细胞呈贴壁生长㊂经流式细胞术筛选后,发现宫颈癌原代细胞中有少部分CDC50A+Lin-细胞,而正常宫颈原代培养细胞中几乎未见CDC50A+Lin-细胞㊂这表明CDC50A可能是宫颈癌干细胞的表面标志物㊂为了证实此项推论,笔者进一步通过免疫组织化学染色法检测宫颈癌组织和正常宫颈黏膜组织CDC50A阳性表达情况,结果显示,宫颈癌组织中CDC50A阳性表达率为87.5%,明显高于正常宫颈黏膜组织㊂肿瘤干细胞的鉴定主要是需要证明它具有干细胞的自我更新㊁无限增殖及多向分化能力,最重要的是,它是唯一能导致肿瘤发生的细胞㊂因此,笔者首先经MTT法证实了CDC50A+Lin-细胞体外增殖活性明显高于CDC50A-Lin-细胞㊂并通过接种至裸鼠双腋下皮下后,观察肿瘤形成情况,细胞数量为1×105~1×107个/ml时,裸鼠皮下接种CDC50A+Lin-细胞,2周就可观察到明显的新生肿瘤块,成瘤率明显高于接种对照组细;而接种CDC50A-Lin-细胞的裸鼠,观察至12周,仍未见裸鼠形成移植瘤㊂从而证明了CDC50A+Lin-细胞的成瘤能力㊂除此以外,笔者通过TRAP法进一步分析了CDC50A+ Lin-细胞和CDC50A-Lin-细胞端粒酶活性㊂结果显示, CDC50A+Lin-细胞端粒酶相对表达强度显著高于对照组细胞和CDC50A-Lin-细胞㊂端粒酶是由端粒酶逆转录酶(telomer⁃ase reverse transcriptase,TERT)和端粒酶RNA组成的具有特殊逆转录活性的核糖核蛋白复合物,其中TERT是端粒酶的催化亚基,只表达于端粒酶阳性细胞中,而端粒酶的阳性表达与癌变的发生㊁发展密切相关㊂CDC50A+Lin-细胞端粒酶呈高表达,提示,胰腺癌干细胞具有端粒酶活性,它可能通过维持端粒的长度,使细胞保持体外长期传代㊁自我更新的生物学特性㊂目前,关于肿瘤干细胞的研究在多重实体瘤领域已经取得了较大的进展,但是宫颈癌干细胞的分离和鉴定研究尚少,尤其是干细胞表面标志物尚不明确,因此需要借助其他肿瘤干细胞的研究成果和技术,本项研究采用CDC50A作为宫颈癌干细胞筛选分子也是借鉴以往的文献报道㊂通过本项研究对宫颈癌原代细胞分离培养以及表面分子标志物的探索,希望为后续宫颈癌干细胞的研究提供一定的经验和理论支持㊂4摇参考文献[1] 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甘肃回汉族人群D1S80位点扩增片段长度多态性研究
甘肃回汉族人群D1S80位点扩增片段长度多态性研究谢小冬;王勋陵;郭茜;彭晓【期刊名称】《兰州大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2001(037)004【摘要】报道了对甘肃省108名汉族和72名回族无关个体D1S80位点扩增片段长度多态性的等位基因频率调查分析.已在汉族中发现21个等位基因,71种基因型.基因频率为0.005～0.111.杂合度为82%,个体识别率为0.95.在回族人群中发现22个等位基因.51种基因型,基因频率为0.007～0.153,杂合度为86%,个体识别率为0.92,基因频率符合Hardy-Weinberg法则.结果提示甘肃省回族和汉族之间在其等位基因数目及频率分布上均存在显著性差异,进一步的分析还表明甘肃省汉族人属于北方群体,支持了有关中国大陆存在南北两大群体的观点.【总页数】6页(P85-90)【作者】谢小冬;王勋陵;郭茜;彭晓【作者单位】兰州大学生命科学学院.甘肃,兰州,730000;兰州大学生命科学学院.甘肃,兰州,730000;甘肃省人民医院.甘肃,兰州,730000;兰州医学院第一附属医院,甘肃,兰州,730000【正文语种】中文【中图分类】Q339【相关文献】1.浙江省汉人D1S80位点扩增片段长度多态性群体调查 [J], 吴微微;程建波2.河北汉族人群D17S30位点扩增片段长度多态性 [J], 彭郁葱;丛斌;姚玉霞;尤红煜;王俊霞;杨承珠;左敏;谷振勇3.云南汉族人群D17S30位点扩增片段长度多态性 [J], 欧炯文4.用Amp-FLP方法分析江浙沪汉族人群D1S80位点多态性 [J], 冯哲5.云南汉族人群Apo B位点扩增片段长度多态性分析 [J], 申滨;程宝文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HOXA10启动子区基因多态性与女性生殖能力的相关性研究
HOXA10启动子区基因多态性与女性生殖能力的相关性研究符免艾;李娟;黄林;冼梅兰;周立花;胡英;张云霞【摘要】Objective To investigate the polymorphism of the HOXA10 promoter and the female reproduc-tive ability. Methods A total of 240 female infertile patients undergoing assisted reproductive technology (ART) in our hospital from July 2013 to July 2014 were enrolled as infertility group, among which the patients was not pregnant after 3 times of ART were collected as the ART failure group. Two hundred and fifty aged females with normal repro-ductive ability were chosen as the control group. The polymorphism of rs3779456 located in the HOXA10 promoter was detected and the data were analyzed by SPSS19.0. Results There was no significant difference in the three geno-types (TT, CC, CT) between the infertility group and the control group (P>0.05), while there was statistically signifi-cant difference between ART failure group and the control group (P<0.05). The frequency of CC and the other two genotypes was significantly different (P<0.05), the OR value of CC in the infertility group and the control group was 1.24. The allele frequency of T and C between infertility group and the control group were significantly different with an OR value of 1.15. Conclusion The genotype CC may be a dangerous factor for natural pregnancy, while the allele T is beneficial for the reproductive ability.%目的：探讨HOXA10启动子区基因多态性与女性生殖能力的关联性。
RNA-linc00858_和miR-3182_在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移调控作用
RNA -linc00858和miR -3182在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移调控作用及靶向关系吴颖1，魏敏2，冀瑞晴1，王建3，罗彩霞3，单燕丽31 徐州医科大学研究生院，江苏徐州 221004；2 徐州医科大学附属医院妇科；3 新疆维吾尔自治区伊犁哈萨克自治州友谊医院妇产科摘要：目的 观察长链非编码RNA -linc00858和微小RNA -3182（miR -3182）在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移的调控作用，分析宫颈癌细胞中linc00858、miR -3182的靶向关系。
方法 ①40例宫颈癌患者，均行宫颈癌根治术，术中留取宫颈癌组织及癌旁组织，采用RT -qPCR 法检测宫颈癌及癌旁组织中linc00858、miR -3182的表达，采用Spearman 相关性分析法分析宫颈癌组织中linc00858和miR -3182相关性。
②筛选人宫颈癌细胞株MS751为受试细胞，1～4组分别转染si -linc00858（小干扰linc00858，沉默linc00858表达）、OE -linc00858（过表达linc00858）、si -NC （小干扰阴性对照）、OE -NC （过表达阴性对照），转染48 h 时采用Transwell 实验观察各组细胞侵袭、迁移情况。
培养48 h 时采用RT -qPCR 法检测各组细胞linc00858、miR -3182的表达。
③分别采用RNA 免疫沉淀测定实验、双荧光素酶报告实验分析MS751细胞中linc00858与miR -3182的靶向关系。
结果 ①与癌旁组织比较，宫颈癌组织中linc00858相对表达量高、miR -3182相对表达量低（P 均<0.05）。
宫颈癌组织中linc00858和miR -3182的表达呈负相关（r =0.3432，P <0.05）。
②与3组比较，培养48 h 时1组细胞迁移数及细胞侵袭数均少；与4组比较，2组细胞迁移数及细胞侵袭数均多（P 均<0.05）。
云南汉族人群CTLA—4基因多态性与自身免疫性甲状腺疾病的关系
云南汉族人群CTLA—4基因多态性与自身免疫性甲状腺疾病的关系目的：探讨云南地区汉族人群自身免疫性甲状腺疾病（AITD）与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）第1外显子第17密码子49位点A/G基因多态性的相关性。
方法：应用多聚酶链反应—限制性片断长度多态性分析（PCR-RFLP）的实验方法，检测82例Graves病（GD）患者，51例桥本氏甲状腺炎（HT）患者和80例健康人外周血CTLA-4基因第1外显子的第17密码子49位点的基因型并行分析。
结果：GD组GG基因型的频率及等位基因G的频率明显高于健康对照组（字2=9.353，P=0.009；字2=7.548，P=0.006）；而HT组GG基因型及G等位基因的分布频率与健康对照组比较差异无统计学意义（字2=0.062，P=0.969；字2=0.046，P=0.830）。
结论：CTLA-4基因第1外显子的第17密码子49位点可能是云南汉族GD的易感候选基因。
自身免疫性甲状腺疾病（autoimmune thyroid disease，AITD），包括弥漫性毒性甲状腺肿（Graves disease，GD）和桥本氏甲状腺炎（Hashimot o’s thyroiditis，HT），是器官特异性自身免疫性疾病。
其发病为多基因遗传与复杂的环境因素共同作用的结果[1]。
近年来有多项研究显示细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 （Cytotoxic T lymphocyteassociated Antigen 4，CTLA-4）在GD遗传易感性中占有重要的地位[2-5]。
CTLA-4又名CD152分子，是一种T细胞上的跨膜受体，在T细胞表面重要的协同刺激分子受体。
免疫反应中T细胞活化有两类信号是必需的，第一类是抗原肽-HLA复合物，由抗原呈递细胞所呈递和特殊的T细胞受体识别，然后将信号传递给T细胞。
第二类就是协同刺激信号，由抗原呈递细胞上的协调刺激分子与T细胞表面相应的受体结合而产生。
云南省汉族人群CD25基因多态性与宫颈癌的发生发展的相关性
［ 摘 要 ］目的： 探讨 Ｃ Ｄ ２ ５ 基因多态性与云南汉族人群官颈癌发生发展的相关性。方法： 选取云南地区汉族
人群癌前病变 （ ＣＩ Ｎ ） 患者 １ ３ ６例 ， 宫 颈癌 患者 ２ ２ ７例 以及汉族健康 体检人群 ４ ８ ３例 ， 采用 Ｔ ａ ｑ Ｍａ ｎ探针 基因分型
方法对 Ｃ Ｄ ２ ５基 因中 Ｓ Ｎ Ｐ位点 ｒ ｓ ７ ０ ７ ２ ７ ９ ３ （ Ｃ＞Ｔ ） 和ｒ ｓ ３ １ １ ８ ４ ７ ０ （ Ｃ＞ Ｔ） 进行基 因分 型 ， 研究 其等位基 因 、 基 因型及 所构 建的单倍 型在 Ｃ Ｉ Ｎ患者 、 宫颈癌患 者和健康对照人群 中分布频率 。结果 ： ｒ ｓ ７ ０ ７ ２ ７ ９ ３ （ ｃ＞ Ｔ） 等位基 因 Ｃ和 Ｔ 在 Ｃ Ｉ Ｎ组 和对 照组 、 Ｃ Ｉ Ｎ组与癌症组 中分布频率 的差 异具有统计 学意义 （ Ｐ＝ ０ ． ０ ３ ９和 ０ ． ０ ３ ９ ） ， 提示 该位 点等位 基因 ｃ在宫颈癌发生和发展 阶段分别发 挥保 护 （ Ｏ Ｒ＝０ ． ７ ５ ； ９ ５ ％Ｃ Ｉ ： ０ ． ５ ７～０ ． ９ ９ ） 和风 险 因素 （ Ｏ Ｒ＝１ ． ３ ８ ； ９ ５ ％
Ｃ ／ ： １ ． ０ ２～１ ． ８ ６ ） ； ｒ ｓ ３ １ １ ８ ４ ７ ０ （ Ｇ＞Ｔ ） 的 等位 基 因 Ｃ和 Ｔ在 Ｃ Ｉ Ｎ组 和 对 照 组 、 Ｃ Ｉ Ｎ组 和癌 症 组 中分 布 频 率 的 差 异 具
有统计学 意义（ Ｐ＜ ０ ． ０ ０ １和 Ｐ＜ ０ ． ０ ０ １ ） ， 提示该位 点等位基因 ｃ在宫颈癌 发生和发展 阶段分别 发挥保护 （ Ｏ Ｒ＝
Ｔｈｅ Ｃｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ Ｐｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐｈ ｉ ｓ ｍｓ ｉ ｎ ＣＤ２ ５ Ｇｅ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ Ｉ ｎｉ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎｄ
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·论著·[文章编号]1000-8861（2017）01-0046-08；[DOI ]10.13431/ki.immunol.j.20170009云南汉族人群CD80基因多态性与宫颈癌发生发展的相关性研究李传印，严志凌，史荔，杨宏英，洪超，俞建昆，张新文，姚宇峰*[摘要]目的探讨CD80基因多态性与云南汉族人群宫颈癌发生发展的相关性。
方法本研究选取云南地区汉族人群癌前病变（CIN Ⅲ期）患者126例，宫颈癌患者450例，健康体检人群500例，采用TaqMan 探针基因分型方法对CD80基因中的4个SNP 位点rs16829980（A>G ）、rs16829984（G>C ）、rs41271391（G>T ）和rs41271393（C>T ）进行基因分型，并研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在CIN Ⅲ期患者、宫颈癌患者和健康对照人群中分布频率的差异。
结果rs16829984（G>C ）等位基因C 和G 在CIN Ⅲ期组和对照组、癌症组和对照组中分布频率的差异具有统计学意义（P =0.026和0.006）。
rs16829980（A>G ）中等位基因A 和G 在CIN Ⅲ期组和癌症组中分布频率的差异具有统计学意义（P =0.038）。
而rs41271391（G>T ）和rs41271393（C>T ）的等位基因和基因型在病例组（CIN Ⅲ期组和癌症组）和对照组中的分布频率的差异无统计学意义（P >0.05）。
单倍型分析结果显示AGGC 单倍型可能是宫颈癌发生的危险因素（OR =1.449；95%CI ：1.096-1.915）。
结论位于CD80基因启动子区域的SNP 位点rs16829984（G>C ）等位基因C 可能是云南汉族人群宫颈癌发生的保护性因素（OR =0.700；95%CI ：0.510-0.960），rs16829980（A>G ）等位基因A 可能是云南汉族人群CIN Ⅲ期向宫颈癌发展的保护性因素（OR =0.703；95%CI ：0.503-0.982）。
[关键词]宫颈癌；CD80；SNPs ；相关性；云南汉族人群[中图分类号]R737.33[文献标识码]AThe association betwwen the SNPs of CD80gene and the initiation and development of cervical cancer in a Yunnan Han populationLI Chuanyin 1,YAN Zhiling 2,SHI Li 1,YANG Hongying 2,HONG Chao 1,YU Jiankun 1,ZHANG Xinwen 1,YAO Yufeng 1,*1.Institute of Medical Biology,Chinese Academy of Medical Sciences &Peking Union Medical College,Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research &Development on Severe Infectious Disease,Kunming 650118,China;2.Department of Gynecology,Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunming 650118,China *Corresponding Author:YAO Yufeng,E-mail:leoyyf@[Abstract]To evaluate the association between four single nucleotide polymorphisms (SNPs)(rs16829980A>G,rs16829984G>C,rs41271391G>T and rs41271393C>T)in CD80gene and the initiation and development of cervical cancer in a Yunnan Han population,a total of 126patients with CINⅢ,450patients with cervical cancerand 500healthy individuals were recruited in this study,and the genotyping of the SNPs was analyzed by Taqman assay.Additionally,the haplotypes were constructed and the association between the haplotypes with the initiation and development of cervical cancer was analyzed.Data showed that frequencies of allele G and C of rs16829984G>C were significantly different between CINⅢand control groups,and also between cancer and control groups(P =0.026and 0.006,respectively).The allelicfrequencyofrs16829980A>G wassignificantlydifferent between CINⅢand cancer groups (P =0.038).While the allelic and genotypic frequencies of rs41271391G>Tandrs41271393C>Twerenotsignificantly different among CINⅢ,cancer and controlgroups (P >0.05).The frequencies of haplotypes基金项目：国家自然科学基金（31270030，81573206）；协和青年基金（3332015149）；云南省应用基础研究重点项目（2016FA034）；云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项（2013FB169）；云南省妇科肿瘤内设研究机构中心（2014NS032）；中国医学科学院病原生物学研究所基本科研业务费项目（2012IPB107）作者单位：650118昆明，中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室（李传印，史荔，洪超，俞建昆，张新文，姚宇峰）；650118，昆明医科大学第三附属医院妇瘤科（严志凌，杨宏英）*通信作者：姚宇峰，E-mail ：leoyyf@constructed by rs16829980A>G,rs16829984G>C,rs41271391G>T and rs41271393C>T showed that the haplotypic frequency of AGGC was significantly different between CINⅢand control groups(P<0.05).In conclusion,the C allele of rs16829984G>C may be a protective factor against the initiation of cervical cancer (OR=0.700;95%CI:0.510-0.960),while the A allele of rs16829980A>G may be a protective factor against the development from CINⅢto cervical cancer.[Key words]Cervical cancer;CD80;SNPs;Association;Yunnan Han population宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，已成为危害女性身体健康的最主要的杀手。
世界卫生组织统计资料表明，宫颈癌在全球妇女癌症死亡率中位居第2，在一些发展中国家甚至位居首位，每年全球大约有50万例新发宫颈癌病例，约20万人死于宫颈癌。
据不完全统计，我国现有宫颈癌病人约13.8万，每年约有5万人死于宫颈癌[1]。
HPV感染是诱发宫颈癌发生的必需条件，但并非所有感染HPV的患者最终都发展为宫颈癌[2]。
近年来研究发现宿主遗传因素在HPV相关的宫颈癌发生过程中也发挥重要作用，尤其是参与免疫识别和抗原提呈相关基因中存在的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）在宫颈癌发生发展过程中发挥重要作用[3-5]。
CD80（又被称作B7-1）属于免疫球蛋白超家族成员，表达于抗原提呈细胞（APC）表面，是T细胞活化过程必不可少的共刺激分子，那么CD80表达差异可能会造成个体间免疫应答效率的差异，可能是导致疾病甚至肿瘤发生的一个重要因素。
研究发现CD80在大多数肿瘤细胞表面缺少表达，从而导致肿瘤细胞的免疫逃逸。
研究显示存在于CD80基因中的SNPs与多种疾病相关[6-7]，包括癌症[8]，这些位点包括位于基因启动子区域的rs16829984（G>C）和位于基因5’-UTR（5’-Untranslated region，5’-UTR）区域的rs16829980（A>G）。
位于基因启动子区域的SNP 可能会通过碱基序列的改变影响转录因子的结合而影响基因的表达，而位于基因5’-UTR区域的SNP 可能会通过影响mRNA的翻译起始而影响CD80基因的表达。
鉴于CD80在大多数肿瘤中缺少表达，因此位于CD80基因启动子和5’-UTR区域的SNP可能会通过影响CD80基因的表达而与肿瘤相关。
因此本研究选取2个位于CD80基因启动子区域的SNP位点：rs16829984（G>C）和rs41271393（C> T），以及2个位于CD80基因5’-UTR区域的SNP位点rs16829980（A>G）和rs41271391（G>T），研究这些SNP位点在云南汉族人群癌前病变（CINⅢ期）患者、宫颈癌患者和健康人群中的分布情况，以期找到与宫颈癌发生发展相关的CD80基因SNP位点，为宫颈癌的诊断、治疗提供新靶点及思路。