Biotin 生物素简介
Biotin 生物素簡介
Biotin 生物素簡介生物素是一環狀有如尿素的化學物質，具有一硫酚(Thiophene)的結構環，此種學物質有八種同形異構物，但也只有右旋生物素(d-biotin)是存在於自然界中，也才有維生素的功能。生物素是一無色、針狀的物質，稍微溶解在冷水中，較易溶解於酒精裡，但不溶有機溶劑中。生物素對熱還算穩定，並不被酸或鹼所破壞的。生物素是某些微生物發育所必須的營養素之一，只要很少量即可助微生物之生長。其廣存於自然界中所以正常人不虞匱乏，唯飲食大量缺乏時，可能會伴隨生物素的缺乏。功能：細胞的生長脂肪酸的生成蛋白質、脂肪、碳水化合物的代謝維生素B群的利用缺乏症狀沮喪，2.乾燥皮膚，3.疲勞，4.稍帶灰色皮膚，5.失眠症，6.肌肉蒼，7.食欲不振。用人做試驗時，4週時會出現中度性的皮膚炎，到7~8週後形成脫屑性膚病，尤其在四肢手腳部份，帶有麟片似地灰斑。舌狀乳突萎縮，反胃、食欲不振等毛病。肌肉蒼白、神經過敏症(hyperaesthesia)，厭倦、疲乏、貧血亦會發生。皮脂溢出性的皮膚炎、脫屑性的紅皮症等與生物素缺乏有關。用來治療的症候皮膚炎、粉刺溼疹腳痙攣禿頭。治療時，每日5mg生物素注射或
2~5mg口服，療程數天。增進效率的物質1.維生素B群，2.維生素B12，3.葉酸(folic acid)，4.泛酸(patothenic acid)，
5.維生素C，5.硫(sulphur)。相抗抗衡的物質1.酒精，2.咖啡，3.生蛋白。中華民國衛生署每日營養素建議攝取量RDNA: -- (衛生署每日營養素建議攝取量以16歲男性為基準。)美國國立食品營養委員會每日營養素建議攝取量
RDA(Recommended Dietary Allowances): 300mcg 來源：內臟，蛋黃，豆類，穀類....等為最佳食物來源。雞肉
-------------------------------2~5
巧克力---------------------------32
花椰菜----------------------------17
蛋---------------------------------6
豬肉-------------------------------2~5
全麥------------------------------5
花生-------------------------------30
青豆------------------------------2
牛肝-------------------------------100
鮭魚------------------------------5
牛奶------------------------------5
牡蠣------------------------------9
牛肉-------------------------------4
玉蜀黍---------------------------6
胡蘿蔔----------------------------2
菠菜------------------------------2
草莓-------------------------------4
蕃茄------------------------------2（每一百公克食物中所含生物素的毫克數）
链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF使用说明
链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF使用说明 货号：S5810 产品说明： 链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF利用生物素与链霉亲和素配体之间的相互作用纯化生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质。链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，需要在变性条件下洗脱，链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在pH9.5-11.0结合，pH4.0时洗脱，不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。具体性能见表1。 性能指标 基质4%琼脂糖微球 配体链霉亲和素 载量>120nmol/ml介质；生物素化白蛋白6mg/ml介质 粒径（μm）45-165 最大流速0.1MPa，1bar PH稳定范围2-10 储存缓冲液含20%乙醇的1×PBS 储存温度2°C-8°C 纯化流程： 1.Buffer的准备 所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。 生物素或生物素化物质的纯化： 结合/洗杂Buffer：20mM NaH2PO4，0.15M NaCl，pH7.4
洗脱Buffer：8M盐酸胍，pH1.5 亚氨基生物素标签物质的纯化： 结合/洗杂Buffer：50mM碳酸铵，0.5M NaCl，pH10.0 洗脱Buffer：50mM碳酸铵，0.5M NaCl，pH4.0 2.样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。 样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。 3.样品纯化 （1）将链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer 进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。 （2）将样品加到平衡好的链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF中（保证目的蛋白与链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。 （3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。 （4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。 （5）依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。 4.SDS-PAGE检测 将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用
谷氨酸的发酵工程
谷氨酸发酵过程控制 【摘要】谷氨酸是构成蛋白质的20种常见α氨基酸之一。作为谷氨酰胺、脯氨酸以及精氨酸的前体。谷氨酸的质量受到发酵的条件、菌种、温度、pH、接种量和种龄等因素的影响。如果控制不好这些因素整个发酵过程发酵液受污染、出现菌体的生长缓慢和代谢产物的积累很少、发酵周期延长甚至所得产品不是最终产品。本文通过综述发酵培养基、培养条件的控制及发酵过程温度、pH、接种量和种龄的控制，以及消泡等多方面因素，来提控制高谷氨酸发酵过程的参数来提高发酵的质量以些方法。 【关键词】谷氨酸、发酵、控制 1.谷氨酸概述 谷氨酸学名：2-氨基-5-羧基戊酸。构成蛋白质的20种常见α氨基酸之一。作为谷氨酰胺、脯氨酸以及精氨酸的前体。L-谷氨酸是蛋白质合成中的编码氨基酸，哺乳动物非必需氨基酸，在体内可以由葡萄糖转变而来。D-谷氨酸参与多种细菌细胞壁和某些细菌杆菌肽的组成。符号：E。 1.1谷氨酸用途 1）下游产品开发 将有一定反应活性的双功能基试剂氯乙醇和L—谷氨酸直接酯化保护羧基，用三光气活化成其相应的N—羧酸酐，可直接得到侧链具有一定反应活性的聚L—氯乙基谷氨酸酯。谷氨酸可生产许多重要下游产品如L—谷氨酸钠、L—苏氨酸、聚谷氨酸等。 2）食品业 谷氨酸是在食品工业中应用较多的氨基酸。谷氨酸钠俗称味精，是重要的鲜味剂，对香味具有增强作用。谷氨酸钠广泛用于食品调味剂，既可单独使用，又能与其它氨基酸等并用。用于食品内，能显着提高食品的风味和有增香作用。谷氨酸作为风味增强剂可用于增强饮料和食品的味道，不仅能增强食品风味，对动物性食品有保鲜作用。 3）日用化妆品等 谷氨酸为世界上氨基酸产量最大的品种。如：N—酰基谷氨酸钠系列产品是由谷氨酸缩合而成的性能优良的阴离子表面活性剂，广泛用于化妆品、香皂、牙膏、香波、泡沫浴液、洗洁净等产品中。谷氨酸作为营养药物可用于皮肤和毛发。用于生发剂，能被头皮吸收，预防脱发并使头发新生，对毛乳头、毛母细胞有营养
链霉亲和素Streptavidin 说明书
链霉亲和素Streptavidin说明书 货号：S9170 规格：1mg/5mg/10mg 保存：-20℃干燥保存，有效期至少保持2年。 纯度：≥95% 活性：≥15Units/mg，（Green改良法测定）。 产品来源：大肠杆菌发酵工程菌株。 分子大小：60kDa 产品简介： 链霉亲和素（SA）是阿维丁链霉菌（Streptomyces avidinii）分泌的一种同型四聚体蛋白。与生物素具有很高的亲和力，本制品为127AA最佳核心结构，每分子SA结合4个生物素分子，国际比活性12-15 U/mg。SA与禽类亲和素（Avidin，AV）相比特异性更强，与生物素结合后半衰期长达6小时，而AV半衰期仅为1小时。由于SA不含糖基且等电点接近于中性，因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。 本制品已广泛应用于包被免疫检测用微孔板，制备SA偶联酶制剂（如SA-HRP、SA-AP等），SA偶联荧光素（即荧光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验，免疫组化化学、亲和色谱填料制备、含StrepTagⅡ标签（8-AA寡肽）的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究和生物芯片被料等生物技术领域。 使用方法： 一、微孔板包被 1.用碳酸钠缓冲溶液（pH9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成3-10ug/ml（客户可设定梯度进行实验） 注意：由于SA等电点是7.4，包被不建议使用中性缓冲液。 2.用移液器吸取100ul/孔，4℃过夜包被或者37℃包被2h；
3.洗涤：倒尽板孔中液体，加200ul洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使 孔中洗涤液流尽，扣干 4.后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程 若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。包被前，将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。 二、SA偶联磁珠 2.1NHS活化 1.充分混匀磁珠后，取100μl PangoBeads COOH磁珠到1.5ml离心管中，置于磁性分离上，待固液分 离后去除上清液； 2.取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液。 重复该步骤1次； 3.迅速加入新配制的50μl EDC溶液和50μl NHS溶液（均为50mg/ml，以上述MES配制）到装有磁 珠的离心管中，漩涡混匀使磁珠充分悬浮，室温下垂直混合30min； 4.反应结束后，加入100μl上述MES溶液洗涤2次；（活化状态不宜长时间保存，建议立即进行偶联）2.2蛋白偶联 1.将离心管置于磁性上，分离去除上清液，加入100μl蛋白溶液（25mM MES，pH 5.0）轻柔地混匀； （蛋白浓度在0.1-2.0mg/ml） 2.在室温下垂直混合反应2h，或在4℃条件下垂直混合过夜； 3.反应结束后将离心管置于磁分离架上，磁性分离去除上清液，加入1ml乙醇胺溶液（3M，pH9.0）洗涤 磁珠2次； 4.加1ml乙醇胺溶液（3M,pH9.0）于离心管中，涡旋30s，将离心管置于垂直混合仪中室温反应1-2h； 5.反应结束后，将离心管置于磁力架上，待固液分离后移除上清液，然后加入100μl纯化水轻柔涡旋30s， 磁吸分离，重复该步骤1次；
高中生物素的生理作用
生长素的生理作用 【引言】 经过多位科学家的研究，发现了生长素，那生长素到底有什么样的作用呢？这正是我们这节课所要讨论的话题。生长素能调节细胞的生长，但是其发挥作用时具着它的特殊性——两重性，既能促进生长，也能抑制生长；既能促进发芽，也能抑制发芽；既能防止落花落果，也能疏花疏果。在我们生产生活中，最常见的反映生长素两重性的事例就是顶端优势，植物的顶芽优先生长而侧芽生长受到抑制的现象。生长素和农业密切相关，在农业上，它既可以促进扦插枝条生根，也可以促进果实的发育，还可以防止落花落果。总之，植物体的生命活动是通过植物体内的激素调节来实现的，尽管植物激素的含量极少，但是却是植物的生长，发育和繁殖等生命活动能有条不紊，正常进行，使植物体更好的适应不断变化的环境。 【教学目标】 知识目标： 1、掌握生长素的生理作用，理解顶端优势的原理。 2、通过分析“生长素浓度与所起作用的关系”图，能够简述生长素作用的两重性；植物不同器官对生长素的敏感性不同。 3、描述植物顶端优势的现象、原因、解除方法及应用。 4、了解生长素及其类似物在农业生产实践中的应用。 能力目标： 1、学会用已学知识来分析问题、解决问题。 情感态度与价值观： 1、通过生长素的生理作用，训练学生将知识运用于实践的能力。 2、通过课后探究活动，培养协作精神。 【重点】·突破策略： 重点： 1、生长素在发挥生理作用时的特点——两重性。 2、生长素在农业生产中的应用。 突破策略： 1、分析图表，引导学生总结生长素发挥作用时所表现的特点。 2、通过日常生活中的事例的分析，让学生更加深刻的理解生长素在农业生产中的应用。 3、共同探究扦插枝条生根时所需的生长素类似物最适的浓度。 【难点】·突破策略： 难点： 1、顶端优势产生的原因以及在生产生活中常见的实例分析。 2、生长素生理作用的两重性及应用问题。 突破策略： 1、通过生产生活中常见实例让学生分析理解顶端优势。 2、借助“同一株植物的不同器官对生长素浓度的反应”曲线图，突破生长素生理作用的两重性。 【教具准备】 多媒体教学软件：松树的塔形树冠；去顶芽后侧芽的生长情况；植物某一器官对不同浓度生长素反应图；根、茎、芽三个器官对不同浓度生长素反应图。 【学法指导】：本节内容可读性强，实验性强，动态性强。在教学过程中，引导学生学会运用理论知识于实验设计中；科学指导学生通过阅读、观察、课后实验等方法去落实知识。
生物素标记EMSA探针-AP1
生物素标记EMSA探针－AP1 产品简介： 生物素标记EMSA探针－AP1是用于EMSA(也称gel shift)研究的并经生物素(Biotin)标记的AP1 consensus oligonucleotide。 这个生物素标记的双链寡核苷酸含有公认的AP1结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。 AP1 consensus oligo的序列如下： 5’-CGC TTG ATG ACT CAG CCG GAA-3’ 3’-GCG AAC TAC TGA GTC GGC CTT-5’ 本生物素标记EMSA探针已经过纯化，可以直接用于EMSA结合反应。 本生物素标记EMSA探针可以和碧云天的化学发光法EMSA试剂盒(GS009)配套使用。 一个包装的生物素标记探针可以进行约200-400个样品的EMSA检测。 保存条件： -20℃保存，一年有效。 注意事项： 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。 对于基于生物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考碧云天的化学发光法EMSA试剂盒(GS009)的使用说明。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.本生物素标记EMSA探针用于EMSA结合反应时，参考如下步骤进行： A.如下设置EMSA结合反应： 阴性对照反应： Nuclease-Free Water 7-7.5μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 0μl 生物素标记探针 0.5-1μl 总体积 10μl 探针冷竞争反应： Nuclease-Free Water 4-4.5μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2μl 未标记的探针 1μl 生物素标记探针 0.5-1μl 总体积 10μl Super-shift反应： Nuclease-Free Water 4-4.5μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2μl 目的蛋白特异抗体 1μl 生物素标记探针 0.5-1μl 总体积 10μl 样品反应： Nuclease-Free Water 5-5.5μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2μl 生物素标记探针 0.5-1μl 总体积 10μl 突变探针的冷竞争反应： Nuclease-Free Water 4-4.5μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2μl 未标记的突变探针 1μl 生物素标记探针 0.5-1μl 总体积 10μl
链霉亲和素磁珠
链霉亲和素磁珠 保存：2~8℃保存，有效期1年。 产品说明： 链霉亲和素-生物素（SA-Biotin）系统具有极高的结合亲和力（Kd=10^-15），在生物领域具有广泛的应用。Streptavidin采用蛋白偶联技术将SA共价连接于固相载体表面，可高效结合生物素化抗体、核酸、蛋白等配体分子。本产品采用超顺磁性微球，粒径均一、形貌规整，有利于方便、快捷地捕获目标分子以及实现磁性分离。本产品可配套自动化设备进行高通量操作。 产品信息： 产品信息SA磁珠（1μm）SA磁珠（2μm） 游离生物素1100pmol/mg磁珠1000pmol/mg磁珠 生物素化单链寡核苷酸(24nt)500pmol/mg磁珠400pmol/mg磁珠 生物素化IgG20μg/mg磁珠20μg/mg磁珠 磁珠浓度10mg/mL 磁珠表面亲水基团 保存溶液1×PBS，含0.1%（v/v）Tween-20，0.1%（w/v） NaN3 产品应用范围： （1）免疫检测、分离蛋白、细胞分选等。Streptavidin可特异性地结合生物素化抗体或抗原，作为免疫检测、ELISA等固相反应载体，或用于分选细胞等。 （2）分离核酸、制备核酸探针等。Streptavidin可特异性地结合生物素化的核酸探针，广泛应用于DNA、RNA的杂交实验。 （3）DNA-蛋白质相互作用研究。Streptavidin可特异性地结合生物素化的靶点DNA或RNA片段，可用于蛋白质与核酸相互作用研究。 结合生物素化分子操作流程（本操作以适用于链霉亲和素磁珠系列所有产品） 1.使用前准备 1.1缓冲液：以下为常用的缓冲液成分，用户可根据需要调整缓冲液的盐浓度及pH
DNA3’端生物素标记
1、准备工作： A、取出TdT Buffer (5X)、Biotin-11-dUTP和Ultrapure water溶解，并置于冰浴上备用。 B、取出待标记的单链EMSA探针，用水稀释至1μM，并置于冰浴上备用。如果待标记的EMSA探针为双链， 95℃加热2分钟，然后立即放置到冰水浴中，使双链的EMSA探针转变为单链的探针，然后同样用水稀 释至总的单链DNA浓度为1μM，即每条单链的浓度为0.5μM，相当于最初双链的EMSA 探针浓度为0.5μM。 2、DNA探针的标记： Ultrapure water 29μl TdT Buffer(5X) 10μl 待标记探针(1μM) 5μl Biotin-11-dUTP(5μM) 5μl TdT(10U/μl) 1μl 总体积 50μl A、参考上述设置反应体系。注：对于双链的EMSA探针的标记反应，建议一次做两管，即总体积共100μl，以最终获得足够的生物素标记EMSA探针用于后续EMSA检测。 B、用枪轻轻吹打混匀，切勿vortex。37℃孵育30分钟。 C、加入2.5μl 探针标记终止液，轻轻混匀终止反应。 3、TdT的去除： A、探针标记反应终止后，加入52.5μl氯仿-异戊醇(24:1)，vortex使有机相和水相充分混合以抽提TdT(说明：静止后有机相和水相会很快分层)。 B、12000-14000g离心1-2分钟。吸取上清备用。上清即为被生物素标记的单链DNA探针。 4、探针的纯化(选做)： 通常为实验简便起见，可以不必纯化标记好的探针。有些时候，纯化后的探针会改善后续实验的结果。 如需纯化，可以按照如下步骤操作： A、对于100μl标记好的探针，加入1/4体积即25μl的5M醋酸铵，再加入2体积即200μl的无水乙醇，混匀。 B、-70℃至-80℃沉淀1小时，或-20℃沉淀过夜。 C、4℃，12,000g-16,000g离心30分钟。小心去除上清，切不可触及沉淀。 D、4℃，12,000g-16,000g离心1分钟。小心吸去残余液体。微晾干沉淀，但不宜过分干燥。 E、加入50μl TE，完全溶解沉淀。标记好的探针可以-20℃保存。 5、生物素标记探针标记效率的检测： A、取5μl Biotin-Control Oligo(0.4μM)，加入196μl TE，混匀，稀释成10nM Biotin-Control Oligo(作为标准品)。取出适量10nM Biotin-Control Oligo，依次稀释成5nM、2.5nM、1nM、0.5nM和0.25nM。 B、取3μl步骤3B所获得的生物素标记的DNA探针(100nM)，加入27μl TE，混匀，稀释成10nM 生物素标记的探针(作为待测样品)。取出适量的10nM 生物素标记的探针，依次稀释成5nM、2.5nM、1nM、0.5nM和0.25nM。 C、参考下面的表格，取一适当大小的带正电荷尼龙膜，在膜上做好相应标记。对于经过
(完整版)谷氨酸发酵
1）生物素营养缺陷型 ?作用机制:生物素是脂肪酸生物合成最初反应的关键酶乙酰CoA羧化酶的辅酶,参与 了脂肪酸的合成,进而影响脂肪酸的合成.当磷脂合成量少到正常的1/2左右时,细胞变形,Glu向膜外泄漏. ?控制关键:使用该类突变株必须限制发酵培养基中生物素亚适量(5-10 g/L).在发酵 初期(0-8小时),细胞正常生长,当生物素耗尽后,在菌的再次倍增时,开始出现异常形态细胞,即完成了细胞从生长型到积累型转换. 2）油酸营养缺陷型 ?作用机制:油酸营养缺陷型丧失了合成油酸的能力,通过控制油酸使磷脂合成量减少 到正常量的1/2左右. ?控制关键:保证在培养基中油酸亚适量,完成细胞从生长型到生产型的转换. （3）添加表面活性剂 ?添加表面活性剂(如吐温60)或不饱和脂肪酸(C16-18),也能造成细胞渗漏,积累谷氨 酸. ?机理:两者在脂肪酸合成时对生物素有拮抗作用,导致磷脂合成不足,形成不完整的细 胞膜. ?关键:控制好脂肪酸或表面活性剂的时间和浓度,必须在药剂加入后,在这些药剂存在 下进行分裂,形成产酸型细胞. （4）添加青霉素 ?机理:青霉素抑制谷氨酸生产菌细胞壁后期的合成,细胞膜在失去保护,在渗透压的作 用下受损,向外泄露谷氨酸. ?控制关键:一般在进入对数生长期的早期(3-6小时)添加.添加青霉素后倍增的菌体不 能合成完整的细胞壁,完成细胞功能的转换. 谷氨酸发酵强制控制工艺 ?为了稳产,克服培养基原料中某些成分不易控制带来的影响,在谷氨酸发酵时可采取 “强制控制”的方法,如:“高生物素高吐温”或“高生物素高青霉素”的方法. ?控制方法:在发酵培养基中预先配加一定量(过量)的纯生物素,大大地削弱每批原料 中生物素含量变化的影响,高生物素、大接种量能促进菌体迅速增殖.再在菌体倍增的早期加入相对高的吐温或青霉素,形成产酸型细胞.固定其它条件,确保高产稳产。谷氨酸发酵 ? 1.适应期:尿素分解出氨使pH上升.糖不利用.2-4h. 措施:接种量和发酵条件控制使适应期缩短. ? 2.对数生长期:糖耗快,尿素大量分解使pH上升,氨被利用pH又迅速下降.溶氧急剧 下降后维持在一定水平.菌体浓度迅速增大,菌体形态为排列整齐的八字形.不产酸.12h. 措施:及时供给菌体生长必须的氮源及调节pH,在pH7.5-8.0时流加尿素;维持温度30- 32℃ ? 3.菌体生长停止期:谷氨酸合成. 措施:提供必须的氨及pH维持在7.2-7.4.大量通**,控制温度34-37 ℃. ? 4.发酵后期:菌体衰老,糖耗慢,残糖低. 措施:营养物耗尽酸浓度不增加时,及时放罐. 发酵周期一般为30h. 二、谷氨酸发酵的生化过程
谷氨酸发酵
谷氨酸发酵 目前工业上应用的谷氨酸产生菌有谷氨酸棒状杆菌、乳糖发酵短杆菌、散枝短杆菌、黄色短杆菌、噬氨短杆菌等。我国常用的菌种有北京棒状杆菌、纯齿棒状杆菌等。 谷氨酸除用于制造味精外，还可以用来治疗神经衰弱以及配制营养注射液等。我国的谷氨酸发酵虽然在产量、质量等方面有了较大的提高，但与国外先进水平相比还存在一定差距。主要表现在：设备陈旧，规模小，自控水平、转化率和提取率低，易受噬菌体污染，废水污染问题尚未完全解决等。 一、菌种的选育 主要通过基因突变、基因工程、细胞工程得到优良的菌种。 可以从自然界中先分离出相应的菌种，再用物理或化学的方法使菌种产生突变，从突变个体中筛选出符合生产要求的优良菌种。 在谷氨酸发酵中，如果能够改变细胞膜的通透性，使谷氨酸不断地排到细胞外面，就会大量生成谷氨酸。研究表明，影响细胞膜通透性的主要因素是细胞膜中的磷脂含量。因此，对谷氨酸产生菌的选育，往往从控制磷脂的合成或使细胞膜受损伤入手，以提高细胞膜对谷氨酸的通透性，如生物素缺陷型菌种的选育。 1.谷氨酸生产菌的生化特征 1. α-酮戊二酸氧化能力微弱: α-酮戊二酸脱氢酶丧失或活性低. 2. 谷氨酸脱氢酶活性强. 3. 还原性辅酶Ⅱ(NADPH+H+)进入呼吸链能力缺陷或微弱. 4. 异柠檬酸裂解酶活力微弱. 5. 不利用谷氨酸. 6. 耐高糖耐高谷氨酸 . 7. CO2固定能力强. 8 .解除谷氨酸反馈抑制. 9. 具有向胞外分泌谷氨酸的能力. 2.谷氨酸产生菌 棒杆菌属：北京棒杆菌 钝齿棒杆菌 谷氨酸棒杆菌 短杆菌属：黄色短杆菌 产氨短杆菌 小杆菌属：嗜氨小杆菌 节杆菌属：球形节杆菌 3.共同点： 1. α-酮戊二酸氧化能力微弱: α-酮戊二酸脱氢酶丧失或活性低. 2. 谷氨酸脱氢酶活性强. 3. 还原性辅酶Ⅱ(NADPH+H+)进入呼吸链能力缺陷或微弱. 4. 异柠檬酸裂解酶活力微弱. 5. 不利用谷氨酸.
生物素标记试剂盒使用说明书
生物素标记试剂盒 使用说明书 货号: EBLK0002
产品介绍： Elabscience生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂，用于含有氨基（NH2-）抗体的标记。生物素已经活化，可直接使用，每个试剂盒足以完成3次标记，每次可标记0.2-2mg。试剂盒中包括6个用于抗体标记脱盐的Filtration tube，不用透析，操作简便，熟练操作90min可完成整个标记过程。 产品特点： 试剂全面:本试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂。 快速:整个过程仅需90min。 方便:通过Filtration tube即可脱盐，无需透析或者凝胶过滤。 使用灵活:既可用于微量标记又可大量标记，每次可标记0.2-2mg。 理想的标记效果:已经优化确定了最适的标记比例，降低标记不足或由于过度标记而失活的可能性。 产品组成： 标记过程需要仪器： 1. 10ul，50ul，200ul，1000ul可调高精度移液器 2. 恒温箱（37℃） 3. 离心机（离心力可达到12,000×g） 储存条件： 本试剂盒未开封前在2-8℃可稳定保存一年
生物素标记反应原理： NH2-Reactive Biotin专一地与伯胺反应（N-末端及赖氨酸残基侧链）形成稳定的酰胺键 生物素标记NH 2 -Reactive Biotin使用量的计算： 每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度。通过优化，我们确定了标记2mg/ml的抗体（IgG ，150KD），使用生物素和抗体的分子比为20:1能达到较理想的标记效果。 1、标记2mg/ml的抗体，使用生物素和抗体的分子比为20:1时，应加入生物素量的计算方 法： ml蛋白×2mg蛋白 ml蛋白×1mmolIgG 150,000mgIgG ×20mmol生物素 mmol蛋白 = mmol生物素 2、对于10mmol的生物素溶液，应加入反应中该生物素体积的计算方法： mmol生物素×1,000,000μL L ×L 10mmol = ul生物素 计算示例： 对于0.5ml 2mg/ml的IgG（分子量为150,000）溶液，需加入10mM的生物素溶液13.3ul。 0.5ml IgG×2mgIgG 1mLIgG ×1mmolIgG 150,000mgIgG ×20mmol生物素 1mmolIgG =0.000133mmol生物素 0.000133mmol生物素×1,000,000μl L ×L 10mmol =13.3ul生物素溶液 操作过程： 实验前准备： 1.仔细阅读使用说明书。 2.计算待使用NH2-Reactive Biotin的量。 3.提前20min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（注：不需要用到的NH2- Reactive Biotin 继续放置冰箱中）。
34抗体的标记——生物素(Biotin)
抗体/蛋白的生物素（Biotin）标记 一般每个抗体可以标记3～5个生物素，标记时，生物素与抗体的比率受抗体浓度影响，对于10 mg/ml 的抗体溶液来说，生物素应超过蛋白12倍（摩尔数），对于2 mg/ml 的抗体溶液应超过20倍，生物素也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。 蛋白样品不得含有叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物。 SOP35 抗体/蛋白的生物素（Biotin）标记 1. 抗体/蛋白的前处理： 1.1 选择适当截留的超滤柱中加入400μl 标记反应溶液（0.1M PBS pH 7.2），加入1mg抗体，混匀。 1.2 4℃，6,000rpm，离心2min，弃滤液；于超滤柱中再加入200μl标记反应溶液，混匀。4℃，6,000rpm，离心2min， 1.3 重复步骤1.2 6～7次。 1.4 混匀超滤柱中的残留的液体，室温静置1min；将超滤柱反转倒置于一新的超滤管中，4℃，6,000rpm，2min，收集液体。 1.5 取50μl PBS于超滤柱中混匀，静置1min。倒置超滤柱，4℃，6,000rpm，2min，收集液体。 1.6 步骤1.4 与步骤1.5 的收集的滤液合并，用标记反应溶液调节抗体浓度到2mg/ml，4℃放置备用。 2. 生物素的标记： 2.1 将生物素溶解在合适的溶剂中（请参照所选购生物素的说明书，不同的生物素其溶剂不同），浓度为20mg/ml,按照生物素与抗体分子摩尔比1:20的比例加入抗体溶液，室温反应1h。 2.2 葡聚糖凝胶分离纯化/透析袋或者超滤管去除游离生物素及其他试剂。 2.3 将抗体保存于合适的抗体保存液。 进行抗体标记的时候，需要对抗体性质、交联剂和标记物的性质非常了解，否则很难标记出高品质的抗体；标记量低，导致信号值低；标记量太高，不但容易造成背景，并且还容易由于标记物的聚集造成信号拮抗，反而降低或者淬灭信号值。标记物的种类繁多，不同类型的标记物其性质完全不一样，标记物很难选择和把握，建议初学者使用专业化的试剂盒进行标记，或者直接委托专业化公司标记。福因德生物提供以下抗体标记相关产品，同时可以提供抗体/蛋白标记服务。
年产三万吨谷氨酸的发酵罐设计与选型
年产3万吨谷氨酸发酵罐设计 目录 第一章前言 第二章谷氨酸发酵罐的主要技术指标 第三章谷氨酸生产工艺流程及计算 3.1谷氨酸生产原料及处理 3.2谷氨酸生产工艺流程图 第四章谷氨酸发酵罐的总物料衡算 4.1谷氨酸生产的工艺技术指标 4.2谷氨酸发酵车间的物料衡算 4.3三万吨谷氨酸发酵车间的物料衡算结果表 第五章谷氨酸发酵罐的设计与选型 5.1谷氨酸发酵罐空管灭菌蒸汽用量 5.2发酵罐的选型 5.3生产能力、数量和容积的确定 5.4主要尺寸的计算 5.5冷却面积的计算 5.6搅拌器计算 5.7搅拌轴功率的计算 5.8设备结构的工艺计算 5.9设备材料的选择 5.10发酵罐壁厚的计算
5.11接管设计 5.12支座选择选用裙式支座 第六章发酵罐的设计图 第一章前言 谷氨酸是一种氨基酸, 其用途非常广泛,可用于食品、医学、化妆品等，它是非人体所必需氨基酸，但它参与许多代过程，因而具有较高的营养价值，在人体，谷氨酸能与血氨结合生成谷氨酰胺，解除组织代过程中所产生的氨毒害作用，可作为治疗肝病的辅助药物，谷氨酸还参与脑蛋白代和糖代，对改进和维持脑功能有益。另外，众所周知的谷氨酸钠盐即味精有很强烈的鲜味，是重要的调味品。 第二章谷氨酸发酵罐的主要技术指标 根据常识，一个良好的发酵罐应满足下列要求：①结构严密，经得起蒸汽的反复灭菌，壁光滑，耐腐性好，以利于灭菌彻底和减小金属离子对生物反应的影响；②有良好的气-液-固接触和混合性能以及高效的热量、质量、动量传递性能；③在保持生物反应要求的前提下，降低能耗；④有良好的热量交换性能，以维持生物反应最是温度；⑤有可行的管道比例和仪表控制，适用于灭菌操作和自动化控制。 本论文设计原理是基于强化传质、传热等操作，将生物体活性控制在最佳状态，降低总的操作费用。另外，发酵罐部状态也是不可忽视的影响因素。 初步确定主要技术指标如表1所示。 表1主要技术指标
生物素标记抗体的免疫荧光方法
生物素标记抗体的免疫荧光方法 *重要提示：在开始实验前请查阅所用抗体的说明书中第一页应用（APPLICATIONS）部分，确认这支抗体已经验证过可用于你计划采用的本实验方法中的特定方案。 A.所需溶液和试剂 注意：用Milli-Q超纯水或是相当级别的水配制溶液。 1.10 X磷酸盐缓冲液(PBS): 1升水中加入80 g 氯化钠(NaCl), 2 g 氯化钾(KCl), 14.4 g 磷 酸氢二钠(Na2HPO4) and 2.4 g 磷酸二氢钾(KH2PO4)。调整pH到7.4。 2.甲醛溶液，16%，无甲醇的类型，Polysciences, Inc. (cat# 18814) ，现配现用。开封 以后放在4°C避光保存。使用时用PBS稀释。 3.二甲苯 4.无水乙醇，组织学级，100%和95%。 5.蒸馏水(dH2O) 6.封闭缓冲液：配制25ml时，2.5 ml 10X PBS和1.25ml正常血清（来源与二抗相同， 例如正常山羊血清，正常驴血清）兑到21.25ml的蒸馏水中，混匀。边搅拌边加入75μL Triton X-100(100%) 7.抗体稀释缓冲液配置40ml时，取4 ml 10X PBS兑入36 ml蒸馏水，混匀。加入0.4 BSA，使溶解。边搅拌边加入120μL Triton X-100(100%)。 8.10 mM 柠檬酸钠缓冲液配置1L时，称取2.94g二水合柠檬酸三钠(C6H5Na3O7?2H2O) 溶解在1L蒸馏水中。调整pH为6.0。 9.荧光素标记的抗生物素蛋白Avidin/Streptavidin 注意：第一次使用不论是一抗还是荧光素标记的抗生物素蛋白Avidin/Streptavidin时，都需要做滴定分析以判断何种稀释比例能在你的样品上得到最强的特异信号同时背景保持最低 11.Prolong? Gold 抗淬灭试剂(Invitrogen, Eugene, OR, Cat# P36930) B.样品制备 I.细胞系培养物来源(IF-IC) 重要提示：查阅说明书中APPLICATIONS部分，确认所用抗体可用于IF-IC。 注意：细胞应直接在多孔板，腔室玻片或是盖玻片上直接培养，处理，固定和染色。 1.用PBS稍加润洗。 2.吸去PBS，将细胞泡在2-3 mm厚的2-4%甲醛溶液（PBS配制）中。 注意：甲醛有毒，需要在通风橱中操作。 3.室温下固定细胞15分钟。 4.吸去固定剂，用PBS润洗三次，每次五分钟。 5.甲醇打孔步骤（是否需要参考抗体说明首页）在甲醛固定后，将细胞浸泡在冰纯甲 醇中（加入足量甲醇完全盖住细胞，液层厚度在3-5mm，千万别让细胞干掉），–20°C 孵育10分钟。用PBS润洗5分钟。 6.继续C部分的免疫染色。 II.石蜡切片(IF-P) 重要提示：查阅说明书中APPLICATIONS部分，确认所用抗体可用于IF-P。 脱蜡处理/再水化 1.用二甲苯浸洗切片3次，每次5分钟。 2.用无水乙醇浸洗切片2次，每次10分钟。 3.用95%乙醇浸洗切片2次，每次10分钟 4.在蒸馏水中润湿2次，每次5分钟。 抗原暴露：
谷氨酸发酵知识完全总结
谷氨酸的性质及基本介绍 147.12926 1.538 主要用途简介： （一）食品工业：谷氨酸钠俗称味精，是重要的鲜味剂，对香味具有增强作用。 （二）日用化妆品：谷氨酸作为营养药物可用于皮肤和毛发。 N—酰基谷氨酸钠系列产品是由谷氨酸缩合而成的性能优良的阴离子表面活性剂，广泛用于化妆品、香皂、牙膏、香波、泡沫浴液、洗洁净等产品中。 焦谷氨酸钠（味精脱水生成的产物）具有极强的吸湿性，能保持皮肤湿润，防止干燥，并增强皮肤和毛发的柔软和弹力。日本己有以谷氨酸钠（或谷氨酸）为原料生产的高级人造革、化妆品和洗涤剂等产品。 （三）医药行业：谷氨酸作有较高的营养价值，医学上主要用于治疗肝性昏迷，还用于改善儿童智力发育。 （四）农业：谷氨酸与某些激素配合，可制成柑桔增甜剂；还可作为微肥的载体，在氮磷钾基本满足的条件下，作为叶面喷洒的微肥具有投入少、效益高等特点。 谷氨酸钠既是西红柿保护性杀菌剂，又是防治果树腐烂病的特效杀菌剂。 氨基酸铜是目前生产上良好的杀菌剂，有机铜比无机铜的应用效果好。 特殊说明： （一）谷氨酸晶体为白色结晶或结晶性粉末，味微酸。 （二）吸湿性温度50℃，其临界湿度在90%以上。
谷氨酸生产水平与市场分析 生产水平： 谷氨酸棒状杆菌-生物素敏感型高产菌株：采用生物素亚适量工艺，发酵32h，产酸达140g/L以上，糖酸转化率达62%以上，国内同类研究的领先水平。 谷氨酸棒状杆菌-谷氨酸温度敏感型突变株：在最佳发酵条件下，发酵24h，产酸达到160g/L，糖酸转化率达72%，国际同类研究的先进水平。 市场分析： 我国味精工业的产量稳居世界第一位，2007年全国味精产量达190万吨。味精工厂的味精平均销售价格为7,800元/吨，成本为7,000元/吨。按照上述产量计算，我国味精工业中纯味精的总产值约150亿元，加上相当于上述总值30%的副产品（主要是饲料蛋白、化肥、液态肥料）的产出，我国味精工业年生产总值约为200亿元人民币。 从市场需求来看，2007年国内谷氨酸年产量约190万吨，国内人均消费味精仅1kg，与日本、香港、台湾、东南亚等国家及地区的味精消费水平（1.5kg）相比，还是较低的。味精综合开发利用的效益显著，通过提高产酸率，吨味精成本可降低500元左右，其生产成本将低于日本的味精生产成本，具备了参与国际市场的竞争力，可以抓住机遇扩大味精出口量。同时在国内可降低味精销售价格，刺激国内市场消费。
亲和素和生物素的ELISA试剂盒的应用
亲和素和生物素的ELISA试剂盒的应用 亲和素-生物素系统在ELISA试剂盒中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA试剂盒中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素-酶结合物，以放大反应信号。 应用亲和素和生物素的ELISA试剂盒,亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉亲和素。生物素又称维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素-羟基琥珀亚胺酯(BNHS)可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素医学教育网整理化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA试剂盒偶联起来，就可大大提高ELISA试剂盒的敏感度。 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。【试剂盒规格】：48T/96T 【试剂盒方法】：酶联免疫法/酶免法(ELISA) 【性状】：液态 【试剂盒种属】马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。 【试剂盒标本】血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等 【用途】：科研实验 【贮存】：贮存于2℃-8℃. ELISA试剂盒操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 本公司长期供应进口ELISA试剂盒，种属齐全,有专门检测人、小鼠、大鼠、豚鼠、猪、狗、猴、羊、牛、鸡、兔等各种样本科研试剂盒。试剂盒提供免费代测、技术指导、全方位售后服务，欢迎来电咨询。
几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记
几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、 生物素标记 抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等，还有一些其他的标记方法例如金标记，本文主要讲述了这些抗体标记的基本原理、操作步骤。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶(HRP)标记辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG 后该醛基与IgG氨基结合，形成Schiff氏碱。为了防止HRP 中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。氧化反应末了，用硼氢化钠稳定Schiff氏碱。这里介绍两种程序。 程序一： (1)将5mg HRP溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3溶液中;加0.5ml 10mmol/L NaIO4溶液，混匀，盖紧瓶塞，室温避光作用2小时。 (2)加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3混匀。 (3)加入0.75ml小鼠已处理的腹水，或纯化单抗等 (15mg/ml)，混匀。 (4)称取Sephadex
G25干粉0.3g，加入一支下口垫玻璃棉的5ml注射器外筒内;随后将上述交联物移入注射器外套;盖紧，室温作用(避光)3小时或4℃过夜。 (5)用少许PBS将交联物全部洗出，收集洗出液，加 1/20V体积新鲜配制的5mg/ml NaBH4溶液，混匀，室温作用30分钟;再加入3/20V NaBH4溶液，混匀，室温作用1小时(或4℃过夜)。 (6)将交联物过Sephadex g200或Sepharose 6B(2.6×50cm)层析纯化，分管收集第一峰。 (7)酶结合物质量鉴定： 克分子比值测定 酶量(mg/ml)=OD403×0.4 IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.3)×0.62 克分子比值(E/P)=酶量×4/IgG量，一般在1-2之间。酶结合率=酶量×体积/抗体，标记率一般为0.3-0.6，即1-2个HRP分子结合在一个抗体分子上，标记率可大于0.6，0.8，0.9;OD403/OD280等于0.4时，E/P约为1。 标记率=OD403/OD280 酶活性和抗体活性的测定可应用ELISA法、免疫扩散、DAB-H2O2显色反应测定酶结合物的酶活性，抗体活性及效
链霉亲和素商品化应用简介
链霉亲和素商品化应用简介 一、链霉亲和素性质 链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性（pH6.0）的蛋白质，并且不带任何糖基。 链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015L／mol。在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10～12和Ｃ端19-21间断裂，形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示，１mg链霉亲和素的最高活性可达18U。 二、亲和素和链霉亲和素的比较 相同点 1、生物素结合能力：AV：13~15U，SA：14~18U 2、活性中心依赖于色氨酸-懒氨酸：亲和素在氨基酸序列的70-70和110-111 两个位点有色氨酸-懒氨酸，链霉亲和素在氨基酸序列的79-80和120-121两个位点含有色氨酸-懒氨酸。
不同点： 1、分子量：AV=66KD, SA=54KD 2、等电点：AV=10.5, SA=6.0, AV带正电较多，非特异性结合较强。 3、位阻效应：SA的生物素结合位点较AV深，位阻效应较强，长臂生物素更适 合。 4、生物素的结合：AV随机结合，SA协同结合。 5、氨基酸序列：AV含二硫键和10%糖，SA含甘氨酸丙氨酸较多，无糖和二 硫键。 三、链霉亲和素在ELISA中的应用 酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 生物素－链霉亲和素系统在ELISA中的应用有多种形式， 1、用于间接包被：可以在固相上先预包被链霉亲和素，原用吸附法包被固 相的抗体或抗原与生物素结合，通过链霉亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗原间接包被。这种包被法主要有以下优点： ① 增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。 ② 阴性对照、空白对照本底低，检测敏感性高。 ③ 用链霉亲和素替代抗体包被微孔，避免了抗体包被微孔时容易发生失活
谷氨酸发酵控制
一简述甜菜糖蜜添加吐温发酵的机理！！！ 吐温是一种表面活性剂，它是在菌体细胞不饱和脂肪酸合成的过程中，作为抗代谢物具有抑制作用，对生物素具有拮抗作用。通过拮抗脂肪酸的生物合成，达到控制磷脂合成，导致磷脂合成不足。结果形成磷脂合成不足的不完全的细胞膜，提高了谷氨酸向膜外漏出的渗透性。 二简述甘蔗糖蜜添加青霉素流加糖发酵的机理！！！ 添加青霉素可抑制谷氨酸生产菌细胞壁的后期合成，主要抑制糖肽转肽酶，影响细胞壁肽聚糖的生物合成。因为青霉素的结构与革兰氏阳性的谷氨酸菌所特有的糖肽的D-Ala-D-Ala末端结构类似，因而它取代合成糖肽的底物而和酶的活性中心结合，是五肽末端的丙氨酸不能被肽酶移去，谷氨酸桥一头无法与它前面的丙氨酸相接，因此交联不能形成，网状的结构连接不起来，糖肽的合成就不能完成，于是菌体内的尿二磷和N-乙酰胞壁酸便大量的积累，青霉素与转肽酶相结合，形成了青霉素的酶，结果形成不完全的细胞壁，导致形成不完全的细胞膜。由于青霉素合成细胞壁后期生物合成，是细胞膜处于无保护的状态，又由于膜内外的渗透压差，进而导致细胞膜的物理损伤，形成不完全的细胞膜，失去渗透障碍物，增大了谷氨酸向胞外分泌的渗透能力。 三简述温度敏感突变株发酵生产谷氨酸的机理！！！ 谷氨酸温度敏感突变株的突变位置是在决定与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜结构基因上，发生碱基的转换或者颠换，一个碱基被另一
个碱基所置换，这样为该基因所指导的酶在高温下失活，导致细胞膜某些结构的改变，当控制培养温度为最适温度时，菌体正常的生长，当温度提高到一定的程度时，菌体便停止生长且大量的产酸。而它仅需通过控制物理的方式就可以完成谷氨酸生产菌由生长型细胞向产酸型细胞的转变。 四简述谷氨酸发酵培养基对发酵的影响及控制措施！！！ 影响因素及控制措施如下： 1.生物素 谷氨酸在发酵的过程中，前期：菌体的生殖期，一定量的生物素是菌体增殖期所必须的一般在5ug/L，而在产物合成期，要控制生物素的浓度,一般在0.5ug/g，以保证产物的正常合成。 2. 碳源 谷氨酸产生菌均不能利用淀粉，只能利用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等；有些菌种能利用醋酸、乙醇、正烷烃等作碳源。淀粉水解糖的质量对发酵影响很大。一般还原性的糖的浓度控制在125—150g/L。 3 碳氮比 碳氮比对谷氨酸发酵影响很大，在发酵的不同阶段，控制碳氮比以促进以生长阶段向产酸阶段转化，在长菌阶段，如氨根离子过量会抑制菌体生长，在产酸阶段，如氨根离子不足，a-酮戊二酸不能还原并氨基化，而积累a-酮戊二酸，谷氨酸生成量少。 一般发酵工业碳氮比为100：(0.2～2.0)，谷氨酸的碳氮比为100：(15～30)，当碳氮比在100：11以上才开始累积谷氨酸。