动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法
畜产品中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测技术
2016年第9期（下半月）农民致富之友 Nong Min Zhi Fu Zhi You276财经◎畜牧兽医畜产品中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测技术穆伟峰（新乡市畜产品质量监测检验中心，河南新乡 450003）[摘 要] 目的改善畜产品中氟喹诺酮类药物残留检测。
方法样品经过磷酸盐缓冲液提取，过HLB固相萃取柱，用适当乙腈比例的流动相进行分离。
结果鸡肉、鸡蛋、猪肉样品回收在85%—95%之间。
结论操作简单，回收稳定。
[关键词] 畜产品 氟喹诺酮 药物残留 高效液相色谱法[中图分类号] S826 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650(2016)09-0276-011 材料与方法1.1 仪器与试剂Waters2695高效液相色谱仪，15厘米C 18粒径5um 液相色谱柱，WatersHLB 固相萃取柱（30mg ），安捷伦1200荧光检测器，高速离心机，高速振荡匀浆器。
恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、达氟沙星标准品，色谱纯乙腈、甲醇，超纯水，其他试剂均为分析纯。
1.2 工作试剂配制5.0mol/L 氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和溶液28mL 加水稀释至100mL 。
0.03mol/L 氢氧化钠溶液：取5.0mol/L 氢氧化钠溶液0.6mL 加水稀释至100mL 。
0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液：取浓磷酸3.4mL 用水稀释至1000mL ，用三乙胺调pH 至2.4。
30%乙腈缓冲液：取30mL 乙腈和70mL0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液混合。
磷酸盐提取液：取磷酸二氢钾6.5g 加水稀释至500mL ，用5.0mol/L 氢氧化钠溶液调pH 至7.0。
洗脱液：乙腈与0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液2比8配制。
流动相：乙腈与0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液14比86配制。
1.3 标准溶液配制准确称取恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星约25.00mg ，达氟沙星5.00mg ，用0.03M 氢氧化钠溶液定容于25mL 容量瓶中，制成标准储备液，根据称量量和标准品浓度计算标准溶储备液浓度，分别约为1mg/mL 和0.2mg/mL 。
喹诺酮类药物残留量的测定 标准
喹诺酮类药物残留量的测定标准一、引言喹诺酮类药物是一类常用的抗菌药物，被广泛应用于畜禽养殖业和养殖水产业中，以预防和治疗动物植物的感染疾病。
然而，由于长期和滥用使用，喹诺酮类药物在畜禽产品中的残留量问题日益严重，给食品安全带来了一定的挑战。
为了保障消费者的健康和食品安全，加强对喹诺酮类药物残留量的测定标准显得尤为重要。
二、国内外对喹诺酮类药物残留量的测定标准1. 国际标准在国际上，对于喹诺酮类药物残留量的测定标准，主要是由国际食品安全标准委员会（Codex Alimentarius Commission）和世界卫生组织（WHO）制定并发布的《动物兽药残留限量国际标准》。
在该标准中，对不同种类的喹诺酮类药物在畜禽产品中的残留量都有详细的规定和限定，以确保产品的安全合格。
2. 国内标准在我国，对于喹诺酮类药物残留量的测定标准主要由国家食品安全标准委员会负责制定和管理。
国家食品安全标准委员会及其下属的各专业委员会，根据国家食品安全相关法律法规的要求，不断进行标准的修订和完善，以适应国内外食品安全形势的发展和变化。
三、喹诺酮类药物残留量的测定方法1. 高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前国际上常用的一种喹诺酮类药物残留量测定方法。
该方法准确、灵敏度高，并且可对多种喹诺酮类药物进行同时测定，适用于不同类型的畜禽产品。
2. 超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）超高效液相色谱-串联质谱法是一种新型的分析技术，具有分辨率高、灵敏度高和分析速度快的特点。
该方法适用于对喹诺酮类药物残留量进行快速准确的测定，是当前国内外研究和应用的热点之一。
四、个人观点和理解在我看来，喹诺酮类药物残留量的测定标准是食品安全监管中的重要环节，它不仅关乎着畜禽产品的质量和安全，更关系着广大消费者的身体健康和生命安全。
当前，我国在食品安全监管方面已取得了一定的成绩，但也面临着一些挑战和问题，如标准的实施和监管不到位等。
动物性食品中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱检测方法的研究进展
2019年第6期(总第211期)动物性食品中氟卩奎诺酮类药物残留高效液相色谱检测方法的研究进展焦安祥，袁瓊金，崔凌峰，司闯，舒利贤，许翔耕(六盘水市农产品质量安全检测中心，贵州六盘水553000)中图分类号：S859.84文献标识码：B文章编号：1003-8655(2019)06-0102-01摘要：近年来，动物源性食品氟摩诺酮类药物残留受到了广泛关注。
开展更加快速、髙效、髙灵敏度、高准确度的检测动物源性食品中氟唾诺酮类残留的方法已成为对检测机构的新要求。
本文对近几年发表文献中关于有关动物性食品中氟壓诺酮类药物的检测方法进行归纳总结，综述了高效液相色谱检测法在动物性食品中达氟沙星、沙拉沙星、恩诺沙星和沙拉沙星检测检测的研究进展，以期为监管部门、检测机构在监督、检测中提供一定参考。
关鏈词:动物源性食品;氟哇诺酮类药物;残留;髙效液相检测方法氟座诺酮类药物为化学合成抗菌药物，抗菌力强、使用方便、价格低廉等特点⑴，常用于畜禽水产养殖中，在保证动物源性食品供应方面发挥了巨大的作用。
但是随着该类药物长期和广泛的应用，造成动物性食品中药物残留，且该类药物在动物体内代谢缓慢易残留，给人类造成极大的危害，从而导致人类细菌耐药性产生⑵。
本文对近几年发表文献中关于有关动物性食品中氟座诺酮类药物的检测方法进行归纳总结，综述了高效液相色谱检测法在动物性食品中达氟沙星、沙拉沙星、恩诺沙星和沙拉沙星检测检测的研究进+展，以期为监管部门、检测机构在监督、检测中提文供一定参考。
献1沙拉沙星检测肖2000年，贾海峰等⑴建立了兽用盐酸沙拉沙殊星含量高效液相色谱测定方法。
该方法采用色谱M柱为十八烷基键合硅胶(Na-va-Pak C18)150x3.9mm,流动相为以0.5mol/l柠檬酸-0.5mol/L醋酸钱-乙睛(80:10:10,用高氯酸调pH至2.4)，流速1.2ml/min,检测波长274nm0分别对7个不同浓度沙拉沙星进行测定，经检测平均回收率为99.7%,线性范围0.2ug/ml?-1.2ug/ml,相关系数=0.9999,变异系数0.3%。
高效液相色谱-串联质谱法测定动物组织中的16种喹诺酮类药物残留
高效液相色谱-串联质谱法测定动物组织中的16种喹诺酮类药物残留高效液相色谱-串联质谱法测定动物组织中的16种喹诺酮类药物残留建立了动物组织样品中萘啶酸、恶喹酸、氟甲喹、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、二氟沙星、麻保沙星、培氟沙星、司帕沙星、奥比沙星等16种喹诺酮类兽药多残留量的高效液相色谱-串联质谱测定方法.用酸性乙腈萃取样品中的16种喹诺酮类药物残留,然后用正己烷脱脂,旋转蒸发浓缩,以Inertsil C8-3色谱柱分离,在正离子模式下以电喷雾电离串联质谱进行测定.在10,50,100 μg/kg 3个加标水平下进行了验证试验,方法的线性范围为10～100 μg/kg,平均回收率为62.4%～102%,相对标准偏差为1.4%～11.9%.该方法简便、快速、准确,各项技术指标满足国内外法规的要求,可用于鸡肉、鸡肝和鱼肉等动物组织样品中喹诺酮类药物多残留的确证检测.作者：岳振峰林秀云唐少冰陈小霞吉彩霓华红慧刘昱YUE Zhenfeng LIN Xiuyun TANG Shaobing CHEN Xiaoxia JI Caini HUA Honghui LIU Yu 作者单位：岳振峰,林秀云,唐少冰,吉彩霓,华红慧,刘昱,YUE Zhenfeng,LIN Xiuyun,TANG Shaobing,JI Caini,HUA Honghui,LIU Yu(深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心,广东,深圳,518067)陈小霞,CHEN Xiaoxia(深圳大学教务处,广东,深圳,518060)刊名：色谱ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY 年，卷(期)：2007 25(4) 分类号：O658 关键词：高效液相色谱-串联质谱法喹诺酮类药物残留动物组织。
鸡肉中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测方法的改进
鸡肉中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测方法的改进崔惠娟【摘要】对《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》进行改进,经试验验证,洗脱液改用含30％乙腈的流动相时,能提高方法的回收率.添加10μg/kg、100 μg/kg、200 μg/kg浓度水平时,测得的回收率为77.6％～95.2％,精密度＜10％,该方法检测环丙沙星的线性范围是5 ～200 μg/kg,检出限是0.5μg/kg、定量限是11.7 μg/kg;达氟沙星的线性范围是1～40 μg/kg,检出限是0.11 μg/kg、定量限是3.4 μg/kg;恩诺沙星的线性范围是5～200 μg/kg,检出限是0.5μg/kg、定量限是11.6 μg/kg;沙拉沙星的线性范围是5～200 μg/kg,检出限是0.5μg/kg、定量限是16.7μg/kg.说明改进后的方法能够满足鸡肉中氟喹诺酮类药物残留的检测.【期刊名称】《云南畜牧兽医》【年(卷),期】2017(000)002【总页数】3页(P17-19)【关键词】鸡肉;高效液相色谱法;氟喹诺酮类药物【作者】崔惠娟【作者单位】红河州动物疫病预防控制中心,云南蒙自 661199【正文语种】中文【中图分类】S859.84禽业科技氟喹诺酮类属化学合成抗菌药，因其抗菌谱广、抗菌活性高、毒副作用小、组织分布广等特点被广泛用于畜禽和水生动物疾病的防治[1]。
临床上常用的氟喹诺酮类药物主要有环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星等。
随着氟喹诺酮类药物的广泛应用，各类细菌对其产生的耐药率已达到60%～70%[2]。
目前，氟喹诺酮类药物的滥用及残留问题已经引起人们的广泛关注。
在动物性食品中，氟喹诺酮类药物残留检测方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)等[3]。
目前，用HPLC法检测鸡肉产品中的氟喹诺酮类药物残留，主要用到的国家标准方法是《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》(农业部1025号公告-14-2008)[4]。
超高效液相色谱法对罗非鱼中3种氟喹诺酮类兽药残留的测定
超高效液相色谱法对罗非鱼中3种氟喹诺酮类兽药残留的测定摘要建立了罗非鱼肉中3种氟喹诺酮类兽药残留的定量分析方法。
方法以乙腈-磷酸二氢钾溶液（3∶1，v/v）为提取溶剂，提取液过固相萃取小柱BOND ELUT-C18净化，3种目标化合物采用超高效液相色谱—荧光检测器检测，外标法定量。
添加0.005～0.100 mg/kg浓度水平时，罗非鱼中3种氟喹诺酮类加标回收率在84%～93%，相对标准偏差（RSD）为3.9%～6.7%。
方法检出限（S/N=3）为0.7～1.6 μg/kg，定量限（S/N=10）为2～5 μg/kg。
该方法前处理简单，快速有效，准确可靠，可用于水产品氟喹诺酮类兽药残留日常抽样快速检测。
关键词超高效液相色谱；荧光检测器；氟喹诺酮残留；罗非鱼氟喹诺酮类药物Fluoroquinolones（FQS）是近30年来迅速发展起来的一类人工合成药物，具有广谱、高效等特点。
其主要用作兽药和饲料添加剂，用以预防和治疗动物疾病，在临床上使用较为广泛[1]。
早在20世纪80年代，在水产养殖中就已经开始使用氟喹诺酮类药物来预防和治疗细菌性疾病。
由于在水产养殖过程中使用氟喹诺酮类药物，造成了水产品中的氟喹诺酮类药物残留，增强了致病菌的耐药性，这种耐药性通过食品传递给人，使人产生难以治愈的疾病。
近年来，水产品中氟喹诺酮类药物残留已经引起了广泛关注[2]。
关于氟喹诺酮类药物的检测方法研究报道，一般有高效液相色谱[3]、液相色谱-串联质谱法[4]、免疫测定法等[5]，液质联用法虽然灵敏度和准确度都较高，但成本也相对较高，不易普及；免疫测定法前处理简单，但存在假阳性高、准确率相对较低的问题。
高效液相色谱荧光检测器对动物源食品中FQS药物残留进行检测，前处理方法简单，且成本较低，而在此基础上利用超高效液相色谱（UPLC），与传统的HPLC技术相比，UPLC具有更强的分离能力，大幅度地改善了液相色谱的分离度和灵敏度。
高效液相色谱法同时测定禽蛋中4种氟喹诺酮类药物残留量_林玲
0. 05mol/ L 磷酸/ 三乙胺溶液的配制 :取浓磷酸 3. 4mL ,用水稀释至 1000mL ,用三乙胺调节 p H 至 2. 4。
磷酸盐缓冲溶液 : 取磷酸二氢钾 6. 8g ,加水溶 解并稀释至 500mL ,用 5. 0mol/ L NaO H 溶液调节 p H 至7. 0 。
作者简介 : 林玲 ,女 ,1978 年 8 月出生 ,硕士 ,助理研究员 ,主要从事食品分析 。E2mail : linling408 @163. com 通讯作者 : 杨春亮 ,男 ,研究员 。TeL : 0759 - 2228505
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分 析 仪 器 2010 年第 2 期
标准储备液 :精密称取环丙沙星 、恩诺沙星 、沙 拉沙 星 各 10mg , 达 氟 沙 星 2mg , 用 0. 03 mol/ L NaO H 溶液溶解并稀释成浓度为 1mg/ mL (环丙沙 星 、恩诺沙星 、沙拉沙星) 和 0. 2mg/ mL (达氟沙星) 的标准储备液 。
超高效液相色谱串联质谱检测猪肉中氟喹诺酮类药物残留
农技服务资源环境·143·2017.15 期·第34卷超高效液相色谱串联质谱检测猪肉中氟喹诺酮类药物残留许燕平（泰州市农林畜水产品质量检测中心，江苏 泰州 225300）摘要：随着社会的全面性发展，超高效液相色谱串联质谱检测猪肉中氟喹诺酮类药物残留性也十分显著。
为了能够使得其整体的检测效率得到显著性的提升。
在进行检测的过程中，其同样需要采用多种不同的方式让效液的整体体系得到相应的完善。
本文主要针对高效液相色谱串联质谱检测猪肉中氟喹诺酮类药物残留进行相应的分析，并提出了相应的优化措施。
关键词：超高效液相色谱；质谱检测；药物残留从整体上而言，高效液相色谱串联质谱的检测相当关键。
其能够使得整体的药物变化情况得到较好地处理。
一般情况下，在进行全面性的处理过程中需要采用多种不同的方案让质谱的检测效率得到显著性的提高。
１超高效液相色谱串联质谱检测猪肉概况分析在建立猪肉组织的体系中，其需要结合具体的情况让药物的整体检测效率得到相应的提高。
但从另外一方面而言，猪肉组织中其液谱在相色上也会存在明显的改变。
因此，为了建立有效地检测组织。
需要结合其整体沙星性质的变化。
让质谱检测的效果更为显著。
一般情况下，其液相色谱的检测主体条件为检测猪肉的整体变化情况。
由于其整体的色谱条件会发生一定的变化。
因此，在色谱的整体变化情况下，需要对猪肉的组织变化进行显著性的变化分析。
同时，在利用其药物变化的情况下，对其色谱的改变进行良好的分析。
在保证其色彩方式的同时，需要利用其沙星的性质变化情况。
让内标法的定量结构进行整体的指标控制。
这样，在浓度范围的整体控制上，其内指标的指数就能得到较好地控制。
从而使得其内标法量的数据更为明确。
在内标的坐标量上，需要对各种不同的药物进行量的分析。
一般情况下，其会具有7中不同的药物残留。
其FQS 的药物量在信息层的主体范围内都能得到一定程度的控制。
在浓度范围控制较为明确的情况下，需要对限量系数及内部指数进行精准性的检测。
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动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测
高效液相色谱法
1 范围
本标准适用于猪的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏，鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留量检测。
2测定方法
方法提要或原理
用磷酸盐缓冲溶液提取试料中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。
以磷酸—乙腈为流动相。
用高效液相色谱—荧光检测法测定，外标法定量。
试剂和材料
5mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液14mL，加水稀释至50mL。
0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5mol/L氢氧化钠溶液0.6 mL，加水稀释至100 mL。
0.05mol/L磷酸—三乙胺溶液：取浓磷酸3.4 mL，用水稀释至1000 mL。
用三乙胺调节pH值至2.4（以配4L溶液为例，取浓磷酸3.4 mL×4=13.6 mL，加水使成4000 mL，用三乙胺调pH值至2.4）。
磷酸盐缓冲溶液（用于肌肉、脂肪组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500 mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
磷酸盐溶液（用于肝脏、肾脏组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500 mL，pH值为4.0~5.0。
标准储备液：分别取达氟沙星对照品约10mg,恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星对照品各约50mg,精密称定，用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为0.2mg/mL(达氟沙星)和1 mg/mL（恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星）的标准工作液。
置2℃~8℃冰箱中保存，有效期为1周。
对照品溶液稀释步骤
（1）对照品储备液浓度：1 mg/mL
（2）最大残留限量（100μg/kg→100ng/g）
上机浓度为0.05μg/kg：
1 mg/mL×1mL
50 →20μg/mL
20μg/mL ×0.5mL
200→0.05μg/kg（此浓度对应最大残留限量浓度，因为
20mL提取液只有5mL上柱）（3）阳性添加（100μg/kg→100ng/g 样品/2g→200ng/2g）
20μg/mL×0.5mL
10mL →1μg/mL
1μg/mL×0.2mL →200ng
注：甲磺酸达氟沙星（C19H20FN3O3▪CH4O3S）：C19H20FN3O3= 357.39 =78.81%
C19H20FN3O3▪CH4O3S 453.49
盐酸环丙沙星（C17H18FN3O3▪Hcl）：C17H18FN3O3= 331.35 = 90.09%
C17H18FN3O3▪Hcl 367.81
测定步骤
试料的制备
绞碎后的供试样品、空白样品、空白添加试料样品
提取
取（2±0.05g）试料，置50mL离心管中，加磷酸盐缓冲溶液10.0mL，10000r/min 匀浆1min。
匀浆液转入离心管中，中速振荡5min，离心（肌肉、脂肪10000r/min5min；
肝、肾15000r/min10min），取上清液，待用。
用磷酸盐缓冲溶液10.0mL洗刀头及匀浆杯，转入离心管，洗残渣，混匀，中速振荡5min,离心（肌肉、脂肪10000r/min5min；
肝、肾15000r/min10min）。
合并两次上清液，混匀，备用。
净化
固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2mL预洗。
取上清液5.0mL过柱，用水1mL淋洗，挤干。
用流动相1.0mL洗脱，挤干，收集洗脱液。
经滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱法测定。
色谱条件
流动相：0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液—乙腈（82+18，v/v），使用前经微孔滤膜过滤;
流速：0.8mL/min；
检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm；
进样量:20μL
3测定方法灵敏度、准确度、精密度
3.1灵敏度
达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星在鸡和猪的肌肉、脂肪、肝脏及肾脏组织中的检测限为20μg/kg，最大残留限量为100μg/kg。
3.2准确度
本方法在20μg/kg~500μg/kg添加浓度的回收率为60%~100%。
3.3精密度
本方法的批内变异系数≤15%，批间变异系数≤20%。