EDU-细胞增殖检测
EDU染色
Edu掺入法检测细胞增殖
1.取对数生长期细胞，以每孔4000个细胞接种于96孔板中，培养至对数生长期；
2.用细胞培养基按1000：1的比例稀释Edu溶液（试剂A），制备适量50μM的Edu培养基；
3.每孔加入100μL 50μM Edu培养基孵育1h，弃培养基；
4.PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟；
5.每孔加入100μL细胞固定液（即含4%多聚甲醛的PBS）室温孵育30min；
6.每孔加入2mg/mL甘氨酸，脱色摇床孵育5min后，弃甘氨酸溶液；
7.每孔加入100μLPBS，脱色摇床清洗5min，弃PBS；
8.每孔加入100μL渗透剂（0.5%Triton X-100的PBS）脱色摇床孵育10min；PBS清洗1次，5min;
9.每孔加入100μL的1mg/mL DAPI，避光、室温、脱色摇床孵育10min，弃染色反应液；
10.每孔每次加入100μLPBS清洗1~3次；染色完成后，荧光显微镜检测。
edu细胞增殖实验原理
edu细胞增殖实验原理
细胞增殖实验是一种用于研究生物细胞生长的基础实验。
它是通
过在适宜的培养条件下，通过定期观察和计数细胞的数量和形态变化，来研究细胞分裂和生长的过程。
在实验中，通常采用细胞培养技术，将细胞种植在营养丰富的培
养基中，确保细胞具有足够的营养和生长条件。
然后在特定时间点，
使用显微镜观察细胞的增殖情况，计数细胞数量和评估其形态变化。
细胞增殖实验的主要原理是通过研究不同条件下细胞增殖的变化，来推测影响细胞生长和正常功能的因素。
例如，可以研究不同营养成
分对细胞生长的影响，探索某些药物或遗传学变异对细胞增殖和功能
的影响等。
在实验过程中，需要注意一些因素以保证实验结果的准确性和可
靠性。
首先，需要使用高品质的培养基及其他细胞培养试剂，以确保
细胞生长环境的稳定性和一致性。
此外，还需定期检查细胞培养条件，包括温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度等环境参数。
同时，还需用显
微镜进行精确地观察和定量测量细胞生长状态，以保证实验数据的准
确性和可重复性。
总之，细胞增殖实验是生物学研究中最基础的实验之一。
通过定
量和定性地研究细胞生长和分裂的变化，可以得出某些生化、生物物
理和遗传学方面的结论，这对深入理解细胞功能和疾病发生机制有重
要意义。
EDU检测细胞增殖
图5 采用EdU标记干细胞进行示踪实验
文献实例：
EdU标记ADSC细胞移植情况（红色： EdU；蓝色：DAPI；绿色：α-SMA抗 体）
5) Lin G, Wang G, et al. Cytotherapy. 2010.(细胞示踪)
C10314 Cell-LightTM EdU DNA Proliferation in vivo Detection
对递减，利用流式细胞仪在４８８ｎｍ激发光和荧光检测通道可对其进行分析。 Ｂｒｄｕ检测法
Ｂｒｄｕ中文全名５－溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在ＤＮＡ合 成期（Ｓ期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Ｂｒｄｕ单克隆抗体，ＩＣＣ染色，显示增 殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研 究细胞动力学有重要意义。
Br
DNA变性后，BrdU才能与 其抗体进行结合
检测相关荧光光谱图：
Ribobio
Apollo ® 567 光谱图 Apollo ® 643 光谱图 Hoechst33342光谱图
Cell-Light™ EdU 细胞增殖检测
1) 在细胞水平上EdU对增殖细胞的标记
Ribobio
利用EdU检测细胞新合成的DNA，同时结合细胞核标记物进行双重或 多重标记，判断增殖细胞的种类，增殖速度，全面分析增殖细胞的定 位、分布。
EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)
Cell-Light™ EdU 检测原理
在DNA合成过程中，EdU可取 代脱氧胸腺嘧啶核苷（T）插 入DNA链。
Ribobio
EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)
细胞增殖检测方法
细胞增殖检测方法
细胞增殖是细胞数量的增加和分裂的过程，对于检测细胞增殖的方法有很多种。
以下是一些常见的细胞增殖检测方法：
1. 细胞计数：通过显微镜观察和手工计数细胞数量，或使用自动化细胞计数仪进行细胞计数。
2. 细胞增殖染料：使用细胞增殖染料，如溴化乙锭（BrdU）或五溴乙酰胺（EdU），将其添加到培养基中，然后检测细胞摄取或转化这些染料的程度，以评估细胞增殖。
3. MTT试验：MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基-2H-四唑酮）试验通过测量细胞的代谢活力来评估细胞增殖。
MTT试剂会被活细胞还原为紫色的甲基噻唑咪唑离子，可以使用分光光度计测量产生的紫色产物的吸光度来确定细胞的增殖能力。
4. 细胞周期分析：通过流式细胞术检测细胞的DNA含量，可以确定细胞处于哪个细胞周期阶段，并评估细胞的增殖能力。
5. 细胞增殖标记：通过使用荧光标记物或融合蛋白来标记增殖细胞。
例如，使用荧光标记的抗体来检测细胞核内的增殖相关标记物，如Ki-67。
6. 实时细胞分析：使用实时细胞分析系统，如X-Celligence系统，可以通过记录电极传感器阻抗的变化来监测细胞的生长和扩张情况，从而评估细胞增殖。
这些方法可以单独或结合使用，以获得更全面和准确的细胞增殖信息。
EdU细胞增殖检测法的操作教程（附文献）
EdU细胞增殖检测法的操作教程（附文献）细胞增殖的能力是评价细胞、代谢、生理、病理状况、细胞活性、基因毒性等的重要指标之一。
细胞增殖虽然与多种因素有关，比如细胞代谢活性、与细胞增殖相关的蛋白表达、ATP的浓度等等，但是检测细胞增殖现象的zui直接zui准确的方法就是用荧光探针直接检测遗传物质DNA的合成，这种方法是研究细胞增殖、信号通路、DNA修复及分化等等方向常用的方法。
目前，基于DNA的合成原理，人们zui初开发了工具是BrdU染色法, 但是这种方法操作耗时长，往往需要过夜处理细胞，操作繁杂，比如需要DNA变性、抗原修复以及抗原抗体反应等操作，后来在BrdU的基础上，人们开发出了革命性的探针--EdU，这种方法不需要繁杂的操作，节约时间，且反应更灵敏和准确。
并且与MTT/WST-1或者CCK-8这种依靠化学显色法只能得到一个折线图的方法相比，EdU 细胞增殖检测法可以得到高清细胞增殖现象数据图，可视化展示数据、更直观、更具视觉效果!EdU的检测原理是什么？EdU可以说是一款革命性的细胞增殖状态检测方法与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比，EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。
EdU细胞增殖检测法的操作教程一、首先用 EdU 来标记细胞注意:本实验样本是Hela 细胞，如果使用其它类型的细胞，实验可能需要做调整。
建议 EdU 起始浓度是10 µM，或者根据细胞类型设置几个梯度预实验摸索zui佳EdU浓度，再进行正式实验。
1.在六孔板里的盖玻片上培养细胞，使其生长至所需密度后处理细胞；2.用 10 mM EdU 溶液在无血清培养基中制备 2x EdU 工作溶液；3.预热 2x EdU 溶液，然后将 2x EdU 溶液添加到等体积含有实验细胞的培养基中，获得 1x EdU 溶液。
EdU
［ 关键词］ Ｅ ｄ Ｕ； Ｂ ｒ ｄ Ｕ； 细 胞 增 殖 ［ 中 图分 类 号 ］ Ｒ 一 １ ［ 文献标识码 ］ Ａ ［ 文章编号］ １ ６ ７ １ — ８ ３ ４ ８ （ ２ ０ １ ５ ） ３ ２ — ４ ５ ８ １ — ０ ３ Ａ５ ４ ９细 胞 上 进 行 了 测 试 ＿ １ 。 。 Ａｎ ｄ ｅ ｒ ｓ ｅ ｎ等 ＿ ２ 的研 究 发 现 ，
Ｅ ｄ Ｕ 使 用 浓 度 很 可 能 会 限制 其 对 细胞 增 殖 的影 响 。
３ Ｂ ｒ ｄ Ｕ 检 测 增 殖 细 胞 的 特 点 及 原 理
Ｂ ｒ ｄ Ｕ 是 另 一 种 嘧 啶类 似 物 ， 其 化 学 结 构 特 点 是 溴 替 代 了
Ｅ ｄ Ｕ是一种胸 腺嘧 啶核苷 的类 似物 ， 其 化 学 结 构 特 点 是 脱 氧 胸 腺 嘧 啶 环 上 与 ５位 Ｃ原 子 相 连 的 甲 基 被 乙 炔 基 取 代 ， 在 ｓ期 细 胞 增 殖 时 可 作 为 底 物 掺 入 到 正 在 复 制 的 Ｄ Ｎ Ａ 链 中，
结 合其 他 细 胞标 记 物 进 行 双 重 染 色 ， 可 判 断细 胞 种 类 及 增 值 速 度， 对 研 究 细 胞 动 力 学 有 重 要 意 义 。 目前 ， Ｂ ｒ ｄ Ｕ 标 记 新 合 成 ＤＮＡ 的 方法 在 动 物 细 胞 组 织 的 肿 瘤 生 物 学 、 遗传学 、 分 子 生 物
通 过 与 染 料 的 共 轭 反 应 可 以 进 行 高 效 快 速 的 细 胞 增 殖 检 测 ］ ， 其 中， 乙炔 基 能 够 与 一 种 荧 光 标 记 的小 分 子 叠 氮 化 合 物
细胞增殖 检测方法
细胞增殖检测方法细胞增殖是指细胞在生物体内不断分裂和繁殖的过程，是生物体生长和发育的基础。
检测细胞增殖的方法有很多种，以下将详细介绍几种常见的细胞增殖检测方法。
首先，细胞计数法是最常用的细胞增殖检测方法之一。
细胞计数法主要通过显微镜观察和数数的方式，计算细胞的数量来反映细胞增殖的情况。
可以通过细胞染色或细胞标记技术使细胞在显微镜下更易于观察和区分。
细胞计数法通常需要使用专业的细胞计数仪或显微相机来帮助实施，具有操作简单、结果准确等特点。
其次，MTT法是一种在体外细胞培养中常用的细胞增殖检测方法。
MTT法基于细胞中还原剂细胞线粒体呼吸将黄色硫代唑盐（MTT）还原为紫色的可溶性产物，最后通过比色法测定细胞数目和细胞活力。
MTT法操作简单、结果稳定可靠，广泛应用于药物筛选和细胞增殖研究中。
另外，细胞增殖标记法是通过标记DNA合成阶段的细胞来检测细胞增殖的方法。
常见的细胞增殖标记法有Brdu法和EDU法。
这两种方法都是通过标记新合成的DNA分子来反映细胞增殖情况，Brdu法利用抗体检测Brdu标记的DNA，而EDU法则利用稳定的EDU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷）分子和荧光染料的结合来检测标记的DNA。
由于这两种方法都需要使用荧光染料或抗体检测，因此需要显微镜或流式细胞仪等设备来进行检测。
此外，细胞增殖检测还可以通过测定细胞凋亡（细胞死亡）来间接反映细胞增殖情况。
细胞凋亡是细胞自身程序性死亡的一种形式，常使用TUNEL（DNA末端标记术）法或Annexin V/PI双染法来检测细胞凋亡。
这些方法通过标记DNA 断裂或细胞膜破损来区分凋亡细胞和正常细胞，并通过荧光染料或抗体检测来反映细胞凋亡的程度。
细胞凋亡的明显增加往往意味着细胞增殖的受抑制。
总的来说，细胞增殖检测方法的选择应根据具体实验的目的、条件和资源来决定。
不同的方法各有优势和局限性，需要结合实际情况进行选择。
在细胞增殖检测中，细胞计数法是最常用的方法，MTT法和细胞增殖标记法是常见的体外检测方法，而通过检测细胞凋亡来间接反映细胞增殖情况也是一种有效的方法。
EdU法细胞增殖检测——Brdu方法的革命性突破
EdU法细胞增殖检测——Brdu方法的革命性突破细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。
其中EdU检测方法是zui新的细胞增殖检测方法。
一、什么是细胞增殖呢？细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。
单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。
多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。
二、细胞增殖的意义和方式意义：细胞增殖是生活细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征。
细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
方式：真核生物的分裂依据过程不同有三种方式，有有丝分裂，无丝分裂，减数分裂。
其中有丝分裂是人、动物、植物、真菌等一切真核生物中的一种zui为普遍的分裂方式，是真核细胞增殖的主要方式。
减数分裂是生殖细胞形成时的一种特殊的有丝分裂。
三、关于EdU检测方法EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。
与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。
细胞增殖伴随着多细胞生物生命体运作的一生，越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测，关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。
那么到目前为止，研究细胞增殖有哪些手段呢？EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。
EdU（5-溴-2-脱氧尿嘧啶）试剂盒是一种嘧啶类似物，可以在DNA合成期整合入DNA双链。
通过以上原理图的对比，大家不难发现，EdU法检测细胞增殖，无须抗体，无变性步骤，保持细胞形态和DNA完整性，是一种简单，可靠，省事的创新方法。
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荧光显微镜检测方法(以96孔板，A549贴壁细胞为例)
细胞培养
取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。
药物处理
(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。
EdU标记
1.1 用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50μM EdU培养基；
注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度(1~10μM)；
2)如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；
3)配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
表1 EdU培养基及染色反应液的使用量参考
注：1)*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；
2)悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。
1.2 每孔加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基；
注：1)最佳孵育时间与细胞周期相关(表2)，大多数细胞系均可采用2小时孵育时间；
2)EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育时间内的营养物质持续供给(表1)；
1.3 PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。
注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。
表2 EdU孵育时间设定参考
注：1)EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h孵育时间。
孵育时间越长，细胞增殖数量就越多；
2)*考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，具体实验的细胞群体细胞周期会有所变化。
表3细胞实验EdU孵育浓度及时间参考
注：如果您有采用BrdU进行实验的经验，可以参照BrdU实验的相关参数进行EdU实验。
细胞固定化
2.1 每孔加入50μL 细胞固定液(即含4% 多聚甲醛的PBS)室温孵育30分钟，弃固定液；注：1)低浓度的多聚甲醛有利于细胞结构的保持，当需要抗体染色时，需采用Triton X-100透化细胞以利于抗体进入细胞内。
2)可采用其他方式进行细胞固定。
2.2 每孔加入50μL 2 mg/mL 甘氨酸，脱色摇床孵育5分钟后，弃甘氨酸溶液；
注：目的是中和多聚甲醛，保证染色反应体系，当采用其他方式进行细胞固定时可酌情省略此步骤；
2.3 每孔加入100 μL PBS，脱色摇床清洗5分钟，弃PBS；
2.4 (加强)每孔加入100μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS)脱色摇床孵育10分钟;PBS清洗1次，5分钟。
注：当实验需要进行其他抗体染色时，或由于某些细胞类型对染料的吸附性较高，可能需要增强细胞膜通透性。
普通细胞可以省略。
Apollo染色
3.1 每孔加入100 μL的1X Apollo®染色反应液(表3)，避光、室温、脱色摇床孵育30分钟后，弃染色反应液；
注：1)染色液用量与细胞量相关，以覆盖细胞为宜(表1)；
2)孵育时间可以进行适当调整，调整范围为10~30分钟。
表4 Apollo®染色反应液的配置参考(现用现配)
注：1)*表示通常配制的Apollo®反应液的体积足以进行5～10个孔(96孔板)染色；
2)按顺序配制适量1X Apollo®染色反应液，以免破坏正常的反应体系(现用现配，30分钟用完)；
3)试剂E 为白色粉末，较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需更换；粉末较难准确称量，称量误差范围可稍微放宽，但不应超过±20%。
3.2 加入100 μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS) 脱色摇床清洗2~3次，每次10分钟，弃渗透剂；
3.3 (加强)每孔每次加入100 μL 甲醇清洗1~2次，每次5分钟；PBS清洗1次，每次5分钟。
注：由于某些细胞对染料的吸附性较高，需采用加强方式洗脱以降低染料背景。
普通实验可以省略。
DNA染色
4.1 用去离子水按100：1的比例稀释试剂F，制备适量1X Hoechst33342反应液，避光保存；
4.2 每孔加入100 μL 1X Hoechst 33342反应液，避光、室温、脱色摇床孵育30分钟后，弃染色反应液；
4.3 每孔每次加入100 μL PBS清洗1~3次；
4.4 客户可选择进行其他染色步骤，否则每孔加入100 μL PBS保存待用。
其他染色(自备)
(可选)客户可以根据实验需要进行细胞表面或细胞内抗原的抗体染色(注：染料兼容性请参照表4)。
图像获取及分析
建议染色完成后立即进行观测;如果条件限制，请避光4℃湿润保存待测，但不应超过3天。
注：调试仪器时，请将曝光时间调整为30ms左右，尽量不要>1s。
表5配套染料的相关波长信息
注：1)*荧光显微镜宜采用Hoechst 33342及Apollo® 567进行DNA复制活性检测；
2)激光共聚焦显微镜采用Apollo® 567或Apollo® 643均可。