李斯特菌
李斯特菌检验及快检技术
李斯特菌检验及快检技术一、引言1.对李斯特菌的介绍2.李斯特菌的危害性3.检测技术的重要性二、李斯特菌检验技术的基本原理1.传统的检测方法2.分子生物学的检测方法三、李斯特菌快检技术的基本原理1.免疫学快检技术2.核酸检测快检技术四、李斯特菌检验技术的应用1.食品中李斯特菌的检测2.体外环境中李斯特菌的检测五、结论1.总结李斯特菌检测技术的优缺点2.展望李斯特菌检测技术未来的发展方向附注：写论文除了需要提纲，还需要深入调研、资料整理、论文撰写等工作。
如需帮助，欢迎发起新的任务。
第一章：引言李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的革兰氏杆菌，是一种人畜共患病菌，能够引起严重的人类食源性感染（Listeriosis）。
该菌可以从土壤、水、粪便中分离出来，同时也可以从生食或未经充分加热的食物中分离出来，因此是食品安全领域中的一个相关热点。
根据世界卫生组织的数据，每年全球有超过2000万人感染李斯特菌，其中约70%的患者死亡，还有很多人因为骨髓炎、中枢神经系统炎症等病症而面临长期的治疗和严重的健康风险。
因此，对李斯特菌的检测技术具有极大的现实意义。
第二章：李斯特菌检验技术的基本原理李斯特菌的检测技术可分为传统的检测方法和现代的分子生物学检测方法两种。
1.传统的检测方法传统的李斯特菌检测方法包括了传统的培养法、浸泡法、热激法、膜过滤法、小样品快速检测等。
其中，传统培养法是最常用的方法之一，通过在特定富营养液中定期供气供养菌株，使其持续繁殖，从而可以在培养皿上观察到典型的李斯特菌菌落。
但是，传统的培养法需要数日至数周才能获得结果，无法满足急速检测的要求，此外，还有可能会因为培养条件不当而遗漏不易培养的物种，或者因污染而致假阳性结果。
2.分子生物学的检测方法分子生物学检测法包括了PCR技术、荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）、核酸芯片技术、蓝色荧光蛋白标记技术（Green Fluorescent Protein, GFP）和基于质谱技术的全扫描方法等。
李斯特菌存活条件
李斯特菌存活条件
李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的细菌，广泛存在于环境中，包括土壤、水体、动物肠道等地方。
它是一种耐寒、耐高盐和耐干燥的细菌，因此在一些食品加工环境中也可以存活。
以下是李斯特菌存活的一些条件：
1. 温度：李斯特菌的最适生长温度为30°C至37°C，但其可以
在低至0°C的低温环境中存活，并且可以在较高温度（最高
可达50°C）下存活一段时间。
2. pH值：李斯特菌对酸性环境相对较敏感，最适生长pH范
围为6.0至9.0之间。
但在pH值较低（pH<4.5）或较高
（pH>9.0）的环境中也可以存活。
3. 水分活性：李斯特菌对水分活性（aw）要求较低，一般在0.92以下。
较高的盐度和糖浓度可以降低李斯特菌的水分活性，从而抑制其生长。
4. 氧气需求：李斯特菌是一种厌氧菌，可以在缺氧或低氧环境下生长。
但也能在氧气充足的环境中存活。
5. 食物来源：李斯特菌可以通过食物传播，特别是容易受到污染的食品，如生鲜肉类、家禽、海鲜、生奶制品、软奶酪等。
为预防李斯特菌引发的食源性疾病，应注意避免生食，加强食品卫生和加工控制措施，妥善保存食品，避免食品交叉污染等。
李斯特菌：潜伏的食品安全隐患
其他症状
除了发热，患者还可能出现头痛、呕吐、嗜睡、抽搐、乏力、 腹泻、幻觉及意识障碍等症状。这些症状的出现，使得李斯 特菌感染的诊断和治疗更加复杂。
危害与并发症
严重并发症
对于免疫力低下的患者，李斯特菌 感染可能导致严重的并发症，如脑 膜炎、心内膜炎等。这些并发症的 出现，使得李斯特菌感染成为一种
严重的健康威胁。
01 生存机制
深入研究李斯特菌的生存机制， 探讨其在不同环境下的适应性和 生存策略。
02 杀灭策略
探索新的李斯特菌杀灭策略，以 更有效地控制其在食品中的存活 和传播。
李斯特菌感染的诊断与治疗
早期诊断方法 开发更为敏感和特异的早期诊断方法，以提高李斯特菌感染的诊断准 确性和及时性。
新型治疗方案 研究新型治疗方案，包括抗生素的合理使用和免疫干预等，以提高治 疗效果和降低死亡率。
菌后，病情往往更为严重。
孕妇与新生儿
孕妇感染李斯特菌的风险尤为突出，感染后可能导致流产、早 产等严重后果。新生儿感染李斯特菌后，症状多为败血症和脑
膜炎，死亡率高达30%至70%。
04
李斯特菌感染的 危害与临床表现
临床表现
发热症状
李斯特菌感染后，患者可出现发热症状，体温多在38.5℃以 上，甚至可达40.5℃。这一症状的出现，提示我们可能面对 的是一种严重的细菌感染。
分离生熟食品
避免交叉污染
在食品加工过程中，应严格区分生食和熟食的砧板、刀具等 工具，避免交叉污染。
清洁工具
加工熟食品前，务必确保所有工具和容器已彻底清洁，以降 低李斯特菌的传播风险。
避免食用高风险食品
高风险食品
免疫力较低的人群应尽量避免食用冷藏或冷冻的沙拉、生的水产品以及未经 加热的软奶酪、火腿肉等熟食。
李斯特菌国标
李斯特菌国标李斯特菌是一种常见的致病菌，也是人类感染的重要病原体之一。
它广泛存在于自然界中，可以在土壤、水体、动物体内等多种环境中找到。
李斯特菌感染会引起利斯特菌病，这是一种由于食物中摄入李斯特菌而引起的食源性感染病。
为了保障公众的食品安全，许多国家都制定了李斯特菌的国家标准。
李斯特菌国标是对食品中李斯特菌的检测和控制要求的规范。
它主要包括了李斯特菌的检测方法、限量标准和控制措施等内容。
李斯特菌国标的制定是为了保护公众的健康和食品安全，防止李斯特菌感染的发生和传播。
李斯特菌国标规定了李斯特菌的检测方法。
常用的检测方法包括传统培养法、分子生物学方法和免疫学方法等。
传统培养法是通过将食品样品进行培养，然后观察菌落形态和生化特性来鉴定李斯特菌的存在与否。
分子生物学方法则是利用PCR技术，通过检测李斯特菌的特异基因序列来进行检测。
免疫学方法则是利用抗原抗体反应，通过检测李斯特菌的抗原或抗体来进行检测。
这些方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方法进行检测。
李斯特菌国标还规定了李斯特菌在食品中的限量标准。
根据国际上的标准，食品中李斯特菌的限量标准通常为每克不得超过100 CFU （菌落形成单位）。
这是因为李斯特菌在较低温度下仍能生长繁殖，并且只需要摄入极少量的李斯特菌就可能导致感染。
因此，对于易受污染的食品，如生食海鲜、生食肉类等，限量标准通常更为严格。
李斯特菌国标还规定了食品生产过程中的控制措施。
这些措施主要包括原料控制、加工控制、卫生控制和贮存运输控制等。
在原料控制方面，要求食品生产企业选择符合卫生标准的原料，并对原料进行适当的处理。
在加工控制方面，要求企业严格执行卫生操作规程，确保生产过程中的卫生条件。
在卫生控制方面，要求企业定期进行卫生检查和消毒，保持生产环境的清洁和卫生。
在贮存运输控制方面，要求企业对成品进行适当的贮存和运输，确保成品的卫生安全。
李斯特菌国标的制定和执行对于保障食品安全和公众健康意义重大。
冰箱杀手李斯特菌知识点
很多人会习惯性地把吃不完的饭菜放进冰箱等下一顿取出食用，认为这样“既保鲜又降温”。
但实际上，有些嗜冷的细菌会在食物中隐伏，成为“隐形杀手”。
李斯特菌就是其中一种，今天带大家一起来了解一下。
一、简介李斯特菌是革兰氏阳性，兼性厌氧，细胞内寄生的无芽孢的杆状细菌，在血琼脂上生长时呈过氧化氢酶阳性和β-溶血性，对人有致病性，可导致腹泻、脑膜炎和败血症等。
李斯特菌在我们的生活中相当常见，绝大多数食品、泥土、植物、动物饲料以及人类和动物的粪便当中，都可以找到它的身影。
李斯特菌对各种环境（如低温、高盐、低pH、氧化应激等）的耐受性很强，可以在冰箱冷藏室内较长时间生长繁殖，因此称为“冰箱杀手”。
二、常见的易感食物有哪些1.乳制品：用未经高温消毒的生乳制作的奶酪是污染的高风险食品。
2.酱料：未经杀菌的蛋黄酱肉类产品。
3.肉类：已经煮熟的冷冻鸡肉食品；经加工的熟火鸡肉；冻烟熏鱼类；未经酸化的猪舌肉冻等。
4.即食食品：提前做好、存放时间较长的三明治；外面购买的沙拉包或提前准备好的沙拉。
5.蔬菜：未完全煮熟的豆芽。
三、吃了被李斯特菌污染的食物会怎样？健康成年人感染一般不会有严重后果，甚至携带病菌也不会发病，而且感染率很低。
简单来说，就是李斯特菌“欺软怕硬”，老人、孕妇、新生儿、免疫低下人群，都是最好下手的对象。
尤其是孕妇，感染李斯特菌之后，孕妇本人可能并不会出现严重症状，但细菌可以通过胎盘感染胎儿，并可能造成流产、死胎或早产，败血病和初生婴儿脑膜炎等严重后果。
四、如何判断食物是否被李斯特菌污染？1.首先观察食物外观和气味：虽然李斯特菌污染的食物在外观上可能没有明显变化，但如果食物出现异味、变色、发霉等情况，可能意味着已被其他细菌或霉菌污染，这也增加了李斯特菌污染的风险。
2.其次检查食物的储存时间和条件：定期检查食物的保质期，避免食用过期食品。
3.特别注意高风险食品：李斯特菌在肉类、家禽、乳制品和某些蔬菜中较为常见。
因此，对于这些高风险食品，更应格外注意其储存和处理方式。
李斯特菌2013.7.8-7.14
动物科学邱杰英家畜和人感染此菌后，表现为脑膜炎、败血症和孕畜流产；家禽及啮齿动物表现为坏死性肝炎和心肌炎.概况：李斯特氏菌是一种格兰氏阳性菌，形状为圆尾带柱，它是一种非芽孢兼性厌氧菌.李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌.肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌地感染源.李斯特菌中毒严重地可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中地李斯特菌，并制定了相应地标准.资料个人收集整理，勿做商业用途目前国际上公认地李斯特菌共有七个菌株：单核细胞增生李斯特()绵羊李斯特菌()英诺克李斯特菌()威尔斯李斯特菌()西尔李斯特菌()格氏李斯特菌()默氏李斯特菌() 资料个人收集整理，勿做商业用途其中单增李斯特菌是主要能引起人类疾病地菌.单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病地病原菌.它能引起人、畜地李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多.它广泛存在于自然界中，食品中存在地单增李氏菌对人类地安全具有危险，该菌在℃地环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康地主要病原菌之一. 资料个人收集整理，勿做商业用途李斯特菌地来源人首先，人能传播这种感染.特别是在医院里，通过人和人地接触尤易感染.据报道，健康人群粪便中地携带率为－，有％地人可短期带菌.据有关研究表明，大约有５％到１０％地健康人群携带有这个病菌. 资料个人收集整理，勿做商业用途动物及环境李斯特菌传播给人类地主要途径是通过水源到厨房地食物链中地任何一个环节.它既能随食品原料进入食品加工厂，也可由灰尘或排泄物经工作人员带入，污染工作场所机机械设备，进而污染食品.直接或间接地接触动物，都有可能成为感染李斯特菌地来源.牛和羊类都能成为李斯特菌地携菌体.从环境方面来说，李斯特菌（Ｌｍ）也广泛地存在于环境中.因此，食品从环境当中受到李斯特菌（Ｌｍ）地机会是很大地.从食品工厂来说，在后处理阶段，特别重要地是防止从工厂设施和机器中受到污染. 资料个人收集整理，勿做商业用途食品食品能在食品链中地任何一个环节受到李斯特菌（Ｌｍ）地污染，包括从原产地，到工厂地加工过程，进入分销环节，直致进入消费者地厨房.这个情况在那些潮湿气候地地区尤为显著.前已述及，李斯特菌可以在许多食品中得到感染，如牛奶、乳酪、生家禽和家畜肉、发酵香肠、蔬菜和海产品（－）.当然，有些食品被检出其它类型地非Ｌｍ李斯特菌，可能不会引起人地感染，然而，其存在地事实勿庸置疑表明：操作过程地卫生状况需要立即加以改进.我们特别要注意，对于那些操作温度较高，保质期较短且常在冷藏条件下保存地食品通常都是李斯特菌地适宜生长环境.资料个人收集整理，勿做商业用途三、控制因素李斯特菌地感染最近呈上升趋势，在美国，１９６７－１９６９报告有２５５个感染例，然而，在１９８７年，这个数字却达到了１５００.要想区分哪些李斯特菌地感染是来源于食品，或者说，分别区分出来源于食品或非食品，却是很困难地.原因是它有很长地潜伏期.根据记载，第一例确定由食品引起地李斯特菌感染在１９８１年，发生在加拿大地一次沙拉制品地较大规模地污染事件.在那次事件中，有４１例被感染，７例致死.根据调查，原因是其中地卷心菜受到了李斯特菌地污染.污染源又是通过做为肥料地羊粪而来.这些羊被怀疑感染了李斯特菌.其后，在美国、瑞士、英国、法国又相继发生了李斯特菌地污染事件.牵涉到地食品有牛奶、乳酪、猪肉、生乳制品等.因此,有效地控制和预防被提到了一个及其重要地位置.以下，列举一些重要地控制因素.资料个人收集整理，勿做商业用途温度李斯特菌Ｌｍ是在能引起食品传染地致病菌中地比较特殊地一种.其原因是它属适冷细菌，李斯特菌能在～℃地温度下生存(有地资料讲在０～４４℃温度条件下能生长)，以４～６℃时繁殖最快.李斯特菌Ｌｍ能在冷冻产品中存活至几个星期，在酸性条件下较为困难.资料个人收集整理，勿做商业用途抗热性李斯特菌Ｌｍ不是一种特别地抗热菌种，它不是芽孢菌，因此可以在巴氏灭菌地条件下被破坏.然而，相比较另一些食品致病菌，它地抗热性要好一些.根据实验，一套良好地灭菌乳系统能将生乳地Ｌｍ控制在正常单位以下.对于肉制品而言，至少要保证７０℃和２分钟以上地加热时间.如果加热过程不稳定，则可能减低杀菌效果.３、ＰＨ同其它细菌一样，李斯特菌在酸性条件下地存活能力取决于酸地种类和温度.通常能在ＰＨ小于５地条件下得以生长，其中，李斯特菌得以生长地最低地ＰＨ值据记录是在ＰＨ４．３.在冷藏条件下，它能生长地最低ＰＨ值线有所提高，据研究表明在ＰＨ５．２.资料个人收集整理，勿做商业用途４、水分活性及盐李斯特菌Ｌｍ单是一种能承受高离子浓度和低水分活性地菌种.它能够在１０％地ＮＡＣＬ溶液内甚至更高地浓度下得以存活甚至生长；同时，也能在水分活性０．９２地条件下生长.其最低限随温度及溶剂地不同而稍有差异.备注:水分活性来表示.其定义为食品所显示地水蒸汽压对在同一温度下纯水地蒸汽压之比:资料个人收集整理，勿做商业用途水分子会从水中蒸发跑到空气中成为气体，即水蒸汽，而气体都有一定压力，水蒸汽地压力就称为水蒸汽压，一般食品不仅含有水，而且含有蛋白质，淀粉等固形物，所以它地水相对地就比纯水少，故其水蒸汽压也就小，即一般有＜，所以值皆小于.资料个人收集整理，勿做商业用途空气在微生物实验中，用肉汤培养基显示厌氧培养有助于Ｌｍ地生长.同时，另一些实验表明在缺氧状态下，Ｌｍ能在３℃到７℃地条件下在肉类中繁殖.同样，在３－１０％地充二氧化碳地条件下，Ｌｍ能在５℃地条件下在不同种地蔬菜中得以生长.然而，高浓度地二氧化碳（８０％）能抑制. 资料个人收集整理，勿做商业用途杀灭条件该菌对理化因素抵抗力较强－℃经－可杀死，％酒精，％石炭酸（氢氧化钠，福尔马林）可杀死此菌.该菌对青霉素，四环素，磺胺均敏感. 资料个人收集整理，勿做商业用途监控频率对加工环境较湿地应每周检测一次，较干地需每月监控一次.若监控环境地检测结果不理想,则返回监控在一定时间内生产地产品,检测产品是否受到影响.检验方法：国标法(常规法)、增菌培养取回地样品应在℃下处理、存放和运送，如果是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态.取液体或半固体或固体样品放入含有无选择性试剂增菌肉汤（）地均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，℃培养，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，继续培养和.. 资料个人收集整理，勿做商业用途分离共培养和后，取培养物分别在和或加七叶苷琼脂平板上划线.琼脂可替代琼脂.将和平板置于℃培养，平板在℃培养.然后，把平板放于解剖镜载物台上，以角入射光从平板下面照射平板，通过目镜垂直向下观察寻找可疑菌落.李斯特氏菌在平板上呈有光泽地兰色或灰色.用已知阳性菌和阴性菌划线地平板作对照资料个人收集整理，勿做商业用途加入七叶苷和地平板不用斜射光系统，选择可疑菌落地方法与在上选择可疑菌落地方法相同.在平板上李斯特氏菌菌落周围有一个黑色环，其它菌也可形成黑色环，但形成时间要在两天以上.李斯特氏菌在和平板上地菌落特征相似资料个人收集整理，勿做商业用途在和或平板上挑取个或更多地典型菌落，分别划线于平板上以得到更纯、更典型地单个菌落.食品检验中在平板上纯化是必须地，因为在和或平板上分离菌落时可能沾有不可见地受抑微生物.挑取个典型菌落地原因是一个样品中可能分离到一种以上地李斯特氏菌.℃平板培养，如果不用于动力观察，也可在℃培养.资料个人收集整理，勿做商业用途、李斯特氏菌属地区别将肉汤培养物接种到肉汤中，℃培养，接种支琼脂斜面，℃培养.用磷酸盐缓冲液将斜面菌苔洗下，菌悬液于℃水浴中加热，以离心，弃去上清夜，将剩余液与沉淀混匀制成菌悬液，进行血清学玻片凝集试验.、小鼠毒力试验将分离地菌株接种到肉汤中，℃培养，将培养物离心、浓缩，用生理盐水制成菌悬液（浓度为个菌），取腹腔注射体重为小鼠，每组个观察内小鼠死亡情况.用已知致病地单增李斯特氏菌和非致病地英诺克李斯特氏菌相同方法进行，做对照试验.资料个人收集整理，勿做商业用途、协同溶血（）试验在羊血琼脂平板上平行接种β溶血金黄色葡萄球菌（）和马红球菌(),在它们中间垂直划线接种可疑菌，与两线相近但不相交，在℃培养,检查平板中垂直接种点对溶血环地影响.靠近金黄色葡萄球菌接种点地单增李斯特氏菌地溶血增强，西尔李斯特氏菌地溶血也增强，绵羊李斯特氏菌在马红血球附近地溶血增强.资料个人收集整理，勿做商业用途(二) 免疫学检测方法、自动酶联荧光免疫检测系统（）分析方法自动酶联荧光免疫检测系统（）分析方法是对李斯特菌属全部种地筛检，则是对李斯特菌属中主要致病菌－单增李斯特菌地筛检.资料个人收集整理，勿做商业用途。
李斯特菌检验及快检技术的研究报告
李斯特菌检验及快检技术的研究报告李斯特菌是一种被广泛认为对人体有害的食品中毒病原菌，其分布广泛且传染性较强。
因此，在食品安全控制中尤为重要。
本文主要介绍李斯特菌的检验方法和快检技术的最新进展。
一、李斯特菌的检验方法（一）传统培养法传统的李斯特菌检测方法是通过样品的预处理、富集和分离步骤来完成的。
李斯特菌需要在富集培养基中生长，通常选择一种或多种具有选择性和增菌性的富集培养基，如LPM（리스테리아\r모노사이토제식\r보피드학）和HWA（하모니방법）等。
在此基础上，使用不同的培养基和方法，如PALCAM（Polymyxin A、Acriflavine、Lithium Chloride、Ceftazidime、Aesculin、Mannitol）或Oxford等培养基，可以有效地筛选和鉴定李斯特菌。
（二）分子生物学检测法分子生物学技术对于敏感性和特异性都要求更高，因此被广泛应用于李斯特菌检测。
PCR（聚合酶链式反应）是其中的一个典型应用，它可以在分子水平上鉴定李斯特菌，并且具有快速、灵敏、特异的优势。
与传统的培养方法相比，PCR可以在几个小时内从食品病原菌中检测出李斯特菌，同时避免了富集培养的步骤，具有高度的可重复性和快速性。
二、快速检测技术的研究进展由于李斯特菌的高度危害性和迅速传播性，快速检测技术在食品安全保障方面变得至关重要。
目前，研究者正在寻找各种快速检测方法，以检测李斯特菌的存在和数量。
（一）基于拉曼光谱的检测技术近年来，拉曼光谱技术已经成为基于光谱学的分析方法的重要应用。
对于肉类、水果、蔬菜等样品等食品，无需处理即可直接检测李斯特菌。
使用Raman光谱技术可以获得高质量的特征光谱，并且具有快速、无损伤、可重复性高的优点，因此被视为一种有前途的李斯特菌检测方法。
（二）基于表面增强拉曼光谱的检测技术通过在样品表面添加纳米颗粒，可以增强红外或拉曼光谱的信号，从而提高检测灵敏度。
基于表面增强拉曼光谱技术的引入，为李斯特菌检测技术的集成光谱学提供了新的方法。
李斯特菌检测方法
李斯特菌检测方法
李斯特菌检测方法包括传统的培养方法和分子生物学方法。
传统的培养方法包括：
1. 食物中毒患者粪便、脑脊液、血液等标本的培养：将标本接种于含有富营养的培养基中，如PALCAM、Fraser等培养基，经过24-48小时的培养，观察是否出现李斯特菌的生长。
2. 食品和环境样品的培养：将样品接种于含有富营养的培养基中，如OXOID Brilliance Listeria Agar、PALCAM等培养基，经过24-48小时的培养，观察是否出现李斯特菌的生长。
分子生物学方法包括：
1. PCR检测：通过PCR扩增李斯特菌的DNA序列，检测样品中是否存在李斯特菌。
2. 实时荧光PCR检测：利用实时荧光PCR技术，通过检测PCR反应体系中荧光信号的变化，快速、准确地检测样品中的李斯特菌。
3. 基因芯片检测：利用基因芯片技术，检测样品中李斯特菌的DNA序列，快速、高通量地检测李斯特菌。
4. 免疫学检测：利用抗体对李斯特菌进行检测，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光免疫分析（FIA）等方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
发病机制
• 与宿主免疫状态有关 • 该菌感染早期，非免疫巨噬细胞缺乏杀灭该细胞
的活力，但可以限制它在淋巴网状系统的增生。 • 感染2～3天后，在T细胞激活下，更多的巨噬细胞
被吸引到炎症部位，导致炎症清除 • 体液免疫对该菌感染无保护作用，故在细胞免疫
低下和使用免疫抑制剂的患者中，该病的发病率 相对较高
李斯特菌
武汉大学人民医院新生儿科 方成志
李斯特菌
• 李斯特氏菌属(Listeria)早在20世纪初即 被发现，它共有7个菌种，革兰氏染色阳性。 其中单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，简称单增李氏菌) ，是唯 一能引起人类疾病的，也是一种人畜共患 的病原菌。
特点
短小的革兰阳性无芽孢杆菌
• Ｔ 淋巴细胞由不同的亚群组成，包括识别吞噬体内抗原的 CD4+Ｔ 淋巴细胞和识别细胞质中抗原的CD8+Ｔ 淋巴细胞。产 单核细胞李斯特菌感染可引发以上２种不同的免疫应答。产单 核细胞李斯特菌是一种 兼 性 细 胞 内 增 值 的 细 菌，它 的 增 值 受 到ＣＤ８＋、ＣＤ４＋Ｔ 淋巴细胞和分泌性Ｉ ＦＮ 等免疫调节细胞的影响
绵羊李斯特菌 L.ivanovii
单核细胞增生李斯特菌 L.monocy togenes
英诺克李斯特菌 L.innocua
单增李斯特菌
威尔斯李斯特菌 L.welshimei
李斯特菌
西尔李斯特菌 L.grayi
默氏李斯特菌 L.murrayi
来源及传播途径
单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐 受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、 青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该 菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播
• 脑脊液涂片可发现小的革兰阳性杆菌 • 血和脑脊液培养阳性 • 其它辅助检查： 并发脑脓肿患者，脑电图可见异常
诊断
• 外周血血象增高，脑脊液特点 • 血和脑脊液培养阳性可确诊 • 血清学检查，双份血清抗体效价递升可协助诊断，但该菌
抗原与葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌有共同抗原可发生交 叉反应，故其诊断价值有限 • PCR检测脑脊液中该菌有助于辅助诊断
• 晚发型多发生于出生7 天后至 数 周，多为足月儿,主要 表现 为 脑膜炎。单核细胞增生性李斯特菌可直接通过血 脑屏障进入脑实质及脑干引起脑膜脑炎及脑干脑炎，存活 婴儿约 30% ～ 50% 留有严重神经系统后遗症，包括脑积 水、智力障碍、癫痫、耳聋、皮质盲等
临床表现
• 李斯特菌脑膜炎与其他细菌性脑膜炎相似 • 一般起病急，90%病例的首发症状为发热 • 有严重的头痛、眩晕、恶心、呕吐 • 脑膜刺激征明显，且常伴有意识障碍，如木僵、谵妄等亦
治疗
• 对青霉素、氨苄西林、庆大霉素、链霉素氯霉素喹诺酮类、 利福平、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(复方磺胺甲噁唑)等均敏 感。
• 氨苄西林或青霉素与氨基糖苷类抗生素联合应用有协同作 用
• 妥布霉素与庆大霉素不易透过血脑屏障，故不易单独使用 • 利福平易透过血脑屏障，且对该菌作用强 • 复方磺胺甲唑对李斯特菌有体外杀菌作用，对青霉素过敏
同时也是食品中常见的、公共卫生学上重要的食源性病 原 菌
ＷＨＯ 和 ＦＤＡ 于 １９８６ 年设立了李斯特菌研究中心， 专门协调该菌的病原学、流行病学及临床等研究工作。该菌已 被列为 ２０世纪９０年代四大食源性疾病致病菌之一
其中，单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增
代表菌株 生李斯特菌是一种人畜共患病的病原菌。
➢ 产单核细胞李斯特菌的致病性与 LLO 密切相关，具有LLO 的产单核细胞李斯特菌有致病性，无LLO 则无致病性
➢ 研究表明 LLO是一个多功能的毒力因子，能引起宿主细胞 诸多反应，如细胞增殖、黏膜细胞外渗作用、巨噬细胞中 细胞因子的表达、树突状细胞的凋亡、磷脂代谢及引起机 体产生免疫反应等
发病机制
发病机制
• 作为侵袭性胞内菌，产单核细胞李斯特菌可逃离宿主吞噬 小体，在细胞质中增殖，并将抗原呈递给 ＭＨＣ－Ｉ类 分子途径，促进抗原特异保护性 ＣＤ８＋Ｔ 细胞的生成。 而且产单核细胞李斯特菌感染宿主的专职性抗原递呈细胞 （ＡＰＣ）后，可诱导有效的细胞免疫应答和 Ｔｈ１细 胞因子的分泌
• 与感染易感性增加有关的一个重要细胞因子就是IL-10。 有研究显示， IL-10产量增多可提高李斯特菌感染易感性； 一旦炎性反应被控制， IL-10对减缓炎性反应有重要意义。 由不同数量的 Ｔ 淋巴细胞、Ｂ 淋巴细胞、巨噬细胞和 树突状细胞产生的IL-10 ，其最重要的作用是抑制免疫系 统的多种免疫细胞产生细胞因子
可发生抽搐
临床表现
• 重症者可在24～48h内昏迷 • 少数起病缓慢，病程较长而有反复 • 如病变累及脑实质则可有脑炎和脑脓肿的表现 • 个别发生脑干炎而呈复视、发音和吞咽困难、面神经瘫痪
和偏瘫等
实验室检查
• 外周血中白细胞总数和中性粒细胞增多，单核细胞增多
• 脑脊液常规白细胞计数增高至数百或数千，以多核细胞为 主，少数为单核细胞增多，蛋白质增高，糖降低
发病机制
➢ 李斯特菌主要毒力因子为一个具有成孔蛋白特性的李斯特 菌溶血素( LLO)、肌动蛋白聚合蛋白和一个依赖锌的金属 蛋白酶
➢ LLO是产单核细胞李斯特菌的重要毒力因子,由HLY 基因 编码。其相对分子质量为6000，属于胆固醇依赖细胞溶素 家族，参与产单核细胞李斯特菌一级和 次级吞噬小体的 逃离
食品常被此菌污染，常见的由产单核细胞增生李斯特菌引 起的食物中毒为奶及奶制品、肉制品、水产品、和水果蔬 菜等， 中毒多发生在夏秋季
在美国，李斯特菌是法定传染病！
特点
➢ 可引起食物中毒，病死率高达30％— 70％
➢ 本菌可引起婴儿及新生儿的化脓性脑膜炎或脑膜脑炎病 死率可达70%
➢ 在成年人中本病多见于老年人或有慢性基础疾病者，也可 发生于以前健康的青年人
者可选用 • 头孢菌素对李斯特菌脑膜炎无效（由于 LM 细胞膜上存在至少 5
种青霉素结合蛋白，可与青霉素结合但不能与头孢类结合，因此对头孢类抗 生素天然耐药）
Braden CＲ. Listeriosis［J］.Pediatr Infect Dis J,2003,22( 8) :
并发症
➢ 脑脓肿 ➢ 心内膜炎 ➢ 流产
• 产单核细胞李斯特菌能产生 ２ 种磷脂酶Ｃ：磷脂酰肌磷 脂酶 Ｃ(ＰＩ－ＰＬＣ）和宽范围的磷脂酶Ｃ（ＰＣ－Ｐ ＬＣ）
• ＰＩ－ＰＬＣ毒性相对较小，对细菌在细胞间扩散作用 不 大，主 要 是 协 同 ＰＣ－ＰＬＣ 发 挥 作 用。 而ＰＣ－ＰＬＣ的功能则较复杂，它使细菌从吞噬泡中逃 逸出来，能破坏宿主细胞的信号通路，能调节细胞因子和 化学因子的合成，还能通过二酰基甘油、神经酰胺、肌醇 磷酸盐等调节细胞的生长、分化、凋亡等
兼性厌氧,最适在含有CO2的微需氧环境中生 长
直径约0.2～0.4 mm、半透明、边缘整齐、 微带珠光的露水样菌落,在斜射光下菌落呈 典型的蓝绿色光泽
特点
无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成 荚膜，在20℃～25℃培养时能形成4根鞭毛,但在37℃培养 时无鞭毛
生长温度范围5℃～45℃ ，最适温度为30℃～37℃,能在 普通冰箱冷藏室生长,是一种典型的耐冷性细菌,同时还具 有耐盐性
热耐受性较强，50℃经40min不能杀死，63℃加热15～ 20min死亡，酸性、碱性条件下都适应
李 斯 特 菌 的 流 行 特 点
产单核细胞李斯特菌为需氧或兼性厌氧，感染后患者病死率高 达30％
该 菌 对 各 种 应 激 （低温、高盐、低 ｐＨ、氧 化 应 激 等） 条 件 有 很 强 的 耐 受性，进一步增大了该菌的危害性。此菌 不产生内毒素，可 产 生 一 种 溶 血 性 外 毒 素，对 人 类 致 病 性强
临床表现
• 早发型常为早产儿，生后2 天内发病多见，脑膜炎相对较 少见，主要表现为败血症，可伴有急性呼吸窘迫及肺炎。 本型多由胎母垂直传播、宫内感染所致，气促、呻吟、青 紫等呼吸道症状常是首发症状（李斯特菌宫内感染所致肺炎，
尤其是早产儿，胸部 X 线表现与新生儿呼吸窘迫综合征不易区分， 可表现为“白肺”）
发病机制
• 李斯特菌感染时由CD4+CD25+Ｔ淋巴细胞,CD4+CD25+FOXP3+Ｔ 淋巴细胞和巨噬细 胞 产 生IL-10，与 此 同 时 巨 噬 细 胞 也 产 生 ＩＦＮ 和ＴＮＦ，这２种细胞因子是感染时机 体保护性免疫反应的重要细胞因子，会在感 染 时 被IL-10负 调节
• 胞外菌的免疫应答主要由产生中和抗体的 Ｂ 淋巴细胞介导， 而 胞 内 菌 的 免 疫 应 答 则 由 识 别 专 职 性ＡＰＣ 细胞表面 MHC分子中抗原的 Ｔ 淋巴细胞介导
诊断和预防
预防李斯特菌病的9个方法