医学免疫学与病原生物学实验图片 革兰氏染色(油镜下观察,革兰氏阴性、杆菌)
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实验二细菌的革兰氏染色
实验二细菌的革兰氏染色一.实验目的1.了解革兰氏染色原理并掌握其操作。
2.巩固无菌操作技术及显微镜使用方法。
二.实验原理革兰氏染色法能将细菌分成两大类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
在用乙醇进行脱色时，两种菌的细胞壁结构不同，阳性菌细胞壁为网状结构，比较厚，结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，而阴性菌细胞壁比较薄，颜色更容易洗脱出来，所以最终革兰氏阴性菌为红色，阳性菌为紫色。
三.仪器、试剂与材料1.菌种：枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌属25922。
2.染色液和试剂：结晶紫、碘液、番红、95%的乙醇、沙黄、香柏油、二甲苯、蒸馏水。
3.器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、滴管、吸水纸四.实验步骤1.染色步骤：（1）制片：接种环蘸取细菌液置于载玻片，酒精灯外焰加热玻片进行细菌固定。
（2）初染：添加结晶紫染色，1min后倾去染色液，蒸馏水冲洗至无色。
（3）媒染：吸干残留蒸馏水后，加入一滴碘液，作用1min，水洗。
（4）脱色：吸干残液后，加入95%酒精进行脱色，30s后水洗。
（5）复染：吸干残液后，用番红液复染，1min后，水洗。
（6）镜检：吸干残液后，低倍镜寻找目标物体，再用高倍镜放大目标物，目标视野添加香柏油进行观察。
2.平板划线（1）左手中指、无名指和小拇指托住无菌平皿。
（2）盖子用食指和拇指掰开，右手持接种环进行第一区划线。
（3）酒精灯灼烧接种环至通红，晾凉后进行第二区划线（4）重复（3）进行第三、四区划线（5）将平皿置于适宜温度的培养箱培养过夜。
五.结果与讨论1.革兰氏染色结果图1为显微镜下的染色结果，从结果可以看出，这是革兰氏阳性菌，也就是我们所用的实验材料之一枯草芽孢杆菌，不过红色比较零星，这可能是因为我们在清洗载玻片的时候不小心清洗过度，将一部分细菌冲洗掉了，所以效果并不是很好。
图1 枯草芽孢杆菌而我们所用的另外一个实验材料大肠埃希氏菌属25922理论上说应该是革兰氏阴性菌，这也就意味着最终显微镜下看到的颜色应该是紫色，但是试验最后我们只观察到一片白色，回过头来思考原因，这可能是因为我们在吸干载玻片的过程中用力过猛用纸巾把细菌给擦去了，所以最后细菌都没了，也就没有染上相应的颜色。
细菌革兰氏染色PPT课件
实验二 细菌革兰氏染色
1
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
2
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
3
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
17
1、根霉——菌丝特化形成假根等特化菌丝
18
1、根霉——孢囊孢子（无性繁殖）
19
2、曲霉、青霉——分生孢子（无性繁殖）
20
3、犁头霉——接合孢子（有性繁殖）
21圆柱形，
但有时某些酵母菌可形成假菌丝。酵母菌无性繁殖以出芽 方式生殖。
22
微生物的菌落形态
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
5
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
6
四、实验方法
（一）革兰氏染色 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—
菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉 眼可见的群体。
区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细 胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态 的集中反映，因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征， 可通过这些特征差异区分和识别。
特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质 地等。
1
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
2
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
3
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
17
1、根霉——菌丝特化形成假根等特化菌丝
18
1、根霉——孢囊孢子（无性繁殖）
19
2、曲霉、青霉——分生孢子（无性繁殖）
20
3、犁头霉——接合孢子（有性繁殖）
21圆柱形，
但有时某些酵母菌可形成假菌丝。酵母菌无性繁殖以出芽 方式生殖。
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微生物的菌落形态
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
5
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
6
四、实验方法
（一）革兰氏染色 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—
菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉 眼可见的群体。
区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细 胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态 的集中反映，因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征， 可通过这些特征差异区分和识别。
特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质 地等。
革兰氏染色试验步骤ppt课件
11
二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可 形成不溶于水的结晶紫液和碘液的复合物，G+细菌由于 其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，因此遇脱 色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，再加上它不含 类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与 碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
乳酸石炭酸棉蓝染色优点：细胞不变形，不易干燥，防腐，保存时间较长，
25
三、实验器材
1、菌种：细黄链霉（Streptomyces microflavus） 红酵母（Rhodotorula SP） 产黄青霉（Penicillium chrysogenum） 黑曲霉（Aspergillus niger） 黑根霉（Rhizopus nigricans ） 总状毛霉（Mucor racemosds）
24
酵母菌：单细胞真核生物
真
形态：卵圆形、圆形、椭圆形或圆柱形等
繁殖方式：无性：主要为出芽繁殖，产生芽孢子
菌
有性：产生子囊孢子
美篮染色优点：可区分死活细胞，活细胞能使蓝 色变无色，死细胞一直呈蓝色。
霉菌：霉菌可产生复杂分枝的菌丝体（基内菌丝和气生菌丝），
气生菌丝长到一定阶段分化产生分生孢子梗，分生孢子梗上 产生生孢子。分生孢子梗和分生孢子的形态特征是分类的重 要依据。 繁殖方式：主要产生无性孢子和产生有性孢子繁殖
2、培养基：高氏1号琼脂、麦芽汁琼脂、马铃薯葡萄糖琼 脂或查氏培养基。
3、试剂：0.1%美蓝染液、乳酸石炭酸棉蓝染色液、 50% 乙醇。
4 、器具：显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子、接 种杯、解剖针、擦镜纸等。
26
四、实验步骤
放线菌形态观察方法（扦片法）
二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可 形成不溶于水的结晶紫液和碘液的复合物，G+细菌由于 其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，因此遇脱 色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，再加上它不含 类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与 碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
乳酸石炭酸棉蓝染色优点：细胞不变形，不易干燥，防腐，保存时间较长，
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三、实验器材
1、菌种：细黄链霉（Streptomyces microflavus） 红酵母（Rhodotorula SP） 产黄青霉（Penicillium chrysogenum） 黑曲霉（Aspergillus niger） 黑根霉（Rhizopus nigricans ） 总状毛霉（Mucor racemosds）
24
酵母菌：单细胞真核生物
真
形态：卵圆形、圆形、椭圆形或圆柱形等
繁殖方式：无性：主要为出芽繁殖，产生芽孢子
菌
有性：产生子囊孢子
美篮染色优点：可区分死活细胞，活细胞能使蓝 色变无色，死细胞一直呈蓝色。
霉菌：霉菌可产生复杂分枝的菌丝体（基内菌丝和气生菌丝），
气生菌丝长到一定阶段分化产生分生孢子梗，分生孢子梗上 产生生孢子。分生孢子梗和分生孢子的形态特征是分类的重 要依据。 繁殖方式：主要产生无性孢子和产生有性孢子繁殖
2、培养基：高氏1号琼脂、麦芽汁琼脂、马铃薯葡萄糖琼 脂或查氏培养基。
3、试剂：0.1%美蓝染液、乳酸石炭酸棉蓝染色液、 50% 乙醇。
4 、器具：显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子、接 种杯、解剖针、擦镜纸等。
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四、实验步骤
放线菌形态观察方法（扦片法）
微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色_图文_图文
染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
染色结果
大肠杆菌革兰氏染色结果
染色结果
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
四、实验结果
显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数
绘图记录观察结果
思考题
1、在制作涂片中，为什么要进行固定这 一步？
2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳 性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁 的结构和组成不同决定的。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂 结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用 乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红 )复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂 蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞 中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染 剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌 。
2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂
面染色1-2分钟。 5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的
水变无色为止（注：勿冲去菌体）。 6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。 7、镜检：油镜观察并绘图。
二、实验原理---简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二：一是 杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增 加其对染料的亲和力。常用的有加热和化 学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原 有的形。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染 色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
实验一 革兰染色法PPT课件
葡萄球菌属主要是釐黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌等链球菌属肺炎链球菌草绿色链球菌肠球菌等白喉杆菌炭疽杆菌破伤风杆菌蜡样芽孢杆菌等其中釐黄色葡萄球菌肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阳性菌通常对青霉素类第一或第二代头孢菌素等高度敏感青霉素可为化脓性细菌感染可首选药物
微生物实验课注意事项
• 禁止不穿白大衣进入实验室； • 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随
2020/3/26
P3
9
9
注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
2020/3/26
11
11
染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
2020/3/26
大肠杆菌(10×100)
12
12
染色结果
螺形菌Spiral bacterium
2020/3/26
13
13
革兰染色意义
★鉴别细菌 ★选择抗菌药物 ★研究细菌的致病性
2020/3/26
2020/3/26
15
15
选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾 杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆 菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细 菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐 药
• 革兰氏阴性菌对第三代头孢、氨基糖苷类、抗假单胞菌 属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第 二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆 菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。
微生物实验课注意事项
• 禁止不穿白大衣进入实验室； • 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随
2020/3/26
P3
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9
注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
2020/3/26
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染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
2020/3/26
大肠杆菌(10×100)
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染色结果
螺形菌Spiral bacterium
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革兰染色意义
★鉴别细菌 ★选择抗菌药物 ★研究细菌的致病性
2020/3/26
2020/3/26
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选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾 杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆 菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细 菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐 药
• 革兰氏阴性菌对第三代头孢、氨基糖苷类、抗假单胞菌 属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第 二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆 菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。
医学微生物学实验 革兰氏染色+球菌
医学生物学实验
医学微生物教研室
2012年3月
实验内容
一、细菌染色标本观察 （革兰染色法）
二、病原性球菌标本片观察 链球菌 脑膜炎双球菌
链球菌
脑膜炎双球菌
一、革兰染色法
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
【菌种】白色葡萄球菌+大肠杆菌 【试剂】革兰染液 【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、吸水纸、
显微镜等 【方法】1、细菌涂片标本的制片
2、革兰染液染色 3、油镜下观察结果
细菌涂片的制备
器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5mm
柄约22cm
5—8cm
金属柄约14.5cm
绝缘柄 约7.5cm
安装环(针)的螺口(约8mm)
操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
细菌涂片的制备
菌液采取法
【操作步骤】
细菌涂片的制备
一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固；
可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
【操作步骤】 二、革兰染液染色
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 碘液 1’ 95% 乙醇 30” 复红 1’
冲洗
滤纸干燥
油镜观察
革兰氏染色
甲
紫紫色色（（GG＋＋））
菌
初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫 染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
乙
红色（G-）
医学微生物教研室
2012年3月
实验内容
一、细菌染色标本观察 （革兰染色法）
二、病原性球菌标本片观察 链球菌 脑膜炎双球菌
链球菌
脑膜炎双球菌
一、革兰染色法
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
【菌种】白色葡萄球菌+大肠杆菌 【试剂】革兰染液 【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、吸水纸、
显微镜等 【方法】1、细菌涂片标本的制片
2、革兰染液染色 3、油镜下观察结果
细菌涂片的制备
器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5mm
柄约22cm
5—8cm
金属柄约14.5cm
绝缘柄 约7.5cm
安装环(针)的螺口(约8mm)
操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
细菌涂片的制备
菌液采取法
【操作步骤】
细菌涂片的制备
一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固；
可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
【操作步骤】 二、革兰染液染色
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 碘液 1’ 95% 乙醇 30” 复红 1’
冲洗
滤纸干燥
油镜观察
革兰氏染色
甲
紫紫色色（（GG＋＋））
菌
初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫 染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
乙
红色（G-）
革兰氏染色课件PPT
复染
复染：将脱色后的涂片用复染液进行复染处理，以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净，以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥，以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度，避免过高或过低，以免影响 染色效果。
染色
染色：将涂片浸入革兰氏染色液中， 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间，避免过 长或过短，以免影响染色效果。
脱色
脱色：将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理，以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配，以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜，过期 或变质的染色液会影响染色效果
。
避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染，以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全，避免染色 液溅到皮肤或眼睛上，如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究，有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片：将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上，然后晾干或烘干， 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚，以免影响染色效果。
固定
固定：将涂片在火焰上快速通过两次，使菌体或组织固定 在玻片上，以便后续染色。
病原生物学实验图片+1+
斯氏狸殖吸虫
子宫分叶多
毛蚴
日本血吸虫
胞蚴
日本血吸虫
尾蚴
华支睾吸虫
卫氏并殖吸虫
日本血吸虫
日本血吸虫：
钉螺
日本血吸虫卵
小棘,无卵盖,外 有组织残留物
毛蚴
宽椭圆形
日本血吸虫：病理
日本血吸虫：病人照片
布氏姜片 吸虫卵
卫氏并殖 吸虫卵
日本 血吸 虫虫 卵
华支 睾吸 虫卵
丝状菌落
小分生孢子
芽生孢子 大分生孢子
芽生孢子
大分生孢子（含菌丝）
放线菌硫磺样颗粒
放线菌
放线菌菌落
白色念珠菌
新生隐球菌
寄生虫
华支睾吸虫：成虫
成虫状似葵花子
囊蚴
华支睾吸虫
雷蚴
华支睾吸虫
华支睾吸虫卵(最小)
卵盖 肩峰
毛蚴
状似芝麻,灯泡状
疣状突起
华支睾吸虫：中间宿主
长角涵螺(3圈),赤豆螺(4圈)
伤寒杆菌鞭毛染色（示鞭毛）
致病性肠道杆菌 在SS培养基上形 成相对较小，半 透明，无色或淡 黄色的菌落。
靛基质试验（吲哚试验）
玫瑰吲哚
甲基红（MP）试验
VP试验
枸橼酸盐利用试验
弧菌
霍乱弧菌（革兰染色）
厌氧性细菌
破伤风梭菌（示芽胞）
革兰染色和芽胞染色
破伤风梭菌芽胞染色（示芽胞）
破伤风梭菌革兰染色（示芽胞）
3个品字 形唇瓣
成虫(雌雄异体，雄虫较雌虫为小)
雄虫：尾端有一对 象牙交合刺
受精卵
未受精卵
长椭圆形 卵壳及蛋白质膜均较受精 卵 无蛔甙层 卵内充满大小不等的折光 颗粒
宽椭圆形 受精膜、壳质层、蛔甙层 卵壳外有一层虫体子宫分泌 物形成的蛋白质膜，表面凹 凸不平 卵壳内有一个大而圆的卵细 胞， 卵壳间可见新月形间隙。