不同金属离子对酶活性的影响
酶学性质研究
1.6 酶学性质研究（1）pH 的影响：分别测定粗酶液在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0下的酶活力，确定其最适反应pH 值；将粗酶液用上述pH 缓冲液稀释后，45℃水浴保温4小时后，测定其剩余酶活力。
（2）温度的影响：分别在40~95℃下测定酶活力，确定其最适反应温度；将酶液在40～90℃范围内的不同温度下保温60 min 后，测定其剩余酶活力。
（3）金属离子的影响：在酶液中分别添加各种金属离子，使其浓度为4 mmol ／L ，然后测定酶活力。
2.5 纤维素酶粗酶液酶学性质2.5.1酶反应的最适pH 值和酶的pH 稳定性粗酶液在不同pH 值下测得的酶活及在不同pH 值下处理4小时后测得的相对酶活示于图11。
结果表明，CMCase 在pH 3.5～4.5有较高的酶活力，最适反应pH 值为4.0；β-Gluase 在pH 4.5～5.5酶活力较高，最适反应pH 值为5.0，同样方法测得FPA 最适反应pH 为5.0。
可见，该菌株所产的各组分纤维素酶是酸性酶。
图11表明，该菌产CMCase 在pH3.0～6.0的范围内，β-Gluase 在pH3.5～5.5的范围内，酶活力均可保持在80％以上，说明该菌株所产酸性纤维素酶可在较宽的pH 值范围内保持其酶活力的稳定性。
2.5.2 酶反应的最适温度和酶的热稳定性在不同温度下直接进行酶促反应测得的酶活及在不同温度下热处理60 min 后于最适反应温度和最适pH 下测得的相对酶活(以4℃保存的酶液活力为100%)示于图12。
结果表明，CMCase 、β-Gluase 及FPA 最适反应温度均为65℃。
c e l l u l a s e a c t i v i t y ( U .m l -1)pHr e l a t i v e y a c t i v i t y （%）c e l l u l a s e a c t i v i t y ( U .m l -1)temperature ( o C )r e l a t i v e y a c t i v i t y （%）图11 pH 值对酶活力及酶稳定性的影响Fig.10 Effects of pH value on Cellulase activity andstability 图12 温度对酶活力及酶稳定性的影响 Fig.11 Effects of temperature on activity andstability of cellulase图12表明，温度低于60℃时，CMCase和β-Gluase能保持90％以上的酶活性，酶液在80℃下保温1小时，CMCase仍保持10%的活性，70℃热处理1小时，β-Gluase活性仅损失60%。
酶的抑制剂与激活剂
Folin-酚法测碱性蛋白酶酶活原理
Folin-酚试剂在碱性条件下，其磷钼酸盐-磷钨酸 盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混 合物)。
在一定浓度范围内，蓝色深浅与含酚羟基氨基酸 (酪 氨酸)的量成正比，通过比较加入金属离子(或洗衣粉)后 和未加入金属离子(或洗衣粉)的反应酶液的OD680值，可 以推断出该种金属离子是该酶的激活剂还是抑制剂。
(4)反应结束时加入10%三氯醋酸溶液2 ml(终止反应) ， 立即摇匀，静置10 min。
(5)各取上清1.5ml于EP管中，6000rpm,离心1min 。取上 清1ml于试管中，各加入0.4 mol/L Na2CO3溶液5ml及 福林一酚试剂1 ml，置于40℃显色15 min 。
(6)测定OD680值 ，并以原酶活力为100，算出相对酶活 。空白试验时，先加三氯醋酸溶液，再加入酶液和 底物，同样测定OD680值。
酶的抑制剂与激活剂
一.目的与内容
目的：学习研究酶的抑制剂和激活剂的方法，并通 过几种金属离子和表面活性剂对枯草杆菌碱性蛋白酶 活力的影响，筛选出该酶的某些抑制剂和激活剂。
内容：1.几种金属离子Ca2+、Ag+、Cu2+、Hg2+和 Mg2+对枯草杆菌碱性蛋白酶活力的影响；2.洗衣粉对枯 草杆菌碱性蛋白酶活力的影响。
2．洗衣粉对酶活力的影响： (1)分别在pH 7.0和pH 10.0酶液中加入洗衣粉(反应液
终浓度为0.03%)。 (2)混合液和pH7原酶液、 pH7空白(共4支)于25℃下放
置20 min。 (3)测酶活力，并以原酶活力为100，算出相对酶活。
五.注意事项
1.实验中，以先加TCA的酶液为空白，以原酶液试管为 标准液，对其操作应与实验试管同步一致。
PH、金属离子在溶菌酶提取过程中对酶活性的影响
2011届本科毕业生毕业论文题目：PH、金属离子在溶菌酶提取过程中对酶活性的影响作者姓名徐萧苟真汪磊指导教师刘秀丽学科专业生物技术系别生命科学与技术学院学号2007221121 20072211022007221115提交论文日期2011年6月2日PH、金属离子在溶菌酶提取过程中对酶活性的影响徐萧苟真汪磊指导老师：刘秀丽（陇东学院生命科学与技术学院甘肃庆阳 745000）摘要:本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过在提取过程中施以不同的PH和加入不同的金属离子，来测定其对提取的溶菌酶活性的影响。
结果表明酶活性在PH6.0-6.5最强、且在5-7范围内较稳定；金属离子中Na+、K+对其活性有轻微激活作用。
Mn2+、Mg2+对溶菌酶活性无明显影响，Ca2+、Cu2+、Fe2+、Zn2+使溶菌酶活性下降。
关键词：盐析蛋清溶菌酶；酶活性；影响因素；金属离子；提取；PHPh, Metal Ions In Mind The Enzymes Are Extracts Of The Enzyme ActivityXuxiao gouzhen wanglei（Gansu College of Life Science and Technology, Biotechnology, 07 classes inQingyang 745000）Abstract: Objective To study the extraction process of egg white lysozyme PH, metal ions on enzyme activity levels.Methods: egg white lysozyme in the extraction process or by changing the PH by adding various metal ions the size of the different factors to determine the results of the activity of egg white lysozyme was observed enzyme activities. The results of activity of the strongest in the PH6.0-6.5 and was stable in the range 5.0-7.0; metal ions in the Na +, K + activation of its activity slightly. Mn2 +, Mg2 + had no effect on the activity of lysozyme, Co2 +, Ca2 +, Cu2 +, Fe2 +; Zn2 + is the activity of lysozyme decreased. Conclusion Preliminary results showed that acid extraction of lysozyme as part of the environment and enhance the metal ions for their activity and reduce the effectKeywords ：out truffles are an enzyme ;enzyme activity ; factors influencing Metal ion; extraction;pH;0引言溶菌酶(Lysozyme),正式名为N-乙酰基糖胺酶（N-lhexosaminodase）,属胞壁质酶（muramidase）, 有称N-乙酰胞壁质酶，能选择性地分解微生物的细胞壁而具有杀菌、抗病毒、抗肿瘤细胞等功效，在食品工业、医疗、生物学领域有着广泛的应用[1]。
冲刺2020高考生物实验突破专题：影响酶活性的条件(附答案及解析)
影响酶活性的条件1．实验原理(1)探究温度对酶活性的影响 ①反应原理②鉴定原理：温度影响酶的活性，从而影响淀粉的水解，滴加碘液，根据是否出现蓝色及蓝色的深浅来判断酶的活性。
(2)探究pH 对酶活性的影响①反应原理(用反应式表示)：2H 2O 2――――→过氧化氢酶2H 2O ＋O 2。
②鉴定原理：pH 影响酶的活性，从而影响氧气的生成速率，可用带火星的卫生香燃烧的情况来检验O 2的生成速率。
2．实验步骤和结果 (1)探究温度对酶活性的影响(2)探究pH对酶活性的影响考点一：“梯度法”探究酶的最适pH(1)设计思路(2)设计方案例一、为了探究某种淀粉酶的最适温度，某同学进行了如图所示的实验操作。
实验步骤如下：步骤①：取10支试管，分为五组。
每组两支试管中分别加入1 mL某种淀粉酶溶液和2 mL 质量分数为5%的淀粉溶液。
步骤②：将每组淀粉酶溶液和淀粉溶液混合并摇匀。
步骤③：将装有混合溶液的五支试管(编号1、2、3、4、5)分别置于15 ℃、25 ℃、35 ℃、45 ℃、55 ℃水浴中。
反应过程中每隔1分钟从各支试管中取出一滴反应液，滴在比色板上，加1滴碘液显色。
回答下列问题：(1)实验原理：淀粉在淀粉酶的催化作用下分解成还原糖；淀粉酶的活性受温度影响；用碘液可检测淀粉，因为淀粉遇碘液变蓝，根据蓝色深浅来推断淀粉酶的活性。
(2)该实验的设计存在一个明显的错误，即步骤②前应__________________________________________________________________________________________________。
(3)在本实验中，各组溶液的pH要保证______________，该实验能否选用斐林试剂检测实验结果？__________，理由是________________________________________________________________________________________________________________________。
金属离子对纤维素酶活力影响的研究
金属离子对纤维素酶活力影响的研究
纤维素酶的活性往往受到金属离子的影响，因此研究金属离子对纤维素酶活性的影响及机制十分重要。
研究发现，铝离子，铁离子，锆离子和钴离子与纤维素酶的活性有紧密关系。
一般情况下，金属离子可以抑制纤维素酶活性，铝离子最明显，其抑制作用随金属离子浓度的增加而加强；而钴和锆在低浓度时可以激活纤维素酶活性。
金属离子可以通过多种方式影响纤维素酶的活性，比如直接作用在酶上，导致酶的结构发生改变而影响其活性；另外，金属离子可以与底物（纤维素）结合干扰底物和酶之间的作用，进而影响酶的活性；另外，它还能结合抑制剂，抑制酶的活性；最后，金属离子可以结合酶体，破坏酶体，而导致很大程度上降低酶活性。
综上所述，可以看出，金属离子可以通过多种方式影响纤维素酶活性，因此，为了确保其高效率使用，需要在添加金属离子的前后，注意检测其对纤维素酶活性的影响，确保其最佳活性条件，可以获得最佳不同浓度的金属离子，有利于取得满意的纤维素酶活性结果。
金属离子对牛小肠碱性磷酸酶的影响
activity (U /mg)
正丁醇抽提 ( Extraction with n2butyl alcohol)
0. 35饱和度硫酸铵 ( 0. 35 (NH4 ) 2 SO4 )
0. 7饱和度硫酸铵 ( 0. 7 (NH4) 2 SO4 )
ZHANG Ying, YU Tong, ZHAO Xin2p ing3 , GAO Ju
( School of L ife Sciences, Key Laboratory of B io2resources and Eco2environment M inistry of Education, Sichuan University, Chengdu 610065, China)
参照酶活力测定方法 ,在反应体系中分别加入 不同浓度的含各种金属离子的无机 盐溶 液 , 加入 100μL 酶液和 100 μL pNPP,用 Tris2HCL 缓冲液补 足至 2 mL ,于最适温度下反应 10 m in,用 1 mL 浓度 为 1 mol/L NaOH 终止反应 ,在 405 nm 处测定光吸 收值 ,以无金属离子反应体系为对照 ,计算各种金属 离子存在下的酶的相对活力 。选用的效应物分别为 N aCl、KC l、M gSO4 、CaC l2 、N iSO4、CoC l2 、M nSO4 、 CuC l2 、ZnSO4 、CdC l2 、Pb (NO3 ) 2 。
探究影响酶活性的因素
2.实验步骤和结果 (1)探究温度对酶活性的影响
序号
实验操作内容
试管1
试管2
试管3
1 加入等量的可溶性淀粉溶液
2 mL
2 mL
2 mL
60 ℃热水(5分钟
2
控制不同的温度条件
沸水(5分钟) 冰块(5分钟)
)
1 mL(5分钟 3 加入等量的新鲜淀粉酶溶液 1 mL(5分钟) 1 mL(5分钟)
)
4
产物总量也不会1 2增3加4 5
解析
答案
(4)生物体内酶的化学本质是__蛋__白__质__或__R__N_A， 其特性有__高__效__性__、__专__一__性_(答出两点即可)。
12345
解析
答案
(排除温度干扰)，且将酶溶液的pH调至 预设 pH后再 滴入，
不宜在未达到预设pH前，让反应物与酶接触。
过氧 化氢
过
过酶
氧
氧
化
化
氢
氢
酶
酶
关键点拨
1.实验材料选择时的注意事项 (1)在探究温度对酶活性的影响的实验中，不宜选择过氧化氢 (H2O2)和过氧化氢酶作为实验材料，因为过氧化氢(H2O2)在常 温常压时就能分解，加热的条件下分解会加快，从而影响实 验结果。 (2)在探究pH对酶活性的影响实验中，不宜选用淀粉和淀粉酶 作为实验材料，因为在酸性条件下淀粉本身分解也会加快， 从而影响实验结果。
长句应命题探究 答突破简答 题
如图为不同条件下，某酶促反应生成物的浓度随时间的变化曲线，请分析：
1.若表示的是不同催化剂条件下的反应，③是不加催化剂， ②是加无机催化剂，①是加酶，这体现了酶的高效性， 酶具有该特性的原理是同无机催化剂相比，酶能显著降低化 学反应的活化能。
酶促反应影响因素
酶促反应影响因素酶促反应影响因素1. 温度：温度高于酶的最适活性温度，会加速酶分子的活性，而酶活性过高则可导致酶烧伤或破坏，从而降低反应的速率，所以保持合适的温度是影响酶促反应的重要因素之一。
2. 酶浓度：酶浓度是影响酶促反应速率的主要因素，它直接影响反应中酶与底物之间的接触次数，当酶浓度增加时，酶与底物越多，接触次数越多，反应速率自然越快，反之，当酶浓度过低时，反应速率就变慢。
3. pH值：pH值也会影响酶促反应，每种酶都有自己最适宜的pH值，若pH值过高或过低，酶活性可能会下降，甚至在一定的极端条件下可能造成酶的解离，因此需要控制反应的pH值。
4. 辅助因子：对于一些特定的酶，还需要加入某些激活剂或辅助因子，才能促进反应，引起酶活性。
例如，维生素是不可缺少的辅助因子，它们可能和一些酶结合形成介质型酶，影响酶促反应的反应速率。
5. 抑制剂：在生理反应过程中，也需要抑制酶的活性，而一些有机分子可以抑制酶的活性，从而降低反应的速率。
抑制剂的效果受其类型、浓度和pH值等影响，如果抑制剂的浓度过高，将会完全抑制酶活性，从而降低反应的速率。
6. 氧化剂和还原剂：氧化剂和还原剂都会影响酶促反应，氧化剂可以促进酶的反应速率，而还原剂则可以降低酶的反应速率。
例如，苯酚可以作为氧化剂加速酶促反应，而过氧化氢则可以作为还原剂，降低酶促反应的速率。
7. 金属离子：一些金属离子也可以影响酶的反应速率，其中锰、铜、铁等离子可能介导酶的正向活性，而硫酸钙、硫酸镁、硫酸铝等离子可能起抑制作用，降低酶的反应速率。
因此，温度、酶浓度、pH值、辅助因子、抑制剂、氧化剂和还原剂以及金属离子等都是影响酶促反应速率的重要因素。
基于此，实验室工作者可以在有效控制这些条件条件的基础上，改善反应的质量和效率，从而获得更佳的实验结果。
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金属离子对酶活性的影响
实验目的：1、了解金属离子对酶活性的影响；
2、掌握不同金属离子对酶活性作用结果的测量方法
实验原理：
酸性磷酸酯酶广泛分布于动物和植物中，植物的种子、霉菌、肝脏和人体的前列腺中。
它对生物体核苷酸、磷蛋白和磷脂的代谢，骨的生成和磷酸的利用，都起着重要作用。
磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。
磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。
本实验选用绿豆芽作材料，从中提取酸性磷酸酯酶。
以人工合成的对硝基苯磷酸酯（NPP）作底物，水解产生对硝基苯酚和磷酸。
在碱性溶液中，对硝基酚盐离子在405nm处光吸收强烈，而底物没有这种特性。
凡是能提高酶活性的物质统称为酶的激活剂。
无机离子和一些金属离子对酶有激活作用，可以作为酶的激活剂。
其中钾离子是酸性磷酸酯酶的一种激活剂，它在酶与底物之间起了桥梁作用，形成了酶—金属离子—底物三元复合物，从而更有利于底物与酶的活性中心部位的结合。
而氯离子和钠离子对酸性磷酸酯酶的活性
没有什么影响.一些重金属离子如铜离子，对酶活性具有抑制作用。
实验用品：
1、仪器：恒温水浴箱、试管架、试管、分光光度计、
比色皿、吸头、滴管、移液枪、移液管
2、试剂：1.2mmol/L NPP 100ml 、0.3mol/L NaOH
250ml 、酸性磷酸酯酶、pH5.0的柠檬酸缓冲液
1000ml 、2mmol/L FeSO4 、2mmol/LCuSO4、
MnCl22mmol/L 、MgSO42mmol/L、 KCl 2mmol/L EDTA、实验步骤：
调零FeSO
4
CuSO
4
MnCl
2
MgSO
4 EDTA KCl
空白
对照
0 1 2 3 4 5 6 7
NPP
（ml） 1 1 1 1 1 1 1 1
酶液
(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 金属离
子（m
l） 1 1 1 1 1 1 1 1
NaOH(m
l) 3 3 3 3 3 3 3 3 注：反应均在37度水浴箱中进行，0号管先加入1.0mlNPP后保温15分钟，然后加入NaOH 3ml，混匀后再加
酶液1ml，在波长405nm处观察OD值，以0号管调零
实验结果
调零FeSO
4
CuSO
4
MnCl
2
MgSO
4 EDTA KCl
空白
对照
试管号0 1 2 3 4 5 6 7
OD
（abs）0 0.68
4
0.30
9
1.26
2
0.35
7
0.34
1
0.34
2
0.28
4
由实验数据得到的图标如下：
实验作业：
以各金属离子为横坐标，A405纵坐标，绘制不同金属离子与酶活力曲线，观察金属离子与酶活力的关系，分析哪些是酶活性激活剂，哪些是酶活性抑制剂。
结果分析：通过实验组与对照组的OD值对比可知，保证在适宜的温度、pH等外界条件下，再加入1ml 2mmol/L浓度的各种金属离子溶液，对酸性磷酸酯酶的活力均有激活作用。
它们对酸性磷酸酯酶激活作用的强度由大到小依次为：MnCl2、FeSO4、MgSO4KCl、EDTA、CuSO4。
可以看出，重金属对这种酶的激活作用比较强。