豆粕脲酶活性相关资料
豆粕脲酶活性相关资料
尿素酶活性与抗胰蛋白酶之间关系，Wright(1981)
脲酶活性测定的局限性
局限性
尿酶活性没有负值，它对任何过熟豆粕的最低值为零；对于 加热过度的豆粕尿酶测定值不是一个可靠的指标 。
解决办法：
利用蛋白质溶解度去评价。原理是：加热使游离氨基酸与其 它化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内 的结合键，因而降低了蛋白质的溶解度 。一般要求蛋白质溶 解度（0.2%KOH溶液）应在70%～85%之间。PS＞85% 时，表示加热不足，PS＜70%时则表示加热过度
PH增值法（续）
操作方法
准确称取0.400g样品2份，分别置于两支比色管中，一只比 色管中加入20ml磷酸缓冲液，作为空白试验（A管），另一 只比色管中加入20ml尿素缓冲液（B管）。盖塞混匀，在 30℃恒温水浴中准确保持30min。在此期间，每隔5min摇 匀一次。取出后立即加入饱和氯化汞溶液2～3滴，在冷水中 冷却，5min内测定溶液的PH值。
另取比色管做空白试验，加入10ml尿素缓冲液，10ml0.1 mol/l盐酸。称取与上述试样量相当的试样，迅速加入比色管中，
立即盖好比色管并剧烈摇动，在30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min，冷却到20℃，将比色管内容物全部转入烧杯，用 水冲洗比色管2～3次，用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
滴定法（续）
仪器与器皿 pH计 恒温水浴 比色管 10ml移液管
滴定法（续）
试剂
尿素：分析纯 尿素缓冲液：4.45g磷氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并
稀释至1000ml，再将30g尿素溶于此缓冲液中。 0.1mol/l盐酸 0.1mol/l氢氧化钠标准溶液
标定方法：取基准邻苯二甲酸氢钾0.6g，溶于50ml水中，加 热至沸，加入2～3滴酚酞指示剂，用配制的氢氧化钠标准溶液 滴定至呈粉红色30s不退色为终点。以下列公式计算浓度：
大豆制品中脲酶活性的测定
制作人：刘力、李亚杰
背景
大豆制品中含有大量抗营养因子，影响到动物的正常生长 发育。其中最主要的是胰蛋白酶抑制因子，不耐热，但在 点击添加标题 生产加工过程中，过度的加热在灭活抗营养因子的同时， 导致蛋白质变性，特别是赖氨酸、精氨酸和胱氨酸等严重 点击添加标题 变性，大大降低了大豆制品的消化率和生物学价值。抗胰 蛋白酶活性是直接反映大豆制品中抗营养因子水平及加热 程度的可靠指标，但由于该法费时、所用试剂昂贵，在生 点击添加标题 产上不适用。而脲酶活性与抗胰蛋白酶活性呈高度正相关， 方法较简便、快速、经济，国内外常用脲酶活性作为检验 点击添加标题 大豆制品加热程度和抗营养因子水平的判断指标。
注意事项
若样品粗脂肪含量高于 点击添加标题 10%，则应先进行不 加热的脱脂处理后，在测定脲酶活性； 点击添加标题 称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则 会造成试验误差； 点击添加标题 试样和空白试验同时操作，过程要迅速，防 止时间影响。 点击添加标题
问题
反应时间（30min ）对脲酶活性是否有影响？ 点击添加标题
仪器设备
粉碎机：粉碎时应不生强热，如球 点击添加标题 磨机。
点击添加标题 点击添加标题
点击添加标题
测定步骤
样品中脲酶活性的测定：称取0.2 g（准确至0.0001 g）样品（如果活性很
高，可称取0.05 g试样）玻璃试管中，加10 mL尿素缓冲液，立即盖好试管 盖剧烈振摇后，马上置于30±0.5 ℃水浴锅内，准确计30 min±10 s。取下 点击添加标题 后立即加入10 mL盐酸（0.1 mol/L），振摇后迅速冷却至20℃，将试管内容 物全部转入50 mL烧杯中，用20 mL蒸馏水冲洗数次，以0.1 mL的氢氧化钠 标准滴定溶液用酸度计滴定至 pH 4.70。记录氢氧化钠标准滴定溶液消耗量。 点击添加标题 如果选用指示剂，试管中内容物全部移入250 mL锥形瓶中，滴加8~10滴混 合指示剂，以0.1 mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至蓝绿色，记录氢氧化 点击添加标题 钠滴定溶液消耗量。 空白测定：称取样品后立即加入10 mL盐酸溶液，之后不加。
脲酶活性和氢氧化钾溶解度对豆粕热加工的影响
2.1、试剂：
稀硫酸0.2N； 尿素-酚红试剂：将1.2g酚红溶解于30ml0.2N 的氢氧化钠中，用蒸馏水稀释到约300ml；再 加入90g尿素并溶解，用蒸馏水稀释到2升；最 后加入14ml1.0N的硫酸（或70ml0.2N的硫 酸），用蒸馏水稀释到3升。溶液应具明亮的 琥珀色。
2.2、测定步骤：
3、大豆加热处理对蛋白溶解度的影响：
生产实践中，蛋白溶解度的测定值范围一般在60%～90%。对于幼畜日 粮，蛋白溶解度低于70%的豆粕营养价值已受到破坏，蛋白溶解度低于 65%，几乎可以肯定豆粕加热过度。近年来由于豆粕加工技术的改进， 蛋白溶解度有增高的趋势。 鉴定豆粕过熟的方法是在0.2%KOH溶液中测定豆粕的蛋白溶解度。此方 法在近十年来被认为是评估大豆加工过度与加工不足的最佳方法。其原 理是：加热使游离AA与其它化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分 子间和分子内的结合键，因而降低了CP的溶解。高温能使还原性碳水化 合物，如葡萄糖与Lys的游离氨基酸起作用，即美拉德反应。其结果使 Lys分子成为不能被利用，因而使蛋白质的消化率降低。蛋白质分子中的 其它AA，如精氨酸、组氨酸和色氨酸也受热过度的影响，还原性化合物 也包括酮与醛。感观上美拉德反应的产物呈现棕色，故又称棕色反应。
豆粕 SoonSoon 泰国 阿根廷 美国 印度 1 印度 2
AMEn 2553 2406 2344 2381 2164 2087
5
蛋白 48.58 47.37 46.21 45.99 45.55 44.16
水分 11.13 10.16 10.61 10.66 10.44 10.14
脂肪 2.55 0.92 2.12 2.63 1.36 1.35
脲酶活性和氢氧化钾溶解度 对豆粕热加工的影响
大豆制品脲酶活性测定.
（5）计算 UA=pH(B管)-pH(A管)
2、滴定法 （1）原理： 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓 冲溶液混合，在30℃保持30min后， 尿素酶催化尿素水解产生氨，用过 量的盐酸溶液中和氨，再用氢氧化 钠标准溶液回滴。
（2）脲酶活性定义 在30℃和pH＝7的条件下，每分 钟每克大豆制品分解尿素后，所释 放的氨态氮的毫克数。
（3）方法： 粉碎→称取0.05±0.001g→放入试 管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加 蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变 红时间→5 min后取出试管，摇匀继 续观察
空白试验：不加尿素，其他同上。 品质判定：如果溶液为明显的粉红 色，则认为该大豆制品脲酶活性超 标，为不合格产品。 •0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）； •1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
高温、高湿、高压，粒度小，时间 长脲酶活性低。但是，加工过度， 一些氨基酸会被破坏。所以脲酶活 性过高（豆制品过生）或过低（豆 制品过熟）都表明豆制品质量较差。
三、测定原理： 脲酶活性测定实际上是在一定条件 下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试 样、每分钟分解尿素所产生的氨的 量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
此时溶液应具有明亮的琥珀色； （过 段时间溶液会变为深橘红色， 可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶 液再次变为琥珀色）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（3）方法： 将一满匙样品放入表面皿中， 摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴 入表面皿中的样品上，直至完全浸 湿，停留5min，观察样品的颜色反 应。 如果红斑面积多于20%，则认为 该样品脲酶活性超标，为不合格产 品。
发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研(精)
发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研究彭辉才1粱明振1’张宏福2(1广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2北京畜牧兽医研究所营养学国家重点实验室, 北京海淀区100094摘要:豆粕中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原;本试验对8种发酵豆粕进行测定,前两者含量极低未检出。
用SDS-PAGE凝胶电泳定性检测大豆抗原中的B一伴大豆球蛋白(B--Conglycinin和大豆球蛋白(Glycinin,6种条带模糊,抗原消失,结果表明,生物发酵是一种有效的钝化抗营养因子的方法。
关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。
发酵过程中可产生蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等多种酶活,其目的就是消除抗营养因子,把大分子量的大豆蛋白质分解为多肽、寡肽、小肽,从而增加水溶性,提高消化率,利于动物消化吸收。
这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。
发酵豆柏可替代日粮中血浆蛋白粉、鱼粉、肠膜蛋白和乳清粉等动物性饲料原料,可替代日粮中控制腹泻的预防性抗生素,大大降低生产成本,减少畜禽养殖对动物性饲料原料的依赖,杜绝动物性饲料原料所带来的疾病传播,提高养殖业的安全与效益。
大豆的抗营养因子有蛋白酶抑制因子(protease inhibitors,大豆凝集素(SBA、大豆抗原、非淀粉多糖(NSP、植酸(phytic acid、单宁、大豆寡糖、脲酶、.大豆异黄酮、大豆皂甙、致甲状腺肿因子、生氰糖甙等。
这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。
本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。
1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。
豆粕原料检验指标
水分：≤10.0%
粗蛋白：≥50.0%
粗灰分：≤6.0%
0.02≤脲酶≤0.3
75%≤蛋白溶解度≤85%
粗蛋白
粗灰分
尿酶
蛋白溶解度
水分
不符合基本要求
水分：＞12.0%
粗蛋白：＜50.0%
粗灰分：＞7.0%
脲酶：≥0.4或≤0.02
豆粕原料检验指标
去
皮
豆
粕
一级
二级
大豆去皮后经浸提或预压浸提所得
无豆皮或含量极少，呈黄色或浅黄色不规则碎片，色泽一致无发酵、霉变、结块、虫蛀及异味异嗅
水分：≤13.0%
粗蛋白：≥48%
粗灰分：≤5.0%
0.02≤脲酶活性≤0.3
70%≤蛋白溶解度≤85%
皮重：≤1.0%
水分：≤13.0%
粗蛋白：≥46%
蛋白溶解度：≤70
粗蛋白：≥43.0%
粗灰分：≤7.0%
0.02≤脲酶≤0.3
75%≤蛋白溶解度≤85%
粗蛋白
粗灰分
尿酶
蛋白溶解度
水分
不符合基本要求
水分：＞14.0%
粗蛋白：＜42.0%
粗灰分：＞8.0%
脲酶：≥0.4或≤0.02
蛋白溶解度：≤70.0%或≥85.0%
发酵豆粕
利用有益微生物发酵后的豆粕
粗灰分：≤5.0%
0.02≤脲酶活性≤0.3
70%≤蛋白溶解度≤85%
皮重：≤1.0%
粗蛋白
粗灰分
脲酶活性
蛋白溶解度
皮重
水分
不符合基本要求
水分：＞14.0%
发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研(精)
发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研究彭辉才1粱明振1’张宏福2(1广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2北京畜牧兽医研究所营养学国家重点实验室, 北京海淀区100094摘要:豆粕中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原;本试验对8种发酵豆粕进行测定,前两者含量极低未检出。
用SDS-PAGE凝胶电泳定性检测大豆抗原中的B一伴大豆球蛋白(B--Conglycinin和大豆球蛋白(Glycinin,6种条带模糊,抗原消失,结果表明,生物发酵是一种有效的钝化抗营养因子的方法。
关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。
发酵过程中可产生蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等多种酶活,其目的就是消除抗营养因子,把大分子量的大豆蛋白质分解为多肽、寡肽、小肽,从而增加水溶性,提高消化率,利于动物消化吸收。
这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。
发酵豆柏可替代日粮中血浆蛋白粉、鱼粉、肠膜蛋白和乳清粉等动物性饲料原料,可替代日粮中控制腹泻的预防性抗生素,大大降低生产成本,减少畜禽养殖对动物性饲料原料的依赖,杜绝动物性饲料原料所带来的疾病传播,提高养殖业的安全与效益。
大豆的抗营养因子有蛋白酶抑制因子(protease inhibitors,大豆凝集素(SBA、大豆抗原、非淀粉多糖(NSP、植酸(phytic acid、单宁、大豆寡糖、脲酶、.大豆异黄酮、大豆皂甙、致甲状腺肿因子、生氰糖甙等。
这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。
本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。
1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。
饲料用大豆粕国家标准
饲料用大豆粕国家标准一、主题内容与适用范围本标准规定了饲料用大豆粕的质量指标及分级标准。
本标准适用于以大豆为原料以预压—浸提或浸提法取油后所得饲料用大豆粕。
二、引用标准GB 5490-5539 粮食、油料及植物油检验GB 6432-6439 饲料粗蛋白、粗脂肪、粗纤维等项测定方法GB 8622 大豆制品中尿素酶的活性测定三、感官性状本品呈浅黄褐色或淡黄色不规则的碎片状，色泽一致，无发酵、霉变、结块、虫蛀及异味异嗅。
四、水分水分含量不得超过13.0%五、夹杂物不得掺入饲料用大豆粕以外的物质，若加入抗氧化剂、防霉剂等添加剂时，应做相应的说明。
六、质量指标及分级标准1.以粗蛋白质、粗纤维、粗灰分为质量控制指标，按含量分为三级，见下表。
表1 配合饲料、浓缩饲料和预混合料产量(万吨)年份配合饲料浓缩饲料预混合料1990 3122 50.82 21.011999 5600 1000 1603.三项质量指标必须全部符合相应等级的规定。
4.二级饲料用大豆粕为中等质量标准，低于三级者为等外品。
七、脲酶活性允许指标1.脲酶活性定义为在30?5?和pH值等于7的条件下，每分钟每克大豆粕分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
2.饲料用大豆粕的脲酶活性不得超过0.4。
八、检验1.水分、粗蛋白质、粗纤维、粗灰分的检验，按照GB6432-6439的有关规定执行。
2.脲酶活性的检验按GB 8622执行。
九、卫生标准应符合中华人民共和国有关饲料卫生标准的规定。
十、包装、运输和储存饲料用大豆粕的包装、运输和储存，必须符合保质、保量、运输安全和分类，分级储存的要求，严防污染。
中华人民共和国农业部1998-10-11批准，1989-09-01实施。
豆粕尿素酶活性的测定
豆粕中尿素酶活性的测定（PH差值法）1.参考标准无1.适用范围适用于用PH增值法测定豆粕中脲酶活性的方法。
2.原理豆粕中的脲酶可以使用尿素分解产生氨，使体系中pH增加，用pH计测定pH 变化，以判断脲酶活性。
3.仪器和工具4.1粉碎机4.2可调节温度的恒温水浴锅4.3酸度计：精确至0.014.4碘瓶：50ml4.5天平：感量0.01g4.6天平：感量0.1g4.7秒表4.试剂5.1磷酸二氢钾（KH2PO4）5.2磷酸氢二钾（K2HPO4）5.3 50%磷酸二氢钾溶液5.4 50%磷酸氢二钾溶液5.5 尿素[CO(NH2)2 ]5.6 pH7.00磷酸缓冲液：用天平（4.6）称取磷酸二氢钾（5.1）17.1g溶于100ml蒸馏水，再称取烘干的磷酸氢二钾(5.2)21.7g于100ml蒸馏水，将这两种溶液的混合液共配制5000ml。
并用酸度计(4.3)调节pH值，pH小于7.00时，加入少量50%磷酸氢二钾溶液（5.4），当pH大于7.00时，加入少量50%磷酸二氢钾溶液(5.3)，最终使得缓冲液的pH为7.00(±0.01)。
5.7 pH7.00尿素缓冲液：用天平（4.6）称取尿素（5.5）150.0g，溶于5000ml磷酸缓冲液（5.6）中。
并用酸度计(4.3)调节pH值，pH小于7.00时，加入少量50%磷酸氢二钾溶液（5.4），当pH大于7.00时，加入少量磷酸二氢钾溶液(5.3)，最终使得缓冲液的pH为7.00(±0.01)。
5.操作步骤用粉碎机（4.1）粉碎样品，用天平（4.5）分别称取三份样品约0.80g（±0.02g）的样品于3个50ml的碘瓶（4.4）中，其中两个加40ml尿素缓冲液（5.7），另一个加入40ml磷酸缓冲液(5.6)（空白），塞上塞子，摇匀后放入30℃（±1℃）的恒温水浴锅中，用秒表(4.7)准确计时，每10分钟摇匀一次，反应30分钟后，在5分钟内用酸度计(4.3)测定pH值。
大豆制品尿素酶活性测定的影响因素
在 豆粕 中含有 一种 酶 叫 尿素 酶 ， 是 豆 粕 中含 它
有的几种天然酶类之一 ， 在许多高等植物 中都含有
尿 素酶 ， 特别是 胡 芦科 和 豆科 植 物 中含量 很 高 。判 断 豆粕加 热程 度的 主要 指标 是 尿素 酶 活性 ， 尿素 酶 本 身无 营养意义 ， 但它 与抗胰 蛋 白酶 的含量 接 近 ， 而
１ ６ 结 果表 述 ．
１样品 ， 分别称取 ０ １ 、． ０ｇ ． ０ｇ ０ ２ 、
０ ４ 、． ０ｇ０ ８ ． ０ｇ ０ ６ 、． ０ｇ五组 试 样 于 三 角 瓶 内 ， 每组
３ ０ 仿工业实验磨 ， ０ ８ｍｍ筛网；Ｆ Ｄ １０ 配 ． Ｊ Ｓ 一
＊ 收 稿 日期 ： ０ ２ ０ — ２ ２１－ ４ ８
匀 。置于（０ ． ℃） ３ ±０ ５ 空气摇床中， 计时 。隔 ５ｍ ｎ ｉ 放人第二个与此相同的三角瓶做平行试验 。
１４３ 称 取试样 ０ ２０ ， 入 另一 三 角瓶 中 ， ．． ． ００ｇ 放 加 １ ＯｍＬ磷 酸缓冲液 ， 好 橡 胶 塞 ， 匀 ， 为空 白试 塞 摇 作 验， 与前 一个 三角 瓶 间 隔 ５ｍｉ 于 同一 空 气摇 床 ｎ置 中 。隔 ５ｍｉ ｎ放入第 二 个与 此相 同 的三 角瓶 做空 白
平 行试 验 。
高。因此 ， 尿酶活性用来作为豆粕加热是否偏生的
间接估 测指 标 ， 有重要 意义 。 具 本 文分 别从样 品称样 量 、 粉碎 后样 品放 置时 间 、 粉碎 粒度 三方 面 ， 研究 其 在 豆 粕 尿 素 酶活 性 测 定 上
的影 响 。 １ 材 料 与 方 法
・
４ ・ ６
粮 油仓储 科技 通讯 ２ １ （） ０ ２４
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立即盖好比色管并剧烈摇动，在30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min，冷却到20℃，将比色管内容物全部转入烧杯，用 水冲洗比色管2～3次，用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
大豆中脲酶活性测定
为什么要测定脲酶？
脲酶毒性
一般脲酶并没有毒性作用，但在一定温度和pH值条件下，生 大豆的脲酶遇水迅速将含氮化合物分解成氨，引起氨中毒。 大豆中的抗营养因子：胰蛋白酶抑制剂最重要
评估胰蛋白酶抑制剂活性
大豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂抑制动物的生长和引起胰腺肥大。 而直接测定大豆饼粕中的胰蛋白酶抑制剂的活性比较困难、 耗时。脲酶和胰蛋白酶抑制剂在加热时有相近的速率变性， 并且脲酶对热的抵抗力比胰蛋白酶抑制剂强，又易于测定， 所以常用脲酶活性指标来判断大豆饼粕加热的程度和估计大 豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂是否已经被破坏。
M＝m/(V×0.2042) 式中：m：邻苯二甲酸氢钾质量，g；
V：消耗氢氧化钠体积，ml。
滴定法（续）
操作方法
称取0.2000g试样，转入比色管中，加入10ml尿素缓冲液， 立即盖好盖子并剧烈摇动。置于30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min后立即加入10ml0.1mol/l盐酸，迅速冷却到20℃， 将比色管内容物全部转入烧杯，用水冲洗比色管2～3次，立 即用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
我国《饲料用大豆》标准（GB1038489）规定：“饲料用大豆需加热后使用， 尿素酶活性不得超过0.4”。台湾省标准为
0.02～0.3△pH 。
脲酶的测定方法
比色法 滴定法 PH增值法 快速检测法
比色法
实验原理
向含有EDTA二钠盐的PH=7的缓冲液的分析悬 浮液中加入尿酸溶液，在30℃下保温5min， 加入磷钨酸终止酶作用并沉淀蛋白质。产生的 氨在次溴酸钠和麝香草酚作用下形成蓝色的靛 麝香草酚，借以比色。
生产实践中人们常将脲酶活性和蛋白质溶解度结合起来评价
大豆饼粕的品质，用脲酶活性反映大豆饼粕是否过生，用蛋 白质溶解度反映大豆饼粕是否受热过度。
适宜的脲酶活性值
大多数美国的测定表明：为破坏抗营养物质尿 酶值应在0.20或以下。美国饲料工业协会建议 的尿酶值为0.05-0.20。反刍家畜的日粮中往 往加有尿素，因而过高的尿酶值有可能导致氨 中毒。因此，在美国，反刍动物饲养者对豆粕 尿酶值的要求是≤0.20。在欧洲则认为0.5是 可接受的尿酶值（Deschrifver，1977）。
PH增值ห้องสมุดไป่ตู้（续）
操作方法
准确称取0.400g样品2份，分别置于两支比色管中，一只比 色管中加入20ml磷酸缓冲液，作为空白试验（A管），另一 只比色管中加入20ml尿素缓冲液（B管）。盖塞混匀，在 30℃恒温水浴中准确保持30min。在此期间，每隔5min摇 匀一次。取出后立即加入饱和氯化汞溶液2～3滴，在冷水中 冷却，5min内测定溶液的PH值。
通常10分钟以上不显粉红色的大豆饼粕其脲酶 活性丧失。
尿素酶活性与抗胰蛋白酶之间关系，Wright(1981)
脲酶活性测定的局限性
局限性
尿酶活性没有负值，它对任何过熟豆粕的最低值为零；对于 加热过度的豆粕尿酶测定值不是一个可靠的指标 。
解决办法：
利用蛋白质溶解度去评价。原理是：加热使游离氨基酸与其 它化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内 的结合键，因而降低了蛋白质的溶解度 。一般要求蛋白质溶 解度（0.2%KOH溶液）应在70%～85%之间。PS＞85% 时，表示加热不足，PS＜70%时则表示加热过度
滴定法（续）
仪器与器皿 pH计 恒温水浴 比色管 10ml移液管
滴定法（续）
试剂
尿素：分析纯 尿素缓冲液：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并
稀释至1000ml，再将30g尿素溶于此缓冲液中。 0.1mol/l盐酸 0.1mol/l氢氧化钠标准溶液
标定方法：取基准邻苯二甲酸氢钾0.6g，溶于50ml水中，加 热至沸，加入2～3滴酚酞指示剂，用配制的氢氧化钠标准溶液 滴定至呈粉红色30s不退色为终点。以下列公式计算浓度：
滴定法
结果计算
14×C（V0－V） 尿素酶活性＝
30×m C——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L； V0——空白试验消耗氢氧化钠的体积， ml； V——测定试验消耗的氢氧化钠的体 积，ml； m——试验质量，g。
快速测定方法
酚红法
称取0.2克的样品于试管中，加入0.2克的尿 素，再加入2滴酚红指示剂及20ml蒸馏水，摇动10 分钟，观察溶液的颜色。 1分钟内呈粉红色，脲酶活性很强； 1-5分钟呈粉红色，脲酶活性强； 5-15分钟呈粉红色，活性有点强； 15-30无色，没有活性。
PH增值法
原理
用样品溶液PH值与试剂空白的PH值差计算尿素酶的活性。
仪器与器皿
PH计、恒温水浴、比色管
试剂
磷酸缓冲液：取3.403g磷酸二氢钾溶于100ml水中，取 4.335g磷酸氢二钾溶于100ml水中，合并上述两种溶液 并配制成1000ml，用酸溶液或碱溶液调至PH＝7。
尿素缓冲液：取15g尿素，溶于500ml磷酸缓冲液中，调 解pH＝7。为了防止霉菌滋生，可以加入5ml甲苯作为防 腐剂。
计算
溶液PH值（A）与试剂空白pH（B）值差为尿素酶活性，计 算如下：
尿素酶活性＝B－A
PH增值法（续）
注意事项：
应提前一天浸泡电极，保持电极清洁。 有时样品中的可溶性物质附着在电极上，
可以降低测定准确度，操作时要快速果 断。
滴定法
原理
将粉碎的大豆与中性尿素缓冲液混合， 在30±0.5℃保持30min，尿素酶催化 尿素水解产生氨，用过量盐酸中和氨， 再用氢氧化钠标准溶液回滴。酶的活性 用1g分析材料在30±0.5℃下1分钟产生 的氨态氮的毫克数来表示。