巴比妥酸衍生物荧光增强法快速测定牛奶中的三聚氰胺
牛奶中的三聚氰胺含量的快速测定
牛奶中的三聚氰胺含量的快速测定三聚氰胺(melamine)即蜜胺,又称氰尿酰胺,是一种白色晶体，其分子中含氮量高达66. 7% 。
在生鲜乳及乳制品中添加三聚氰胺，可以提高含氮量，冒充成高蛋白食品，从而大幅度降低成本.。
2008年“奶粉中非法添加三聚氰胺”事件的出现对乳制品中三聚氰胺的检测方法提出了迫切需求。
2008年10月7日，国家质检总局、国家标准委员会批准了GB /T22388—2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》和GB /T22400—2008《原料乳中三聚氰胺快速检测2液相色谱法》。
该国标法是目前奶制品生产企业和各个实验室所用的主要方法。
上述检测方法，都需要对样品进行前处理，而且还需要多种化学药品和较为昂贵的仪器设备，虽然检测精度较高，但不便于现场的快速检测。
近红外技术(N IR)是20世纪70年代后发展起来的一种新的快速定性定量分析技术,近红外光谱包含丰富的物质信息，其谱图与物质本身的组成密切相关，通过对光谱特征的分析，可以获得有关物质结构与组成的信息。
其主要特点是无需复杂的前处理即可通过对光谱信息的分析提取出物质的特征信息，因此特别适合用于快速鉴别物质的品质，已广泛地应用于农业、化工和食品行业中。
本实验用近红外光谱法快速定量检测纯牛奶中三聚氰胺。
实验分别配制了两组不同三聚氰胺含量的纯牛奶样品，用于定量分析。
结果表明，近红外光谱分析是一种快速、方便和环保有效的测定乳制品中三聚氰胺含量的新方法。
样品制备所需主要材料和仪器:三聚氰胺分析纯500g，同一批次的超市购买某品牌纸袋纯牛奶4L，感量为0. 1mg的电子天平，水浴锅，容量瓶，移液管等。
样品用于定量分析：共配制三聚氰胺含量范围为0. 9754～19. 5672mg/kg的牛奶样品共20个(样品标号为01～20) ，制样时,用电子天平称取一定质量的三聚氰胺加入到牛奶样品中来得到不同含量的样品,摇匀, 在40℃水浴锅中加热10min。
牛乳中三聚氰胺的快速检测
2007年3月, 美国发生多起因 年 月 食用宠物食品而导致幼儿奶粉导致婴幼儿产生肾 结石病症的严重事件。两起 结石病症的严重事件。 事件的原因都是在食品或饲 料中非法添加大剂量三聚氰 料中非法添加大剂量三聚氰 因此, 胺。因此 如何快速准确的 分析食品和饲料中的三聚氰 胺成为食品企业、食品管理 胺成为食品企业、 机构和广大消费者密切关注 的问题。 的问题。
使用步骤】 【使用步骤】 1、在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待 、在进行测试前先完整阅读使用说明书， 检样本恢复至室温。 检样本恢复至室温。 2、从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内尽快地使用。 、从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内尽快地使用。 3、将检测卡平放，用移液器或滴管吸取稀释后的待检样品溶液， 、将检测卡平放，用移液器或滴管吸取稀释后的待检样品溶液， 垂直滴加3~4 滴（约80µl）于加样孔中，加样后开始计时。 垂直滴加 ）于加样孔中，加样后开始计时。 4、检测结果应在 分钟读取， 、检测结果应在3~5分钟读取，其他时间判读无效，根据示意 分钟读取 其他时间判读无效， 图判定结果。 图判定结果。
【注意事项】 注意事项】 1、检测卡请在保质期内一次性使用； 、检测卡请在保质期内一次性使用； 2、使用前将检测卡和待检样本恢复至温； 、使用前将检测卡和待检样本恢复至温； 3、如果样品偏酸或偏碱，需要调节 、如果样品偏酸或偏碱，需要调节pH 至 中性后再检测； 中性后再检测； 4、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面； 、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面； 5、样品滴管不可混用，以免交叉污染； 、样品滴管不可混用，以免交叉污染；
【产品组成】 产品组成】 三聚氰胺免疫胶体金快速检测卡 样品稀释离心管（ 管 样品稀释离心管（1管 / 份，内 含样品稀释液） 含样品稀释液） 滴管（2个 / 份） 滴管（ 个 干燥剂（ 片 干燥剂（1片 / 袋）
牛奶中三聚氰胺的检测方法
牛奶中三聚氰胺的检测方法牛奶是我们日常生活中常见的食品之一，而牛奶中是否含有三聚氰胺成为了人们关注的焦点。
三聚氰胺是一种有毒化学物质，长期摄入可能对人体健康造成危害，因此对牛奶中三聚氰胺的检测成为了必不可少的工作。
一、高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）。
HPLC-MS技术是目前较为常用的牛奶中三聚氰胺检测方法之一。
该技术结合了高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）两种分析手段，能够对样品中的三聚氰胺进行高效、快速、准确的检测。
首先通过色谱柱将样品中的混合物分离，然后再通过质谱进行定性和定量分析，能够有效地避免其他成分对三聚氰胺检测的干扰，提高了检测的准确性和可靠性。
二、酶联免疫吸附法（ELISA）。
ELISA法是一种常用的免疫学分析方法，也可以用于牛奶中三聚氰胺的检测。
该方法利用酶标记抗体与待检测物发生特异性反应，再通过底物显色从而对三聚氰胺进行定性或定量检测。
ELISA法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点，但也存在着对样品的预处理要求较为严格、易受其他成分干扰等缺点。
三、红外光谱法。
红外光谱法是一种基于样品对红外辐射的吸收、散射、透射等现象进行分析的方法，也可以用于牛奶中三聚氰胺的检测。
通过测定样品在红外光谱区的吸收峰，可以得到样品中三聚氰胺的含量信息。
该方法操作简便、分析速度快，但对仪器的精度要求较高，且受样品基质的影响较大。
四、原子吸收光谱法。
原子吸收光谱法是一种常用的重金属元素分析方法，也可以用于三聚氰胺的检测。
该方法通过样品中三聚氰胺原子吸收光谱的特征进行定性和定量分析，具有操作简便、分析速度快的优点。
但是该方法对样品的预处理要求较高，且仪器设备成本较高。
在进行牛奶中三聚氰胺检测时，应根据实际情况选择合适的检测方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
同时，加强对牛奶生产企业的监督检查，提高牛奶质量安全水平，对保障消费者的健康具有重要意义。
乳中三聚氰胺的测定
乳中三聚氰胺的测定概述三聚氰胺是一种有机化合物，常用于工业生产中的胶粘剂和树脂制造等。
然而，由于其毒性和致癌性，三聚氰胺被禁止在食品和饲料中使用。
因此，对于乳制品中三聚氰胺的测定显得尤为重要。
本文将介绍乳中三聚氰胺的测定方法及其应用。
一、乳中三聚氰胺的来源和危害乳制品是人们日常生活中常见的食品之一，而乳中三聚氰胺是一种常见的污染物。
三聚氰胺通常来自于牲畜饲料中的添加剂，当牲畜摄入三聚氰胺过多时，其代谢产物会通过牛奶等分泌物进入乳制品中。
三聚氰胺对人体健康有严重危害，可能导致泌尿系统疾病、肾结石甚至导致肾衰竭。
二、乳中三聚氰胺的测定方法1. 红外光谱法红外光谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法基于三聚氰胺在特定红外光波长下吸收的特性，通过测量样品中红外光的吸收强度来确定三聚氰胺的含量。
红外光谱法具有快速、准确的优点，但需要专业的仪器设备和操作技术。
2. 气相色谱法气相色谱法也是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法通过将样品中的三聚氰胺蒸发并分离，然后通过气相色谱仪进行定量分析。
气相色谱法具有灵敏度高、分离效果好的优点，但需要较长的操作时间和较高的设备要求。
3. 液相色谱法液相色谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法通过将样品中的三聚氰胺溶解并分离，然后通过液相色谱仪进行定量分析。
液相色谱法具有准确度高、操作简便的优点，但需要一定的样品前处理步骤。
三、乳中三聚氰胺的应用1. 食品安全检测乳中三聚氰胺的测定在食品安全检测中具有重要意义。
通过对乳制品中三聚氰胺的测定，可以保障消费者的健康和权益，防止不合格产品上市和流入市场。
2. 生产控制与质量保障乳制品生产过程中对三聚氰胺的测定也非常重要。
通过对原料和成品中三聚氰胺的监测，可以及时发现和控制潜在的污染源，确保产品质量和生产工艺的稳定性。
3. 法律监管与标准制定乳中三聚氰胺的测定在法律监管和标准制定中起着重要的作用。
通过对乳制品中三聚氰胺含量的限制和监测，可以制定相应的法律法规和标准，保障乳制品行业的健康发展。
乳品中三聚氰胺快速检测解决方案
28 食品安全导刊 2010年11月刊ANAlySIS & TEST 自2008年三聚氰胺事件爆发以来，乳品安全一直备受关注。
为了加大对乳品行业的监管力度，使中国乳品行业迅速恢复元气，相关职能部门出台了多项措施：在质量控制方面，要求对奶源做到严格把关，有效提高乳品质量安全系数。
因此，在奶站收奶环节，企业对原料奶的检测把关显得尤为重要，同时为保证牛奶不发生腐败变质的现象，必须在最短的时间内对其进行检测并立即入罐冷藏，这些都对乳品的检测技术提出了挑战。
常规的三聚氰胺残留量检测方法主要有液相色谱/质谱法（LC-MS）、高效液相色谱（H PLC）、液相色谱串联质谱（LC-M S-M S）等，这些方法因为存在仪器设备昂贵、检测过程繁琐、检测时间太长和对检验人员的技能要求高等局限，所以不适合现场监控和大量样品的筛查，在鲜奶收购环节使用不现实。
鉴于此，如何选择一种快速、低成本的检测方法，构建从奶□ 张德红 扶胜 杜祥乐 北京望尔生物技术有限公司站、企业到政府监管的安全检测网络已成为当前迫切需要解决的问题。
目前，快速筛查技术主要有两大类：生物分析技术和化学分析技术。
生物分析技术又包含免疫学方法，该方法具有检出限低、准确性好、灵敏度高、重现性好等特点，是现在和未来快速筛查技术发展的主流技术，非常适合对原料乳的快速检测。
依托此项技术，北京望尔生物技术有限公司（以下简称北京望尔）开发出三聚氰胺酶联免疫试剂盒和胶体金试纸卡等检测产品，为广大乳品企业及相关机构提供了有效的三聚氰胺快速检测方案。
三聚氰胺酶联免疫试剂盒检测方案检测原理三聚氰胺试剂盒采用间接竞争E L I SA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的三聚氰胺将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三聚氰胺抗体，在加入酶标二抗后，用T M B底物显色，样本吸光值与残留物三聚氰胺的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。
原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法实验报告 (2)
原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法实验报告应化0901 4103090137 金立峰一、实验目的1.了解用液相色谱法快速检测原料中三聚氰胺的方法。
2.了解和掌握高效液相色谱的使用方法。
3.学习使用液相色谱的软件分析数据。
二、实验原理用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱-紫外检测器，加标回收率。
三、实验器材1.实验试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
乙腈（CH3CN）：色谱纯磷酸（H3PO4）磷酸二氢钾（KH2PO4）三聚氰胺标准物质（C3H6N6）：纯度大于或等于99%标准溶液A：2.00×102mg/L2.实验器材一次性注射器滤膜：水相，0.45μm 针式过滤器：0.45μm具塞刻度试管：50mL 液相色谱仪分析天平：感量0.01gPH计：测量精度±0.02 溶剂过滤器四、实验步骤1.流动相的配制配制磷酸盐缓冲液：0.05mol/L.称取6.8g磷酸二氢钾（准确至0.01g），加水800ml完全溶解后，用磷酸调节PH至3.0，用水稀释至1L，用滤膜过滤后备用.②将磷酸缓冲液350mL与乙腈150mL（体积比）超声波震荡混匀.2.标准溶液的配制按下表移取不同体积的标准溶液A，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
3.试样的制备①分别称取光明纯牛奶、光明高钙奶、伊利舒化奶三种样品15g，置于50mL具塞刻度试管中并做标记为1,2,3，加入30mL乙腈，剧烈震荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。
②称取光明纯牛奶15g于三支50mL具塞刻度试管中并标为4,5,6;分别加入20mL、40mL、60mL的三聚氰胺标准溶液（1mg/L),加入30mL 乙腈，剧烈震荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。
牛奶中三聚氰胺的检测方法
牛奶中三聚氰胺的检测方法牛奶是我们日常生活中非常常见的食品，它富含蛋白质、脂肪、糖类、维生素和矿物质，是人们饮食中重要的营养来源。
然而，近年来牛奶中三聚氰胺的问题引起了广泛关注。
三聚氰胺是一种有毒化学物质，长期摄入会对人体健康造成严重危害，甚至引发肾脏疾病。
为了保障消费者的健康，牛奶中三聚氰胺的检测方法变得尤为重要。
目前，常见的牛奶中三聚氰胺检测方法主要包括物理法、化学法和生物法。
物理法是通过仪器设备对牛奶中的物理性质进行测定，例如密度测定、折射率测定等。
这种方法简单易行，但对于三聚氰胺的检测准确度有限，往往需要结合其他方法进行验证。
化学法是利用化学试剂对牛奶中的成分进行反应，通过观察反应产物的形态和颜色变化来判断是否含有三聚氰胺。
这种方法准确度较高，但需要专业的化学知识和实验技能，操作复杂且耗时。
生物法是利用生物学原理对牛奶中的三聚氰胺进行检测，常见的方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）和质谱法。
这种方法灵敏度高、准确度较高，但设备昂贵，操作技术要求高。
除了上述方法外，近年来还出现了一些新型的牛奶中三聚氰胺检测技术，例如纳米材料传感器技术、光谱技术等。
这些新技术在提高检测准确度的同时，也降低了检测成本和时间，具有较大的应用前景。
总的来说，牛奶中三聚氰胺的检测方法多种多样，各有优劣。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的检测方法，并结合多种方法进行验证，以确保检测结果的准确性和可靠性。
同时，加强对牛奶生产环节的监管和抽检工作，也是保障消费者健康的重要举措。
在日常生活中，消费者也可以通过选择正规渠道购买牛奶，注意产品的生产日期和保质期，以及留意相关的质量认证标识，来降低牛奶中三聚氰胺对健康的潜在风险。
同时，加强对牛奶的正确存储和使用，也是保障健康的重要环节。
综上所述，牛奶中三聚氰胺的检测方法是保障消费者健康的重要环节，各种方法各有优劣，需要根据具体情况选择合适的方法，并加强对牛奶生产和消费环节的监管，才能有效降低三聚氰胺对健康的潜在风险。
牛奶中三氯氰胺的测定方法
牛奶中三氯氰胺的测定方法
三氯氰胺是一种用以处理牛奶的化学物质，用于提高牛奶的产量和质量。
然而，在 2008 年，三聚氰胺事件爆发，大量含有三氯氰胺的牛奶被销售到中国各地。
此事件引起了公众对食品安全的极大关注。
现在，测定牛奶中三氯氰胺的方法已经被开发出来。
以下是一些常用的测定方法:
1. 液相色谱法 (LC-MS/MS):这种方法是一种最先进的测定方法，可以精确地检测出牛奶中的三氯氰胺含量。
LC-MS/MS 法需要将牛奶
样品进行处理，然后通过液相色谱仪进行分析。
2. 荧光指示剂法：这种方法使用一种荧光指示剂，当三氯氰胺
存在时，它会与指示剂发生反应，导致颜色的变化。
这种方法操作简单，能够快速检测出牛奶中的三氯氰胺。
3. 化学分析方法：这种方法包括将牛奶样品进行化学处理，然
后进行分析。
例如，可以使用酸解吸法或离子交换色谱法等方法来分析牛奶中的三氯氰胺。
无论使用哪种方法，测定牛奶中三氯氰胺都需要将样品进行处理，以确保结果的准确性和可靠性。
同时，测定方法只是检测出三氯氰胺的存在，并不能确定其含量。
因此，为了保证食品安全，应该采取全面的措施来监控和保障食品安全。
乳制品中三聚氰胺的含量的测定(高效液相色谱法)实验报告
2009级化学教育仪器化学综合性与设计性实验指导老师：曹** 2011年 5月 30号一、实验目的1．通过分析化学综合性实验、设计性实验，培养学生初步的解决分析化学实际问题的能力，培养学生的创新意识与创新能力。
2．学习查阅参考文献、综合参考资料、设计小型分析化学实验。
3．复习和巩固有关理论基础知识并用于指导实践。
4．进一步熟练掌握实验操作技术。
①实验题目：乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法）②摘要、关键词：[摘要]为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取, 离子交换萃取小柱净化, 结合高效液相色谱进行样品测定。
色谱条件: A液：0.9508 g 辛烷磺酸钠（5 mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。
色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm），检测波长：239 nm结果表明: 三聚氰胺标准曲线为y = 4495951x +18978.83, 相关系数R = 0.9999693, 在0.17～110.0 mg/L范围内线性关系良好, 方法检出限为0.12 mg/L, 两个样品三个水平的加标回收率分别为96.34 % (RSD = 4.76)、84.86 % (RSD = 7.21) 、104.29 % (RSD = 7.63) 和95.31 %(RSD = 4.39) 、89.25 % (RSD = 3.88) 、92.59 % (RSD = 5.27)。
[关键词]高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品③引言一、目前有关三聚氰胺在乳制品中的概述：三聚氰胺(melamine) ）（化学式：C3H6N6），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基”，是一种重要的氮杂环有机化工原料, 通常用于塑料制品中合成树脂的生产[ 1 ] 。
牛奶中三聚氰胺的检测方法
牛奶中三聚氰胺的检测方法
牛奶是人们日常生活中常见的饮品，而三聚氰胺是一种有毒化
学物质，如果存在于牛奶中，将对人体健康造成严重危害。
因此，
对牛奶中三聚氰胺的检测方法显得尤为重要。
下面将介绍几种常见
的牛奶中三聚氰胺的检测方法。
首先，常见的检测方法之一是高效液相色谱法。
这种方法通过
将牛奶样品进行前处理，然后使用高效液相色谱仪进行检测，可以
准确地测定牛奶中三聚氰胺的含量。
这种方法具有检测速度快、准
确性高的特点，因此在实际应用中得到了广泛的应用。
其次，还有基于免疫学原理的酶联免疫吸附测定法。
这种方法
利用特定的抗体与三聚氰胺结合，然后通过酶标记的二抗进行检测，可以实现对牛奶中三聚氰胺的快速、准确检测。
这种方法操作简便，且对样品的前处理要求不高，因此在实际应用中也得到了广泛的推广。
此外，质谱法也是一种常见的牛奶中三聚氰胺检测方法。
质谱
法具有极高的灵敏度和准确性，可以对牛奶中三聚氰胺进行精确测定，同时还可以对其他有害物质进行鉴定。
然而，质谱法需要专业
的仪器设备和操作技术，成本较高，因此在实际应用中受到一定的限制。
综上所述，针对牛奶中三聚氰胺的检测方法，目前主要有高效液相色谱法、酶联免疫吸附测定法和质谱法等几种常见的方法。
这些方法各有特点，可以根据实际需要选择合适的方法进行检测。
在日常生活中，我们应该关注牛奶质量安全问题，选择正规渠道购买牛奶，确保饮用的牛奶安全健康。
同时，相关部门也应加强对牛奶质量的监管，保障消费者的权益，共同维护食品安全。
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移取 １ Ｌ牛奶样品， ｍ 加入 ５ｍ ％（ Ｌｌ 体积分数） 三氯 乙酸（ Ｈ＝ ． ） 涡旋 １ ｉ， ｐ ３０ ， ｎ 超声 １ ｉ使蛋 白 ａ ｒ ０ｒｎ ａ 质沉淀， ８０ ｍｎ 以 ０ ０ｒ ｉ 转速离心 １ ｉ， ／ ０ｒｎ 转移合并上清液 ， ０２ ｍ微孔滤膜过滤得清液为待净化 ａ 用 ．２
Ｄ Ａ 乙醇溶 液 和 ０ ３ｍ ０ Ｂ ． Ｌ１ １ ｉ ０ｒ ｎ后测 定荧 光 强度 ． ａ １２４ 样 品制备 ．． 方法 一 ： 在数 只 １ ０ｍＬ离 心管 中分 别准 确移 取 １ｍ Ｌ牛奶 样 品 ， 加入 ５ｍ Ｌ盐酸酸 化 乙腈 （ Ｈ＝２０ ，超声 １ ｉ 蛋 白质沉 淀 ，以 ８０ ｍｉ 速 离 心 １ ｉ， 移合 并 上清 液 ， 向 ｐ ．） ０ｒｎ使 ａ ００ｒ ｎ转 ／ ０ｍｎ 转 并 上清 液 中多次 加入 ２ ０ｍＬ正 己烷 ， 荡 ， 振 静置 ， 弃去 上层 正 己烷相 ，以充 分 除去脂溶 性 物质 ， 下层 清 将 液减压 蒸 干 ， 用水 溶解 ， 后 用微孔 滤 膜过 滤得 清 液备 用 ．方法 二 ：在数 只 １ 然 ０ｍＬ离心 管 中分 别 准 确 ｍ Ｌ的三聚氰 胺标 准 工作溶 液 ， 加超 纯水定 容 至 ４ｍ ， 分振荡 ， 置 Ｌ 充 放
２ 和 Ｎ Ｏ 溶 液 （ Ｈ ＝１ ，１ ，１ ２ ｍ 加 入 ） ａＨ ｐ ２ ３ ４） Ｌ Ｍ． Ｂ Ｄ Ａ体 系 中 ， １２３节 方法 进行 实 验．结 果表 按 ．．
暑 营
茸
明， 在强酸体系中， — Ｂ Ｍ Ｄ Ａ体 系出现双峰 ， 且荧光 强度受溶剂影响较大 ； 在强碱体系中 ， 荧光发射峰 红移 ， 荧光 强度较 弱；在 Ｐ Ｓ缓 冲体 系中 ，当 且 Ｂ
２ 乙腈 、 Ｈ Ｏ、 正己烷 、 三氯乙酸、 Ｃ 和 Ｎ Ｏ Ｈ１ ａ Ｈ均为分析纯试剂 ； 实验用水为超纯水．
１ ２ 实验 方法 ．
１２ １ 实验原理 ．．
三 聚氰胺 （ 在 弱碱性 溶 液 中荧 光强 度很 弱 ， Ｄ Ａ的分子 结构 中含有 较大 的 Ｍ） 而 Ｂ
共轭 ７键体系 ， ｒ 具有较强的荧光， Ｍ可与 Ｄ Ａ以 １ １ Ｂ ： 比例结合形成稳定 的氢键¨ －］ 并通过氢键形 １ ， ９ 成分子长链 ， 其结构如图 １ 所示．由于三聚氰胺 的加入增强了分子刚性 ， 从而使体系的荧光强度显著
黄
晖等 ：巴比妥 酸衍 生物 荧光增强法快速测定牛奶 中的三聚氰胺
２ ０ ５５
增 强 ，同 时 Ｍ．Ｂ 中 氮 杂 环 上 给 ＤＡ
电子取代基上的非键孤对电子与芳 环之间存在激发态 电荷转移作用而 扩大了共轭体系 ， 导致荧光光谱蓝
移 ．由 于 Ｍ．Ｂ 的荧 光 强 度 与 三 ＤＡ 聚氰 胺 的浓度 在一 定范 围 内呈 良好 的线 性关 系 ， 而 可 建立 一 种 测 量 从 痕量 三 聚氰胺 的荧 光分 光光 度法 ． １２２ 试 剂 的 配制 三 聚氰 胺 标 Ｆｇ ｓ ｕ ｏ ｄｏ 。ｄ ｇ帅 。ｇ ａｄＤ Ａｍ “ ． ． ‘ ｔ ｆ ｙｒｇ“ｂ“ ・ “ ｈ “ “ ｎ Ｂ 。 Ｍ
Ｖｏ ． ２ １３
２１ ０ １年 １ １月
高 等 学 校 化 学 学 报
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巴 比妥 酸衍 生物 荧光 增 强 法快 速 测 定 牛 奶 中的 三聚 氰胺
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［ 图 ３ Ａ ］ 故实验选择 ｐ ７０的 Ｐ Ｓ 见 （ ）， Ｈ＝ ． Ｂ 缓冲体 。
Ｆｕ ｒｓｅ ｃ ｘｉ ｔ ｎ（ 一ｃ） ａ ｄ ｅ ｓｉｎ ｌｏｅｃｎ ｅ ｅｃｔ ｉ 口 ａｏ ｎ ｍｉ ｏ ｓ （ ＿）ｓｅｔ ｆ Ｄ Ａ（ ， ） Ｄ Ａ（ ， ） ， ｐ ｃｒ ｏ Ｍ・ Ｂ ａ ｄ ， Ｂ ｂ ｅ ａ ａ ｄＭ （ ， ）ｓｌｔ ｎ ｎ Ｃ ｆ ｏｕｉ ｓ ｏ
司） ￥５ ； ２ 型涡旋仪（ 德国 ＩＡ公司） Ｒ 一 ９ Ｋ ； Ｅ５ ９型旋转蒸发器 （ ２ 巩义市英峪高科仪器厂 ） Ｔ ２６ ； Ｓ． ０型双
重注射 泵 （ 定兰 格恒 流泵有 限公 司 ） 保 ． ５（－ 甲基 蒽基 ） 比妥 酸（ Ｂ 和 三聚氰 胺为 Ｓｇ ａ公 司产 品 ；Ｎ ： Ｐ ・ ２ 一９亚 巴 Ｄ Ａ） ｉｍ ａＨ Ｏ １Ｈ ０、Ｎ Ｈ Ｐ ・ ａ ，Ｏ
准工作液 的配制 ： 精确称取三聚氰胺标准品适量配成质量浓度为 １００ｇＬ的储备液 ； ．０ ／ 准确移取适量 标准储备液配制成浓度为 １ ｇｍ ０Ｉ ／ Ｌ的三聚氰胺标准工作溶液．Ｄ Ａ溶液的配制 ： ｘ Ｂ 称取适量 Ｄ Ａ用乙 Ｂ 醇溶解 ， 配成质量浓度为 １ ｇｍ ０Ｉ ／ Ｌ的 Ｄ Ａ乙醇溶液 ， ｘ Ｂ 避光保存．磷酸盐缓冲溶液 （ Ｂ ） ｐ ７ ０ Ｐ Ｓ ， Ｈ＝ ． ． １２３ 实验 方法 在 ５ｍＬ塑料 离 心 管 中依 次 加 入 ２ｍ Ｂ ． ． ＬＰ Ｓ溶 液 （ Ｈ＝７０ 、 ． Ｌ１ ｇｍＬ的 ｐ ． ） ０８ｍ ０Ｉ ／ ｘ
Ｆ ｇ ４ Ｅｆｅ ｔｏ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔｏ ｆＤＢＡ ｎ ｔ ｅ ｆ ｏ ｉ ． ｆ ｃ ｆｃ ｎ ｅ ｔ ａ ｉ ｎ ｏ ｓ ｏ ｈ ｌ － ｕ
液．将待净化液转移至 自 固相萃取整体柱中， 制 参照文献［０ 的方法处理 ， ２］ 即用 Ｔ ２ ０ Ｓ ￣ 双重注射泵 以
１０ ／ ｉ 的流速过整体柱 ， ０ Ｉ ｍ ｎ 依次用水和甲醇洗涤 ， 再用 ５ 体积分数） ％（ 氨化甲醇洗脱 ， 洗脱液于 ５ ０ ℃下用氩气吹干， 残留物用水定容 ， 涡旋混合 １ ｉ， ｎ 通过 ０２ ｍ微孔滤膜后用于测定． ｍ ．２ １２５ 荧光测定条件 激发波长 Ａ ２５ａ 发射波长 Ａ ＝ ３ ｍ， ．． 。＝ ７ ｍ， ３ ８ｎ 激发和发射狭缝宽度分别为
１ ０和 ５ ｎ ｍ．
２ 结 果 与讨 论
２ １ Ｍ－ Ａ体 系的荧 光光谱 及其 影 响 因素 ． ＤＢ
图 ２ Ｍ．Ｂ 为 Ｄ Ａ体系的荧光激发光谱和发射光谱．可见 ， ｐ ７０的 Ｐ Ｓ溶液中 ， －Ｂ 在 Ｈ＝ ． Ｂ Ｍ Ｄ Ａ体系 最 大激 发波 长为 ２５ｎ ７ ｍ．以此 波长 激发 ， ３ ８ｎ 在 ３ ｍ处产 生最 强 的荧光 峰． 考察了 ｐ Ｈ值对 Ｍ．Ｂ Ｄ Ａ体系荧光强度的影响， 分别将 ｐ Ｈ值 为 ４ ５ ５０ ５５ ６０ ６５ ． ， ． ， ． ， ． ， ． ， ． ，７０ ７５ ８０ ８５的 Ｐ Ｓ ．，． 和 ． Ｂ 溶液 、 Ｃ 溶液（ Ｈ＝ ， ， Ｈ１ ｐ ０ １
收 稿 日期 ：２ １－１１． ０ １ —７ ０
基金项 目： 国家 自然科 学基金 （ 批准号 ： １７ ０ ３ 资助． ２ ０５ ９ ） 联系人 简介 ： 何治柯 ， ， 男 博士 ， 教授 ， 士生导师 ， 博 主要从 事分子光谱分析及纳米传感器研究．Ｅｍ ｉ ｚｋｅ ｈ ．ｄ ．ｏ ． ａ ： ｈｈ ＠ｗ ｕ ｅ ｕ ｃ ｌ ｎ
液 （ Ｈ＝ ． ） ｐ ７ ０ 的用量 为 ２ｍＬ Ｉ
考察 了 Ｄ Ａ浓度对体系荧光强度的影响．由图 ４ Ｂ 可见 ， Ｄ Ａ的浓度大于 １ 当 Ｂ
ｍ Ｌ时， 荧光强
度 趋于 稳定 ； Ｂ Ｄ Ａ用量 在 ２ ｇｍ ／ Ｌ时荧 光强 度最 大 ，故实验 选择 Ｄ Ａ用量 为 ２／／ Ｌ Ｂ ￣ ｍ ． ｇ
衍生物 （ Ｂ 形成稳定的氢键 ， Ｄ Ａ） 使三聚氰胺 的荧光强度显 著增强 ，由此建 立 了巴 比妥酸衍 生物荧光增 强测
定 牛奶 中三 聚氰胺 的新方法．在优化 的条 件下 ， 该方法 的线性范 围为 １． ２５～１５ Ｌ， 出限为 ７ ５ ２０ 检 ．
中三聚氰胺 的快速检测． 关键词 三 聚氰胺 ；巴比妥酸衍生物 ； 荧光增强 ０ ５ ６７ 文献标 识码 Ａ 文章编号 ０５ － ９ （０ １ １－５ ４ ５ ２ １０ ０ ２ １ ） １２０ － ７ ０ 中图分类号
ｐ ６０—８０时 ， ３ ８ｎ Ｈ＝ ． ． 在 ３ ｍ处 荧 光 强度 强 且稳 定 系．取不 同体 积 的 ｐ ＝ ． Ｈ ７ ０的 Ｐ Ｓ溶 液进 行 实验 ， Ｂ 结 果如 图 ３ Ｂ 所示 ，当 缓 冲溶 液 用 量 大于 １２ｍ （） ． Ｌ 时 ， 光强 度 最大 且趋 于 稳定 ，故实 验选 择 Ｐ Ｓ溶 荧 Ｂ …
黄 晖‘ 向 东山 ， ， 李 丽 李海刚 ，曾国平 ， 治柯 ， 何
（ ．武汉大学化 学与分子科学学 院 ， １ 生物医学分析化学教育部重点实验室 ， 武汉 ４ ０７ ； ３０ ２
２ ．三明学院化学与生物工程系 ， 明 ３５ ０ ） 三 ６０ ０
摘要
建立 了一种简单快速测定三聚氰胺的方法．在 ｐ ７ ０的磷 酸盐缓 冲溶液 中 ， 聚氰 胺与 巴比妥酸 Ｈ＝ ． 三
键¨ ， 导致 三 聚氰胺 的荧光 强度 显著 增强 ， 在一定 浓度 范 围 内，荧光 的增加值 与三 聚氰胺 的浓度 且 呈 良好 的线性 关系 ， 于此本 文建 立 了一种 能快速 、准确地 测定 牛奶 中三 聚氰胺 的方法 ． 基
１ 实验 部 分
１ １ 仪 器与试 剂 ．
Ｒ 一３ １ｃ型荧光 分光光 度计 （ Ｆ５０ ｐ 日本 Ｓｉ ｄｕ公 司 ） Ｐ 一０型酸 度计 （ 国 Ｓｒｒ ｓ 司 ） Ｔ Ｌ ｈｍａｚ ； Ｂ１ 德 ａｔ ｉ 公 ｏｕ ；Ｇ一 １Ｇ型 高速 离心 机 （ ６ 北京 泽祥 恒达 科 技发 展 公 司 ） Ｑ ２０型 超 声 波 清洗 器 （ 山市 超声 仪 器 有 限公 ；Ｋ ２０ 昆
Ｍ－ Ｂ ０ ７ ｇｍＬＭ ＋ ｇｍＬＤ Ａ； Ｄ Ａ： ． ５ ／ ２ ／ Ｂ Ｄ Ａ： 吕 ｍ Ｂ ２ ／ Ｌ；Ｍ： ．５ ｇ ｍ ． ０７ ／ Ｌ
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高 等 学 校 化 学 学 报
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Ｆｇ ３ Ｅ ｅｔ ｏ Ｈ（ ｉ． ｆ ｃ ｆｐ Ａ）ａ ｄａ ｕ ｔ Ｂ）ｏ ｅｂ ｆ ｒｓｌｔ ｎｏ ｅｆ ｏｅｅ ｃ ｔｎｉ ｓ ｎ ｍｏ ｎ （ ｆ ｈ ｕ ｅ ｏ ｉ ｎ ｔ ｕ ｒｃｎ ｅｉ ｅｓ ｙ ｔ ｕｏ ｈ ｌ ｎ ｔ