硫代葡萄糖苷的检测
芥子油苷检测
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芥子油苷检测
芥子油苷（Glucosinolate）又称硫代葡萄糖苷、硫苷，是十字花科蔬菜中的一种重要的次生代谢产物，根据侧链基团的不同，可以把硫苷分为脂肪族、芳香族和吲哚族三大类。
硫苷在芥子酶的作用下容易水解产生异硫氰酸醋、硫氰酸醋等不同化合物，这些降解产物具有较强抗菌作用及可通过诱导泛醌还原酶的活性成为致癌物质的阻断剂。
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HPLC和LC-MS测定芥子油苷样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关质谱参数（中英文）。
3. 质谱图片。
4. 原始数据。
5. 芥子油苷含量信息。
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硫代葡萄糖甙总量速测方法氯化钯法
断提高认识的基础上迅速开展起来了。全国各油 菜育种单位相继开展了低硫甙油菜新品种的选 育工作，以开发应用这一植物蛋白资源。因此，国 家制定了油菜籽中硫甙含量的标准，在此标准中 规定油菜籽（饼）中硫甙含量≤４５．００斗ｔｏｏｌ／ｇ。所 以掌握准确可靠的油菜籽（饼）中硫甙含量的分析 测试技术，在油菜育种、良种繁殖、区域试验、收 购及饼粕利用等工作中都成为非常重要的一个 组成部分。 １． 目前常用的方法
２０枷ｍｉｎ，中间搅动两次，取出静置冷却后，用水
稀释至１０ｍｌ摇匀。 ３．２经过滤后取０．５ＩＩｌｌ放人另一带塞的５ｍｌ或 １０ｍｌ试管中，并加入０．１％羧甲基纤维素钠溶液 ２ｍｌ，（硫甙钯络合物是胶状沉淀物，影响光度的测 定。加入分散剂羧甲基纤维素钠溶液，使比色液
社，２００６． ［２］李培武，扬湄，张文。陈洪，等．油菜硫甙检测技术研究 及进展［Ｊ）．油菜品质检测技术手册，２００３．８． ［３］吴谋成，黄荣汉．油菜籽中硫代葡萄糖甙总量的快速 测定［Ｊ］．华中农业学报，１９８３，（３）：ｉ－９． ［４３丁小霞，李培武．李光明。杨艳燕。等．傅里叶变换近红 外光谱技术测定完整油菜籽中芥酸和硫甙含量［Ｊ］．中国 油料作物学报，２００４，（９）：６－１１．
万方数据
前处理过程繁琐；使用试剂、药品成本高；分析时 间长，不适合于一般基层育种单位和收购单位大
（硫甙提取物与氯化钯反应生成有色产物依硫甙 的多少分别呈不同的颜色，颜色越深，表明硫甙
硫代葡萄糖苷的检测
硫代葡萄糖苷的检测1 硫代葡萄糖苷的简介硫代葡萄糖苷 ( 以下简称硫苷）是主要分布于十字花科和刺山柑植物中的含硫次生代谢产物。
由β- D- 硫葡萄糖基、硫化肟基团和来源于氨基酸的可变侧链 R 组成。
其生物合成途径分为三部分：前体氨基酸侧链延伸、核心结构形成及次级侧链的修饰。
硫苷以稳定化合物的形式分布于植物营养器官和生殖器官中，当植物组织受到破坏时，分布于细胞质的黑芥子酶将液泡中的硫苷分解成腈、异硫氰酸酯、硫氰酸酯、恶唑烷酮等多种降解产物，反应产物因硫苷种类、金属离子、pH 值等而不同，其过程十分复杂。
2 硫苷生理功能2.1增强植物抗逆性硫苷及其降解产物具有抵御草食动物、抗病虫及抗病原微生物能力，在植物的防卫反应中发挥重要的作用。
硫苷降解产物烯丙基异硫氰酸酯、2- 苯乙基异硫氰酸酯、n- 丁基异硫氰酸酯及 1-氰基 - 2- 苯乙烷对芸苔属专食性昆虫卵具有致死作用。
其中 2- 苯乙基异硫氰酸酯致死剂量最低，烯丙基异硫氰酸酯、n- 丁基异硫氰酸酯次之，1- 氰基- 2- 苯乙烷最高。
较适应寄主植物中异硫氰酸酯含量比适应寄主植物高，因而可推测硫苷组成及浓度对专食性昆虫有影响。
异硫氰酸酯对土传病虫害防治效果因其含量、病虫对其敏感性，在土壤中的释放速率及残留时间等而不同。
当植株中 2- 苯乙基硫苷含量增加时，蚜虫数量减少，植株抗虫性增强。
2.2诱虫作用硫苷是黄曲条跳甲进行寄主选择的主要因素，同一蔬菜品种中硫苷含量与其选择性呈显著相关。
除此之外，硫苷还能刺激小菜蛾产卵，其产卵量与硫苷含量变化趋势基本相符。
因而，硫苷具有诱虫作用。
2.3致甲状腺肿大硫苷是菜籽饼中最主要的抗营养因子，其降解产物异硫酸氰盐及恶唑烷酮能够引起畜禽甲状腺肿大，并且甲状腺受损存在种间差异。
2.4抗癌吲哚族硫苷降解产物对 S180 小鼠具有抗肿瘤作用。
葡萄糖莱菔子苷（硫苷中一种）降解产物萝卜硫素是蔬菜抗癌效果最好的植物活性物质，诱导人或动物体内 Phase酶II (如谷光苷肽 - S- 转移酶、苯醌还原酶和UDP- 葡萄糖醛酸转移酶)数量的增加，抑制 Pha-seI 酶的产生，从而阻断致癌物产生的代谢途径，抑制癌细胞分裂和生长。
紫白菜花青素和硫代葡萄糖苷含量测定及其近红外光谱快速测定模型研究
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青花菜硫代葡萄糖苷含量测定及其近红外光谱快速测定模型研究
青花菜硫代葡萄糖苷含量测定及其近红外光谱快速测定模型探究摘要：硫代葡萄糖苷是青花菜中一种重要的营养成分，对于青花菜质量的评估具有重要意义。
本探究通过对青花菜中硫代葡萄糖苷含量的化学测定和近红外光谱快速测定两种方法的比较，建立了一种基于近红外光谱的青花菜硫代葡萄糖苷含量快速测定模型。
起首，通过基于氯化铵溶液提取和硫酸亚铁还原的方法，接受高效液相色谱法确定了青花菜中硫代葡萄糖苷的含量。
结果表明，最佳提取条件为：氯化铵溶液的浓度为80%，提取温度为60℃，提取时间为30min，青花菜的破坏程度为40目。
接下来，收集了160个青花菜样本的近红外光谱数据，并进行了预处理和特征提取。
最后，接受支持向量机、随机森林和偏最小二乘回归三种模型对数据进行建模和优化，得到了基于偏最小二乘回归模型的最佳猜测结果。
该模型的猜测精度达到了96.87%，同时具有较高的速度和好用性，可以作为青花菜硫代葡萄糖苷含量快速测定的可行方法。
关键词：青花菜；硫代葡萄糖苷；近红外光谱；高效液相色谱；偏最小二乘回归；猜测模型。
青花菜硫代葡萄糖苷是一种富含硫元素的营养成分，具有很高的营养价值和生理活性，对人体健康有浩繁好处。
因此，青花菜中硫代葡萄糖苷含量的测定对于青花菜质量的评估和营养价值的确定具有重要意义。
传统的测定青花菜中硫代葡萄糖苷含量的方法是接受高效液相色谱法，该方法检测灵敏度高、精度较好、可靠性较高，但需要耗费大量的时间和精力，操作复杂，成本较高。
近年来，随着近红外光谱技术的不息进步，其快速、无损、精准的特点，为青花菜中硫代葡萄糖苷含量的测定提供了一种新的方法。
本探究接受基于氯化铵溶液提取和硫酸亚铁还原的方法，确定了青花菜中硫代葡萄糖苷的含量，并比较了化学测定和近红外光谱测定两种方法的差异。
结果表明，两种方法的测定结果具有很高的一致性，且近红外光谱测定具有更高的速度和效率。
为了建立一种基于近红外光谱的青花菜硫代葡萄糖苷含量快速测定模型，本探究收集了160个青花菜样本的近红外光谱数据，并对数据进行了预处理和特征提取。
五 硫甙检测技术
油菜籽中硫代葡萄糖苷检测技术硫代葡萄糖苷（简称硫甙或硫苷）是存在于十字花科植物中的一类含硫次生代谢产物，本身无毒，但在与其伴生存在的芥子酶的作用下，降解成有毒的异硫氰酸酯、硫氰酸盐、腈类化合物等，引起动物甲状腺肿大等，饼粕难于饲用或降低其饲用价值。
因此，硫苷是油菜品质检测的重要指标。
硫苷的测定方法有多种，根据被分析的对象，硫苷分析方法可分为两类：第一类是测定硫苷降解产物，间接计算硫苷的含量；第二类是直接测定完整硫苷或其衍生物；根据分析目的不同，硫苷的分析方法又可分为总量法和分量法：总量法是测定样品中所有硫苷总含量，而不考虑其侧链（R-）的差异；分量法是测定样品中硫苷的每一种硫苷组份的含量，以研究样品中硫苷组成类型的差异及不同硫苷组份的生物效应。
按化学方法分类则有重量法、银盐滴定法、碘量法、比色法、色谱法和近红外光谱法。
高效液相色谱法、专用速测仪法（分光光度法）和近红外光谱法是目前国内外油菜籽中硫苷含量测定最常用的方法，下面对这三种方法作重点介绍。
一、高效液相色谱法1.方法原理用70%甲醇水溶液提取硫苷，在阴离子交换树脂上纯化并酶解脱去硫酸根，反相C18柱分离，紫外检测器检测硫代葡萄糖苷。
2.仪器设备（1）分析天平（2）研钵或粉碎机（3）漩涡混合器（4）水浴锅（5）离心机（6）高效液相色谱仪3.结果表示检测结果显示为色谱峰，根据标准样品对检测结果进行定性和定量换算。
硫苷测定结果表示方法有三种，一是干基饼粕中硫苷含量；二是含8.5%水杂饼粕中硫苷含量；三是含8.5%水杂油菜籽中硫苷含量。
该方法的优点是测定准确、可测定硫苷分量和总量，适于国家及部级质检中心用于出据第三方公正数据的检测及品种审定和区域试验材料硫苷含量的精确测定。
缺点是仪器设备昂贵、测试费用高、条件严格，硫酸酯酶等大部分试剂及消耗品均需进口，且分离测定时间长，不适用于菜籽收购过程中的现场快速测定。
二、专用速测仪法（分光光度法）1.方法原理油菜籽中硫苷与特异性酶和专用显色剂反应生成有特征吸收峰的有色产物，采用分光光度法测定硫苷含量。
硫代葡萄糖苷的检测
硫代葡萄糖苷的测定一、硫代葡萄糖苷的结构硫代萄糖苷是一种含硫的阴离子亲水性植物次生代谢产物。
1970年,Marsh和Waser 等对硫代葡萄糖苷晶体的X射线分析证明: 所有的硫代葡萄糖苷都有一个核心结构是β-D-葡萄糖连接一个磺酸盐醛肟基团和一个来源于氨基酸的侧链。
根据侧链R的氨基酸来源不同，可以将硫代葡萄糖苷分为脂肪族硫代葡萄糖苷（侧链来源于蛋氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸），芳香族硫代葡萄糖苷（侧链来源于酪氨酸和苯丙氨酸）及吲哚族硫代葡萄糖苷（侧链来源于色氨酸）。
不同的侧链决定了水解产物的不同,抗癌活性也存在差别。
硫代葡萄糖苷的分类主要依据侧链R的不同。
二、硫代葡萄糖苷的性质硫苷本身是一类稳定的化合物，但在芥子酶或胃肠道中的细菌酶的催化作用下会发生降解并生成多种降解产物。
硫苷与芥子酶隔离共存于植物体内。
当植物的器官受损或对植物加工时他们相接触导致硫苷降解。
硫苷和它的降解产物都具有活跃的生物化学特性。
（1）在食品中赋予产品特殊的风味，从而影响食物的适口性。
如芥末辣根的辛辣味，雪菜味等。
（2）硫苷的降解产物如OZT及硫氰酸盐等，这些降解产物能抑制甲状腺素的合成和吸收，从而引起甲状腺肿大。
三、硫代葡萄糖苷在植物中的分布在天然植物中已发现120多种不同的硫代葡萄糖苷，它们存在于11个不同种属的双子叶被子植物中，最重要的是十字花科，所有的十字花科植物都能够合成硫代葡萄糖苷。
硫代葡萄糖苷存在于这些植物的根、茎、叶和种子中，但主要存在于种子中。
另外，许多非十字花科的双子叶被子植物中也同样含有一种或两种硫代葡萄糖苷。
硫代葡萄苷在一些十字花科植物中的含量大约占干重的1%，在一些植物种子中的含量达到10%。
硫代葡萄糖苷在芸苔属蔬菜中的含量一般是500～2 000 μg/g,西兰花、花椰菜、甘兰分别含有5～6种以上的硫代葡萄糖苷，其中包括吲哚族硫代葡萄糖苷和芳香族的硫代葡萄糖苷。
四、硫代葡萄糖苷的测定（一）、分光光度法一、原理：GS在蔬菜中内源酶----芥子酶的作用下水解产生葡萄糖，用3,5—二硝基水杨酸法测定所产生的葡萄糖量，计算出GS的含量。
高效液相色谱仪-串联质谱法鉴别十字花科植物中硫代葡萄糖苷
摘要：建立超高效液相色谱仪——串联质谱法鉴别十字花科植物中硫代葡萄糖苷的分析方法。
采用70％甲醇水溶液提取白芥种子中的硫代葡萄糖苷，通过反相C12柱分离，电喷雾一离子阱一飞行时间质谱测定。
利用硫代葡萄糖苷二级质谱裂解产生的m／z l95，241，259，275，291特征离子和伴随产生的80，162，163，196，242 Da中性分子丢失规律，共鉴别出5种硫代葡萄糖苷。
硫代葡萄糖苷(简称硫苷)是广泛存在于十字花科植物中的含硫次级代谢产物，主要分布于植物的根、茎和叶中。
当植物细胞受到破坏(如挤压、虫咬等)后，硫苷与植物内生的黑芥子酶接触，降解产生异硫氰酸酯、恶唑烷酮和硫氰酸酯等化合物¨J，其中异硫氰酸酯具有良好的生物活性，而且对人畜无害。
因此硫苷及其降解产物的研究引起了科学工作者的浓厚兴趣。
根据侧链R基团的不同，目前已发现约l20种硫苷，其中有多种具有抗癌、抗肿瘤、杀菌和杀虫活性的异硫氰酸酯，如吴华等比较几种异硫氰酸酯的杀线虫活性，发现烯丙基和丙烯酰基异硫氰酸酯具有良好的杀线虫活性。
大量研究表明甲硫基己基异硫氰酸酯等具有良好的抗肿瘤活性，是非常具有潜力的抗癌药物。
硫苷的检测方法主要是传统的化学方法和现代的仪器分析手段。
化学方法耗时、误差大、操作繁琐，只能测定硫苷总量。
液相色谱法具有很高的分离效率，但对于硫苷单体鉴别需要对照品，无法满足快速鉴别硫苷的需要。
笔者采用超高效液相色谱一离子阱-飞行时间质谱联用技术，既能高效分离硫苷，又能准确、快速鉴别硫苷。
对于硫苷及降解产物的研究具有重要意义，同时又能够提高工作效率。
1实验部分1.1主要仪器与试剂超高效液相色谱仪-离子阱-飞行时间质谱仪： LCMS—IT-TOF型，日本岛津公司；数显恒温水浴锅：HH-6型，真空干燥箱：VD23型，德国81NDER公司；电子天平：AUY220型，日本岛津公司；超声波清洗器：KS-120E1型旋转蒸发仪：R-216型，瑞士BUCHl公司；台式高速离心机：H-1650型，研磨机：All基本型，德国IKA公司；白芥种子：产地为湖北武汉；正己烷、氯仿、乙酸铵、甲酸：分析纯甲醇：色谱纯，美国Fisher公司；实验用水为美国Pall公司Purelab Ultra超纯水系统制备的超纯水，电阻率为18.2 MQ•cm。
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硫代葡萄糖苷的测定
一、硫代葡萄糖苷的结构
硫代萄糖苷是一种含硫的阴离子亲水性植物次生代谢产物。
1970年,Marsh和Waser等对硫代葡萄糖苷晶体的X射线分析证明: 所有的硫代葡萄糖苷都有一个核心结构是β-D-葡萄糖连接一个磺酸盐醛肟基团和一个来源于氨基酸的侧链。
根据侧链R的氨基酸来源不同，可以将硫代葡萄糖苷分为脂肪族硫代葡萄糖苷（侧链来源于蛋氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸），芳香族硫代葡萄糖苷（侧链来源于酪氨酸和苯丙氨酸）及吲哚族硫代葡萄糖苷（侧链来源于色氨酸）。
不同的侧链决定了水解产物的不同,抗癌活性也存在差别。
硫代葡萄糖苷的分类主要依据侧链R的不同。
二、硫代葡萄糖苷的性质
硫苷本身是一类稳定的化合物，但在芥子酶或胃肠道中的细菌酶的催化作用下会发生降解并生成多种降解产物。
硫苷与芥子酶隔离共存于植物体内。
当植物的器官受损或对植物加工时他们相接触导致硫苷降解。
硫苷和它的降解产物都具有活跃的生物化学特性。
（1）在食品中赋予产品特殊的风味，从而影响食物的适口性。
如芥末辣根的辛辣味，雪菜味等。
（2）硫苷的降解产物如OZT及硫氰酸盐等，这些降解产物能抑制甲状腺素的合成和吸收，从而引起甲状腺肿大。
三、硫代葡萄糖苷在植物中的分布
在天然植物中已发现120多种不同的硫代葡萄糖苷，它们存在于
11个不同种属的双子叶被子植物中，最重要的是十字花科，所有的十字花科植物都能够合成硫代葡萄糖苷。
硫代葡萄糖苷存在于这些植物的根、茎、叶和种子中，但主要存在于种子中。
另外，许多非十字花科的双子叶被子植物中也同样含有一种或两种硫代葡萄糖苷。
硫代葡萄苷在一些十字花科植物中的含量大约占干重的1%，在一些植物种子中的含量达到10%。
硫代葡萄糖苷在芸苔属蔬菜中的含量一般是500～2 000 μg/g,西兰花、花椰菜、甘兰分别含有5～6种以上的硫代葡萄糖苷，其中包括吲哚族硫代葡萄糖苷和芳香族的硫代葡萄糖苷。
四、硫代葡萄糖苷的测定
（一）、分光光度法
一、原理：
GS在蔬菜中内源酶----芥子酶的作用下水解产生葡萄糖，用3,5—二硝基水杨酸法测定所产生的葡萄糖量，计算出GS的含量。
二、仪器及试剂：
1、实验材料
(1)3,5-二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、氢氧化钠、苯酚、无水葡萄糖、氟化钠、醋酸铅、硫酸钠。
(2)市售大头菜、油菜、白萝卜
2、仪器
(1)722分光光度计；(2)恒温水浴锅；(3)电炉；(4)刻度比色管；(5)容量瓶；(6)漏斗；(7)研钵；(8)温度计；(9)砧板、菜刀。
三、实验步骤
1、标准曲线的制作
（1）3,5-二硝基水杨酸的配置
取酒石酸钾钠182g及用3,5-二硝基水杨酸7g，加热溶解于500mL 蒸馏水中，加入15g氢氧化钠，溶解后再加4g苯酚及1g无水亚硫酸钠，溶解后定容至1000mL，放置一周后备用。
（2）葡萄糖标准溶液的配置
取0.100g无水葡萄糖，蒸馏水溶解并定容至100mL，此溶液每mL含葡萄糖1.0mg
（3）葡萄糖标准曲线的绘制
取6支10mL刻度试管，依次加入葡萄糖标准溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL,用蒸馏水补足至1mL，加入3,5-二硝基水杨酸溶液3mL混匀，于沸水浴中保温10min（使其完全反应）后取出，冷却至室温后定容至10.0mL，于530nm处测吸光度值，以葡萄糖量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2、样品的酶解
选取大头菜表皮、中间、中心部位，油菜的根、茎、叶部位，萝卜的表皮、中间、中心部位，准确称取研磨每种样品0.500g两份，分别置于两支25mL刻度试管中，各加氟化钠0.1g。
在一支试管中加沸水20mL,立即加热至沸并保持10min。
在另一支试管中则加入35~38度蒸馏水20mL，置37度水浴中保温酶解1小时，使GS在芥子酶作用下水解。
完成酶解后加热至沸并保持10min。
3、GS总量的测定
在两支试管中分别加入6滴中性醋酸铅，以沉淀其中的蛋白质及色素类物质，过量的醋酸铅应用饱和的硫酸钠溶液消除。
最后，加蒸馏水定容至25mL，用滤纸过滤至试管中。
取滤液各0.5，按葡萄糖标准曲线绘制方法，分别测定其吸光度。
四、GS总量的计算
GS=（m2-m1）×50×2.207／m×100％
式中: m1—灭酶管从标准曲线上查得的相应葡萄糖量，mg m2—酶解管从标准曲线上查得的相应葡萄糖量，mg
m—样品质量，mg
2.207——是硫葡萄糖转化为硫葡萄糖苷的系数
五、误差分析
1、标准曲线的制作
绘制的标准曲线不过原点，可能是由于测量时参比溶液的配制不准确，引入了少量影响光吸收物质。
2、硫代葡萄糖苷含量的测定
测定结果中，有的测定值不合理。
可能是在样品研磨中并转移至比色瓶过程中，由于研磨及在空气中停留时间过长，还有研磨时产生的热，使芥子酶作用于植物体，即灭酶处理的样品在灭酶前有部分葡萄糖苷已被酶解，缩小灭酶前后的差值及人为的偶然误差引起。