精浆的生化检验技术(三修)
精浆的生化检查有什么临床意义
精浆的生化检查有什么临床意义目前，不孕不育已经成为世界范围内的难题，男性占其中的百分之五十以上，在所有男性不孕不育患者中，有百分之七十五的患者病因尚不明确。
整个受孕的过程，男性需要有合格的禁止、输精管道自己附属性腺。
但是因为现代人们生活作息的不规律，导致越来越多的男性患者出现精子质量越来越差的问题，同时患者的人群也在不断的扩大。
在这些不孕不育患者中相对性不孕不育多，绝对性不孕不育患者少。
很多男性不孕不育患者在接受过常规的精液检查以及形态学检查之后，医生在看过患者精液检查报告之后，通常都会叮嘱患者进一步进行精浆生化检查。
对此，有很多患者并不是非常明白，为什么要做精浆生化检查？首先要从男性朋友精液的组成生分说起，精液由两部分组成，甚至我们可以将精液看作是池塘里的水和鱼一样，其中含有百分之五的有形成分，这些有形成分就是精子，剩下的百分之九十五都是无形成分被称为精浆。
在精浆中，有百分之六十属于精囊液腺，百分之三十属于前列腺液，尿道的球腺以及尿道的腺液占剩下的百分之五。
精子就像鱼，精浆就像水，男性的精子质量在很大程度上都会受水质好坏的影响。
因此，对于不孕不育的患者而言，在进行检查的过程中不仅仅要关注精子的质量，同样还应当关注精浆的质量。
1、精浆生化检查的临床意义进行精浆生化检查能够对患者的前列腺、精囊腺以及附睾的功能进行评估；能够对患者的输精管道梗阻进行定位诊断，不同的患者、不同的梗阻部位在进行精浆生化检查的过程中，显示出来的生化检查指标也不尽相同；研究男性附属腺对男性生育产生的影响。
2、适合精浆生化检查的人群精子质量分析正常，但是已经结过婚长时间没有怀孕的男性朋友应当前往医院进行精浆生化检查；精子质量存在异常需要查找原因的患者应当前往医院进行精浆生化检查；前列腺、附睾炎以及精囊炎症患者以及其他炎症感染的患者需要进行精浆生化检查；一些育前体检者进行精液常规结合的人也应当进行精浆生化检查。
3、精浆生化指标与附属性腺的关系附睾：中性α-葡萄甘酶、左旋肉毒碱精囊：果糖前列腺：酸性磷酸酶；抗精子抗体4、常规的精浆生化检查项目4.1、精浆中性α-葡萄甘酶的定量测定------附睾分泌功能指标在男性的精浆中存在两种α葡萄甘酶的异构体，其中来源于附睾的中性α-葡萄甘酶占百分之八十；来自于前列腺的酸性α-葡萄甘酶占剩下的百分之二十。
精浆全自动生化分析仪
精浆全自动生化分析仪可实现高粘度精浆标本的准确加样，可满足部分特殊生殖检测项目的自动化检测需求。
具备生化和ELISA一体化检测功能，是生殖专科实验室的理想选择。
具有多项普通生化分析仪所不具备的特殊检测模式。
如：标本去蛋白处理、标准品与样品的非同步检测、设立与测定程序相异的每标本对照程序等。
配备有稳定的精浆复合质控物，可满足质量控制和标准化的要求。
也可用于除精浆以外的其它类型标本的检测，以及其它各种生化免疫项目的检测。
产品特点：1.能全面满足各大型生殖专科实验室日常精浆、血清标本的检测需要。
自动化检测，可减轻实验室的工作强度，提高精浆生化免疫项目检测的精确性和准确性。
2.可同时检测多个项目，特别适用于检测项目纷杂、需要在短时间内快速出报告的实验室。
3.具有质量控制功能，可自动绘制质控图。
配合BRED精浆复合质控品，可满足日常质量管理和实验室标准建设的需要。
4.中(英）文操作界面，生殖项目采用固化检测模块，方便使用。
可根据客户的需求，提供扩展项目检测的个体化技术服务。
5.操作简单，易于维护和保养。
6.具有HIS/LIS接口，可以与医院HIS系统和实验室LIS系统实现无缝衔接，实现生殖医学实验室管理的信息化。
仪器配套检测项目：1. 精浆锌定量检测（Zn）2. 精浆柠檬酸定量检测（Citric）3. 精浆果糖定量检测（Fructose）4. 精浆酸性磷酸酶定量检测（ACP）5. 精子顶体酶活性定量检测（Acrosin）6. 精浆弹性蛋白酶定量检测（Elastase）7. 精浆中性α-葡萄糖糖苷酶定量检测（NAG）8. 精浆（液）乳酸脱氢酶同工酶X定量检测（LDH-X）9. 其他生化、ELISA免疫项目检测产品参数：检测速度: 光学测试:240测试/小时，EIA：120测试/小时样品位置: 96个位置，任意放置常规/定标或质控,可随时插入急诊样本试剂位置：27个位置，可扩展至44个（EIA法）反应杯清洗：可以反应杯自动清洗，并可以自动监测清洗状态样本稀释：可以自动样本稀释，并可以选择稀释比例检测通道：4个光学通道同时检测样本测光方式：后分光，可做单/双波长光源：氙灯2000小时以上寿命，大部分可用3-5年RS232接口：标准RS232通讯接口HIS/LIS：具有HIS/LIS接口。
精浆生化项目及其临床意义
精浆主要化学成分
1、水:约占90%以上 2、糖类:果糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖等 3、蛋白质:白蛋白及非酶蛋白质 4、脂类:包括胆固醇、睾酮、前列腺素等 5、酶蛋白:酸性磷酸酶、透明质酸酶、糖苷酶、精素、纤溶酶原激活剂等
精浆主要化学成分
6、肽类激素：如FSH 、LH、催乳素等 7、胺类：如精胺、亚精胺、精胺素等 8、氨基酸：如精氨酸、谷氨酸等20多种 9、有机酸及有机碱：如柠檬酸、肉毒碱、甘油磷酸胆碱、乳酸等 10、 无机离子：锌、镁、钙、铜、钾、氯、钠等
拟开展项目
实验室拟开展精浆生化项目
1、精液白细胞检测 2、精浆弹性蛋白酶定量测定 3、精浆柠檬酸定量测定 4、精浆酸性磷酸酶定量测定 5、精浆锌定量测定 6、精浆中性α-葡萄糖甘酶定量测定 7、精浆果糖定量测定 8、精子DNA碎片检测 9、精子包被抗体IgA检测 10、性交后试验
临床意义
生殖道感染 评价指标
附睾 分泌功能 评价指标
精浆中性α-葡萄糖苷酶定量检测
精浆中性α-葡萄糖苷酶定量检测
精浆中性α-葡萄糖苷酶定量检测
1、精浆中性 α－葡萄糖苷酶主要由附睾上皮细胞分泌，是附睾的特异性酶和标记酶。 2、该酶在精子的糖原降解中起到重要的催化作用，能作为精子代谢及运动的供应能源， 且在精子成熟、获能及受精过程中伴有的比较活跃的糖基反应都与此酶活力密切相关。 3、中性 α- 葡萄糖苷酶浓度和活性降低，会影响精子在附睾中成熟和获得向前运动的能 力，从而影响生育功能，有利于诊断男性不育症。 4、中性 α- 葡萄糖苷酶活力水平与男性不育的附性腺功能不全所致的梗阻性无精子症和 少精子症有密切关系。
THANKS.
精液白细胞检测
精液白细胞检测
1、白细胞精子症：正常精液中白细胞数＜1×106/ml, 若超过此值就称为白细胞精子症。 2、原因：生殖系统的炎症、自身免疫性疾病、不良刺激、长期接触有毒物质或辐射、 长期处于高温环境等。 3、影响：精液白细胞中大约有95%是嗜中性粒细胞和巨噬细胞，他们会产生过多活性 氧，引发氧化应激，诱导细胞凋亡并导致精子数量减少，损伤精子质膜，降低精子活 动率和受精能力，降低正常形态精子百分率，对精液液化产生不利影响，甚至会影响 接受辅助生殖技术治疗患者的妊浆弹性蛋白酶定量检测
精浆弹性硬蛋白酶、生化、果糖
精浆弹性硬蛋白酶（PMN-Elastase）精浆弹性硬蛋白酶是检测炎症的手段之一，精浆弹性硬蛋白酶可作为静止型生殖道感染的诊断及愈后检测指标。
临床上主要用于检查男性生殖道感染。
精浆弹性硬蛋白酶检测原理包被于固相载体的抗弹性硬蛋白酶单抗可与精浆中弹性硬蛋白酶相结合，结合的待测物再与特异性酶标记物反应，最后通过底物显色，其吸光度大小与精浆标本中弹性硬蛋白酶浓度相关。
检测步骤（1）准备适当数量的包被微孔。
标准品、稀释标本加样量均为100μl/孔。
五个标准品浓度依次为3000、1500、750、375 和0ng/ml（以标本稀释液作为0 标准）。
（2）用封片膜封板。
以孵育振荡器（350 ～400rpm）室温（18 ～28℃）反应60min。
（3）弃去封板膜。
洗板：以洗涤液注满微孔,每次浸泡1min,共洗板5 次。
扣干。
（4）每孔加酶结合物100μl。
用封板膜封板。
以孵育振荡器（350 ～400rpm）室温（18 ～28℃）反应45min。
（5）弃去封板膜。
洗板：以洗涤液注满微孔，每次浸泡1min, 共洗板5 次。
扣干。
（6）每孔加显色液100μl, 室温避光反应20min[显色液临用前配制。
方法是：显色剂A: 显色剂B按体积比40: 1混合（如显色剂A 400μl + 显色剂B 10μl）,显色液配制后30min 内使用]。
（7）每孔加终止液100μl,充分混匀。
15min 内上酶标仪双波长450/630nm 比色。
判断标准判断标准数值：< 290ng /ml, 隐性感染: 290 ～1000ng/ml, 确证感染: > 1000ng/ml。
急性炎症时, 弹性硬蛋白酶复合物浓度迅速从正常水平升高超过290ng/ml, 直到炎症被治愈, 否则还是保持高水平。
当临床上检查到有微生物感染, 炎症即可被诊断。
精浆生化学对精浆进行生物化学检测。
精浆主要由附属性腺(前列腺、精囊腺、尿道球腺)和附睾的分泌物组成，因此精浆生化检查对评估附属性腺的功能以及研究附属性腺对男性生育的影响有重要意义。
精浆的生化检验技术三修
0.5~20ul、50~200ul、100~500ul、 200~1000ul 石英定时钟
实验操作方法 试剂准备
糖苷酶抑制剂冻干粉以120μl蒸馏水溶解，4℃可使 用20天，分装保存-20℃可长期使用（切勿反复冻 融）
精浆柠檬酸定量测定
二、精浆中性α-葡萄糖甘酶测定（酶法）
检测目的
主要是附睾分泌功能的指标，较左旋肉毒碱 和甘油磷酸胆碱对附睾更敏感、更特异 先天性副睾发育不良明显降低、急慢性副睾 炎降低 正常见于单纯输精管阻塞无精症
原理
α-葡 糖
P-硝基酚吡喃葡糖苷 （底物） 苷酶 对硝基
加酸
酚（产物） Na2CO3 淡黄色物质，在405nm
男性生殖腺分泌功能
睾丸:精子、雄性激素、转铁蛋白、 附睾 : 中性α-葡萄糖苷酶、肉毒碱、甘油磷酸
胆碱、唾液酸等，与精子的功能性成熟有关 精囊腺: 分泌果糖、前列腺素等，呈碱性 前列腺: 分泌酸性磷酸酶、柠檬酸、谷氨酸转
肽酶、PSA、锌、镁等，其分泌物呈酸性
精液的组成和来源
OF STD1: 0 精液是由精子和精浆组成的混合物
检测前，将待检精浆标本用样本稀释液1:4稀释，充分混匀
五 、精浆酸性磷酸酶的检测
精浆果糖检测标准化和管理
精液经2 000 r/min离心在10 mi精n后，浆84. 中约30%来自前列腺，60%来自精囊
腺，5-10%来自于附睾及尿道球腺
正常精浆应具备
外观和粘稠度都正常
精浆各项生化指标正常 精液WBC＜ 1×106/ml 细菌培养阴性或细菌计数＜1000/ml
波长有最大吸收峰
加酸是抑制酸性α-葡萄糖甘酶 ，保护中性α-
精浆生化检测的标准化与质量控制Final
20
15
10
5
0
11
16
21
26
31
36
41
46
51
56
61
Cases
Comparison of sperm concentrations in seminal plasmas obtained at 1 000g for 10 min or 3 000g for 15 min
18
66
1
6
果糖标准液吸光度的监测
精浆UA检测
• 液化后的精液标本用Ba(OH)2和 ZnSO4沉淀蛋白
→上清与UA氧化酶试剂反应→520 nm 波长处
比色。精浆UA浓度 = （测定管吸光度/标准管 吸光度）×595 μmol/L。
37
方法学评价—批内差异
• 随机选取精液标本1份，将其分成10份同时检 测，结果为（509.05±46.62）μmol/L，CV 为9.16%。
31
（四）精浆γ -谷氨酰转肽酶（γ -GT）测定
• 检测方法为化学比色法，可分为标准曲线法和 试剂盒法 • 精浆γ-GT检测中应注意三点 ①精浆稀释后需立即检测 ②离心速度对精浆γ-GT检测结果有影响 ③精浆γ-GT测定中应引入质量控制体系
32
（五）精浆锌的测定
• 检测方法为化学比色法
• 已有测定精浆中锌浓度的试剂盒出售
Without chymotrypsin
35
36.92±20.49
0.772
0.446
30
冻融对精浆ACP活性的影响
n Sample With PMSF ACP (U/ml) Without PMSF
1 2
10 10
精浆生化分析在精索静脉曲张诊断中的临床意义_沙琨
作者简介：沙琨（1976－），女，硕士，主管检验师，主要从事临床生物化学方面的研究。
通讯作者：齐莹莹，E－mail：yingyingqi@126．com ·临床检验·精浆生化分析在精索静脉曲张诊断中的临床意义沙琨，齐莹莹郑州人民医院检验科，河南郑州450000摘要：目的探索精浆锌、酸性磷酸酶、柠檬酸、果糖、α－葡萄糖苷酶在诊断精索静脉曲张中的临床意义。
方法收集本院泌尿生殖科就诊的89份精索静脉曲张（VC）患者精浆锌、酸性磷酸酶、柠檬酸、果糖、α－葡萄糖苷酶的检测结果，同时以20份正常生育史的已婚男性作为对照组。
结果VC组精浆生化分析结果中，果糖（28．43mmol/Lʃ5．05mmol/L）、酸性磷酸酶（77．69U/Lʃ10．87U/L）、柠檬酸（20．55mmol/Lʃ3．68mmol/L）的浓度与对照组的果糖（28．43mmol/Lʃ6．23mmol/L）、酸性磷酸酶（133．34U/Lʃ41．24U/L）、柠檬酸（21．27mmol/Lʃ2．84mmol/L）的浓度相比，差异无统计学意义（P＞0．05），而VC组精浆锌（1519．2μmol/Lʃ201．47μmol/L）、α－葡萄糖苷酶（51．49U/mlʃ10．63U/ml）的浓度明显低于对照组精浆锌（2356．6μmol/Lʃ259．34μmol/L）、α－葡萄糖苷酶（58．31U/mlʃ4．40U/ml）的浓度，差异有统计学意义（P＜0．05）。
结论精索静脉曲张是影响精浆锌和α－葡萄糖苷酶浓度改变的一个重要原因，精浆生化检测为诊断VC提供了简单快速的方法。
本研究为及时有效地治疗男性不育症提供了有力的临床实验基础。
关键词：精索静脉曲张；精浆生化；精浆锌；α－葡萄糖苷酶中图分类号：R697+．24文献标识码：A文章编号：1004－8685（2015）09－1389－03Clinical significance of Seminal plasma biochemical analysisin the diagnosis of spermatic vein quSHA Kun，QI Ying－yingZhengzhou People’s Hospital，Zhengzhou，Henan450003，ChinaAbstract：Objective To explore clinical significance of the seminal plasma zinc，acid phosphatase，citric acid，fructose，al-pha glycosidase in the diagnosis of varicocele（VC）．Methods Collect the hospital uropoiesis reproductive clinic of89varico-cele（VC）in patients with seminal plasma zinc，acid phosphatase，citric acid，fructose，alpha glycosidase test results At the same time select20normal reproductie history of married men as control group．Results VC group in the seminal plasma bio-chemical analysis results，fructose（28．43mmol/Lʃ5．05mmol/L），citric acid（77．69U/Lʃ10．87U/L），acid phosphatase （20．55mmol/Lʃ3．68mmol/L）fructose concentration compared to control group of fructose（28．43mmol/Lʃ6．23mmol/L），citric acid（133．34U/Lʃ41．24U/L），acid phosphatase（21．27mmol/Lʃ2．84mmol/L），there was no statistically signifi-cant difference（P＞0．05）．And VC group of seminal plasma zinc（1519．2μmol/Lʃ201．47μmol/L），alpha glycosidase （51．49U/mlʃ10．63U/ml）concentration significantly lower than control group in seminal plasma zinc（2356．6μmol/Lʃ259．34μmol/L），alpha glycosidase（58．31U/mlʃ4．40U/ml），and the differences had statistical significance（P＜0．05）．Conclusion Varicocele is an important reason of the change of the concentration of glycosidase and seminal plasma zinc and al-pha．Seminal plasma biochemical tests provides a simple and rapid method for diagnosis of VC which provides timely and effec-tive in the treatment of male infertility with powerful clinical experimental basisKey Words：Varicocele；Seminal plasma biochemical；Seminal plasma zinc；Alpha also glycosidase精索静脉曲张（varicocele，VC）指精索的静脉回流受阻、瓣膜失效、血液反流而引起血液淤滞，导致蔓状静脉丛扩张、伸长、弯曲［1］。
精液常规分析(世界卫生组织标准)
精液常规分析（世界卫生组织标准），男性生育力检查的金标准精液分析是评估男子生育力的重要方法，也是男科病诊断、疗效观察的实验依据，但精液分析的各参数也不是特异的，它并不能够确定达到受精位置的少数精子的受精能力，因此要正确评估男子生育能力还需要结合临床进行综合评估。
精液的分析结果易受射精频度，温度，实验室条件，检验人员的技术熟练程度，主观判断能力等诸多因素影响，其结果易发生偏差，因此精液采集与分析必须严格按照适宜的标准化程序进行，才能提供受检者临床状况的必要信息。
不育夫妇初诊时，男方至少要按标准程序做两次精液分析，两次分析如有明确差异，还要进行第三次分析。
精液标本可能含有致病菌和病毒（如HIV病毒，肝炎病毒，单纯疱疹病毒等），因此应视为生物危险品。
实验室技术人员应注意防护，要使用一次性手套和各种器皿。
用过的器皿要消毒处理。
精液培养，用于生物测定，宫腔内受精或体外受精，在处理过程中必须严格用无菌材料和无菌操作。
一，精液标本的采集和运送精液采集规范化是做好精液分析的前提条件，因此在精液采集前务必要详细告知受检者有关精液采集和运送的方法及注意事项。
1，标本采集前应禁欲至少48小时，但不超过7天。
为减少精液分析结果的波动，禁欲的天数应尽可能恒定。
每一份精液分析报告都应写明：病人姓名、禁欲时间、标本采集的日期和时间、标本采集是否完整以及标本从采集到分析的时间间隔等。
2，初检者应做两次精液分析，两次精液采集的间隔应大于7天，但不能超过3周。
如果两次的结果有明显的差异，应再取标本进行第三次分析。
3，标本的采集最好在实验室附近的取精室内单独进行。
否则，应在采集后1小时内送到实验室。
4，最好用手淫的方法取精液，收集精液要用对精子无毒性作用的广口玻璃或塑料容器中。
温度应保持在20~40℃,以避免降低精子活力。
如果要做微生物学方面的检查，病人应先排尿并洗净双手和阴茎，用无菌容器收集。
5，如手淫取精有困难，可用特制的避孕套进行精液采集。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
标本1实际浓度
结果报告
标本最终检测结果以“精浆中性α- 葡糖苷酶
总活性”方式报告，即总活性=标本浓度
(U/L)×一次射精的精液体积 (ml)=mU/ 一次射 精
正常参考值
≥20 mU /一次射精（WHO）
33
试验中注意事项
• 严格控制禁欲时间和样本离心速度 • 操作时加样要准确，混匀充分
ENTER NUMBER OF STANDARD REPLICATES: 01
CONCN. OF STD1: 0
CONCN. OF STD2: 4.46
CONCN. OF STD3: 8.92 CONCN. OF STD4: 17.84
CONCN. OF STD5: 35.68
按“平滑曲线”方式拟合标准曲线
空白孔单孔，所有检测孔吸光度均为之相减。
30
各检测孔在微孔板上的位置排列方式如下：
1 A B C 2 B S1 S2 3 R1 R1B R2 R5 R5B R6 4 …… …… …… ……
D
E F G H
S3
S4 S5 Q QB
R2B
R3 R3B R4 R4B
R6B
R7 R7B R8 R8B
……
…… …… …… ……
Centrifugation at 2 000 r/min for 10 minutes Centrifugation at 3 500 r/min for 15 minutes
25
20 15
10
5 0 1 5 9 例数
39
49
13
17
21
25
29
33
37
41
45
•
冻融后的精浆α葡糖苷酶的检测结果
（ 43/51 ）的精浆含有精子，平均精子密度 为 (2.43±3.95)×106/ml ， 而 经 3 500 r/min离心15 min后，23.53%（12/51）的精 浆含有精子，平均精子密度为（0.22±0.87） ×106/ml，结果见图1。
38
图1
30 精子密度 (106/ml)
不同速度离心后的精浆中精子密度的比较
开始有效的自由活动，且有充分活动力，可 由阴道进入宫颈、子宫及输卵管，最后与卵 子结合而致孕。
精囊（凝固酶）和前列腺（液化因子、PSA）
在精液的凝固和液化过程中起重要作用
13
男性不育疾病中精浆生化指标的改变
凝固 液化
正常 正常 不
PH
急性>8 慢性<7 <7 >8
α-糖苷 果糖 酶
降低 正常 正常 正常 降低 正常
精液是由精子和精浆组成的混合物 精子产生于睾丸 精浆产生于附睾、前列腺、精囊腺和尿道球
腺等附属腺体
正常精液中精子占5%，精浆占95%
在精浆中约30%来自前列腺，60%来自精囊
腺，5-10%来自于附睾及尿道球腺
6
7
正常精浆应具备
精浆量≥2.0ml
外观和粘稠度都正常 PH值7.2-7.8 精浆各项生化指标正常 精液WBC＜ 1×106/ml
F
G H
Q
R1 R2
QB
R1B R2B
R8
R9 ┇
R8B ……
R9B …… ┇ ……
S：标准孔
Q：质控孔
QB：质控对照孔 R：标本测定孔
27
RB：样本对照孔
• Bio-Tek ELx800酶标仪程序设置，主要参数如下 MAPPING DIRECTION: DOWN; BLANK MAP: P-DOWN; ENTER NUMBER OF STANDARDS: 05
酸性抑制剂（ul）
蒸馏水（ul） 质控液（ul）
样本（ul） 糖苷酶抑制剂（ul） 底物（ul） 终止液（ul）
10 5
—— —— 100 1000
10 5
—— 5 100
—— ——
5 —— 100 1000
—— ——
5 5 100 1000
37℃ 预温5min，底物同时预温5min。 37℃准确反应25min。 1000
4
男性生殖腺分泌功能
睾丸:精子、雄性激素、转铁蛋白、 附睾 : 中性α-葡萄糖苷酶、肉毒碱、甘油磷酸 胆碱、唾液酸等，与精子的功能性成熟有关
精囊腺: 分泌果糖、前列腺素等，呈碱性
前列腺: 分泌酸性磷酸酶、柠檬酸、谷氨酸转
肽酶、PSA、锌、镁等，其分泌物呈酸性
5
精液的组成和来源
每管各取250ul，标准液250ul,在微孔板上按特定方法排列， 酶标仪405nm比色。
23
比色与计算
计算标准管浓度对应的标本浓度值
1单位（U）葡糖苷酶活性=37℃下每分钟产生 1umol PNP
标本系数=总孵育体积÷样本体积÷反应时间
(min) =1115÷5÷25=8.92
标准管浓度对应的标本浓度值(umol/L)=标准
糖苷酶抑制剂（冻干粉）
底物（冻干粉）
1瓶
2瓶
终止液
标准品（1~5）
50ml×1瓶
各2.5 ml
质控液
底物溶解液
100μl×1瓶
5 ml×1瓶
19
实验设备及用具
酶标仪 低速自动平衡离心机 微量水平振荡器 水浴箱 （37℃）
精密移液器（加样枪） 0.5~20ul、50~200ul、100~500ul、 200~1000ul
所有6份标本加与不加PMSF对α-葡糖苷
性检测没有影响（P >0.05）。连续20天
（隔一天检测一次）的检测结果表明，
6份标本的CV为2.22%～5.29%。见表2
40
表2 精浆样本在加入PMSF和未加入 PMSF后活性变化情况
Sampl e 1 2 3 4 5 n 10 10 10 10 10
加入PMSF α-葡萄糖苷酶(U/ml)
B：空白孔 S：标准孔
Q：质控孔
QB：质控对照孔
31
R：标本测定孔
RB：样本对照孔
• 设置酶标仪程序时，标准浓度输入值分别为0、 4.46、8.92、17.84和35.68。按“平滑曲线”方 式拟合标准曲线 • 人工计算方法：检测管实际浓度(U/L)=检测管浓
度-对照管浓度。
如：质控管实际浓度=Q－QB =R1－R1B
20.84±0.66 23.01±1.05 33.43±1.16 36.54±1.74 48.48±1.58
CV(%) 3.17 4.56 3.47 4.76 3.26
未加PMSF α-葡萄糖苷酶(U/ml) CV(%)
21.23±0.68 22.87±1.21 33.78±0.75 36.63±1.75 49.04±1.67 3.20 5.29 2.22 4.78 3.41
男科实验室开展的精浆生化项目
精浆α-葡萄糖甘酶测定 精浆果糖测定 精浆酸性磷酸酶的测定 精子顶体酶的测定 精浆锌的测定 精浆乳酸脱氢酶X同工酶的测定 精浆柠檬酸定量测定
16
二、精浆中性α-葡萄糖甘酶测定（酶法）
检测目的
主要是附睾分泌功能的指标，较左旋肉毒碱
和甘油磷酸胆碱对附睾更敏感、更特异
评价精浆α-葡糖苷酶检测中离心速度、禁欲时间、 以及冻融对精浆α-葡糖苷酶水平的影响，为精浆α-葡
糖苷酶检测实现标准化及实验室内部和实验室之间的
质量控制提供指导 • 不同速度离心后的精浆中α-葡糖苷酶水平见表1、
36
表1
精浆α-葡萄糖苷酶在精浆标本2000r/min
离心10min和3500 r/min离心15min结果比较
28 酶标仪打印输出结果，即为检测标本真实浓度（U/L）
• 优点
仪器可设置多样本空白，直接计算待检样本浓度
• 缺点
操作繁锁（对酶标仪操作技术要求较高） 浪费试剂
每次试验最好作标准曲线
29
通过人工计算检测样本浓度（适用于不能
设置多样本空白的酶标仪，如大多数普通 酶标仪）
• 酶标仪对空白处理方式有限，但可设置一个
石英定时钟
20
实验操作方法
试剂准备
糖苷酶抑制剂冻干粉以120μl蒸馏水溶解，4℃可使
用20天，分装保存-20℃可长期使用（切勿反复冻 融）
每瓶底物冻干粉以2.2ml底物溶解液充分溶解，分
装保存
溶解后的底物液，4℃保存可用5天，-20℃保存可
用数月（切勿反复冻融）
21
标本准备
记录受检者一次射精的精液总量(ml)
酸性磷 柠檬酸 酸 酶
正常 正常 升高 降低 正常 正常
降低
副 睾 疾 病 精 囊 缺 如
前列腺 疾 病
正常 不 正常
输精管 阻 塞
正常
正常
正常
降低
正常
正常
正常
14
精浆生化检验的目的
精子功能指标：评价精子受孕能力 用于男性生殖道炎症的诊断
了解副性腺功能 确定梗阻性无精子症及梗阻部位
15
精液液化后以3000g离心10分钟，保留精浆 若样本不能立即测定，可以Eppendorf管分
装精浆，-20℃保存待检
根据离心力计算离心速度公式
N Rcf *10 / 1.118 * R
5
N：离心速度
Rcf：离心力
R：离心半径
22
操作方法