金线莲与内生真菌共生培养体系的建立
我国药用植物的调查报告
我国药用植物资源开发利用的研究综述姓名:蓝国栋班级：10级土木8班学号：20101873摘要:我国药用植物资源丰富。
种类繁多，在药用植物开发利用领域上取得显著成就，但是，仍然存在许多问题，尤其在要用植物的保护以及可持续研究和开发利用上存在很大不足。
本文对我国药用植物的概况、近年来我国药用植物开发利用的研究已及存在的问题进行概括，提出了今后发展的一些建议。
关键词：药用植物；概况；开发利用；现状；建议总言：药用植物种质资源是我国中医药事业发展的物质基础、中药材生产的源药用植物种质资源是我国中医药事业发展的物质基础、中药材生产的源头，是优质中药材形成的物质基础，种质的优劣直接影响药材质量的差异，进而影响临床用药疗效。
因此，药用植物种质资源作持续、稳定地保证人民健康需求的物质保障，已成为国家的重要战略性资源。
正文：1我国药用植物资源种类丰富中国现有药用植物资源383科2309属11146种,占中药资源种类的87%。
在药用低等植物资源中,菌类种数最多,以真菌为主,常用药材有冬虫夏草、灵芝,等。
药用藻类以海洋藻类种数最多,有120种以上,用作药材的主要有海带、昆布,等。
药用地衣较多的有梅衣科、松萝科、石蕊科等,约占药用地衣种数的77%,常用种有破茎松萝、长松萝,等。
苔藓类主要药用种类有地钱、石地钱、蛇苔(蛇地钱),等。
蕨类属为孢子植物之首,较重要的是石松亚门和真蕨亚门,占药用种数的98%,：453-454]。
在药用高等植物资源中[1],种子植物占90%以上,是我国药用植物资源的主体,其中裸子植物药用种类有10科27属126种,最重要的是松科,有10属113种29变种,柏科有8属29种7变种,常用药材为侧柏和松花粉,等。
三尖杉科中许多都含有抗癌活性物质,近年来颇受关注,我国有1属10种,均可药用。
红豆杉科中常用药材有东北红豆杉、南方红豆杉和云南红豆杉,含有抗肿瘤活性物质紫杉醇。
麻黄科有11种3变种1变型,其中草麻黄、中麻黄、木贼麻黄为药典收载种。
金线莲一促生真菌化学成分的研究
・中药及天然药物・金线莲一促生真菌化学成分的研究3张集慧 郭顺星 杨峻山 肖培根(北京100094中国医学科学院2中国协和医科大学2药用植物研究所)摘要 目的:研究粘帚霉属(Gliocladium )的一种真菌(简称F 菌)培养过程中产生的化学成分。
方法:用甲醇等有机溶剂提取,硅胶柱层析分离,根据理化性质及MS ,FAB 和NMR 等光谱数据确定其结构。
结果:分得6种成分,确定它们为:棕榈酸(Ⅰ);5,5′一双取代氧甲基呋喃醛(Ⅱ);麦角甾醇(Ⅲ);6,222二烯25,82过氧麦角甾232醇(Ⅳ);棕榈酸甘油酯(Ⅴ);D 2甘露醇(Ⅵ)。
结论:化合物(Ⅱ)和(Ⅳ)为首次从粘帚霉属真菌中得到。
关键词 金线莲;粘帚霉属;真菌;化学成分Studies on chemical constituents of the f ungus accelerating the grow th of Anoectochilus roxburghiiZhang Jihui (Zhang J H ),Guo Shunxing (Guo SX ),Yang J unshan (Yang J S ),et al (Institute of Medicinal Plant ,Development ,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking U nion Medical College ,Beijing 100094)ABSTRACT OB JECTIVE :To study the chemical constituents of Gliocladium sp 1METH ODS :The data of FAB ,MS and NMR of the compounds were used to identify their structures 1RESU LTS :Six compounds were seperated and identified as palmitinic acid (Ⅰ),bis 2(52furmyl 2furfuryl )2ether (Ⅱ),ergosterol (Ⅲ),6,222diene 25,82epidioxyergosta 232ol (Ⅳ),palmityl glycerin ester (Ⅴ),and D 2mannitol (Ⅵ)1CONC L USION :The compound (Ⅱ)and (Ⅳ)were firstly elucidated from this genus 1KE Y WOR DS A noectochilus roxburghii ,Gliocladium ,fungus ;chemical constituents 金线莲(A noectochil us roxburghii )是传统的名贵中药,对肾炎、糖尿病具有独特疗效。
金线莲组织培养研究进展
金线莲组织培养研究进展金线莲是一种重要的中药材，具有清热解毒、消肿止痛、生津止渴等功效，在中医药领域具有重要的药用价值。
随着对金线莲功效的深入研究，人们对金线莲的组织培养技术也逐渐进行了探索和研究。
本文将对金线莲组织培养研究的进展进行总结和分析。
一、金线莲植物简介金线莲，又名黄岑、黄针子，为蓼科植物金线莲的全草。
金线莲生长在我国东北、华北、西北、西南、华东和华南地区的湿润草地、灌木丛和沟边等地，是一种常见的中草药材。
金线莲性寒味苦，具有清热解毒、消肿止痛、生津止渴等功效，对热淋、湿疹、痈肿、痔疮、高血压等症有很好的疗效。
二、金线莲组织培养研究现状金线莲的繁殖方式主要有种子繁殖和地下茎繁殖，但这两种方式繁殖速度较慢，种子繁殖还存在种子质量不稳定的问题。
对金线莲进行组织培养研究，以实现其快速繁殖和大规模生产具有重要的意义。
目前，金线莲的组织培养研究主要集中在以下几个方面：1. 金线莲组织培养技术的建立通过金线莲的愈伤组织培养和再生植株的诱导研究，建立了金线莲的组织培养技术，为金线莲的快速繁殖和生产提供了技术支持。
研究人员通过优化培养基成分、激素配比和培养条件等方面的条件，成功地诱导了金线莲的愈伤组织，并进一步实现了再生植株，为金线莲的组织培养奠定了基础。
2. 金线莲次生代谢产物的研究金线莲中含有丰富的次生代谢产物，包括黄酮类、三萜类、生物碱、鞣酸类等，具有良好的药用价值。
通过金线莲的组织培养技术，研究人员可以控制愈伤组织的分化方向，调控次生代谢产物的合成途径，实现对金线莲次生代谢产物的高效生产，为金线莲的药用价值开发提供了新的途径。
3. 金线莲遗传转化研究利用金线莲的组织培养技术，研究人员可以构建金线莲的愈伤组织和再生植株，为金线莲的遗传转化研究提供了材料基础。
通过外源基因的导入和表达，可以实现对金线莲重要性状的调控和改良，为金线莲的品质改良和功能性成分的提取提供了新的途径。
三、金线莲组织培养研究存在的问题及展望尽管金线莲组织培养研究取得了一些重要进展，但仍然存在一些问题需要进一步解决。
金线莲根部内生菌多样性宏基因组的分析
金线莲根部内生菌多样性宏基因组的分析陈倩倩;刘波;关雄;唐建阳【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2014(000)011【摘要】Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl is a traditional Chinese medicine, which has been used for diabetes and tumor treatment. The wild A. roxburghii and its endophytes live together to form a balanced symbiotic system. The endophytes produce various secondary metabolites to protect the host from being attacked by fungi and pests. Endophytes are rich bio-resources. Because of a major limitation of isolation methods and cultivation media, the diversity endophytes still remain undiscovered. Metagenomics simultaneous study of endophytes genomes from environmental samples may avoid the limitations of culture-dependent methods. We enriched the microbiota from the root of A. roxburghii and extracted and purified the metagenomic DNA.16S rDNA fragments were amplified by PCR and cloned to Escherichia coli DH5α to sequence. The endophytes were mainly uncultured bacterium, uncultured compost bacterium, Enterobacteriaceae, Paenibacillus sp., Bacillus sp. and Brevibacillus sp., according to 16S rDNA information. This research provided the basis for mining endophytes resources of A. roxburghii. Analyzed the groups of endophytes by partial sequence of 16S rDNA. This work opens further insight into the great potential of A. roxburghiimicrobiota.%金线莲(Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl)是中国传统中药，具有重要的药用价值，现代医学用来治疗糖尿病和癌症。
三种内生真菌对铁皮石斛、金线莲生长影响的研究
三种内生真菌对铁皮石斛、金线莲生长影响的研究高微微;郭顺星【期刊名称】《中草药》【年(卷),期】2002(33)6【摘要】目的研究开唇兰小菇、石斛小菇、兰小菇等 3种小菇属内生真菌对兰科濒危药用植物铁皮石斛、金线莲生长的促进作用。
方法采用植物无菌原球茎及试管苗与真菌进行双重培养 ,观测原球茎增殖及苗的生长情况。
结果接种 3种内生真菌后 ,铁皮石斛苗的生长量高于对照 3～ 5倍 ,石斛小菇、兰小菇对铁皮石斛原球茎增殖也有明显促进作用 (P<0 .0 5 ) ;接种 3种真菌的金线莲苗 ,侧芽及侧根数均显著高于对照。
结论 3种小菇属内生真菌能够促进铁皮石斛幼苗生长 ,促进金线莲侧芽及侧根的萌发 ,对铁皮石斛。
【总页数】4页(P542-545)【关键词】内生真菌;铁皮石斛;金线莲;生长;影响;研究【作者】高微微;郭顺星【作者单位】中国医学科学院协和医科大学药用植物研究所【正文语种】中文【中图分类】R282.71【相关文献】1.石斛内生真菌固体菌剂对铁皮石斛组培苗促生作用研究 [J], 徐文婷;张雅琼;董文汉;白燕冰;李泽生;孙文丽;杨生超;谢世清;梁泉2.内生真菌菌丝及代谢物对铁皮石斛及金线莲生长的影响 [J], 高微微;郭顺星3.内生真菌对铁皮石斛种苗生长的影响 [J], 朱彦明;金锦游;崔永一4.一株木榄内生真菌菌株的分类鉴定及其对铁皮石斛生长和多糖积累的影响 [J], 蓝桃菊; 张艳; 谢玲; 陈艳露; 张雯龙; 黄昌艳5.一株木榄内生真菌菌株的分类鉴定及其对铁皮石斛生长和多糖积累的影响 [J], 蓝桃菊; 张艳; 谢玲; 陈艳露; 张雯龙; 黄昌艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
金线莲分泌IAA内生真菌的筛选与鉴定及其发酵条件优化
金线莲分泌IAA内生真菌的筛选与鉴定及其发酵条件优化陈科霖;王明元;尤长胜;刘建福;林萍;李雨晴;陈文亮【期刊名称】《华侨大学学报:自然科学版》【年(卷),期】2022(43)3【摘要】从福建金线莲品种‘红霞’的根、茎、叶中分离内生真菌,分析优良菌株产吲哚乙酸(IAA)的特性.采用组织培养、平板划线法和Salkowski比色法,筛选能够产IAA的金线莲内生真菌,通过形态特征及内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列等方法进行菌种鉴定,并利用正交试验确定菌种产IAA最优条件.结果表明:从‘红霞’金线莲茎中筛选分离的内生真菌PJ3产IAA能力最强,产量高达106.7μg·mL^(-1);经鉴定,PJ3为角担菌属(Ceratobasidium)真菌.PJ3最佳发酵培养基配方和培养条件分别为:0.5 g·L^(-1)硫酸镁,1.5 g·L^(-1)磷酸氢二钾,1.5g·L^(-1)磷酸二氢钾,10.0 g葡萄糖,15.0 g酵母浸粉,培养时间为132 h,培养温度为28℃,初始pH值为5,摇床转速180 r·min^(-1),装液量(体积分数)为28%.【总页数】7页(P348-354)【作者】陈科霖;王明元;尤长胜;刘建福;林萍;李雨晴;陈文亮【作者单位】华侨大学化工学院;泉州市金胜生态农业有限公司【正文语种】中文【中图分类】S718.81;S567.239【相关文献】1.盐生海芦笋内生真菌Salicorn 35的分离鉴定与抗氧化发酵条件优化2.内生真菌SF4的鉴定及产乙酰胆碱酯酶抑制剂发酵条件的初步优化3.2株溶磷、解钾与产IAA的内生真菌菌株的筛选、鉴定及促生作用研究4.1株野生海带内生真菌W-1的分离鉴定和发酵条件优化5.盐生海芦笋内生真菌S19的分离鉴定与抗氧化发酵条件优化因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
金线莲与内生真菌共生培养体系的建立_于雪梅
表 1 培养 60 d 时不同培养基上 2 种真菌
对金线莲生长的影响
cm
培养基
未接菌苗 增高
A
1 .958
B
3 .550
C
1 .817
D
1 .600
E
1 .883
注 :n =3
接 94017 菌苗 增高
1 .150 2 .100 1 .442 0 .900 2 .550
接 94005 菌苗 增高
虽然 A , B 培养基上未接菌的苗增高高于 E 培 养基上接菌苗增高 , 因本实验主要目的是筛选适合 菌-苗共生的最佳培养基 , 而 A , B 培养基并不适合菌 -苗建立共生关系 。 综合上述现象 , 初选 E 培养基为 共生培养基 。 3 .2 A , B , C , D 培养基上接种真菌对苗影响较大 , 可能由于 A 培养基糖浓度过高 , 造成真菌严重侵染 植株 。B , D 培养基缺乏有机成分和蔗糖两大重要成
1 .083 1 .600 1 .708 0 .475 2 .100
由表 1 可见 , A , B , C , D 4 种培养基上接种真菌 的苗增高均低于未接种真菌的苗增高 。E 培养基上 接种 94017 真的苗增高为 2 .1 cm , 高于未接种真菌 的苗增高(1 .883 cm)。
在 5 种培养基上 , 接种真菌的金线莲苗增高最 高为 E , 高于其它 4 种培养基 。 未接种真菌的金线 莲苗培养 60 d 时 B 增高最高(3 .55 cm), 其余依次 为 A(1 .95 8cm ), E(1 .883 cm ), C(1 .8 17 cm ), D(1 .600 cm)。 2 .3 接菌后金线莲组织学观察
第 25 卷第 2 期 2000 年 2 月
金线莲研究进展_综述_蔡文燕
2003,32(3):68-72.Ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ 金线莲研究进展（综述）蔡文燕，肖华山，范秀珍 （福建师范大学 生物工程学院，福建 福州 350007） 摘 要：本文对珍稀中草药金线莲的生物学特性、资源分布、药用价值、成分分析、生理活性、细胞学、分子生物学、组织培养及栽培技术等方面作了综述，为深入研究和合理开发利用金线莲提供参考。
关键词：金线莲; 药用植物; 观赏植物中图分类号：Q949.71+8.43 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2003)03-0068-05A review of research on Anoectochilus roxburghiiCAI Wen-yan, XIAO Hua-shan, FAN Xiu-zhen(Bioengineering College, Fujian Normal University, Fuzhou 350007, Fujian China)Ａｂｓｔｒａｃｔ： In this paper, r esearches on the rare medicinal herb Anoectochilus roxburghii including biological characteristics, distribution, medicinal value, ingredient analysis, molecular studies, tissue culture and cultural practices are reviewed. It provides a scientific basis for further study, development and utilization of A. roxburghii.Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Anoectochilus roxburghii ;medicinal herb; ornamental plant金线莲（Anoectochilus roxburghii）即花叶开唇兰，别名金蚕、金线兰、金石松、金线虎头蕉、金线入骨消等，是兰科开唇兰属的一种多年生草本植物。
金线莲研究现状与保护措施
第1期（总第373期）2021年1月No.1 JAN文章编号：1673-887X(2021)01-0059-03金线莲研究现状与保护措施施满容（宁德职业技术学院，福建福安355000）摘要文章对金线莲的生物学特性、资源分布、药用研究、分子生物学、组织培养等方面进行综述，并就现有资源的保护和合理利用提出了建议和展望。
关键词金线莲；研究现状；保护利用中图分类号S567.23+9文献标志码A doi:10.3969/j.issn.1673-887X.2020.12.024 Research Status and Protection Measures of Anoectochilus Roxburghii Shi ManRongShi Manrong(Ningde Vocational College,Fu'an355000,Fujian,China)Abstract：In this paper,rare herbs Anoectochilus the biological characteristics,distribution of resources,medicinal research,molec‐ular biology,tissue culture and other aspects were reviewed and discussed the existing resources protection and rational utilization of suggestions and outlook.Key words：Anoectochilus,research status,protection and utilization金线莲为兰科开唇兰属多年生草本植物，有2种原植物,一种是金线兰又名花叶开唇兰，另一种是台湾银线兰又名台湾金线莲。
民间多用于治疗糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病，有“药王”“金草”之称[1-2]。
药用植物内生真菌的功能研究进展
药用植物内生真菌的功能研究进展丁常宏;都晓伟;徐莹【摘要】This article summarized the functions of endophytic fungi in recent years,such as producing secondary metabolites with pharmaceutically active,promoting the synthesis and accumulation of active ingredients,influencing the growth and development of medicinal plant,improving plants' capacity of disease resistance.At the same time,the paper analyzed the problems existing in the research on endophytic fungi from medicinal plants,and looked forward to the research prospects.%本文对近年来药用植物内生真菌可以产生具有药用活性的次生代谢产物、促进药用植物活性成分的合成与积累、影响药用植物的生长发育、提高药用植物的抗病虫害能力等方面的研究成果进行了综述,并分析了药用植物内生真菌研究中存在的问题、展望了其研究的前景.【期刊名称】《中医药学报》【年(卷),期】2013(041)003【总页数】4页(P168-171)【关键词】药用植物;内生真菌;代谢产物;活性【作者】丁常宏;都晓伟;徐莹【作者单位】黑龙江中医药大学药学院,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学药学院,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学药学院,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R282.71植物内生真菌是指在其生活史的某一阶段在植物组织内生活，但没有引起植物明显病害症状的真菌。
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2000 年 2 月
China Journal of Chinese Materia Medica
Feb. ,2000
分 ,加之菌竞争营养 ,对植株生长有较大影响 。E 培 养基适合菌苗共生 ,二者在其上可交换营养物质 ,因 此菌促进苗生长 。C 培养基上接菌与不接菌对苗影 响不如 A ,B ,D , E 培养基明显 ,可能微量元素不是菌 2苗共培养时的主要制约因素 。 3. 4 本实验筛选出的共生培养体系验证了 Hadley (1974) ,Dijk (1995) [2 ] ,Beyrie (1995) [3 ]等实验结果 , 即糖浓度低时有利于兰科植物与内生真菌共生 ,低 氮情况下内生真菌促进兰科植物生长 。这也是本实 验 E 培养基的设计依据 。现已将其应用于研究金线 莲与内生真菌的关系中 。虽然本实验筛选出的共生 培养体系适合兰科植物与内生真菌共生 ,并保持二 者的共生平衡关系 ,但是 ,兰科植物菌根中真菌同寄 主之间共生平衡关系也是有条件的 ,一旦环境条件
在菌2苗共培养的前期约 25～30 d 时 ,94017 菌 对在 MS 和 B 培养基上的金线莲根几乎侵染至全部
·82 ·
皮层细胞 ,而 94005 菌仅侵染根的部分表皮细胞 。 但在 E 培养基上菌苗培养的后期 60 d 时 94017 , 94005 两菌均以菌丝结形式定殖于金线莲根表皮细 胞及少数在皮层最外一层细胞内 ,表皮细胞分布有 大量的菌丝 ,并可见菌丝碎段 。表皮细胞壁及皮层 最外一层细胞壁明显加厚 ,被番红染成红色 ,皮层最 外一层细胞除被菌丝定殖的细胞外 ,其余多中空 ,无 细胞质及细胞核 。皮层及维管组织部分细胞的核明 显膨大 。接种 94005 菌的金线莲根在真菌未侵入 时 ,维管组织周围的皮层细胞内有多糖颗粒累积在 核周围 ,真菌侵入后多糖颗粒减少 ,变为脂肪类物质 累积在核周围 。接种 94017 菌的根细胞内多糖颗粒 在菌丝侵入前后均较接种 94005 菌的多 。 3 讨论与小结 3. 1 共生培养基的筛选 ,在不同培养基上 ,金线莲 苗与真菌生长状态不同 。真菌对金线莲苗生长的影 响也不同 。在全营养的 MS 培养基中菌过于旺盛生 长 ,与苗竞争营养成分和空间 ,并将植物的根全部侵 染 ,影响了苗的生长 。在缺乏一类营养物质的 B ,C 培养基上 ,94005 菌一直未侵染至根内 ,根呈绿色 。 通常兰科植物菌根呈浅黄褐色 、浅黄色或乳白色 。 说明菌与植物根未形成菌根 ,菌与植物未建立共生 关系 ,二者仍是竞争关系 。从表 1 可看出在 B ,C 培 养基上接种真菌均不利于植株生长 。在 D 培养基上 菌2苗均不能很好生长 。说明蔗糖作为碳源是菌与 苗生长必不可少的条件 。E 培养基上菌2苗都能很 好生长 ,且真菌促进苗生长 ,二者可长期共存 。真菌 以菌丝结形式定殖于根表皮细胞及少数皮层最外一 层细胞内 ,植株根浅黄褐色 ,为兰科植物菌根特征 , 说明两种菌均与植物建立了共生关系 ,形成了菌根 。 另外 ,一般认为内生真菌不但可促进植物生长 ,同时 还可防止植物致病菌对其污染 ,因为这些真菌常可 产生抗生素类物质 ,为植物生长创造一个良好微环 境[5] 。
表 1 培养 60 d 时不同培养基上 2 种真菌
对金线莲生长的影响
cm
培养基
未接菌苗 增高
接 94017 菌苗 增高
接 94005 菌苗 增高
A B C D E
注 : n = 3
1. 958 3. 550 1. 817 1. 600 1. 883
1. 150 2. 100 1. 442 0. 900 2. 550
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
第 25 卷第 2 期 中 国 中 药 杂 志
Vol. 25 ,No. 2
[ 收稿日期 ] 1999206218 [ 资助项目 ] 国家自然科学基金资助项目 (39970018)
芽转入 MS 培养基中成苗 ,1～2 个月后 ,苗高 2～ 4 cm ,根长 0. 5～1. 5 cm 。 1. 2. 2 菌种培养 :将真菌接种到平皿麦麸培养基上 培养 7～10 d 。 1. 2. 3 供试培养基 :A1MS 培养基 ;B1MS 培养基 , 无有机成分 ; C1MS 培养基 ,无微量元素 ; D1MS 培 养基 , 无蔗糖 ; E1N H4NO3 825 mg ·L - 1 , KNO3 950 mg·L - 1 ,MgSO4 185 mg·L - 1 ,肌醇 100 mg·L - 1 ,其 它有机成分为 MS 培养基有机成分量的 2/ 3 ,蔗糖 15 g·L - 1 ,其它成分同 MS 培养基 ,琼脂 9 g·L - 1 , p H 518[2～4 ] 。 1. 2. 4 共生培养条件的筛选 :将金线莲无菌苗垂直 插入 5 种供试培养基中 ,每 100 ml 三角瓶中 2 株幼 苗 ,两苗相距 1～1. 5 cm ,培养 10～15 d 时 ,将经麦 麸培养基活化的 94017 ,94005 两种真菌分别用打孔 器 (直径 0. 45 cm) 在菌落表面打取平板菌块 ,然后 用接种针将一平板菌块接种于与两苗相距 3 cm 培 养基上 ,并稍将菌块按入培养基中 。每种培养基均 设对照 (即只接苗不接种真菌) 。每一处理重复 3 瓶 。培养温度 24～25 ℃,光照 150 lx ,光照时间 11 h 。定期观察记录金线莲苗与真菌的生长状态 。 1. 2. 5 接菌后金线莲组织学观察 : 将苗从瓶中取 出 ,洗去培养基 ,切取根段 3～5 cm 固定于 FAA 液 中 。常规石蜡包埋与切片 ,片厚 15μm ,番红固绿染 色 ,光学显微镜观察 。 2 结果和分析 2. 1 不同培养基上菌2苗生长状态
第 25 卷第 2 期 中 国 中 药 杂 志
Vol. 25 ,No. 2
2000 年 2 月
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金线莲与内生真菌共生培养体系的建立
于雪梅 ,郭顺星
(中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 ,北京 100094)
植物材料为金线莲 A . rox bu rghii 无菌苗 。真 菌为分离自兰科植物的内生真菌 ,即解剖发现根细 胞内存在真菌菌丝 。其中 94017 真菌分离自金线 莲 ,94005 真 菌 分 离 自 铁 皮 石 斛 Den d robi u m can2 di d u m Wall. ex Lindl 。 1. 2 方法 1. 2. 1 植物培养 :用金线莲茎段 、茎尖诱导 708 0. 475 2. 100
由表 1 可见 ,A ,B ,C ,D 4 种培养基上接种真菌 的苗增高均低于未接种真菌的苗增高 。E 培养基上 接种 94017 真的苗增高为 2. 1 cm ,高于未接种真菌 的苗增高 (1. 883 cm) 。
在 5 种培养基上 ,接种真菌的金线莲苗增高最 高为 E ,高于其它 4 种培养基 。未接种真菌的金线 莲苗培养 60 d 时 B 增高最高 (3. 55 cm) ,其余依次 为 A ( 1 . 958cm) , E ( 1 . 883cm) , C ( 1 . 8 1 7cm) , D (1. 600 cm) 。 2. 3 接菌后金线莲组织学观察
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在 5 种培养基上 , 94017 真 菌 生 长 速 度 都 较 94005 真菌快 ,这是由真菌自身特性决定的 。在 MS 培养基上 ,两种真菌生长较快 ,94017 菌接种 10d 即 侵染到植株下部茎 1 cm 处 。94005 菌接种 15～20 d 与苗相接触 。培养 25～30 d 时 ,接种 94017 菌的苗 基部出出褐色分泌物 ,接种 94005 菌的苗有的下部 变黑 。培养 60 d 时未接种真菌苗平均增高显著高 于接种真菌的苗增高 。在 B ,C 培养基上 ,94017 菌 与苗共培养 25～30 d 时菌才基本与苗相接触 ,继续 培养 时 , 两 种 菌 的 生 长 速 度 减 慢 , 培 养 60 d 时 , 94005 菌还未与金线莲的根完全接触 ,根仍然呈绿 色 。在 D 培养基上 ,两种真菌几乎不能生长 ,苗后期 变成黄褐色 。金线莲苗细弱 ,且生长速度缓慢 。在 E 培养基上 ,培养 25～30 d 时 ,两种菌与苗相接触 , 培养 60 d 时 ,两种菌都已与金线莲的根完全接触 , 即菌丝包围在根周围 ,根呈浅黄褐色 。在整个培养 过程中 ,植株长势健壮 。继续将两者共培养 6 个月 , 两者仍保持共生状态 。 2. 2 不同培养基上真菌对金线莲的影响(表 1)
[ 关键词 ] 共生体系 ;金线莲 ;内生真菌
兰科植物中有许多名贵花卉和珍稀药用植物 , 并 且 在 自 然 条 件 下 大 都 与 真 菌 共 生 。金 线 莲 A noectochil us rox bu rghii ( Wall. ) Lindl 为兰科花叶 开唇兰属植物 ,为名贵中草药 ,具有清热凉血 、祛风 利湿 、强心 、固肾 、利尿 、平肝 、降血压等功效 。近年 来主要用于治疗高血压 、糖尿病及肿瘤等疑难病症 , 引起医药界的广泛重视 。民间称其为“神药”[1 ] 。由 于该植物自然生态条件独特 ,繁殖率低 ,生长缓慢 , 加上鸟类嗜食 ,特别是近年来对其需求量猛增 ,产区 人们过度采挖 ,使得金线莲野生资源日渐枯竭 。在 野生金线莲的根中 ,我们已观察到内生真菌的存在 。 因此 ,建立金线莲与内生真菌共生培养体系 ,筛选促 进金线莲生长的优良共生菌种 ,进而研究金线莲与 内生真菌的关系 ,对保护金线莲的种质资源 ,研究其 新的栽培繁殖方法具有较大理论意义和应用价值 。 1 实验材料与方法 111 实验材料