免疫学实验：T淋巴细胞转化试验
实验报告 淋巴细胞转化
实验报告淋巴细胞转化
实验报告：淋巴细胞转化
摘要：
本实验旨在探究淋巴细胞的转化过程，通过不同的刺激因素，观察淋巴细胞的分化和功能改变。
实验结果表明，淋巴细胞在不同刺激条件下，具有不同的转化能力，这为深入研究淋巴细胞功能和免疫反应提供了重要的参考。
引言：
淋巴细胞是免疫系统中的重要细胞，具有多种功能，包括抗原识别、抗体产生和细胞毒性等。
在不同的刺激条件下，淋巴细胞可以发生转化，表现出不同的功能和特性。
本实验旨在通过不同的刺激因素，观察淋巴细胞的转化过程，为深入研究淋巴细胞功能和免疫反应提供实验依据。
材料与方法：
1. 采集小鼠淋巴细胞
2. 将淋巴细胞分为不同实验组
3. 对不同实验组的淋巴细胞进行不同刺激处理，如抗原刺激、细胞因子刺激等
4. 观察淋巴细胞的形态变化和功能改变
5. 分析实验结果
结果：
经过不同刺激处理后，观察到淋巴细胞的形态发生了明显的改变，包括细胞大小、形状和表面分子的表达。
同时，经过刺激处理后，淋巴细胞的功能也发生了变化，如抗体产生能力、细胞毒性和细胞因子分泌等。
讨论：
本实验结果表明，淋巴细胞在不同刺激条件下，具有不同的转化能力，这为深入研究淋巴细胞功能和免疫反应提供了重要的参考。
未来可以进一步探究淋巴细胞转化的分子机制，以及在免疫治疗和疾病治疗中的应用前景。
结论：
通过本实验，我们得出结论：淋巴细胞在不同刺激条件下，具有不同的转化能力，这为深入研究淋巴细胞功能和免疫反应提供了重要的参考。
这一研究成果对于深入理解淋巴细胞的功能和应用具有重要意义。
t淋巴细胞转化试验原理
t淋巴细胞转化试验原理哎呀，今天咱们聊聊“T淋巴细胞转化试验”这个话题，听起来有点复杂，其实就是想了解咱们的免疫系统是怎么运作的。
T淋巴细胞，这些小家伙可不是随便的角色，它们在咱们身体里可是扮演着超级英雄的角色，保卫着我们的健康，抵抗那些不速之客，比如病毒和细菌。
这些小卫士可不光靠嘴巴说说，真打起来，真是拼尽全力啊。
想象一下，当你感冒了，身体里那些T淋巴细胞像是接到了召唤令，马上就开始集结。
它们的任务就是识别敌人，发起攻击。
于是，就出现了“转化”这一过程。
这个转化呀，简单来说就是T细胞在受到刺激后，像变魔术一样，从休眠状态变成了战斗状态。
想象一下，平时它们在沙发上吃零食，突然听到敌情来袭，立刻变身，穿上盔甲，准备上战场。
这个过程的关键在于抗原，听起来像是个高大上的词，其实就是指那些入侵者身上的“身份证”。
T细胞通过这些抗原，判断敌人是谁。
当它们识别出敌人后，就开始快速增殖，像是聚会时突然多了很多新朋友，大家伙都围在一起，热火朝天。
为了测试这些小家伙的反应能力，科学家们发明了T淋巴细胞转化试验。
在这个试验中，科学家们会给T细胞提供一些刺激物，像是抗原或者细胞因子。
就像是给它们打了一针兴奋剂，嘿，立刻活力四射。
试验的结果可以告诉我们这些T细胞有多敏感，能不能有效地应对入侵者。
如果它们反应强烈，那就说明免疫系统工作得很好，健康状态也不错；如果反应弱，那可就得注意了，可能免疫系统有点儿“懒散”。
这个试验不仅对研究免疫反应有帮助，还可以用来判断一些疾病，比如自身免疫病、感染性疾病，甚至肿瘤。
通过观察这些细胞的转化情况，医生们可以更好地了解患者的健康状况。
这可比查个血压强多了，不是吗？。
说到这里，很多小伙伴可能会问，这个试验安全吗？放心，经过多年的研究和应用，科学家们早就把这些搞得有模有样了。
试验过程简单、快捷，几乎没有副作用，像是在做个简单的身体检查，心里有底了，再也不怕那些细菌、病毒来了。
再说说这个试验的实际应用，特别是在疫苗研究上。
淋巴细胞转化实验报告
淋巴细胞转化实验报告
《淋巴细胞转化实验报告》
淋巴细胞是一种重要的免疫细胞，它们在体内起着重要的免疫监测和调节作用。
淋巴细胞的转化实验是一种常用的实验方法，用于研究淋巴细胞的功能和活性。
在本次实验中，我们对淋巴细胞进行了转化实验，并得到了一些有趣的结果。
首先，我们从实验动物的淋巴组织中分离出淋巴细胞，并将它们培养在含有适
当营养物质的培养基中。
随着培养时间的延长，我们观察到淋巴细胞的数量逐
渐增加，并且它们的形态也发生了变化。
在显微镜下观察，我们发现淋巴细胞
的形态由圆形变为椭圆形，胞质增加，胞核变大。
这表明淋巴细胞在培养基中
得到了充分的营养和生长条件，从而发生了细胞转化。
接下来，我们对转化后的淋巴细胞进行了功能性实验。
我们使用了一种常用的
淋巴细胞激活试剂，刺激转化后的淋巴细胞，然后观察它们的反应。
我们发现，转化后的淋巴细胞在受到刺激后，迅速产生了细胞因子，并且开始增殖和扩散。
这表明转化后的淋巴细胞具有了充分的免疫活性，并且能够有效地应对外界的
刺激。
最后，我们对转化后的淋巴细胞进行了表型分析。
我们使用了流式细胞术对细
胞进行了分析，发现转化后的淋巴细胞表面的免疫分子表达水平显著增加，这
进一步证实了它们的免疫活性得到了提高。
通过本次实验，我们成功地进行了淋巴细胞转化实验，并得到了一些有意义的
结果。
这些结果不仅对于淋巴细胞的功能和活性有重要的启示，也为我们进一
步研究免疫细胞的活性和调节机制提供了重要的参考。
希望通过我们的努力，
能够为免疫学领域的研究和临床应用做出更大的贡献。
T淋巴细胞转化试验步骤及注意事项
淋巴增殖实验:第一种，取外周血和脾脏分离淋巴细胞用于淋巴增殖实验,具体步骤如下⑴雏鸡翅下釆血2mL,加入1mL抗凝血和1mLPBS的混合液,混合均匀后,缓缓加入装有2mL淋巴细胞分离液的无菌透明的大离心管中,不要摇晃,注意血液与淋巴细胞分离液不要混合,2000rpm,离心20min,可以看见中间有层白色雾状白细胞,吸取白细胞至2inL离心管中,2000rpm离心5min取沉淀;(2)向离心管中加入1mL 1640清洗2遍,2000rpm离心5min取沉淀;⑶将沉淀悬于1mL DMEM,细胞计数板计数,取 1 xlO7个细胞悬于ImLPBS中,置于37°C培养箱中用CFSE (终浓度2gM)避光染色lOmin,每隔2-3min上下颠倒一次;(4)DMEM洗漆细胞2次,每次1mL,2000rpm离心6-7min;(5)悬于1mL DMEM 中;(6)取5xl05个细胞置于96孔板,同时加入20μ30μg/m的ConA,DMEM补齐至200μL,4℃二氧化碳培养箱诱导3d;(7)流式专用buffer洗涤2次,2000r离心5min,200μbuffer悬起,流式细胞仪检测。
取1小块脾脏加入1mL 1640研磨,脾脏细胞先用200μL红细胞裂解液作用5min,2000rpm离心5min,计数,之后重复上述步骤。
第三种，外周血液 T、B 淋巴细胞增殖功能测定——MTT 测定法1. 外周血液淋巴细胞悬液的制备无菌采取外周血液，以淋巴细胞分离液密度梯度离心法(2000r/min，20min)分离淋巴细胞，再用 RPMI1640 培养液离心洗涤(1500r/min，10min)淋巴细胞 3 次，用台盼兰拒染法检测细胞活率＞95％，同时进行细胞计数，用 RPMI-l640 完全培养液调细胞浓度至1×107/ml。
2. 外周血液 T 淋巴细胞增殖功能测定于 96 孔微量培养板每孔加入50µl含20µg/m1 ConA 的 RPMI1640 培养液，对照孔只加 RPMI1640 培养液。
T淋巴细胞转化试验
弃上清， 弃上清，用残液将沉淀细胞混匀配成悬液
滴片，姬姆萨染色， 滴片，姬姆萨染色，油镜观察
结 果 观 察
转化细胞： 转化细胞：
• 淋巴母细胞： 淋巴母细胞：
体积大，核膜清楚， 体积大，核膜清楚，染色质疏松呈细 网状， 细胞比例变小。 网状，核/细胞比例变小。
判定结果
实 验 材 料
肝素抗凝血 Hank‘s液 淋巴细胞分层液 PHA 细胞计数板 显微镜
操 作 步 骤
淋巴细胞的分离
用Hank’s液配成 液配成 1×106细胞 的淋 × 细胞/ml的淋 巴细胞悬液。 巴细胞悬液。
加PHA 5ug/ml
阴性对照：不加PHA 阴性对照：不加PHA
分别加入24孔细胞培养板，培养72小时 分别加入24孔细胞培养板，培养72小时 24孔细胞培养板 72
实 验 原 理
T淋巴细胞与许多特 异或非特异抗原在体 外共同培养时， 外共同培养时，细胞 的代谢和形态可以发 的代谢和形态可以发 生一系列的变化: 生一系列的变化: 细胞形态向淋巴母细 胞的转化 转化。 胞的转化。 电荷的改变、 电荷的改变、 细胞内蛋白质和核酸 合成的增加、 合成的增加、
未转化细胞
T淋巴细胞转化试验
(T lymphocyte transformation test)
中山医学院免疫学Biblioteka 研室实验目的和要求掌握T淋巴细胞转化实验的原理; 掌握 淋巴细胞转化实验的原理; 淋巴细胞转化实验的原理 掌握细胞计数的方法。 掌握细胞计数的方法。 细胞计数的方法 熟悉能引起T淋巴细胞发生转化 熟悉能引起T 的常用抗原性物质及其特点; 的常用抗原性物质及其特点;
转 化 率 计 算
t淋巴细胞转化实验报告
t淋巴细胞转化实验报告猪淋巴细胞转化实验猪淋巴细胞转化实验1.采集抗凝血每个10ml注射器吸入100ul肝素钠抗凝剂（20mg/ml），每个样品无菌采血5-8ml。
（保存在4°环境，从猪场回来最好放在冰盒中）2、淋巴细胞分离，采集的肝素抗凝外周血液（肝素用量20U/mL），可采用以下方法进行分离。
（1）Ficoll-Comray（聚蔗糖——泛影钠）分离淋巴细胞法：用10毫升的试管，加入4毫升淋巴细胞分离液（比重介于1.0-1.090之间），在这种分层液的界面上，轻轻加入4毫升左右肝素化的血液，千万不要打乱两液间的液面。
然后用1500rpm，离心15分钟。
此时即可见到液体分为四层。
最下层是红细胞和粒细胞，分层液在它的上层，最上层是血浆层。
淋巴细胞在血浆层和分层液之间，淋巴细胞多时，可呈现一层乳白层。
用移液器直接插入淋巴细胞分层液吸取淋巴细胞 1.5mlEP管中，充分混匀，2000rpm离心10分钟，弃去上清，即获得纯淋巴细胞，可加入适量HanK’S液进行计数，应用浓度为1-2×106/mL，每份需用1毫升。
（2）红细胞裂解法用10毫升的试管加入8ml的Tris-MH4C1红细胞裂解液，然后加入2-4ml抗凝血，室温放置20min（每各5min上下缓慢摇匀一次），后1500rpm离心10min，弃掉上清，用HanK’S液混悬细胞进行计数（如果红细胞很多，可以再用5ml裂解液裂解一次）。
应用浓度为1-2×106/mL，每份需用1毫升。
3.流式细胞仪检测CD3/CD4/CD8步骤待血液样品和灌注液样品都计数完毕后，吸取一定体积含有106的细胞悬液，1500rmp离心3min，弃掉上清液，加入用PBS混匀的含有CD3/CD4/CD8混合抗体的反应液80ul，混匀后4℃反应30min。
待反应过后，1500rmp离心3min，用100ul移液器吸弃上清，然后加入0.5ml含有1-2%胎牛血清的PBS液，混合均匀，1500rmp离心3min，后用100ul移液器吸弃上清。
t淋巴细胞转化实验报告
t淋巴细胞转化实验报告淋巴细胞转化实验是一种体外培养方法，用于研究免疫细胞对不同物质的反应，包括抗原、细菌、病毒等。
本实验采用人体外周血淋巴细胞作为材料，通过添加激动剂使其转化为体外培养的淋巴母细胞，然后进行免疫学研究。
本报告将对本实验的过程和结果进行描述和分析。
实验步骤1.收集外周血从正常成年人的静脉血收集外周血，将其分装到离心管中。
用 PBS 冲洗红细胞，使淋巴细胞纯化后采集上清液。
2.细胞数计数采用血细胞盘进行计数，每个实验需要约 4-6万个淋巴细胞，取相应数量的细胞用1640 培养基含有 10% 胎牛血清的细胞密度中稀释。
3.淋巴细胞培养将稀释的淋巴细胞在细胞密度2 × 10^5/ml 的情况下播种在 96 或 48 孔板的深孔中，然后加入不同的激动剂，如激活剂、抑制剂、细胞因子等，同时添加乙酰溴芬酸作为负对照组。
4.腺病毒载体转染在淋巴细胞培养的第 2，3 天，加入适量的腺病毒载体（MOI 为 50），接种24 h 后用媒介液冲洗并更换新的培养液，然后让细胞继续培养。
5.淋巴细胞功能检测对于 CD4+ T 细胞和 CD8+ T 细胞，通过检测它们的增殖和检测分泌的细胞因子的表达来评估激动剂的效应。
在体外转化过程中，通过荧光PCR技术检测核因子-κB 和JAK/STAT 信号通路的激活。
实验结果本实验采用血细胞盘计数，每个实验需要约 4-6 万个淋巴细胞。
将这些细胞培养在96 或 48 孔板的深孔中，添加不同的激动剂，保持在合适的细胞密度。
添加适当的激动剂，可以在淋巴细胞转化的过程中发现一系列的细胞反应，如细胞增殖，细胞因子的分泌等。
实验分析本实验是一项重要的免疫学研究方法，可以用于检测免疫细胞（如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞）对外来物质的反应。
适当地添加激动剂，可以诱导免疫细胞在体外转化成淋巴母细胞，从而在体外模拟免疫反应过程。
在本实验中，采用了血细胞盘计数，这是一种传统的细胞计数方式。
T淋巴细胞转化实验 ppt课件
T淋巴细胞受到PHA作用后发生活化增殖， 其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高，四甲 基噻唑蓝（MTT）作为其底物参与反应，被催 化形成蓝紫色结晶甲臢(fomazan) ，经盐酸─异 丙醇或溶解后为蓝色溶液。甲臢的形成量与细胞 增殖活化的程度呈正相关。
ppt课件
31
试剂与器材
1. RPMIl640 培养液 。 2. 植物血凝素（PHA）。
ppt课件
8
试剂与器材
3. 姬姆萨染液。 4. 标本 肝素抗凝人外周静脉血。 5．器材 细胞培养瓶、CO2培养箱、超净台、高
压灭菌器、无菌过滤装置、离心机、显微镜等。
ppt课件
9
操作步骤
外周血0.2ml
PHA
无PHA
5%CO2 37℃ 72h 1500rpm 离心10min
吸取白细胞层涂片ppt课件24 2 ．淋巴细胞转化率的计算：按上述分类检查推片头、体、尾三部 分，分别计数淋巴母细胞、过渡型母细胞和核有丝分裂相细胞以及 成熟的小淋巴细胞，以前三者为转化细胞，每份标本计数200个细胞， 按下列公式计算转化率：
ppt课件
25
转化率
转化的淋巴细胞数 转化和未转化的淋巴细
胞数
100%
15
四、结果观察
可以见到以下几种类型细胞 (1) 成熟的小淋巴细胞：与未经培养的小淋巴细胞一样为 6 -8
um ，核染色致密，无核仁，核与胞浆比例大，胞浆染色为轻度嗜碱 性。
ppt课件
16
ppt课件
17
淋巴细胞标志及功能检测
龚道科
2002.4
(2) 淋巴母细胞：
细胞体积增大，约 20 - 30 um ，形态不整齐，常有小突出，核 质染色疏松，有核仁 l - 2 个，胞浆变宽，常出现胞浆空泡。
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转化率
转化的淋巴转细化胞的数淋 未巴转细化胞的数淋巴细胞数100%
3H-TdR掺入法
然后用1000ul加样器隔着纱布将脾细胞悬液吸出，放入50ml无菌离心管中，再分 别用1ml培养液冲洗纱网和平皿，并将细胞悬液吸出，放入同一50ml离心管中， 剩余3ml培养液备用。 4. 2000rpm，常温离心6分钟，弃上清，加3ml含血清1640培养液重悬细胞。
➢ 细胞计数
1. 取上述制备好的细胞悬液混匀后取出20ul，加到盛有980ul计数液的EP管中，混 匀后取出20ul到一个新的EP管中，再向其中加入20ul台盼蓝染料，混匀后取20ul 计入到细胞计数版上，在显微镜下计数，计数方法见后。
第三天
1.取出96孔板加入MTT (5mg/ml) 20ul/孔 2. 5% CO2 37℃，继续培养2小时。 3. 2000rpm，离心10min。小心弃去上清，加入100ul/ 孔 DMSO振荡，使颗粒全部溶解。 4.酶标仪测吸光度值：OD490nm 5.结果判定：SI=ConA孔OD值/对照孔OD值
A,SPA)（人B） 美洲商陆（pokeweed mitogen, PWM)
常用的检测方法
➢ 形态学观察法 ➢ 3H-TdR（3H-胸腺嘧啶核苷）掺入法 ➢ MTT法 (四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）
本次实验采用 MTT法
形态学检测方法
➢ 淋巴母细胞主要表现有体积明显增大，是成熟淋巴细胞的 3~4倍；染色质疏松，核仁清晰可见；胞浆丰富并形成空泡。
操作流程
无菌取脾
研磨成单细胞悬液+1640 （无FBS)
细胞计数【?/ml】 取20ul细胞+980ul的1W1640
混匀后取出20ul细胞+20ul台盼蓝 小心弃去上清，加入100ul/ 孔 DMSO振荡，使颗粒全部溶解
酶标仪测吸光度值： OD490nm
结果判定：SI=ConA孔OD值/对照孔OD值
T淋巴细胞转化试验
Mar. 5, 2013
主要内容
➢实验分组及材料 ➢实验原理 ➢检测方法 ➢主要操作步骤 ➢结果判定
实验分组及材料
➢分组：每组4人
原理
Lymphocytes(B/T) mitogens Proliferation Nucleic Acid↑ Specificity Ag transformation Protein ↑ lymphoblast
活/增殖 期的细胞
线粒体 能量代谢
MTT掺入
琥珀酸脱氢酶
MTT
还 原
测OБайду номын сангаас490值
溶解
DMSO
细胞内/周围
甲臢颗粒 formazan
SI
ConA 刺激管OD值 对照管 OD值
操作流程
第一天
1. 杀鼠、 取脾、捣碎、 获得细胞、 计数 2.细胞稀释（1×107）， 上样 （100ul/孔） 3. ConA 的梯度稀释，上样 （100ul /孔） 4.将96孔板置于细胞培养箱，做好标记，5%CO2 37℃ 培养48小时。
调细胞浓度
1×107个 /ml
2000rpm 10min
加板(三复孔) (加法见附图)
5%CO2 37℃培养48 小时
培养终止前2小时加入MTT (5mg/ml) 20ul/孔
5% CO2 37℃ 继续培养2小时
实验步骤
➢ 单细胞悬液的制备
1. 小鼠脱臼处死，75%酒精浸泡消毒2-3分钟。 2. 于超净台内取出脾组织，放入预先盛有5ml无血清1640培养液的平皿内。 3. 用纱网包裹住脾组织，将脾剪成小块，用5ml注射器塞轻压使脾细胞透过纱网。
2. 用含血清1640培养液调细胞浓度至1×107/ml，每组所需总量为4ml（此步可使用 之前装无血清培养液的离心管）。
实验步骤
➢T细胞在PHA或ConA刺激下转化为淋巴母细胞，同时DNA和 RNA合成明显增加，此时将同位素3H标记的胸腺嘧啶核苷（ 3H-TdR ），加入培养液内，则被作为DNA原料摄入到转化的 细胞内，测定细胞内掺入DNA中的3H-TdR的放射性相对数量 （以脉冲数cpm表示）可用来表示转化率的高低。 ➢测定低能量3H的放射性需用液体闪烁计数器。
T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体， 在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。
有丝分裂原
➢ 有丝分裂原（mitogen）来自植物蛋白或细菌产 物，它能与多种细胞膜糖类及寡糖基分子结合， 后者为丝分裂原受体、结合后能促使细胞活化和 诱导细胞分裂。
➢ T和B细胞表面都有分裂素受体，在体外可非特 异性刺激静止淋巴细胞向淋巴母细胞转化。这种 转化细胞DNA合成增加，出现细胞体积增大， 胞浆增多，嗜碱性以及产生有丝分裂等形态变化。
G0
有丝分裂原 特异性抗原
G1
3H-TdR
S
New DNA
Pr,RNA,DNA 前体物质
DNA↑↑
3H-TdR TdR
cpm
SI
ConA 刺激管cpm值 对照管 cpm 值
MTT法
MTT法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。MTT是 一种噻唑盐，化学名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二 苯基溴化四唑，水溶液为黄橙色。小鼠脾细胞受到 ConA作用后发生增殖活化，其胞内线粒体琥珀酸脱氢 酶活性相应升高，MTT作为其底物参与反应，形成蓝色 的甲臜（Formazan）颗粒沉积于细胞内或细胞周围，用 二甲亚砜(DMSO)溶解所生成的甲臜颗粒，其生成量与 细胞数目和/或细胞活性呈正相关，通过检测490nm处 光密度值变化，可间接反映细胞生长及增殖活性。
常用的丝裂原
➢T cell proliferation
植物血凝素（phytohemagglutinin, PHA)(人T） 刀豆素A（concanavalin, ConA）（鼠T） 美洲商陆（pokeweed mitogen, PWM)
➢B cell proliferation
脂多糖（lipopolysaccharide, LPS)(鼠B） 金黄色葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein