马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基配制共25页
马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基配制课件
药用真菌培养
在药用真菌培养中，PDA培养基也得到了广泛应用，如灵芝 、冬虫夏草等。通过PDA培养基的精心配制和优化，可以获 得高质量的药用真菌菌丝体，为中药材的制备提供原料。
马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)培养基配制 课件
contents
目录
• PDA培养基简介 • PDA培养基的配制 • PDA培养基的使用方法 • PDA培养基的应用实例 • PDA培养基的优化与改进 • PDA培养基的发展前景与展望
01
PDA培养基简介
PDA培养基的定义
01
PDA培养基是一种常用的真菌培 养基，由马铃薯提取物、葡萄糖 和琼脂粉组成。
02
它是一种半固体培养基，用于支 持真菌的生长和繁殖。
PDA培养基的用途
PDA培养基广泛应用于真菌的分离 、纯化和鉴定。
它也是研究和了解真菌生物学特性的 重要工具。
PDA培养基的发展历程
PDA培养基由法国微生物学家查尔斯·路易斯·帕尼埃（Charles Louis Pastier）于 1880年代发明。
改进保存方式
优化PDA培养基的保存条 件和方法，延长其保存期 限，方便使用。
标准化与质量控制
制定PDA培养基的标准操 作程序和质量标准，确保 培养基的质量和可靠性。
06
PDA培养基的发展前景与 展望
PDA培养基的发展趋势
高效化
随着微生物培养技术的不断发展 ，PDA培养基的配方和制备工艺 将不断优化，提高培养效率，缩
2. 煮沸马铃薯
将切好的马铃薯块放入锅中，加水 煮沸15-20分钟，直到马铃薯变软。
马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基
马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基
021050 马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基
(Potato Dextrose Agar)
(Potato dextrose agar medium with antibiotics)
PDA培养基用途：
供霉菌和酵母菌计数及分离培养(GB4789.15-2010和ISO标准)。
原理：
马铃薯浸出粉有助于各种霉菌的生长;葡萄糖提供能源;琼脂是培养基的凝固剂;氯霉素可抑制细菌的生长。
PDA培养基配方(每升)：
马铃薯 300g(从中提取浸出粉)
葡萄糖 20g
琼脂 15g
氯霉素 0.1g
最终pH 6.0±0.2
PDA培养基使用方法：
1、称取PDA培养基40.1g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌20min，备用。
2、霉菌和酵母菌计数时，参照环凯021030高盐察氏琼脂培养基使用方法。
3、用于霉菌分离鉴定，参照环凯021020察氏琼脂。
PDA培养基质量控制：
PDA培养基倾注平皿，下列菌株接种后25—28℃培养72h生长情况如下表。
贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
贮存期三年。
实验室常用培养基
．常用培养基的制备（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基培养真菌最常用的培养基，成分如下：去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15－20g 水1000 ml配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。
配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。
如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g 琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。
标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。
培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。
（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA）是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。
成分如下：酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖（或葡萄糖）l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。
（3）玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润，加棉花塞后灭菌。
天然培养基一般不必调整pH。
（4）查氏（Czapek）培养基查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5gFeSO4 0．01g 蔗糖30g水1000ml（5）灭菌水的配制蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。
PDA培养基
用 法： 1． 称取本品 46.0g，加入 1000ml 蒸馏水中， 115℃高压灭菌 20 分钟。 2． 取适宜稀释度样品液 1ml，加入到无菌 平皿中心，将冷至 45~50℃的 PDA 15~20ml 倾注于平皿中。旋转 平皿将培养基 与样液充 分混匀。 3． 凝固后，翻转平板，置于 36±1℃培养 40~48h。
使用须知： 请在培养基保质期内使用。
质量控制：
1． 外观
此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性。制备
好的平板呈透明无色或淡黄色。
2． 微生物实验
在 36 ±1 ℃培养 40~48 h：
质控菌株
CMCC 生长情况 菌落颜色 沉淀环
酵母菌
+++
白色
-
黑曲霉菌
98003
+++
黑色
-
马铃薯葡萄糖琼脂 Potato Dextrose Agar（PDA）
用 理：
产品编号： AKF003
容 量：250g
成 分：（g/L） 马铃薯浸粉･･････････････････････6.0g 葡萄糖･････････････････････････20.0g 琼脂･･･････････････････････････20.0g pＨ值 5.6±0.2･･･････････････････25℃
简述pda培养基的配方及制作方法
简述pda培养基的配方及制作方法
PDA（Potato Dextrose Agar）是一种常用的培养基，适用于许多真菌和霉菌的培养。
PDA培养基的配方通常包括以下成分：
1. 马铃薯浆（土豆）：200克
2. 葡萄糖：20克
3. 琼脂：15克
4. 葡萄糖酸钠：2克
5. pH值调整至5.6-5.8的蒸馏水：1000毫升
制作方法如下：
1. 将马铃薯洗净削皮切块，加入适量的蒸馏水中，煮至变软。
2. 将煮熟的马铃薯放在纱布上，挤出浆汁，过滤收集。
3. 将收集到的土豆浆汁与葡萄糖、葡萄糖酸钠一起加入适量的蒸馏水中，调整pH值至5.6-5.8。
4. 加热溶解琼脂，在水浴中加热至完全溶解。
5. 将溶解后的琼脂加入到马铃薯浆汁中，充分混合。
6. 用自动称量系统将培养基分装到培养器中，或将培养基倒入无菌培养皿中。
7. 用高压灭菌器对培养基进行高压灭菌，常压下灭菌20分钟或121摄氏度下高压灭菌15分钟。
8. 灭菌后培养基在室温下冷却，凝固后即可使用。
制备好的PDA培养基可用于真菌和霉菌的分离和培养，在无菌条件下进行操作，避免细菌和其它污染物的污染。
PDA培养基的配制方法
PDA培养基的配制方法PDA（Potato Dextrose Agar）是一种常用的培养基，广泛用于真菌和霉菌的培养及鉴定。
以下是用于制备PDA培养基的配制方法。
1.准备所需材料和设备-马铃薯：5个中等大小的马铃薯-葡萄糖：20克-洁净水：1升- 环境灭菌器（autoclave）-秤和容器-酸性pH试纸-移液管-培养皿或试管-实验室纸2.前期准备-将马铃薯洗净并削去外皮。
然后切成薄片，约0.5-1厘米的厚度。
-将锅中的水煮沸，将准备好的马铃薯片放入沸水中煮10分钟。
煮熟的马铃薯要输送到室温。
-将煮熟的马铃薯捣碎，以去除固体残渣。
3.配制PDA培养基-在一个用适量的水洗净和灭菌的容器中称取适量的煮熟马铃薯制得的马铃薯糊。
-摄取10%的葡萄糖。
-将容器放在烧杯中，并在烧杯中添加适量的洁净水，直到容器中的总容积为1升。
-使用酸性pH试纸检查pH值，并将其调整至5.6-5.8的范围内，通过加入少量的1MHCl或1MNaOH。
-用实验室纸过滤培养基，以去除留在溶液中的固体残渣碎片。
-用环境灭菌器将培养基装在培养皿或试管中。
对于培养皿，约20-25毫升的培养基足够；对于试管，约为10毫升。
4.灭菌-将装有培养基的容器放入环境灭菌器中。
-设置灭菌温度为121°C，灭菌时间为15分钟。
-等待完全冷却后，取出培养基容器。
5.储存-将已灭菌和冷却的培养基存放在冰箱中，以避免细菌和真菌的污染。
-培养基通常可以储存在2-4°C的冰箱中，可保持约1-2个月。
注意事项：-在配制PDA培养基的过程中，需要严格遵守无菌技术和操作规范，以避免污染。
-培养基pH值的准确控制对于真菌和霉菌的生长至关重要。
-灭菌温度和时间需要根据实验室设备的不同进行调整，以确保完全灭菌。
-培养基的储存条件是保证其质量和无菌性的关键，需要避免高温、阳光暴露以及其他潜在的污染源。
总结：配制PDA培养基需要用到马铃薯、葡萄糖和水，通过煮马铃薯、制取马铃薯糊、加入葡萄糖并调整pH值，最后经过灭菌和储存，制得一种适用于真菌和霉菌培养的PDA培养基。
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基配制
三、菌种生产常用的设备和用具 6、常用的消毒药品 、
石炭酸： ⑷ 5%石炭酸： 喷洒墙壁 、 地面及擦洗桌面等 ， 也 石炭酸 喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等， 可用来苏尔代替； 可用来苏尔代替； ⑸ 2%来苏尔、新洁尔灭：用法同上； 来苏尔、 来苏尔 新洁尔灭：用法同上； 甲醛（福尔马林） ⑹ 甲醛 （ 福尔马林 ） ： 用于菇房和接种箱等空气消 毒； 方法：关闭门窗消毒，自行气化； 方法：关闭门窗消毒，自行气化； 用量： 甲醛＋ 立方米。 用量：10ml甲醛＋5g KMnO4／立方米。 甲醛
四、母种生产技术
②综合马铃薯培养基 马 铃 薯 200g 、 葡 萄 糖 （ 或 蔗 糖 ） 20g 、 KH2PO4 2g、MgSO4 0.5g、维生素B1 10mg、 、 、维生素 、 琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然。 自然。 琼脂 、 、 自然 适合培养草菇、猴头菌、 适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌 种分离、保藏。 种分离、保藏。
四、母种生产技术
食用菌母种培养基的种类繁多， 食用菌母种培养基的种类繁多 ，由于不同营养 类型的食用菌对营养物质的要求不同， 所以， 类型的食用菌对营养物质的要求不同 ， 所以 ， 在 培养不同食用菌母种时， 培养不同食用菌母种时 ， 应选择适宜该菌种的培 养基。 养基。 母种培养基要求营养丰富、 完全、 氮源、 母种培养基要求营养丰富 、 完全 、 氮源 、 维生 素的比例应高。 素的比例应高。 现将食用菌常用的母种培养基列举如下 ：
pda培养基的配制方法流程
1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)马铃薯(去皮)200g葡萄糖20g琼脂20g水1000mLpH值自然PDA培养基配制注意事项1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。
对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。
如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。
调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。
4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。
15:49:27太珥日2016-4-26 15:49:27PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
它属于固体培养基、半合成培养基。
PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。
PDA培养基的配制(1)称量和熬煮按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
(4)加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。
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锅
原种培养基 。
2）、3）一般在菌种场或研究所应用。
优点：省时、省燃料、 效果好
灭菌设备
Ⅰ高压蒸气灭菌锅
三、菌种生产常用的设备和用具
2、灭菌设备
Ⅱ 常压灭菌锅
目前农村生产栽培种的必备设备，实际上 是一种大型蒸笼式煮灶。底部为铸铁大锅， 上部为圆形木桶，桶内装数层供放培养基的 格架。桶盖装有活络搭及密闭的橡皮圈，由 于锅内温度最高是100℃，所以灭菌时间需维 持10~12h，才能达到灭菌效果。
母种培养基要求营养丰富、完全、氮源、维生 素的比例应高。
现将食用菌常用的母种培养基列举如下 ：
四、母种生产技术
（一）母种培养基 ①马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、琼 脂20g、H2O 1000 mL、pH 6.5。
适用于一般食用菌母种分离与培养，但草 菇、猴头菌等在此培养基上生长不良。
4）菌种：实质上就是经过人工培养并进一步 繁殖的食用菌的纯菌丝体。
二、食用菌的制种程序
种菇
孢子分离 组织分离
接种→母种（一级） 接种→培养→原种（二级）
培养
接种→→栽培种（三级）
经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。
一般1支试管菌种可繁殖4~6瓶原种，每瓶原种又 可扩大繁殖60~100瓶栽培种。
母种
原种和 栽培种
三、菌种生产常用的设备和用具 1、接种设备 ⑴ 接种室 ⑵ 接种箱 ⑶ 超净工作台
超净工作台
三、菌种生产常用的设备和用具
2、灭菌设备
Ⅰ
1）手提式：容量小，适于斜面试
高
管及玻璃器皿等；
压 蒸
2）立式： 容量大，投资大；
气 灭
3）卧式：容量大，投资大；
菌
4）家用24或26 cm压力锅：母种、
三、菌种生产常用的设备和用具 6、常用的消毒药品
⑷ 5%石炭酸：喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等，也 可用来苏尔代替；
⑸ 2%来苏尔、新洁尔灭：用法同上；
⑹甲醛（福尔马林）：用于菇房和接种箱等空气消 毒；
方法：关闭门窗消毒，自行气化；
用量：10ml甲醛＋5g KMnO4／立方米。
四、母种生产技术
食用菌母种培养基的种类繁多，由于不同营养 类型的食用菌对营养物质的要求不同，所以，在 培养不同食用菌母种时，应选择适宜该菌种的培 养基。
实验一 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基配制
一、食用菌菌种种类
人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。
1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分 离等培育的菌丝体称为母种。
2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、 棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。
3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成 为生产上使用的菌种称为栽培种。
（3） 作业
（1）每人制5支试管斜面。 （2）什么叫食用菌菌种？它又有哪些类型？ （3）食用菌菌种生产常用的设备和用具有哪些？ （4）写出食用菌的制种程序。 （5）常用的消毒药品有哪些？
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四、母种生产技术
②综合马铃薯培养基
马 铃 薯 200g 、 葡 萄 糖 （ 或 蔗 糖 ） 20g 、 KH2PO4 2g、MgSO4 0.5g、维生素B1 10mg、 琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然。 适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌 种分离、保藏。
四、母种生产技术
③胡萝卜葡萄糖琼脂培养基 胡萝卜200g、葡萄糖（或蔗糖）18~20g、
三、菌种生产常用的设备和用具
3、培养设备 ⑴ 培养室 ⑵ 生化培养箱
三、菌种生产常用的设备和用具
4、培养菌种的容器
母 种 ： 试 管 ， 常 用 规 格 20×180~200mm ， 18×180mm等。
菌种瓶：盐水瓶、罐头瓶
原种、栽培种 菌种袋
聚丙稀袋 聚乙稀袋
规格有：12~15×30~35 cm， 17×35H自然。
⑵ PDA培养基配制方法
马铃薯（去皮、去芽眼）→切成片（玉米大小）→ 称取200g＋1000mL H2O→煮沸15-20min →双层纱布 过滤→取滤液并补足1000mL＋琼脂→熔化＋其它营 养物质→调节pH（用HCl或NaOH）→分装试管→塞 上棉塞→捆扎→灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）→制 成斜面→检查灭菌效果（即28~30℃培养2~3d）
菌种瓶
三、菌种生产常用的设备和用具
5、接种工具
移植菌种于培养基上的工具称接种工 具，主要有以下几种：
接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；
三、菌种生产常用的设备和用具 6、常用的消毒药品
⑴ 70%酒精：一般用于手、种菇表面消毒；
⑵ 0.1%升汞：常用于玻璃器皿、非金属器械 及种菇表面消毒；
⑶ 0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消毒；