《生物制药技术》实验
《生物制药技术》实验指导-实验三、四
《生物制药技术》实验指导实验三四环素、金霉素的薄层层析鉴定（验证型）实验目的：掌握薄层层析的原理，四环素族抗生素的定性鉴定方法。
实验原理：层析（色谱，chromatograpby）是相当重要、且相当常见的一种技术，在把微细分散的固体或是附着于固体表面的液体作为固定相，把液体（与上述液体不相混合的）或气体作为移动相的系统中（根据移动相种类的不同，分为液相层析和气相层析二种），使试料混合物中的各成分边保持向两相分布的平衡状态边移动，利用各成分对固定相亲和力不同所引起的移动速度差，将它们彼此分离开的定性与定量分析方法，称为层析，亦称色谱法。
用作固定相的有硅胶、活性炭、氧化铝、离子交换树脂、离子交换纤维等，或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体。
将作为固定相的微细粉末状物质装入细长形圆筒中进行的层析称为柱层析（column chromatography），在玻璃板上涂上一层薄而均的支持物（硅胶、纤维素和淀粉等）作为固定相的称为薄层层析（thin layer chromatography），或者用滤纸作为固定相的纸上层析。
层析根据固定相与溶质（试料）间亲和力的差异分为吸附型、分配型、离子交换型层析等类型。
但这并不是很严格的，有时常见到其中间类型。
此外，近来也应用亲和层析，即将与基质类似的化合物（通常为共价键）结合到固定相上，再利用其特异的亲和性沉淀与其对应的特定的酶或蛋白质。
分配层析在支持物上形成部分互溶的两相系统。
一般是水相和有机溶剂相。
常用支持物是硅胶、纤维素和淀粉等亲水物质，这些物质能储留相当量的水。
被分离物质在两相中都能溶解，但分配系数不同，展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。
一种溶质在两种互不混溶的溶剂系统中分配时，在一定温度下达到平衡后，溶质在固定相和流动相溶剂中的浓度之比为一常数，称为分配系数。
当欲被分离的各种物质在固定相和流动相中的分配系数不同时，它们就能被分离开。
分配系数大的移动快（阻力小）。
生物技术制药试验
生物技术制药实验武汉大学药学院生物技术实验室湖北·武汉目录实验一质粒DNA的小量制备 (2)实验二质粒DNA电泳鉴定 (4)实验三感受态细胞的制备和转化 (5)实验四目的基因的表达及表达产物的初步提取 (8)实验五蛋白质纯化—盐析沉淀法 (10)实验六凝胶过滤层析 (14)实验七蛋白质免疫印迹实验（Western Blotting） (16)实验八HRP结合物的过碘酸钠交联法 (19)实验一质粒DNA的小量制备【目的】学会最常用的碱裂解法小量制备质粒DNA的方法。
【原理】根据共价闭合环状质粒DNA和线性DNA在拓扑学上的差异来分离。
在pH12.0~12.5这个狭窄的范围内，线性DNA双螺旋结构解开而被变性。
尽管在这样的条件下共价闭合环状质粒DNA也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。
当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液使pH恢复中性时，共价闭合环状质粒DNA复性快，而线性的染色体DNA复性缓慢，经过离心和蛋白质和大分子RNA等发生共沉淀下去而被去除。
【器材】超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器，微量移液器，1.5ml微量离心管，恒温摇床，试管，双面微量离心管架，试管架，标签纸，磁力搅拌机。
【试剂】pET-28a质粒载体菌, LB培养基1000ml（含10μg/ml卡那霉素），葡萄糖/Tris/EDTA 溶液（溶液I），NaOH/SDS溶液（溶液II），KAc溶液（pH4.8）（溶液III），RNase A，95%乙醇，70%乙醇，TE buffer（pH8.0）。
【实验准备】1. 配制卡那霉素储存液（无菌水配制10mg/ml，分装后-20︒C保存）。
2. 配制LB培养基（胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g加200mL 双蒸水搅拌完全溶解，用约200μL 5N NaOH调pH至7.0，加双蒸水至1L，121︒C灭菌20min）。
3. 溶液I（50mmol/L葡萄糖，25mmol/L Tris HCl pH8.0，10mmol/L EDTA pH8.0）。
生物制药技术实验中的试剂配制方法
生物制药技术实验中的试剂配制方法生物制药技术是利用生物合成的药物，如蛋白质药物、抗体药物和基因工程药物等，用于疾病的预防、诊断和治疗的领域。
试剂配制是生物制药技术实验中非常重要的一环，准确的试剂配制可以保证实验结果的可靠性和准确性。
本文将为你介绍生物制药技术实验中常见的试剂配制方法。
首先，我们来介绍一些常用的试剂配制方法。
1. 溶液配制方法：溶液配制主要涉及到浓度的计算和试剂的配比。
首先，需要根据实验需求和试剂的特性确定所需溶液的浓度。
然后，根据溶液浓度计算试剂的配比，根据配比计算所需溶剂的体积。
在配制溶液时，需注意根据实验要求选择适当的溶剂，并按照正确的顺序加入试剂。
2. pH调节方法：在生物制药技术实验中，pH值对于许多生物反应和酶活性的影响非常重要。
为了调节溶液的pH值，可以使用缓冲液或酸碱溶液。
常见的缓冲液有磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液和氨基甲酸盐缓冲液等。
在使用缓冲液时，需要根据实验要求和所需pH值选择适当的缓冲液，并按照正确比例混合。
3. 标准曲线制备方法：在生物制药技术实验中，常常需要通过标准曲线来定量检测目标物质的含量。
标准曲线可以通过配制一系列已知浓度的标准溶液来建立。
首先，根据实验需求确定标准溶液的浓度范围。
然后，按照一定的比例稀释原始浓度的目标物质。
将稀释后的溶液进行检测，并绘制标准曲线。
根据标准曲线，可以通过检测待测样品的信号强度来确定目标物质的含量。
4. 稀释方法：在生物制药技术实验中，常常需要对样品进行稀释，以获得合适的浓度范围进行检测。
稀释方法主要有单点稀释和系列稀释两种。
单点稀释是将原始样品以一定的比例稀释到目标浓度。
系列稀释是将原始样品按照一定的稀释比例进行连续的稀释。
稀释时需注意准确计算溶液的体积和浓度，以确保稀释后样品浓度的准确性。
除了以上介绍的常见试剂配制方法，还有一些特殊试剂的配制方法需要特别注意。
例如，对于易氧化的试剂，如过氧化氢和亚硝酸盐等，需在实验前即时配制，避免其稳定性降低。
《生物制药技术》实验五
《生物制药技术》实验指导实验五、四环素生物效价测定（选作）一、实验目的1、了解杯碟法测定抗生素生物效价的基本原理。
2、掌握杯碟法测量抗生素效价的方法。
二、实验原理衡量发酵液中抗生素的含量称效价(titer或titre)，效价是评价抗生素效能的标准，也是衡量抗生素活性成分含量的尺度，它代表抗生素对微生物的抗菌效力，人们以1µg金霉素或四环素标准品为1个单位，0.6µg青霉素G钠盐为1个单位。
抗生素的生物测定方法有三大类：稀释法、比浊法以及扩散法。
扩散法中杯碟法(cup and plate method)或称管碟法(tube and plate method) 一种是常用的方法。
它是将已知浓度的标准抗生素溶液与未知浓度的样品溶液分别加到牛津杯(Oxford cup，一种标准的不锈钢小管)中，置于含有敏感试验菌的琼脂平板上进行扩散渗透，一定时间后抗生素在菌层培养基形成浓度由高到低的自然梯度，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。
测量出抑菌圈的大小，以计算抗生素的浓度。
在一定的浓度范围内，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，且在一定的试验条件下，可直接利用抑菌圈的直径近似地代替其平方，因而从样品的抑菌圈直径可在标准曲线上求得样品的生物效价。
将已知效价的金霉素标准液先制成标准曲线，根据被检品溶液的抑菌圈的大小，就可从标准曲线上查出效价的对数值，从中计算出相应效价，再乘以稀释倍数，即计算出待测样品中抗生素的效价。
因杯碟法是利用抑制敏感细菌的直接测定方法，所以符合临床使用的实际情况，而且灵敏度很高，不需要特殊的设备，故多被采用。
但此法也有缺点，即操作步骤多，培养时间长，获得结果慢。
尽管如此，由于它的独特优点，仍然被世界各国所公认，作为国际通用的方法被列入各国药典中。
三、实验材料及设备（一）实验材料1、菌种：工程菌：金霉素链霉菌（Streptomyces aureofaciens）。
生物技术制药综合实验的探索与实践
生物技术制药综合实验的探索与实践生物技术制药是一门跨学科的领域，涉及生物学、化学、药学等多个学科的知识，其核心在于利用生物技术手段生产药物。
生物技术制药的发展和应用，已经成为推动医药产业发展的重要引擎。
本文将从实验的角度出发，探索生物技术制药的实验方法和实践经验，为广大科研工作者和学生提供借鉴和参考。
一、实验目的生物技术制药综合实验的目的是让学生全面了解和掌握生物技术在制药领域的应用。
通过实验，学生可以了解生物技术制药的原理、实验操作和数据分析方法，培养学生的创新意识和实践能力。
二、实验内容1.基因工程细菌的构建基因工程细菌是制药领域中常用的工具，通过基因工程技术，可以将外源基因导入细菌中，使细菌表达目标蛋白。
实验中，可以选择一种适合表达目标蛋白的细菌菌株，如大肠杆菌等，构建表达载体，将目标基因插入到表达载体中，然后转化到细菌中，进行培养和诱导表达。
2.原核表达蛋白的纯化和鉴定在实验中，可以通过蛋白纯化技术，从转化的细菌中纯化目标蛋白，然后通过SDS-PAGE、Western blot等方法对蛋白进行鉴定。
这一步骤可以让学生了解蛋白纯化的原理和技术，培养学生的动手能力和实验操作技能。
3.细胞培养和药物筛选在制药领域，细胞培养是不可或缺的环节。
在实验中，可以选择适合用于药物筛选的细胞系，如HEK293细胞、Hela细胞等，将药物加入培养基中，观察细胞的生长情况和药物的毒性和活性。
4.药物分子构效关系研究药物分子构效关系研究是生物技术制药的重要内容之一，通过分子生物学和生物化学手段，研究药物分子与靶标的作用机制和关系。
实验中可以选择一种常用药物，通过分子对接、酶活性检测等方法，研究药物分子与靶标的结合特点和作用机制，揭示药物的作用方式和规律。
三、实验方法1.实验前准备在进行生物技术制药综合实验之前，需要充分准备实验材料和仪器设备，包括培养基、细菌菌株、表达载体、药物样品等。
需要对实验步骤和方法进行充分了解和掌握，确保实验的顺利进行。
生物制药技术实验中的样本收集和处理注意事项
生物制药技术实验中的样本收集和处理注意事项在生物制药技术实验中，样本收集和处理是非常关键的步骤。
准确的样本处理可以保证实验的准确性和可重复性，确保得到可靠的实验结果。
本文将为您介绍生物制药技术实验中样本收集和处理的注意事项。
首先，样本收集是实验的第一步，对于生物制药来说，常见的样本包括生物体的组织、细胞和体液等。
在收集样本之前，需要事先充分准备，包括准备好所需的工具和材料，如采样器具、容器和抽取样本所需的特定试剂等。
在样本收集过程中，需要注意以下几点：1. 采集工具和容器的消毒：在采集样本之前，必须确保采集工具和容器是干净的，并且进行了充分的消毒处理。
这可以通过使用消毒液或高温杀菌等方法来实现。
2. 避免污染：在采集样本时，必须严格遵守无菌操作的原则，以避免外部环境的污染对样本的影响。
在采集样本之前，必须将采集器具持过火焰消毒，以确保其表面无菌。
3. 采样部位的选择：采集组织样本时，应选择代表性的部位进行采样，避免受到局部病变或其他异常情况的影响。
对于体液样本，如血液或尿液，必须根据实验的需要选择合适的采样时间和方法。
4. 采集样本的数量：在进行生物制药实验时，样本的数量通常是有限的。
因此，在采集样本时，必须合理利用样本数量，避免浪费并确保样本的充分利用。
采集好样本后，下一步是对样本进行处理和保存。
样本处理的目的是提取有用的生物分子或特定的细胞组织，以便进行进一步的实验分析。
以下是在样本处理过程中需要注意的事项：1. 样本处理的时间：生物体的样本通常非常复杂，包含了各种不同的分子和细胞组分。
因此，在进行样本处理时，需要根据实验的需要确定处理的时间，以确保获取到所需的目标分子或组织。
2. 样本处理的温度：在进行样本处理时，温度的选择也非常关键。
不同的生物分子或组织对温度的敏感性可能不同，因此需要根据实验要求选择合适的温度条件进行处理。
3. 样本保存条件：在生物制药技术实验中，样本的保存非常重要，以确保实验的可重复性和结果的准确性。
生物制药技术实验注意事项
生物制药技术实验注意事项生物制药技术是现代医药领域中非常重要的一部分，通过利用生物材料提供的生物活性物质进行药物研发和生产。
在进行生物制药技术实验时，需要严格遵守一系列注意事项，以确保实验的准确性、安全性和可重复性。
本文将介绍一些常见的生物制药技术实验注意事项，以帮助研究人员正确开展实验。
首先，实验前的准备工作至关重要。
在进行生物制药技术实验之前，研究人员应对实验室进行全面的清洁和消毒，确保实验环境无菌。
同时，应准备好所有所需的试剂、设备和仪器，并检查其状态是否正常。
应制定实验计划和步骤，并确保每一步骤都能准确执行。
此外，还需要阅读相关的实验操作手册和安全手册，了解实验的详细步骤和安全注意事项。
在实验过程中，严格遵守实验操作规程和实验记录要求至关重要。
研究人员应按照实验操作规程进行操作，注意正确使用实验设备和仪器。
在操作过程中，应准确计量试剂、实验物质和溶液的浓度，遵守实验所需的温度、pH值和时间等参数。
同时，应注意实验中的时间控制，确保实验在规定的时间内完成。
另外，实验中的生物安全也是非常重要的。
任何涉及到生物材料的实验都应具备相关的生物安全防护措施。
研究人员应佩戴实验室指定的个人防护装备，如实验手套、工作服、眼镜和口罩等。
在处理生物样品和试剂时，应注意避免接触皮肤和吸入气溶胶等，以防止交叉感染和职业暴露。
处理完生物材料后，应正确处置废弃物，防止环境污染和传播疾病。
实验过程中，实验样品的质量控制也是需要重视的。
质量控制包括样品采集、存储和检测等环节。
在样品采集时，应遵循规范的操作步骤，采集样品后需要立即进行冷冻或者保存在低温下以保持其活性和稳定性。
样品检测是生物制药技术实验的关键环节，应确保检测方法的准确性和可重复性，通过校准、定标和质控样品等手段进行质量控制。
在实验过程中，严格遵守实验室的安全规定也是必要的。
研究人员应了解实验室的安全规定和紧急预案，掌握紧急情况下的应对措施。
同时，应定期检查和维护实验设备和仪器，确保其正常运行。
生物制药技术实验中的样本处理流程
生物制药技术实验中的样本处理流程生物制药技术实验是制药行业中非常重要的环节之一。
在这个实验过程中，样本处理是不可或缺的步骤。
样本处理的主要目的是提取生物样本中的目标分子或细胞，并使其适合后续的分析和检测。
本文将详细介绍生物制药技术实验中的样本处理流程。
1. 样本收集：首先，必须根据实验的目的和要求合理收集样本。
样本可以是血液、组织、细胞等。
收集样本时需要注意采集的时间、方法和保存条件，以确保样本的完整性和可靠性。
2. 样本预处理：收集到的样本可能会包含大量不相关的物质，如红细胞、蛋白质等。
因此，在处理之前需要对样本进行预处理。
预处理的步骤包括离心、过滤、洗涤等。
离心是将样本以高速旋转，使得样本中的不同成分沉积在不同位置，方便下一步的分离。
过滤则是通过滤纸或者0.22微米的滤膜去除悬浮物和较大的颗粒。
3. 细胞分离：生物制药技术实验中常常需要研究特定的细胞类型。
对于组织样本，可以通过机械分离、化学分离或酶解的方法将细胞从组织中释放出来。
对于血液样本，可以使用离心和梯度离心来分离各类血细胞。
此外，还可以使用免疫磁珠或流式细胞术等方法实现细胞的特异性分离。
4. 细胞培养：在某些实验中，为了获得更多的目标细胞，需要进行细胞培养。
细胞培养是将分离得到的细胞在适当的培养基中进行培养和繁殖。
培养基中通常含有营养物质、生长因子和抗生素等，以促进细胞的增殖和生长。
5. 样本分离：在实验中，常常需要将混合的样本中的目标成分进行分离。
分离的方法包括离心分离、柱层析、凝胶电泳等。
离心分离是利用自旋力将样本的不同成分分离，柱层析则是利用柱子内固定相的亲和性和分子大小等特性来分离成分。
凝胶电泳则是利用凝胶的孔隙大小和电荷分布将不同成分分离。
6. 样本保存：实验中得到的分离样本需要进行储存以备后续的分析和检测。
样本的保存应在低温或冷冻条件下进行，以避免样本中的物质的降解和变性。
综上所述，生物制药技术实验中的样本处理流程包括样本收集、预处理、细胞分离、细胞培养、样本分离和样本保存等步骤。
生物制药技术实验中的样本处理与保存要求
生物制药技术实验中的样本处理与保存要求生物制药技术是一门关于利用生物材料、生物工程和生物化学的原理和方法来生产药物的学科。
在进行生物制药技术实验时，样本处理与保存是非常重要的环节，它直接影响到后续实验的可靠性和结果的准确性。
本文将介绍生物制药技术实验中样本处理与保存的要求。
首先，对于样本的处理，应该注重样本的采集和取样方法。
采集样本时，应该遵循严格的操作规范，确保样本的来源清晰可靠。
采样时应避免污染和其他外部因素的干扰。
在取样时，应注意使用无菌器具，并保持操作环境的无菌状态。
其次，在样本处理过程中，应注意样本的保存和处理温度。
一般来说，样本应尽快进行处理，以避免样本的变性和降解。
如果样本不能立即处理，应该选择适当的保存方法。
例如，血液样本可以保存在低温下，如-20℃或-80℃，以避免细胞损伤和蛋白质降解。
此外，对于样本处理过程中的离心和过滤，也应注意一些关键的细节。
离心的速度和时间应根据具体的实验要求来确定，以确保样本的分离和沉淀。
过滤过程中，应使用合适的过滤器，并注意过滤器的选择和更换，以防止杂质的污染和堵塞。
在实验中，一些样本可能需要进行稀释或浓缩处理。
在这种情况下，应选择合适的稀释液或浓缩方法，并严格按照实验要求来操作。
稀释或浓缩过程中应避免操作时的振荡和剧烈搅拌，以防止样本的损失和污染。
另外，对于某些需要长期保存的样本，如细胞系、病毒株等，应选择合适的保存方法。
细胞系通常可以冻存保存，冷冻保存的温度一般为-80℃。
病毒株可以冻干保存，或者以液氮保存，液氮保存的温度为-196℃。
在进行长期保存前，还应对样本进行质量检测，确保样本的完整性和活性。
最后，在样本处理和保存过程中，应注意记录样本的详细信息和处理过程。
这可以帮助后续的实验和数据分析，提高实验的可重复性和结果的可靠性。
记录的信息包括样本名称、来源、采集时间、处理时间和所使用的试剂等。
总之，生物制药技术实验中样本处理与保存的要求非常重要。
生物制药技术实验中的实验设计考虑因素
生物制药技术实验中的实验设计考虑因素生物制药技术是利用生物产物来制造药物的方法，它具有高效、安全和可持续发展的特点。
在进行生物制药技术实验时，实验设计是至关重要的一步。
合理的实验设计能够确保实验的可靠性、重复性和可比性，并为后续的数据分析和结果解释提供可靠依据。
因此，我们需要考虑一些关键因素来设计和优化生物制药技术实验。
1. 实验目标和问题设定在开始实验设计之前，我们首先需要明确实验的目标和问题。
明确的目标和问题会指导我们选择适当的实验方法和技术，并确保实验设计的合理性。
例如，如果我们的目标是研究某种生物制药技术对药物产量的影响，我们可以设定问题为“不同培养条件下，药物产量是否存在差异”，从而为实验设计提供明确的方向。
2. 实验变量选择实验变量是实验中我们有意改变的因素。
在生物制药技术实验中，变量的选择十分重要，因为它们直接决定了实验结果的可靠性和相关性。
我们应该选择那些对研究目标有直接影响的变量，并确保变量的改变是可控的。
例如，在研究细胞生长的情况下，培养基成分、温度和pH值都可以作为实验变量，我们可以改变它们来观察生长情况的变化。
3. 实验组设计实验组的设计是整个实验设计中的重要环节之一。
我们需要根据实验目标和变量的选择，设计出合适的对照组和实验组。
对照组是用于对比和验证实验结果的基准组，而实验组则是用于观察和比较变量改变后的效果。
在生物制药技术实验中，对照组通常是没有进行任何干预的组织或样本，而实验组是经过实验操作或处理的组织或样本。
4. 样本量和统计学考虑样本量的选择对于实验设计的可靠性和结果的可信度至关重要。
我们需要根据实验的目标和需求，合理地确定样本量。
一般来说，样本量应足够大，以保证统计结果的可靠性。
此外，我们还需要进行统计学考虑，例如选择适当的统计方法，计算样本量和进行数据分析。
这样可以确保实验结果的科学性和可信度。
5. 实验步骤和操作标准实验步骤和操作标准的制定是保证实验可重复性和可比性的关键因素。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
《生物制药技术》实验指导实验一金霉素链霉菌培养基的制备（验证型）实验目的：1、学会培养基的配制2、掌握灭菌方法。
实验原理：金霉素链霉菌（Streptomyces aureofaciens）亦称“金色链霉菌”，放线菌门(Actinobacteria)，放线菌纲(Actinobacteria)，放线菌目(Actinomycetales)，链霉菌科(Streptomycetaceae)，链霉菌属(Streptomyces)。
在固体培养基上产生金色色素，故名。
其菌落为草帽型, 菌落直径一般为3～5毫米, 表面较平坦, 中间有隆起。
菌落开始为白色，长孢子后变青色。
在显微镜下可以看到短杆状的菌丝。
抗菌素工业上用以生产金霉素。
放线菌是一类介于细菌与真菌之间的单细胞微生物。
放线菌在土壤中分布最多，大多数生活在含水量较低、有机质丰富和微碱性的土壤中。
多数情况下，泥土中散发出的“泥腥味”就是由放线菌中链霉菌产生的土腥素造成的。
放线菌大都好氧，属于化能异养，菌丝纤细，分枝，常从一个中心向周围辐射生长。
因其生长具辐射状，故名放线菌。
放线菌能像真菌那样形成分枝菌丝，并在菌丝末端产生外生的分生孢子，有些种类甚至形成孢子囊，因而曾被误认是真菌。
但其菌落较小而致密，不易挑取。
不少菌种在医药、农业和工业上广泛应用，可产生抗菌素，现已发现和分离出的由放线菌产生的抗生素多达4 000多种，其中，有50多种抗生素已经广泛地得到应用，如链霉素、红霉素、土霉素、四环素、金霉素、卡那霉素、氯霉素等用于临床治疗人的多种疾病；有些可生产蛋白酶、葡萄糖异构酶；有的用于农业生产，如灭瘟素、井冈霉素、庆丰霉素等。
四环素类抗生素是由链霉菌生产或经半合成制取的一类广谱抗生素。
抗菌谱极广，包括革兰氏阳性和阴性菌、立克次体、衣原体、支原体和螺旋体。
品种主要包括金霉素、四环素和土霉素。
器材：1ml移液枪；铝锅；电炉试剂：NaBr母液（100 g／L）KCl母液（100 g／L）M-促进剂母液（2.5 g／L）实验步骤：1．种子培养基种子培养基(g／L)：可溶性淀粉40，黄豆饼粉20，酵母粉5，蛋白胨5，CaCO34，(NH4)2SO4 3，MgSO4·7H2O 0.25，KH2PO4 0.25。
先称取黄豆饼粉20g，单独煮沸10分钟，加入少量凉水降温，4层纱布压榨取汁，与其它称好的各成分混合，定容至1L。
每50ml分装到250ml三角瓶中，每组2瓶。
2．定向发酵培养基发酵培养基(g／L)：可溶性淀粉100，黄豆饼粉40，蛋白胨15，CaCO3 5，酵母粉2.5，(NH4)2SO4 3，MgSO4·7H2O 0.25，α—淀粉酶0.1。
配制方法同种子培养基，配好后分装到500ml三角瓶中，每瓶100ml，分别加入如下成分，比较它们对四环素产量的影响：(1)对照(不加其他成分)；(2)加入NaBr母液至终浓度为2g／L；(3)加入KCl母液至终浓度为2g／L；(4) 加入NaBr母液至终浓度为2g／L及M-促进剂母液至终浓度为0.025g／L。
每两组配一套。
3．灭菌将封好口的培养基121℃灭菌30min。
同时灭1ml 剪口移液枪头、1.5mL离心管。
（总过程：称量——溶化——定容——分装——封口——灭菌）注意事项：1．黄豆饼粉煮沸取汁。
2．培养基封口最好用8层纱布或棉花塞，最好不用橡胶塞，以增加透气性。
3．灭菌时锅内要补足水分。
由于灭菌锅较大，升温排气一定要充分（10min）。
补充阅读：工业发酵中利用生产菌发酵得出最终产物是一个逐级放大的过程，各个不同的阶段对于营养成分的要求也各有特点，根据发酵不同阶段的要求，培养基可分为孢子培养基、种子培养基和发酵培养基三种。
孢子培养基孢子培养基是供菌种繁殖孢子的一种常用固体培养基，对这种培养基的要求是能使菌体迅速生长，产生较多优质的孢子，并要求这种培养基不易引起菌种发生变异。
所以对孢子培养基的基本配制要求是：第一，营养不要太丰富（特别是有机氮源），否则不易产孢子。
如灰色链霉在葡萄糖－硝酸盐－其它盐类的培养基上都能很好地生长和产孢子，但若加入0.5%酵母膏或酪蛋白后，就只长菌丝而不长孢子。
第二，所用无机盐的浓度要适量，不然也会影响孢子量和孢子颜色。
第三，要注意孢子培养基的pH和湿度。
生产上常用的孢子培养基有：麸皮培养基、小米培养基、大米培养基、玉米碎屑培养基和用葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏和食盐等配制成的琼脂斜面培养基。
大米和小米常用作霉菌孢子培养基，因为它们含氮量少，疏松、表面积大，所以是较好孢子培养基。
种子培养基种子培养基是供孢子发芽、生长和大量繁殖菌丝体，并使菌体长得粗壮，成为活力强的“种子”。
所以种子培养基的营养成分要求比较丰富和完全，氮源和维生素的含量也要高些，但总浓度以略稀薄为好，这样可达到较高的溶解氧，供大量菌体生长繁殖。
种子培养基的成分要考虑在微生物代谢过程中能维持稳定的pH，其组成还要根据不同菌种的生理特征而定。
一般种子培养基都用营养丰富而完全的天然有机氮源，因为有些氨基酸能刺激孢子发芽。
但无机氮源容易利用，有利于菌体迅速生长，所以在种子培养基中常包括有机及无机氮源。
最后一级的种子培养基的成分最好能较接近发酵培养基，这样可使种子进入发酵培养基后能迅速适应，快速生长。
发酵培养基发酵培养基是供菌种生长、繁殖和合成产物之用。
它既要使种子接种后能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要使长好的菌体能迅速合成需产物。
因此，发酵培养基的组成除有菌体生长所必需的元素和化合物外，还要有产物所需的特定元素、前体和促进剂等。
但若因生长和生物合成产物需要的总的碳源、氮源、磷源等的浓度太高，或生长和合成两阶段各需的最佳条件要求不同时，则可考虑培养基用分批补料来加以满足。
实验二金霉素链霉菌的定向发酵（验证型）实验目的：1、学习和掌握无菌操作技术。
2、掌握定向发酵四环素的原理。
实验原理：定向发酵是指通过改变培养基组分(加入某些物质)改变微生物代谢途径，使发酵按主观要求产生较多的产物。
金霉素、四环素和土霉素，它们的化学结构极为相似：R1 R2金霉素Cl H土霉素H OH四环素H H金霉菌原是产生金霉素（Chlortetracycline）的菌种，但因金霉素比四环素只多一个氯离子，所以只要在发酵液中加入某些物质，阻止氯离子进入四环素分子，从而使菌种产生较多的四环素。
另外，金色链霉菌在30℃以下时，合成金霉素的能力较强；当温度超过35℃时则只合成四环素。
本实验中，利用溴离子在生物合成过程中对氯离子有竞争性抑制剂作用的原理，以及加入2-硫醇基苯并噻唑(即M—促进剂，分子式：C7H5NS2，通常作为橡胶硫化促进剂)抑制氯化酶的作用，从而增加四环素的产量。
材料和试剂：金霉素链霉菌：购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（菌种保藏号：CGMCC4.1043；订单号20111133 550元）。
实验步骤：前期准备工作：配制斜面培养基（可选，1号培养基由菌种保藏中心提供）1、麸皮36.0 g，K2HPO4 0.2 g，MgSO4·7H2O 0.1 g，（NH4）2HPO4 3 g，琼脂15～20 g，定容至1L，pH 7。
2、可溶性淀粉20g，KN O3 1g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，定容至1L，pH 7.2~7.5。
1、制备斜面孢子：将保藏的菌种的比例接种于液体培养基中（不加琼脂的斜面培养基），28℃下200 r/min振荡培养，将活化1d后的金霉素链霉菌种接入斜面培养基，28℃培养5～7天，待孢子长成灰色，于4℃冰箱中保藏。
2、种子培养：在斜面上用接种铲挑取1cm2左右生长良好的菌体接入装有50ml四环素种子培养基的250ml锥形瓶中，230 r/min、28℃下振荡培养20～24h。
3、发酵培养：以剪口移液枪头取10 ml种子液接入装有100ml发酵培养液的500ml锥形瓶中（注意：同一处理组用同一瓶种子液接种），230 r/min、28℃下振荡培养5 d。
用于后面的测定效价和薄层层析实验。
四环素的提取和精制（选作）一、实验目的1 ．掌握沉淀法精制四环素的原理、方法和基本操作技术。
2 ．熟悉pH 的控制与产量、质最的关系。
二、实验原理四环素为两性化合物，其等电点为5.4 。
当溶液pH 等于等电点时，四环素呈游离碱形式，从水溶液中沉淀出来。
利用四环素的这一性质，可将四环素从发酵液中提取出来。
在连续结晶过程中，pH 的高低对产量、质量都有一定的影响。
四环素的等电点为5.4 , 在pH 4.5~7.5 之间，游离碱在水中的溶解度乎不变。
若pH 控制在接近等电点时，沉淀结品虽然比较完全，收率也高，但此时会有大量杂质同时析出，影响产品的色泽和质量；若pH控制得较低一些，对提高产品质量虽有好处，但沉淀结晶不够完全，收率会低些，影响产量。
因此，在选择沉淀结晶pH 时，就必须同时考虑到产量、质量的效果。
在正常情况下，工艺上控制pH4.8左右。
若沉淀结晶质量较差，pH可控制得稍低些，有利于结晶质量的改善，但不能低于4.5，否则收率低，影响产量。
四环素的提取和精制分酸化、纯化、过滤、结晶和淋洗五个步骤。
(1 ) 酸化加入草酸，使积聚在菌丝体内的四环素尽可能多地成为可溶性盐，而转入液相。
四环素在酸性条件下较隐定，且草酸与钙离子反应生成不溶性的草酸钙，析出的草酸钙能促进蛋白质的凝固，提高滤液的纯度和过滤速度。
( 2 ）纯化纯化剂（黄血盐、硫酸锌和硼砂）与草酸一起混合作用，可以除去发酵液中大量酸溶性蛋白质、铁离子和其他多种离子色素以及其他杂质，从而使滤液纯净，并减少发酵液的粘度，利于过滤。
其中纯化剂黄血盐能与发酵液中的铁离子作用，生成普鲁士盐而除去铁离子。
( 3 ）过滤通过过滤，使四环素溶液与菌丝体以及其他杂质分离，再经过复滤、精滤，进一步提高滤液质址，得到澄清的滤液。
( 4 ) 结晶将滤液的pH调节到等电点，在较低温度下析出纯净的四环素。
( 5 ）淋洗虽然发酵液经酸化后大部分四环素已溶入溶液中，但仍有部分残存在菌渣中，且过滤不可能十分彻底。
所以用酸水淋洗，以提高收率。
三、实验试剂及仪器1．试剂300 g/L草酸溶液、200 g/L 黄血酸钾溶液、200 g/L 硫酸锌溶液、200 g/L 硼砂溶液、浓氮水、3 g/L草酸溶液。
2．仪器1000 mL 烧杯、搅拌器、布氏漏斗、抽滤瓶、滤纸、量筒、pH 试纸、酸度计、温度计、水泵、表面皿。
四、实验步骤1．酸化取600ml 四环素发酵液，置装有机械搅拌的1000 mL烧杯中，开始搅拌，待发酵液温度降至20 ℃以下时，缓缓加入草酸溶液，草酸加入量为27～35g/L，并不时测定发酵液的pH。