液相色谱法与几种检测器
高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法通常使用以下检测器：
1. 紫外光吸收检测器（UV检测器）: 这是最常用的检测器之一。
它利用样品分子在特定波长下吸收的紫外光的数量来检测分离出来的化合物。
2. 荧光检测器:此检测器利用分离出来的化合物的荧光强度来检测分离出来的化合物。
这可以使它有效地检测探测极小浓度的化合物。
3. 电导检测器: 此检测器通过检测样品中离子的电导率来检测分离出来的化合物。
这种检测器通常用于离子交换色谱。
4. 质谱检测器（MS检测器）：在某些情况下，需要识别和定量化合物。
在这种情况下，使用质谱检测器非常有用。
它将化合物的分子质量与一个反应谱库进行比较，以进行准确的定量和鉴定。
5. 折射率检测器（RI检测器）: 检测样品分子与溶剂的差异折射率。
该检测器对于不具有紫外吸收或荧光的化合物是很有用的。
通则0512高效液相色谱法
高效液相色谱法：系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。
超高液相色谱仪：是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
（1）色谱柱反相色谱柱：以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。
（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
不同液相检测器的区别
不同液相检测器的区别公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种，有什么区别高效液相色谱仪常用检测器种类及分析检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet_visibledetector,UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm-800nm)。
它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。
当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
液相色谱仪各种检测器的应用范围
液相色谱仪各种检测器的应用范围HPLC中常用的检测器分有如下几种，紫外吸收检测器（UVD)、二极管阵列检测器(PDAD）、荧光检测器（FLD）、示差折光检测器（RID）、蒸发光散射检测器（ELSD）、质谱检测器(MSD）等.下面就分别介绍简单介绍一下。
光学类检测器1、紫外吸收检测器（UVD）是目前HPLC中应用最广泛的检测器.它的主要特点是灵敏度高，线性范围宽，对流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。
它要求被检测样品组分有紫外吸收,属于选择性检测器。
2、二极管阵列检测器（PDAD)是20世纪80年代才出现的一种光学多通道检测器，它可以看作是UVD的一个分支。
在对每个洗脱组分进行光谱扫描,经计算机处理后，得到光谱和色谱结合的三维图谱。
其中吸收光谱用于定性（确证是否是单一纯物质)，色谱用于定量，常用于复杂样品(如生物样品、中草药）的定性定量分析.3、荧光检测器（FLD）同样属于选择性检测器，其灵敏度在目前常用的HPLC检测器中是最高的，应用也较多,仅次于UVD。
它适用于能激发荧光的化合物.很多与生命科学有关的物质，如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。
荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用，尤其在用荧光衍生后，可以检测很微量的氨基酸和肽.通用型检测器1、示差折光检测器(RID）是一种通用型检测器，只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。
生命科学中常遇到各类糖类化合物,没有紫外吸收，一般常用示差折光检测器。
它的通用性比UVD广，但灵敏度要低,对温度变化敏感，并与梯度洗脱不相容,因而限制了它的使用.2、蒸发光散射检测器(ELSD）也是一种通用型的检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。
ELSD的响应值与样品的质量成正比,因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物.ELSD灵敏度比RID高，对温度变化不敏感，基线稳定,可用于梯度洗脱。
现在ELSD已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测.3、质谱检测器（MSD）是另一种通用型检测器，在灵敏度、选择性、通用性及化合物的分子量和结构信息的提供等方面都有突出的优点。
HPLC中常用的检测器
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4:电化学检测器
理论基础
a: 法拉第第一定律
在电介过程中，电极上起反应的物质量 （W）与通过电介池的电量（Q）成正比。
b: 法拉第第二定律 各种不同的电介质溶液中，通过相同的电量 时，电极上析出的电极产物的当量数相同。 （96487库仑）
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3:二极管阵列检测器（diode-array detector, DAD）
原理: 光电二极管阵列（或CCD阵列，硅靶摄像管等）作为检测元件的 UV-VIS检测器。它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光， 再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列 快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。
c: 对仪器的稳定性（如温度和压力的稳定性）依赖较小
d: 选择性好，优于紫外
例子：花生酱提取物中衡量黄曲霉素的荧光检测法
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缺点: a:适用范围有一定的局限性 –只适用于有荧光基团＆衍生化之后 有荧光基团的化合物 b: 定量分析时线性范围较窄
它适合于 稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋 白质等荧光物质 的测定
不到20%的物质使用这种检测手段,许多药物如喹诺酮类药物采用这种检 测方法.
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在垂直的方向上 进行检测
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优点: a: 灵敏度非常高(灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高 )，其 检出限可达10-9g/ml，(比紫外检测器高2—3个数量级，适合于痕量 分析 ) b: 可以用于梯度洗脱
ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度 或者检测未知物。
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发展历程:
第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家 研制开发的，并在八十年代初转化为商品.
第二十章高效液相色谱(第五版)
（2）L2 = 30cm:
R1 2 L1 ( ) R2 L2
L2 30 R 2 R1 1.33 1.88 L1 15
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紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
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光电二极管阵列检测器
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(二) 荧光检测器 fluorophotometric detector 特点： • 灵敏度高（高于紫外检测器）
• 只适用于能产生荧光或其衍生物能发
荧光的物质。
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(三) 蒸发光散色检测器 evaporative light scattering detector
流动相 （样品）
流动相蒸发除去
加热
组分形成气溶胶
强光
特点： 测定散射光强 • 灵敏度低 I = k mb • 通用型：如糖类、 氨基酸等分析
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(四) 化学发光检测器
组分 + 发光试剂 激发态产物 光辐射
n1/2 -1 k2 R = —— (——) (——) 4 1+k2
：主要受溶剂种类的影响
k ：主要受溶剂配比的影响
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选择流动相时应注意的几个问题
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏 柱子。如使固定液溶解流失； （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉 淀并在柱中沉积。
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第二节 HPLC的固定相和流动相及其选择
一、化学键合固定相：目前应用最广、性能最佳的固定相；
a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
气相色谱与液相色谱
.一、分别原理：1.气相：气相色谱是一种物理的分别方法。
利用被测物质各组分在不一样两相间分派系数（溶解度）的渺小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行频频多次的分派，使本来只有渺小的性质差异产生很大的成效，而使不一样组分获取分别。
2.液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达′107Pa）;色谱柱是以特别的方法用小粒径的填料填补而成，进而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高敏捷度的检测器，可对流出物进行连续检测。
二、应用范围：1.气相：气相色谱法拥有分别能力好，敏捷度高，剖析速度快，操作方便等优点，可是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳固性差的物质都难于应用气相色谱法进行剖析。
一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采纳衍生化法或裂解法。
2.液相：高效液相色谱法，只需求试样能制成溶液，而不需要气化，所以不受试样挥发性的限制。
关于高沸点、热稳固性差、相对分子量大（大于400以上）的有机物（些物质几乎据有机物总数的75%～80%）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分别、剖析。
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱剖析的约占20%，而能用液相色谱剖析的约占70～80%。
三、仪器结构：1.气相：由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据办理系统构成。
进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。
柱箱：色谱柱是气相色谱仪的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过频频多次分派后获取分别，进而达到剖析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。
因为色谱柱的两头分别连结进样器和检测器，所以进样器和检测器的下端（接头）均插入柱箱。
柱箱能够安装各样填补柱和毛细管柱，并且操作方便。
色谱柱（样品）需要在必定的温度条件下工作，所以采纳微机对柱箱进行温度控制。
并且因为设计合理，柱箱内的梯度很小。
关于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。
液相检测器的原理
液相检测器的原理
液相检测器的原理是通过测量样品在溶液中的光学、电化学或质谱特性来分析样品的成分。
该原理基于样品溶解在溶剂中的理论，即溶解度和分配系数等。
常见的液相检测器有紫外-可见光谱检测器（UV-Vis）、荧光
检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
紫外-可见光谱检测器主要利用样品对紫外-可见光的吸收或透
射特性进行分析。
样品分子在特定波长的光照射下，吸收或透射的光强度与样品浓度相关。
通过测量样品的吸收光谱或透射光谱，可以得到样品的浓度信息。
荧光检测器利用样品吸收紫外或可见光后，通过激发产生荧光。
荧光的发射强度与样品浓度成正比，通过测量样品的荧光发射强度来计算样品浓度。
电化学检测器通过测量溶液中的电流或电位变化来获得样品的分析信息。
常见的电化学检测器包括电导检测器、电解质测定仪和电位检测器等。
质谱检测器将样品分子离子化后，通过质谱仪进行分析。
质谱检测器能够在不同的质荷比下获得样品的质谱图，从而确定样品的分子式和相对分子质量。
总之，液相检测器利用样品在溶液中的光学、电化学或质谱特
性来分析样品的成分，是液相色谱、毛细管电泳等技术中重要的组成部分。
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检测器一
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector， UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色 谱仪都配有这种检测器。 特点：灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱， 对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于 制备，并能与任何检测器串联使用。但是只能用于检测有紫 外吸收的物质，且流动相的选择有一定限制，流动相的截止 波长必须小于检测波长。
分析：所建立的方法简便、快速、灵敏度高，适用于鸡蛋中 阿莫西林残留的高灵敏度检测。
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HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿中青蒿素、青蒿乙 素和青蒿酸的含量
用HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿药材中青蒿素、青蒿乙 素和青蒿酸的含量。采用NucleodurC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μ m ID);以乙腈-0.1%乙酸水(50∶50)为流动相;紫外检 测波长209 nm,蒸发光散射检测器漂移管温度50℃。 分析：青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸能够达到很好分离。本法 简单、准确、快速,可同时测定青蒿药材中青蒿素、青蒿乙 素和青蒿酸的含量。
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检测器三
ELSD是一种通用型检测器，定量依据为峰面积（峰 高）或其比值的对数与进样量或浓度的对数成正比。 原理：首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加 热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗 粒在光散射检测池中得到检测。 应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三 脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂， 营养滋补品，及组合分子库等。
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进步与期待：如今更强调的是多种检测器 联用来达到更好的分析分离效果，比如 LC-MS,GC-MS,GC-LC等等。希望我们能 在学习的基础上有更好的创新，学以致用。
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参考资料
1、中药制剂分析第二版蔡宝昌 2、谢恺丹,陈学森,徐东等.高效液相色谱荧光检测法 检测鸡蛋中阿莫西林残留[J]. 食品科学, 2012, 33(22): 264-268. 3、张东,杨岚,杨立新等.HPLC-UV-ELSD法同时测定 青蒿中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量[J].药学学 报2007,42(9):978 -981.
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应用实例及发展
高效液相色谱荧光检测法检测鸡蛋中阿莫西林残留
鸡蛋经乙腈提取，饱和二氯甲烷萃取，水杨醛酸性条件 下沸水浴衍生化后，以0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液(A)和乙 腈溶液(B)为流动相，流速为1.0mL/min，荧光检测激发波长 为354nm, 发射波长为445nm。阿莫西林在5.0～800ng/mL质 量浓度范围内，本方法线性关系良好，相关系数为0.9997。
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检测器二
◆ 荧光检测器(fluorescencedetector，FD) 荧光检
测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生 荧光的化合物。某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生 成荧光衍生物，再进行荧光检测。 ◆ 特点：其最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析； 一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数 量级，但其线性范围不如紫外.
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常用的液相色谱仪
高效液相色谱仪由输出泵、进样装置、 色谱柱 、梯 度冲洗装置、检测器及数据处理和微机 控制单元组 成。
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常见的几种检测器的原理及应用范围
检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化 为可供检测的信号。 分类： A.选择性检测器：组分性质 1.紫外可见吸收检测器(UVD) 2.荧光检测器(FD) B.通用型检测器：总体性质 3.蒸发光散射检测器（ELSD） 4.电化学检测器(ED) 5.示差折光检测器(RID)
◆ 液相色谱法的分离机理是基于混合物中各 组分对两相亲和力的差别。
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◆ 根据固定相的不同， 液相色谱分为液固色 谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的 是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为 基质的键合相色谱。 ◆ 根据固定相的形式液相色谱法可以分为 柱 色谱法、纸色谱法及 薄层色谱法。按吸附 力可分为吸附 色谱、分配色谱、离子交换 色谱和凝胶渗透色谱。
液相色谱法与几种检测器的学习
组员：李欢欢、戴雅吉、郭宣宣 施香琴、马婷婷
内容介绍
◆ 液相色谱法的简单介绍 ◆ 检测器的原理及应用范围 ◆ 应用实例及发展 ◆ 参考资料
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液相色谱法：
简单的说就是用液体作为流动相的色谱法。 1903年俄国化学家M.C.茨维特首先将液相色谱法用于分离叶 绿素。
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液相色谱法的分离机制