色谱柱和色谱系统的故障检修.pptx
色谱柱和色谱系统的故障检修及维护

缓冲液应用的几点建议缓冲液可以提供离子平衡的反离子,并使流动相保持一定的离子强度和ph值,减少拖尾。
但是使用缓冲液要注意几点1:避免使用盐酸盐,盐酸盐对钢质有腐蚀作用。
2:缓冲液最好要现配现用,往往缓冲液是良好的菌类培养液,隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。
3:实验后不可用有机溶剂直接过度,有机溶剂会处使盐类析出,造成液路或色谱柱堵塞,可用95:5的水甲醇冲洗。
4:使用缓冲液要及时掌握ph范围,做到胸中有数。
5:清洗液路和柱子时,有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。
6:长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出,若有白色盐类析出,可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子,走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。
7:选择缓冲液要用可靠的试剂,避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。
6:溶剂过滤器是液相色谱常用的辅助设备,用来过滤流动相;使用注意以下事项1:溶剂过滤器是易碎品,切不可整体搬移,特别不能拿着夹子搬移2:过滤膜选择要选择合格产品,不合格的会溶进杂质,可用待过滤的溶剂浸泡24小时看有无溶解现象,以考察过滤膜质量。
3过滤膜分有机和水系,要区分开。
4:水系过滤,有机用有机膜,最好过滤后再混合,混合后的流动相用哪个比例大用哪种膜。
5:膜不分反正,但最好光滑一面向上,粗糟一面向下过滤效果会好。
6:废弃过滤膜不要随意丢弃,过滤膜对环境有污染,不宜绛解。
收集统一处理。
7:溶剂过滤器配套的无油真空泵抽气时,不要等液体空后再拔软管,不宜拔出,会压扁软管,剩一点液时就停泵。
口8过滤好的溶剂要避免二次污染。
9:给色谱柱加温,温度升高的目的,部分在于增加溶质的溶解度,但更重要的是降低溶剂的黏度,从而改进峰形和分离度。
注意:温度升高会降低保留时间,这对分离度也有影响,温度的变化对谱带宽度的影响甚大,而塔板高度受温度的影响虽然也取决于所采用的色谱类型,而温度升高总是要降低塔板高度的。
问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?答:关于漂移问题:1温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定2流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定2泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
【精品课件】液相色谱的柱和系统故障检修

峰拖尾柱“次级效应”(PH值)
Column: Alkyl-C8, 4.6 × 150mm, 5µm
Mobile Phase:85%25mM Na2HPO4,pH7.0 : 15%ACN
Flow Rate: 1.0 mL/min
Temperature: 35ºC
Sample: 1. Phenylpropanolamine 苯丙醇胺/去甲麻黄碱
4. Chlorpheniramine
Injection 1 峰3 峰形较好
Injection 30 峰3 裂峰
Injection 1 After Column Wash with 100% CAN
经100%乙腈冲洗后 峰3 峰形极好
裂峰
溶剂化效应
Column: StableBond SB-C8, 4.6 × 250mm, 5µm Mobile Phase: 82%H2O : 18%ACN Injection Volume: 30 µL Sample: 1. Caffeine 咖啡因 2. Salicylamide 水杨酰胺
A. Injection Solvent 100% Acetonitrile 峰形宽拖尾
B. Injection Solvent Mobile Phase 峰形尖锐对称
样品溶剂尽可能与流动相匹配
裂峰原因的确定
复杂样品的基质或分析许多样品 ------ 柱污染或部分阻塞滤片
流动相 pH>=7 ------ 由于硅胶溶解使柱塌陷(除非使用专门的柱子) --------预柱与柱的塌陷
对于分析柱每种溶剂至少用25 ml 冲洗 没有缓冲盐的流动相 100% Methanol 甲醇 100% Acetonitrile 乙腈 75% Acetonitrile :25% Isopropanol 75 %乙腈 :25%异丙醇 100% Isopropanol 异丙醇 100% Methylene Chloride★ 二氯甲烷 100% Hexane ★ 已烷 当用已烷蔌二氯甲烷柱子时,必须先用异丙醇冲洗,然后再用你的反相流 动相
气相色谱仪器故障的诊断与排除ppt课件

石英棉和柱头对个别分析 清洗橙管、更换石英棉、
物的吸附
割柱头或使用预柱来保护
分析柱
现象 故障可能原因
排除方法
峰出现 大拖尾
样品被污染(特别时 把样品容器塞包裹一层
样品容器的橡皮帽 金属箔或使用不被溶解
所污染)
的容塞
柱温太低
适当升高柱温
汽化温度过低
适当升高汽化温度
4.鬼峰
现象 鬼峰
故障可能原因 柱头有污染物沉积
更换铝密封垫
现象
故障可能原因
排除方法
柱流失
恒温操作
时,
载气在检测中有漏
基线不规 则漂移 柱出口到检测器的连
接管路被污染
重新老化柱子必要是 更换 检漏
清洗
载气调节阀有毛病, 检查载气调节稳压阀
或操作不当
和稳流阀,确保操作
(仅指FID)
适当,此外应保证起 源压力足够
现象 故障可能原因
排除方法
恒温操 检测器脏 作时,
排除方法
进纯样品 进样口过热使样
时出现多 品组分将解
余峰
衬管和样品反应
每次降低进样口温度20℃观 察峰是否消失
选用去活衬管
衬管填充物有活 性
样品保留在进样 口太久
去除填充物或选用无填充物 的衬管
增加柱流速
5.其它常见峰型症状
现象 故障可能原因
排除方法
分叉峰 热导检测器用氮气为载气 使用适当的流速或 时,流速、柱温选择不当 柱温
适当调节记录仪灵敏 度
检测器被污染
清洗
载气泄漏严重
检漏
现象 故障可能原因
排除方法
记录仪的滑线电阻或驱动记录 检修记录仪
平顶 笔的机械部分有故障
高效液相色谱仪器故障的诊断与维修-ppt课件.ppt

峰变宽 漏夜
故障排除 增加浓度 使系统到达平衡 检查进样器 使用柱温箱
检查漏夜的位置并维修
出现两个或多个未被完 选择其它色谱条件以改善分离
全分离的物质的峰
效果
检测器时间常数太大 使用较小的时间常数
ppt课件
11
4.峰分叉
现象
判断
柱性能下降
保护柱失效
故障排除 更换色普柱 换柱芯
峰分叉
色谱柱或保护柱被污染 清洗柱或保护柱,必要时更换
检测池被污染或有气体
用甲醇或其他强极性的溶剂冲 洗流通池
ppt课件
21
现象
判断
故障排除
测定的波长选择有误 基线漂移
使用分光光度计说明背景吸收, 如背景值高,说明流动相含有 紫外吸收化合物导致基线漂移。 使用的流动相应在紫外截止波 长以外,或更换溶剂
系统泄漏
检查并进行维修
样品中有强保留的物质 用强度合适的溶剂清洗色谱柱
判断
故障排除
样品前处理时产生降解 用标准品对照、检查样品处理过
或混入杂质
程,换新样品
色谱图出 现鬼峰 前一次进样的洗脱物
增加分析时间或梯度洗脱、提高 流速、如问题仍存在,两次进样 间用强溶剂冲洗色谱柱
注射器脏
清洗注射器、冲洗进样口
ppt课件
15
现象
判断
故障排除
流动相被污染
清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入 口过滤器、使用HPLC级试剂
衡
统平衡
室温不稳
基线漂移 流动相污染或分解
使用柱温箱、将系统置于恒温、 空气对流小的环境
清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入 口过滤器、使用HPLC级试剂
流动相脱气不充分
脱气重新平衡系统
气相色谱仪一般故障现象原因及排除措施PPT教学课件

温度除水。
2020/12/09
18
基线噪声太大
柱污染或固定相大量流失:重新老化柱 子。
载气被污染:更换过滤器,加强净化。 载气流量太大:降低载气流量。 载气流路漏气:检漏并修理。 接头松动:紧固接头。 接地不好:改进接地地线。 开关接触点沾污:清洁被污染触点。
检测器或信号线污染、绝缘性不好:用适当溶 剂清洗检测器绝缘部件或信号线接触点。
TCD稳定电源失灵:检修或更换。 FID放大器失灵:检修或更换。
2020/12/09
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基线有规则出现尖刺或小峰
载气气路中有气泡或冷凝液:加热气路 驱除冷凝液。
FID氢气发生气来的水污染氢气管路:除 去管路中的水或更换过滤器。
检修或更换。 柱箱温度保护控制调得太低:柱箱温度
保护设定必须高于所要使用的温度。 检测器恒温箱隔热有缺陷:确保恒温箱
保温良好。 检测器恒温箱或柱箱温控失灵:检修或
更换。
2020/12/09
11
程序升温时基线上升
柱固定相流失:预先老化色谱柱。 双柱操作中两个柱流速不平衡:调节平
衡两柱流速。 色谱柱污染:预先老化色谱柱。
2020/12/09
2
进样后不出峰
气化室温度低样品未气化:重新接线。 检测器或放大器电压供给问题:检查供
电。
2020/12/09
3
保留值正常但灵敏度太低
进样技术差,样品漏失:重复进样练习,提高 进样操作技术。
进样量太少:确认并逐渐增加进样量。 注射器漏气或堵塞:检修或更换。 载气系统有漏气:检查进样橡胶垫、柱接头等。 衰减过分:减少衰减。 TCD桥流太低:增加桥流 检测器无电压供给:检查并供电。
精选液相色谱的柱和系统故障检修资料

7/4/2019
24
峰变宽,裂开 柱塌陷(迟到的峰)
Column: Extend-C18, 4.6 × 150 mm, 5 µm
Mobile Phase: 40% 10 mM TEA, pH 11 : 60% MeOH
Flow Rate: 1.0 mL/min UV 254
Temperature: R.T.
Low Load 低载负
1.70 1.90 1.56 1.70 1.86 1.25
Plates 理论板数 High Load / 10 高载负/10倍
850 815 2776 2539 2735 5189
Low Load 低载负
5941 7842 6231 8359 10022 10725
7/4/2019
7/4/2019
14
裂峰
柱污染
Column: StableBond SB-C8, 4.6 × 250mm, 5µm
Mobile Phase:60%25mM Na2HPO4,pH3.0 : 40%MeOH
Flow Rate: 1.0 mL/min
Temperature: 35ºC
Detection: UV 254 nm
Detection:
Sample: 1. Maleat 顺丁烯二酸
2. Pseudeophedrine 伪
麻黄碱 3. Chlorphenniramine 氯非尼拉明
理论板数
极低的理论板数表明这是一个前面进样极迟洗脱出来的 峰
7/4/2019
25
峰拖尾
进样器密封性差
Column: Bonus-RP, 4.6 × 75mm, 3.5µm
Plates TF 理论板数 拖尾因子
高效液相色谱故障排除1.ppt
柱外效应的影响
检查毛细管连接
色谱柱和检测器之间有漏; 检测器的检测池过大
检查是否有漏;使用小的检测池
色谱柱温度太低; 流动相的黏度太高
连接用的毛细管太长; 柱外死体积太大
提高色谱柱温度
使用内径较细的较短的毛细管连 接; 检查柱外死体积
色谱柱柱效下降
使用较小粒径填料的色谱柱; 更换色谱柱
探索色谱新领域,默克与您共同努力!
色谱柱过载
将样品稀释
柱外效应的影响
检查毛细管连接
2002-9
探索色谱新领域,默克与您共同努力!
解决问题
峰形展宽
2002-9
可能原因
色谱柱或预柱被污染或不合适
解决办法
更换色谱柱或预柱
色谱柱“过载”或进样体积过大 减少进样体积;稀释样品
溶解样品的溶剂选用不当
用流动相溶解样品
缓冲溶液的浓度太稀
使用浓度稍高的缓冲溶液或者 换用其它的缓冲溶液
色谱柱的滤网堵塞
更换滤网;使用柱前过滤系统; 将样品过滤
柱外效应的影响; 死体积
检查毛细管连接
色谱柱有“塌陷”、短流或断流
更换色谱柱; 使用性质较温和的分离条件
2002-9
探索色谱新领域,默克与您共同努力!
解决问题
出现双重峰或 分叉峰
可能原因
样品体积过大; 色谱柱过载
溶解样品的溶剂选用不当
色谱柱有“塌陷”、短流或 断流
溶剂中的杂质会导致出现“鬼峰”,特别是梯度解吸时
2002-9
注意: 只能使用色谱级的溶剂! 不能使用旧的或未经过滤的缓冲溶液
探索色谱新领域,默克与您共同努力!
溶剂
溶剂混合产生的问题
流动相中所使用的不同溶剂必须互溶
色谱柱和色谱系统的故障检修ppt课件
1. Complex sample matrix or many samples analyzedcolumn contamination or partially plugged frit
复杂样品的基质或分析许多样品 - 柱污染或部分阻塞滤片
likely
2. Mobile phase pH>=7 - likely column void due to silica dissolution (unless specialty column used)
- precipitate from sample or buffer 样品或缓冲液中的沉淀物
Back flush column - Clear plugged frit 反冲柱子-清洁阻塞的滤头 Change frit - Clear plugged frit 更换滤头
2024/7/30
4
Column Cleaning 柱子清洗
100% Ethyl Acetate 乙酸乙酯
2024/7/30
6
How to Change a Frit 怎样更换滤头
Column Inlet Frit 柱进口滤头
Column Body 柱身
Compression Ferrule 压缩金属套圈
Wear gloves 戴手套 Do not allow bed to dry 不要让底座干燥 Do not touch the column-body heat will extrude packing 不 要使柱身受热,否则填料会喷出 Do not over tighten 不要旋得太紧
流动相 pH>=7 - 由于硅胶溶解使柱塌陷(除非使用专门的柱子)
3. Injection sol源自ent stronger than mobile phase - likely split and broad peaks, dependent on volume
色谱柱和色谱系统的故障检修PPT教学课件
2020/4/8
3
Pressure Issues 压力问题
Column Observations 色谱柱观测
Potential Problems 潜在的问题
High pressure 压力高
Plugged frit 堵塞滤头 Column contamination 色谱柱污染 Piugged packing 堵塞填料
★ When using either Hexane or Methylene Chloride the column must be flushed with
Isopropanol before returning to your resvered-phase mobile phase.
当用已烷蔌二氯甲烷柱子时,必须先用异丙醇冲洗,然后再用你的反相流动相
HPLC Column and System Troubleshooting
色谱柱和色谱系统的故障检修
What Every HPLC User Should Know
每个HPLC使用者应该知道什么
2020/4/8
1
HPLC Components HPLC 的组成
Pump 泵 Injector/Autosampler 进样器/自动进样器 Column 色谱柱 Detector 检测器 Data System/Integrator 数据系统/积分仪表
2020/4/8
6
Column Cleaning柱子清洗
Normal Phase Solvent Choices in Order of Increasing Strength
为了增加强度选用正相溶剂
Use at least 50 ml of each solvent 每种溶剂至少用50 ml
32_气相色谱仪器故障的诊断与排除课件
色谱柱出现固定相 老化色谱柱,现象未
流失
好转需换固定液流失
较小的柱子
进样口污染
清洗
在双柱操作过程中 ,平衡柱流
两路载气不平衡
速
现象 故障可能原因
排除方法
柱入口处漏(连接处, 排除漏气 注样器体,隔垫)
补充气流量太低
增加气流量到30ml/分
等温时, 检测器炉温有变动,未 足够的时间使基线稳定 基线向 达平衡 一个方 放大器失灵(离子化检 检修 向漂移 测器)
柱固定相流失严重 改用低流失的柱子
零 检测器污染
清洗检测器
放大器失灵
检修
记录仪失灵
检修
量程设定错误
设定合适的量程
现象
故障可能原因
载气源压力太低,使 调节器不能正常工作
基线正弦 波漂移
双柱色谱仪的补偿不 良恒温箱温度控制失
(周期较短) 灵
检测器炉温箱隔热不 好
排除方法
更换 检查两柱的流速并加以 调节,使之互相补偿
现象 故障可能原因
排除方法
前延 样品在系统中冷凝 适当升高汽化室、色谱柱和
峰
检测器的温度
进样技术欠佳
重复进样,提高进样技术
载气流速太低
适当提高载气流速
进样口汽化温度太 升高进样口的温度,以缩短
低
汽化时间
两个峰同时出现 优化色谱条件,必要时更换
色谱柱
试样与固定相中的 换用惰性载体或增加固定液
载体有作用
定(指TCD)
的盖子等盖紧
现象 故障可能原因 进样垫流失
排除方法 更换
密封垫型号错误或已
基线噪 磨损
音
衬管污染
更换 清洗或更换衬管
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2021/1/12
6
Column Cleaning柱子清洗
Normal Phase Solvent Choices in Order of Increasing Strength
为了增加强度选用正相溶剂
Use at least 50 ml of each solvent 每种溶剂至少用50 ml
50% Methanol : 50% Chloroform 50% 甲醇 : 50% 氯仿
2021/1/12
4
Determining the Cause and Correcting
High Back Pressure 查出原因 纠正压力
Check pressure with/without column - many pressure problems are due to blockages in the system or guard 有/无柱子时检查压力 - 许多压力问题是由于系统或保护柱的阻塞
100% Ethyl Acetate 乙酸乙酯
2021/1/12
7
How to Change a Frit 怎样更换滤头
Column Inlet Frit 柱进口滤头 Column Body 柱身 Compression Ferrule 压缩金属套圈
Wear gloves 戴手套 Do not allow bed to dry 不要让底座干燥 Do not touch the column-body heat will extrude packing 不要使柱身受热,否则填料会喷出 Do not over tighten 不要旋得太紧
Female End Fitting 旋好尾端螺母 Male End Fitting 旋好尾端螺头
2021/1/12
8
Preventing Back Pressure Problems
压力问题的预防
Use column protection 柱保护
- Guard columns 保护柱/预柱 - In-line filters 在线过滤器
- precipitate from sample or buffer 样品或缓冲液中的沉淀物
Back flush column - Clear plugged frit 反冲柱子-清洁阻塞的滤头 Change frit - Clear plugged frit 更换滤头
2021/1/12
5
Column Cleaning 柱子清洗
All of these components can have problems and require troubleshooting. 所有这些部件可能出现故障而需要检修。
2021/1/12
2
Categories of Column Problems 色谱 峰形 C. Retention 保留时间
If Column Pressure is high 如果柱压高:
Wash column - Eliminate column contamination and
冲洗柱子
plugged packing 排除柱污染和填料堵塞
- high molecular weight/adsorbed
compounds 高分子量/被吸附化合物
2021/1/12
3
Pressure Issues 压力问题
Column Observations 色谱柱观测
Potential Problems 潜在的问题
High pressure 压力高
Plugged frit 堵塞滤头 Column contamination 色谱柱污染 Piugged packing 堵塞填料
F lush with stronger solvents than your mobile phase
用比你的流动相更强的溶剂冲洗
Reversed-Phase Solvent Choices in Order of
Increasing Strength 为了增加强度选择反相溶剂
Use at least 25 ml of each solvent for analytical columns
Sample Preparation 样品预处理 Appropriate column flushing
适当的柱冲洗 Filter buffered mobile phase
过滤缓冲流动相
2021/1/12
9
Preventing Back Pressure Problems:In-Line Devices
★ When using either Hexane or Methylene Chloride the column must be flushed with
Isopropanol before returning to your resvered-phase mobile phase.
当用已烷蔌二氯甲烷柱子时,必须先用异丙醇冲洗,然后再用你的反相流动相
对于分析柱每种溶剂至少用25 ml 冲洗
Mobile phase without buffer salts 没有缓冲盐的流动相 100% Methanol 甲醇 100% Acetonitrile 乙腈 75% Acetonitrile :25% Isopropanol 75乙腈 : 25%异丙醇 100% Isopropanol 异丙醇 100% Methylene Chloride★ 二氯甲烷 100% Hexane ★ 已烷
HPLC Column and System Troubleshooting
色谱柱和色谱系统的故障检修
What Every HPLC User Should Know
每个HPLC使用者应该知道什么
2021/1/12
1
HPLC Components HPLC 的组成
Pump 泵 Injector/Autosampler 进样器/自动进样器 Column 色谱柱 Detector 检测器 Data System/Integrator 数据系统/积分仪表