第七章流式细胞术在混合表型急性白血病(MPAL)中的应用

流式细胞术系列之-白血病免疫分型

M1：未分化的原粒细胞白血病；
FAB
分
M2：部分分化的原粒细胞白血病；
型
急非淋
M3：急性早幼粒细胞白血病；
（ANLL） M4：急性粒、单核细胞白血病；
急性髓细胞白血病(AML)
M5：急性单核细胞白血病； M6：急性红血病或红白血病；
M7：急性巨核细胞白血病。
MIC分型
形态学
(morphology， M ) ：传统的骨髓片检查
B-ALL
在CD45/SS点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟淋巴细胞比较CD45弱表达
du p eng .0 01
R3
R5 100
R4
101
R1
R2

102
103
CD4 5 PerCP-Cy5.5
104
CD19、CD20、 CD10、cCD72、 CD34、HLA-DR 阳性
AML-M0
AML-M6 （急性红白血病）
• 髓细胞白血病红细胞分化型对应于FAB的M6，在形态学上幼稚红细胞计数大于髓系细胞的50%且髓系幼稚细胞占非红细胞的30%以上。然而因为幼红会因标本处理中溶血步骤而被破坏，当流式细胞仪分析时有核红细胞占总细胞数的50%以下时，红细胞白血病很难与MDS（骨髓增生异常综合症）和早期白血病区分开来。
故难圈出独立成群的肿瘤细胞。 • 对于M4病例一般都设多个门对异常细胞进行分析，且每个异常细胞群根据
其成熟度的不同，表型也可能互不相同。 • 本例为M4EO，增多的嗜酸细胞SSC信号与早幼粒相似;CD45信号与单核细
胞相似。
• CD13和/或 CD33阳性， CD33>CD13， HLA-DR、 CD14（+/-）、 CD15与CD11B 阳性。CD34阳性/阴性，MPO 阳性。

临床流式细胞术在白血病诊断中的应用

临床流式细胞术在白血病诊断中的应用白血病是一种危害人类健康的恶性肿瘤疾病，而临床流式细胞术作为一种高度敏感和特异的检测手段，在白血病的诊断与疾病监测中发挥着重要作用。

本文将探讨临床流式细胞术在白血病诊断中的应用，为临床医生提供更准确、更快速的白血病诊断方法。

一、渗透溶解细胞检测临床流式细胞术在白血病诊断中的首要步骤是对患者样本进行渗透溶解细胞处理，使得白细胞膜溶解并释放细胞内内容物。

这一步骤的重要性在于有效提取细胞，并将它们分散至测试管中。

二、特异性标记在渗透溶解细胞处理后，接下来的关键步骤是对白细胞进行特异性标记。

临床医生可以将荧光抗体添加到细胞中，这些荧光抗体能够与特定蛋白质结合，从而将不同类型的白细胞区分开来。

通过这种方式，临床流式细胞术可以提供全面且准确的白血病亚型识别。

三、流式细胞术仪器操作临床流式细胞术采用了先进的仪器，如流式细胞仪，有助于实现高通量的细胞检测与数据分析。

流式细胞仪通过激光束照射细胞，然后测量细胞散射和荧光信号。

这种技术使得临床医生能够快速、高效地分析数以万计的细胞，并获得准确的白血病细胞计数。

四、数据分析与结果解读得益于流式细胞术仪器的高度灵敏性，临床医生可以对获得的数据进行详细的分析与解读。

通过比较患者样本与正常对照品的差异，医生能够确定是否存在白血病细胞的存在。

此外，还可以进一步识别出不同的白血病亚型，以指导后续治疗决策。

五、临床应用与前景展望临床流式细胞术在白血病诊断中已取得显著的成果，尤其在慢性淋巴细胞性白血病 (CLL) 的诊断与监测上应用广泛。

同时，该技术在急性白血病、骨髓瘤等其他白血病亚型的诊断中也表现出了良好的应用前景。

未来，临床流式细胞术在白血病诊断领域的应用还会得到进一步的发展。

随着技术的不断更新和改进，该检测方法将变得更加高效、更加精确。

此外，流式细胞术与其他检测手段的结合也为白血病诊断提供了新的思路和方法。

结论临床流式细胞术作为一种敏感、特异的检测手段，为白血病的诊断与疾病监测提供了重要的工具。

流式细胞分析在临床血液学中的应用

流式细胞分析在临床血液学中的应用
1.白血病诊断和监测：
白血病是由于骨髓内的恶性细胞大量增殖导致的一种血液系统疾病。

流式细胞术可以根据细胞大小、颜色和表面标记物的表达水平快速分析并鉴别异常细胞。

这对于白血病的早期诊断、分类和监测来说非常重要。

2.免疫功能评估：
流式细胞术可以评估患者的免疫功能。

通过将标记有特定抗体的细胞与患者的血液混合，可以测量细胞表面抗原的表达水平。

这有助于确定患者是否有免疫缺陷，以及免疫功能是否正在正常运行。

3.血液病的异常细胞鉴定：
流式细胞术可以鉴别和计数血液中的异常细胞。

例如，对于淋巴瘤等恶性疾病，流式细胞术可以检测和分类恶性细胞，以便进行早期诊断和个体化治疗。

4.红细胞和血小板计数：
流式细胞术可以用于快速准确地计数红细胞和血小板。

在患者需要进行输血或者有出血倾向的情况下，流式细胞术可以提供非常重要的信息。

5.免疫治疗监测：
流式细胞术可以用于监测免疫治疗的效果。

例如，在进行造血干细胞移植后，流式细胞术可以帮助监测移植后的免疫细胞比例和功能。

这对于治疗干细胞移植相关并发症和个体化治疗来说非常重要。

总之，流式细胞分析是一种在临床血液学中非常有用的技术，可以用于白血病诊断和监测、免疫功能评估、血液病的异常细胞鉴定、红细胞和血小板计数以及免疫治疗监测。

随着技术的发展，流式细胞分析的应用将进一步扩大，为临床血液学的诊断和治疗提供更多的帮助。

四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(完整版)

四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版）白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。

白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。

白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。

采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。

准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。

鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。

已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。

目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。

鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。

一、四色方案的基本要求理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。

流式细胞术在急性白血病免

流式细胞术在急性白血病免疫分型中的应用中山大学附属第三医院血液内科胡元医师•流式细胞术工作原理•流式细胞术的应用•白细胞分化抗原与白血病•白血病细胞的免疫分型1)急性髓系白血病2)急性淋巴细胞白血病3)急性混合细胞白血病4)急性未分化细胞白血病5)慢性粒细胞白血病6)慢性淋巴细胞白血病What Is Flow Cytometry（FCM）?l Flow ~ cells in motionl Cyto~ celll Metry~ measurel Measuring properties of cells while in a fluid stream流式细胞仪结构•液流系统依次传送待测样本中的细胞到激光照射区。

•光路系统细胞由激光激发，通过光学滤片产生光信号，并传送到相应的探测器。

•电系统把光信号转换为电信号。

•分选系统对于有分选装置的仪器，电系统可初始化分选条件。

工作流程•待测细胞标记(荧光素,荧光+单抗,荧光+双抗)，制成单细胞悬液•待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域•激光与荧光素标记的待测细胞相交，激发荧光素产生荧光信号•激光光束与经过荧光素标记的细胞相交，荧光素受激发后产生荧光信号，通过对荧光信号的检测和定量分析，从而得到细胞相关参数的定性、定量测定。

前向角散射（FSC）：反应被测细胞的大小（直径）FSCDetector侧向角散射(SSC)：细胞内精细结构、细胞内颗粒信息激光束SSC DetectorFSCDetectorFCM光电系统何为“设门”？通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。

如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据FSC或细胞大小，在FSC，SSC的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。

正常骨髓CD45/SSC 流式细胞图FSCS S CGranulocytesMonocytesLymphocytesRBCs , Debris,Dead CellsSSC/FSC 设门二维散点图流式细胞术的应用•免疫细胞的检测、定量、分选（胞内外CD分子）•血小板（CD41.42b.61.63,网织血小板,PA-IgG）•DNA、RNA及染色体检测(DNA倍体异质性)•细胞凋亡与增殖（半胱氨酸蛋白酶;DNA含量,Ki-67,CD71）•造血干细胞检测、定量、分选（CD34，磁珠分选）•细胞内蛋白检测(癌基因蛋白,抑癌基因蛋白,P170)•等等白血病相关分化抗原•系列相关性抗原1)T CD2、(m/Cy)CD3、CD4、CD5、CD7、CD82)B CD10、CD19、CD20、(Cy)CD22、(Cy)CD79a3)NK CD16,CD56,CD3-4)浆细胞5)髓系：CD13、CD33、CD14、CD15、CD117、CD11b、MPO6)红细胞：Gly-A7)巨核细胞系：CD41，CD42b，CD61，CD 63白血病相关分化分化抗原•非系列相关性抗原CD34、CD45、HLA-DR、CD38、CD71、TdT•白细胞共同抗原CD45结果判断CD45 /SSC设门MPO≥10%为阳性，CD34 > 10%，其他CD≥20%为阳性急性白血病细胞的免疫分型FCM实例Mü至少表达1个髓系特异性CD，如CD33，CD117，CD13，MPOü可表达CD7或CD4M1ü表达MPO，CD13，CD33，CD117，CD15，HLA-DR。

流式技术在白血病诊断的应用

免疫分型常用的免疫标志及其意义
1．白血病系列分化抗原
T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。 B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。 NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。
红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。
M6： HLA－DR，CD34、CD13、CD33阳性， CD45－SSC图显示主要为红系成份。 M7： 1） CD61（GpⅢa）和/或CD41（GpⅡb-Ⅲa）阳性。 2）GpⅡb/Ⅲa与CD34以减少激活血小板的粘附。
M6
2．ALL：
ALL：儿童中最常见的恶性肿瘤，约占全部肿瘤的25％
②细胞内染色：有些胞内异性抗原的检测对白血病的免疫分型尤为重要，（如TdT, MPO, cCD3, cCD22, 以及
胞浆内Ig的表达。胞内染色的关键是使细胞膜通透。）
③胞膜和胞内的同时染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞内染色，最后是DNA染色。（如，
用于表面标记的荧光素应不被随后的固定和通透步骤所影响，而对于胞内染色，所用的荧光素应足够小能穿透到胞膜内。）
M1： 1）CD13＋、CD33＋、HLA－DR－， (CD34<M0，可能表达部分 CD15)。 M2： 1）CD15>M1， CD34<M1， CD13>CD33 2）多数病例HLA－DR（-）。 3）CD45－SSC图显示从髓系blast区至成熟骨髓细胞区的连续细胞带，CD45－SSC图有助于确定blasts比例。
3. 基于血液肿瘤的复杂性，提供一个通用的抗体选择策略是不现实的。 2）国际上迄今也没有一致性的抗体组合。 3）应该意识到，没有一个的抗体组合可以解决所有的临床相关答案。 4）一个局限性的小组合也可能影响对样本的正确评估和分类。 5）确认细胞异常的能力与所用抗体的数量直接成正比。

流式细胞术在我院急性白血病免疫分型中的应用

ｄｏｉ：１０．１１７４８／ｂｊｍｙ．ｉｓｓｎ．１００６．１７０３．２０１３．０６．０１６
Байду номын сангаас
ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙｉｎＩｍｍｕｎｅｆｒｏｍｔｈｅＣｌａｓｓｉｉｃｆａｔｉｏｎｏｆＡｃｕｔｅＬｅｕｋｅｍｉａ
（福建中医药大学附属三明市中西医结合医院，福建三明３６５００１）摘要：目的探讨本实验室所用１３种单抗对白血病免疫分型的应用价值。方法应用流式细胞术（ＦＣＭ）使用１３种单抗
对９９例急性白血病进行免疫分型，与形态学分型相比较。结果使用１３种单抗从９９例急性白血病中分出髓系白血病
（ＡＭＬ）５９例、淋系白血病（ＡＬＬ）２７例、混合型（ＭＡＬ）５例、未分化型（ＡＵＬ）２例，诊断率达９３．９％（９３／９９）。ＡＭＬ中各抗原表达情况：ｃＤ１３＞ＣＤ ”＞ｃＤｌ４、ｃＤ７＞ｃＤ２、ｃＤｌ９＞ＣＤ１０＞ＣＤ５＞ＣＤ２０，其中多表达ｃＤｌ３、ｃＤ３３；ＡＬＬ中各抗原表达情况：ＣＤｌ９＞ＣＤｌ３＞ＣＤｌ０＞ＣＤ２０＞ＣＤ３３＞ＣＤ５＞ＣＤ７＞ＣＤ２、ＣＤ …其中ＣＤｌｕ、ＣＤＣＤＣＤ２０表达率较高。免疫分型与形态学分型结果相比较，ＡＭＬ二者的吻合率为９０．５％（５７／６３）、ＡＬＬ二者的吻合率为７６．５％（２６／３４）；其中１例Ｍ０免疫分型为Ｂ／Ｍ混合、１例Ｍｌ免疫分型为Ｔ／Ｍ混合、１例Ｍａ免疫分型为Ｔ／Ｍ混合、１例Ｌ。免疫分型为Ｂ／Ｍ混合、１例Ｌ免疫分型为Ｔ／Ｂ混合、１例Ｌ：免疫分型为Ｌｙ＋一ＡＭＬ、２例Ｌ免疫分型为ＡＵＬ；１例形态学为浆细胞白血病的免疫分型为ＡＭＬ、１例淋单混合型白血病ＣＤ、ＣＤ。、ＣＤ。阳性。结论合型和未分化型白血病的诊断亦能明确。关键词：流式细胞术；白血病；免疫分型

流式细胞术在白血病和淋巴瘤中的应用

第二十页，课件共49页
示D10-CD117+/-HLA-DR-
第二十一页，课件共49页
示例：AML-M3V 初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-
第二十二页，课件共49页
混合细胞性白血病的免疫分型
双表型：一种白血病细胞同时表达两个或两个以上系列标志。
原始细胞:CD34+CD11B-
原始细胞:CD34+CD11B+
各阶段细胞按一定的比例分布
出现分化阻滞
原幼细胞<5%
原幼细胞>20%
第三页，课件共49页
免疫分型需要掌握什么理论知识？
正常造血细胞的抗原表达规律
不同系列的细胞表达的抗原？同一系列不同阶段的细胞表达的抗原？每种抗原的表达强度？
正常幼稚B细胞：<5.0%,表达CD10、CD19、 CD22、弱表达CD20，少量CD10stCD34+TDT+
免疫分型常用的抗体
AML
CD34、CD117、CD33、CD13、HLA-DR、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO
怀疑M6加做CD71、GPA 怀疑M7加做CD61、CD41
15.6%
第四十三页，课件共49页
示例：细针穿刺 B-NHL
第四十四页，课件共49页
示例：脑脊液标本 B-NHL
第四十五页，课件共49页
示例：正常浆细胞
第四十六页，课件共49页
示例：MM
第四十七页，课件共49页
示例：浆样淋巴瘤
第四十八页，课件共49页
流式细胞术检测BCR-ABL融合蛋白
第四十九页，课件共49页

流式细胞术在白血病和淋巴瘤中的应用共52页PPT

END
45、法律的制定是为了保证每一个人自由发挥自己的才能，而不是为了束缚他的才能。—— 罗伯斯庇尔
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
流式细的不是针对犯罪的法律，而是针对疯狂的法律。 ——马克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就像影子跟随着身体一样。— —贝卡利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进步。— —杰弗逊 44、人类受制于法律，法律受制于情理。— —托·富勒