大豆铁蛋白(Ferritin)基因家族的克隆与表达特性分析--油料作物学论文模板

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铁蛋白Ferritin原核表达和纯化及纳米颗粒胞外自组装

铁蛋白Ferritin原核表达和纯化及纳米颗粒胞外自组装李志鹏;刘福航;崔奎青;石德顺;刘庆友【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2018(049)001【摘要】This study aimed to express Helicobacter Pylori nonheme iron-containing Ferritin protein in Escherichia coli,and obtain the Ferritin nano-particles with natural nanostructure,for the application in disease and antigen presentation study by surface modification.To improve the expression of Ferritin,Ferritin gene was synthesized according to the Escherichia coli biased codon and cloned to the pET-32a vector.The recombinant protein was purified by affinity chromatography using His-trap Ni2+ column,and refold by gradient dialysis.The refolding protein was detected by transmission electron microscope to identify the nano-structure of the self-assembling protein.The results showed that the prokaryotic expression vector pET-32a-Ferritin was successfully constructed,and the recombinant His-Ferritin protein was expressed after induced by IPTG.The recombinant Ferritin protein was mainly expressed in the form of inclusion body.By use of Histrap Ni2+ affinity chromatography column,we obtained the recombinant Ferritin protein with 96％ purity.The purified protein was in gradient dialysis to 2 mol · L-1 urea buffer with a desalting column to obtain the refold protein.The refold protein had a nanostructure with the diameter of 12-20 nm under the transmissionelectron microscope,which was similar to the natural nanoparticles.In this study,the prokaryotic expression system of Ferritin was successfully established and the recombinant protein with nanostructure was prepared by induction expression,affinity chromatography purification and refolding.This study lays the foundation for the application of Ferritin in biomedical field.%旨在使用原核表达系统表达幽门螺杆菌铁蛋白Ferritin,获得具有天然纳米结构的铁蛋白纳米颗粒,从而通过表面修饰等方法应用于疾病治疗和抗原呈递等研究.将铁蛋白氨基酸序列按照大肠杆菌常用密码子进行优化,合成重组铁蛋白基因并克隆至原核表达载体.使用镍柱进行亲和层析纯化重组蛋白,并在透析复性后利用透射电子显微镜对体外自组装纳米颗粒进行鉴定.结果显示,本研究成功构建了pET-32a-Ferritin原核表达载体,并使用IPTG进行诱导表达获得His-Ferritin 重组铁蛋白,且主要以包涵体形式存在.通过镍柱进行亲和层析纯化获得纯度为96％的重组蛋白,使用脱盐柱将重组蛋白梯度透析至2 mol·L-1尿素缓冲液中进行复性后,使用电子显微镜观察胞外自组装重组蛋白为粒径在12～20 nm的均一的纳米结构,与天然铁蛋白纳米粒子类似.本研究成功建立了Ferritin蛋白原核表达体系,通过诱导表达、亲和层析纯化及复性获得了具有天然纳米结构的铁蛋白纳米颗粒,为其在生物医药领域的应用奠定基础.【总页数】8页(P75-82)【作者】李志鹏;刘福航;崔奎青;石德顺;刘庆友【作者单位】广西大学,亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室,南宁530004;广西大学,亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室,南宁530004;广西大学,亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室,南宁530004;广西大学,亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室,南宁530004;广西大学,亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室,南宁530004【正文语种】中文【中图分类】Q812【相关文献】1.犬瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白的原核表达与纯化 [J], 陈蓉;李辉;施振旦2.小鼠VEGFR2胞外1-4IgG样结构域的原核表达、纯化及活性鉴定 [J], 王伟;殷小涛;李云奇;田仁礼;阎瑾琦;高江平;于继云3.铁蛋白与法氏囊病毒核衣壳蛋白重组蛋白的原核表达及纳米颗粒胞外自组装 [J], 杜梦潭;张伟业;刘兴健;李轶女;张志芳;胡小元4.铁蛋白与口蹄疫病毒VP1在大肠杆菌中融合表达及纳米颗粒自组装 [J], 张伟业;宋浩志;刘兴健;李轶女;张志芳5.铁蛋白轻链的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备 [J], 金蕾;张慧珍;杨继要;赵向锋;王琳;吴逸明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大豆品质调控基因克隆和功能研究进展

下调储藏蛋白的表达。大豆异黄酮是大豆生长过程中形成次生代谢产物，具有多种生物活性，在动植物体内有着广泛的生理作用。近年来大豆异黄酮已成为大豆最弓１人注目功能成分之一，也是食品与营养学研究热点之一。类黄酮类物质可能通过调节结节的产生从而调控植物的根瘤发育、生长繁殖和固氮作用。大豆异黄酮对乳腺癌、前列腺癌、心血管疾病和骨质疏松症的治疗也表现出其他一些有益的效应。目前研究表明，ＧａｚＭＹＢＩ７６可以调控ＣＨＳ８的表达，而干扰ＧｍＭＹＢＩ７６的表达降低了大豆根毛中异黄酮的水平，这表明ＧｍＭＹＢ１７６对于异黄酮的生物合成是必需的。本文综述了大豆种子油分、蛋白以及异黄酮含量相关基因的研究进展，并对大豆种子油分、蛋白及异黄酮在转录水平和／或其他方面所受到的调控进行阐述。关键词：大豆；油分；种子蛋白；异黄酮
基因，从而提高了种子油含量。大豆籽粒富含蛋白质，占籽粒干物质的４Ｏ％左右（３１％一５５％）。大豆蛋白含有８种人体必需的氨基酸，是一种品质优良的植物性蛋白质，在膳食中可以代替部分动物性蛋白质。植物中油分和蛋白质往往是负相关的，ＧｍＤＯＦ４和６ｍＰＯＦｌｌ类转录因子可以提高植物油份含量，但其直接结合ＣＲＡＩ启动子，从而
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｏｙｂｅａｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｃａｓｈｃｒｏｐｓａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓｅｄｉｂｌｅｏｉｌａｎｄｖｅｇｅｔａｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎｓｆｏｒｈｕｍａｎｂｅｉｎｇｓ．Ｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｓｏｙｂｅａｎｉｓｒｅｃｅｎｔｌｙｆｏｃｕｓｅｄｂｙｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ，ｂｒｅｅｄｅｒｓａｎｄｐｕｂｌｉｃｐｅｏｐｌｅ，ｂｅｃａｕｓｅｉｔｓｖａｌｕｅｉｓｍａｉｎｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅ

大豆MYB基因GmMYBJ7的克隆及表达分析

华北农学报·2011，26（5）：107-111收稿日期：2011－05－20基金项目：中央级公益性科研院所科研业务费专项资金资助（2008-17）作者简介：杨文杰（1970－），男，山东泰安人，讲师，博士，主要从事生物化学与分子生物学研究。

通讯作者：唐益雄（1965－），男，湖南邵东人，研究员，博士生导师，博士，主要从事生物化学与分子生物学研究。

大豆MYB 基因GmMYBJ7的克隆及表达分析杨文杰1，2，吴燕民2，唐益雄2（1．淮阴师范学院江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室，江苏淮安223300；2．中国农业科学院生物技术研究所，北京100081）摘要：MYB 蛋白是植物体中一类重要的转录因子，广泛参与植物生理代谢和发育过程的调节。

本研究对利用RACE-PCR 分离克隆的MYB 转录因子基因GmMYBJ7的功能进行了初步研究。

Norhern 杂交对GmMYBJ7在不同组织中的表达情况进行了检测，结果只在茎、叶中检测到了GmMYBJ7的表达；酵母表达结果显示，GmMYBJ7具有明显的转录激活功能，β-半乳糖苷酶活性为24．31U ；半定量RT-PCR 检测显示，在表达GmMYBJ7的转化烟草中，类黄酮代谢途径中的苯丙氨酸氨基裂解酶（PAL ）、肉桂酸-4-羟化酶（C4H ）、4-香豆酰辅酶A 连接酶（4CL ）、查尔酮合成酶（CHS ）、黄烷酮-3-羟化酶（F3H ）等关键酶的表达显著降低，结果表明，GmMYBJ7可能参与植物类黄酮合成的调控。

关键词：大豆；MYB 转录因子；基因表达调控中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1000－7091（2011）05－0107－05Cloning and Characterization of the MYB Gene GmMYBJ 7from SoybeanYANG Wen-jie 1，2，WU Yan-min 2，TANG Yi-xiong 2（1．Huaiyin Normal University ，Jiangsu Key Laboratory for Eco-Agricultural Biotechnology around Hongze Lake ，Huai'an 223300，China ；2．Biotechnology Research Institute ，ChineseAcademy of Agricultural Sciences ，Beijing 100081，China ）Abstract ：The MYB proteins play an important role in plant ，which involved in the regulation of the process of metabolism and development extensively．The function of MYB transcription factor gene GmMYBJ7，which was isola-ted from soybean using the method of RACE-PCR ，was to be clarified preliminarily in this paper．The expression pattern of GmMYBJ7in different organs was studied using Northen blot．The results showed that the expression of GmMYBJ7was detected in the leaves and stems．The transcriptional activation ability of GmMYBJ7protein was con-firmed by the yeast system with β-galactosidase activity of 24．31U．Semi-quantitative RT-PCR analysis indicatedthat GmMYBJ7may also repress the expression of some flavonoid biosynthetic genes ，such as PAL （Phenylalanine ammonia lyase ），C4H （cinnamate-4-hydroxylase ），4CL （4-coumaroyl-CoA ligase ），CHS （Chalcone Synthase ），CHI （chalcone isomerase ）and F3H （flavanone 3-hydroxylase ），which is considered to be related to flavonoid biosynthe-sis in palnt．Key words ：Soybean ；MYB transcription factors ；Gene expression and regulation 转录因子对植物的生长发育及生理代谢调控均具有十分重要的作用。

《2024年大豆编码zf-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能研究》范文

《大豆编码zf-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能研究》篇一一、引言作为重要的油料作物之一，大豆在农业经济中具有不可替代的地位。

随着基因组学的发展，人们对大豆抗逆性及病害抗性机制的深入了解成为了重要的研究方向。

本文以大豆编码zf-RVT 结构域的五个非典型NLR（Nucleotide Binding Site-Leucine Rich Repeat）基因作为研究对象，对其功能进行深入探讨。

二、研究背景及意义NLR基因是一类重要的植物抗病基因，通过识别病原菌效应蛋白来启动抗病反应。

而zf-RVT结构域是NLR蛋白中一种常见的结构特征，在植物抗病过程中发挥重要作用。

本研究选取的五个非典型NLR基因，可能在抗逆境及抗病害中发挥独特的调控作用，对其功能的解析不仅有助于加深对大豆抗病机制的理解，也有助于大豆抗逆性及产量提高的分子育种研究。

三、材料与方法1. 材料选择选取不同大豆品种，包括具有不同抗病性能的品种作为实验材料。

2. 基因克隆与序列分析利用PCR技术克隆出五个非典型NLR基因的序列，并利用生物信息学方法进行序列分析。

3. 表达模式分析通过实时荧光定量PCR技术，分析这些基因在不同组织、不同生长阶段的表达情况。

4. 功能验证通过构建基因的过表达和沉默载体，在大豆中进行转基因实验，观察转基因后植株在逆境和病害条件下的表型变化。

四、实验结果1. 序列分析结果通过对五个非典型NLR基因的序列分析，发现这些基因具有zf-RVT结构域，且与其他已知的NLR基因具有较高的相似性。

同时，这些基因在不同的大豆品种中具有不同的序列变异。

2. 表达模式分析结果实时荧光定量PCR结果表明，这些非典型NLR基因在大豆的不同组织及生长阶段具有不同的表达模式，可能与其抗逆及抗病功能有关。

3. 功能验证结果转基因实验显示，过表达这些非典型NLR基因的大豆植株在逆境和病害条件下的抗性明显增强，而沉默这些基因的大豆植株则表现出对逆境和病害的敏感性增加。

植物对铁元素吸收、运输和储存的分子机制

植物对铁元素吸收、运输和储存的分子机制周晓今;陈茹梅;范云六【摘要】Iron is essential for growth and development of all plants. Since the soil salinity keeps increasing, the availability of iron in soils is limited. Therefore, plants usually suffer from iron deficiency, which reduces the yield and quality of crops, and in tum affects essential mineral nutrition of human. During long - term evolution, higher plants established an adequate system to absorb and utilize iron. In this article, research status on molecular mechanism of iron uptake, translocation and storage in plants were reviewed. In addition, research progresses on enrichment of iron content and environmental suitability of plant by biofortification were summarized. Research perspectives in this field were also discussed in this review.%铁是植物生长发育所必需的微量矿物元素之一.随着土壤盐碱化程度加剧,植物缺铁现象愈发普遍,导致作物产量和品质降低,进而影响人们的营养健康.植物在长期的进化过程中,形成了较完善的铁吸收和利用系统.本文对植物铁吸收、运输和储存等方面的研究现状进行了综述,总结了近年来通过生物加强提高植物铁元素含量和环境适应性的研究成果,并对未来可能的研究领域提出了展望.【期刊名称】《作物研究》【年(卷),期】2012(026)005【总页数】6页(P605-610)【关键词】植物;铁;吸收与转运;分子机制;生物加强【作者】周晓今;陈茹梅;范云六【作者单位】中国农业科学院生物技术研究所,北京100081;中国农业科学院生物技术研究所,北京100081;中国农业科学院生物技术研究所,北京100081【正文语种】中文【中图分类】Q945.12微量矿物元素作为动植物生长所必需的营养元素之一，直接参与机体的生理和生化活动，对动植物的新陈代谢、生长发育均起着极其重要的作用。

《2024年大豆编码zf-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能研究》范文

《大豆编码zf-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能研究》篇一一、引言作为全球重要的粮食来源，大豆具有很高的营养价值与经济效益。

随着植物分子生物学研究的深入，对其遗传特性与免疫防御机制的探讨尤为重要。

NLR基因，即富含核苷酸位点的R蛋白，作为植物的重要抗性基因，在植物抗病过程中发挥着关键作用。

本文以大豆为研究对象，针对编码zf-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能进行深入研究。

二、材料与方法本章节介绍了研究中用到的实验材料（大豆样品）及方法。

通过文献调研及数据分析方法确定了研究的目标，选择以具有zf-RVT结构域的五个非典型NLR基因作为研究对象。

实验方法包括基因克隆、序列分析、转基因技术、基因表达分析以及表型鉴定等。

三、实验结果1. 基因克隆与序列分析通过PCR技术成功克隆了五个非典型NLR基因的编码区序列，并进行了序列比对分析。

结果显示，这些基因具有典型的NLR结构特征，其中zf-RVT结构域具有高度的保守性。

2. 转基因技术及基因表达分析利用农杆菌介导的转基因技术，将这五个非典型NLR基因分别转入大豆中。

通过实时荧光定量PCR技术检测基因的表达水平，发现这些基因在转基因大豆中均有不同程度的表达。

3. 表型鉴定及抗病性分析通过对转基因大豆进行表型鉴定及抗病性分析，发现这些非典型NLR基因在提高大豆抗病性方面具有显著作用。

其中，某些基因对特定病原菌的抗性尤为突出。

四、非典型NLR基因的功能分析1. 识别机制这些非典型NLR基因可能通过识别病原菌的特定分子模式来触发防御反应。

zf-RVT结构域可能在此过程中发挥关键作用，参与信号传导与识别过程。

2. 信号传导与调控这些NLR基因在植物体内可能通过与其他蛋白的相互作用来传递信号，进而调控下游防御反应的启动与执行。

这些基因的表达模式和调控机制对于理解植物免疫系统的复杂性具有重要意义。

3. 抗病性及互作关系通过研究这些非典型NLR基因与病原菌的互作关系，发现它们在提高大豆抗病性方面具有显著作用。

免疫学

植物铁蛋白的纯化摘要干豌豆种子粗提物经MgC2盐析、AcA22 !凝胶过滤和DEAE -纤维素阴离子交换柱层析等方法进行纯化，以邻菲咯啉显色法检测铁蛋白，最后获得纯的铁蛋白．铁蛋白(Ferritin) 是广泛存在于动物、植物和微生物中的一种由24个亚基组成的贮铁关键蛋白质,其贮存的铁具有可溶、无毒和生物可给性等特点[1]。

已有的研究表明,使用孟德尔遗传方法和生物技术途径提高大豆和其它谷物类种子中铁蛋白的表达和其它可溶性铁成分,将有助于全球性缺铁问题的有效解决。

纯化的铁蛋白在PAGE上显示-脐带，SDS—PAGE显示该蛋白仅含28 kg一条亚基．纯化的豌豆铁蛋白免疫7周后，琼脂糖双扩散法检测抗血清效价达1：32．用分级盐析法纯化抗血清，纯化后的抗体用琼脂糖双扩散法对大豆铁蛋白粗提物有免疫交叉反应．英文摘要：ry Pea Seed Extract by salting out, gel filtration MgC2 AcA22! And DEAE -cellulose anion exchange column chromatography purification, 10 phenanthroline colorimetric method todetect ferritin, finally obtain pure ferritinferritin (Ferritin).There is extensive iron storage in a key protein of animal, plant and microorganism is composedof 24 subunits, the storage ofiron is soluble, non-toxic and bioavailability characteristics [1]. Studies have shown that, using the Mendel genetic methods and biological methods to increase the expression of soybean andother cereal seed ferritin and other soluble iron components,effective will be helpful forsolving the global problem of iron deficiency. The purified protein showed that iron - cord on PAGE, SDS and PAGE showed that the protein containing only 28 kg a subunit. The purified pea ferritin 7 weeks after immunization, the titer of the antiserum was 1:32. by agarose double immunodiffusion method of salting out purification of antiserum, antibody purifiedbyagarose double diffusion method of soybean iron protein extracts have immune cross reaction.关键词铁蛋白，纯化铁蛋白(ferritin)是，泛存在于动物、植物和微生物中的一种24亚基组成的分子量约为450 kg的储铁关键蛋白质[2]。

植物铁蛋白的研究进展

植物铁蛋白的研究进展
陈丽萍;张丽静;傅华
【期刊名称】《草业学报》
【年(卷),期】2010(019)006
【摘要】铁蛋白(ferritin)是一种铁结合和存储蛋白,广泛存在于动物、植物和微生物体内,是生物体内的一种保守性较高的多功能多亚基蛋白.植物铁蛋白作为专门的贮铁蛋白,是植物光合作用和固氮等生化反应的铁源,不仅调节体内铁的含量,而且是一种重要的胁迫反应蛋白,调控铁生物功能,在植物的发育、抵抗氧化损害等方面发挥重要的作用.本研究从铁蛋白的结构、功能及基因克隆、表达和遗传转化等方面,概述了其在植物分子生物学中的研究进展及其应用情况.
【总页数】9页(P263-271)
【作者】陈丽萍;张丽静;傅华
【作者单位】农业部草地农业生态系统学重点开放实验室兰州大学草地农业科技学院,甘肃兰州730020;农业部草地农业生态系统学重点开放实验室兰州大学草地农业科技学院,甘肃兰州730020;农业部草地农业生态系统学重点开放实验室兰州大学草地农业科技学院,甘肃兰州730020
【正文语种】中文
【中图分类】Q946
【相关文献】
1.乳铁蛋白及乳铁蛋白肽的基因工程研究进展 [J], 史芳芳;王亮
2.铁蛋白与转铁蛋白受体表达调控的分子机制研究进展 [J], 周密;廖清奎
3.转铁蛋白-转铁蛋白受体抗肿瘤作用研究进展 [J], 张定林;陈玥琦;刘毅敏
4.乳铁蛋白及乳铁蛋白肽的基因工程研究进展 [J], 史芳芳;王亮;吕自力;王安江
5.转铁蛋白和转铁蛋白受体的研究进展 [J], 张宏伟;刘俊涛
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《2024年大豆编码zf-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能研究》范文

《大豆编码zf-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能研究》篇一一、引言大豆作为重要的农作物，其在农业生产和食物营养方面的价值不可忽视。

随着基因组学研究的深入，大量非典型NLR基因被发现，并在植物的抗病反应中扮演着关键角色。

ZF-RVT结构域是这些非典型NLR基因的共同特征之一，它们可能参与多种生物过程的调控。

本研究主要针对大豆中编码ZF-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能进行研究，旨在为大豆抗病育种提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料本研究选用了五个具有ZF-RVT结构域的大豆非典型NLR基因作为研究对象。

相关的大豆基因组数据、转录组数据以及其他辅助材料均来源于公共数据库。

2. 方法（1）基因克隆与表达分析：通过PCR技术克隆目标基因，并利用生物信息学方法进行序列分析，了解其结构特征及表达模式。

（2）转基因技术：构建过表达和敲除载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法，将目标基因转入大豆中，获得转基因植株。

（3）表型分析：对转基因植株进行表型观察，分析其与野生型植株在生长、抗病性等方面的差异。

（4）功能验证：通过基因敲除和过表达等方法，验证目标基因在植物抗病反应中的功能。

三、结果与分析1. 基因序列分析通过对五个非典型NLR基因的序列分析，发现它们均具有ZF-RVT结构域，且与其他已知的NLR基因具有一定的相似性。

进一步分析表明，这些基因可能参与多种生物过程的调控。

2. 转基因植株的获得与表型分析成功构建了过表达和敲除载体，并利用农杆菌介导的方法将目标基因转入大豆中。

转基因植株在生长过程中表现出不同程度的表型变化，其中部分转基因植株表现出较强的抗病性。

3. 功能验证通过对转基因植株的功能验证，发现这些非典型NLR基因在植物抗病反应中发挥重要作用。

具体来说，这些基因可能参与病原菌的识别、信号传导及防御反应的调控等过程。

其中，某些基因的过表达能显著提高大豆对某些病原菌的抗性。

四、讨论本研究针对大豆中编码ZF-RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能进行了研究。

大豆蛋白质组学研究进展

大豆蛋白质组学研究进展牛宁;李占军;金素娟;赵璇;王玉岭【摘要】2010年大豆品种Williams 82的基因组序列测定完成,大豆蛋白质组学研究在此基础上得到了快速发展,取得了一系列新的进展.本文综述了2011年至今,国内外研究人员应用蛋白质组学技术在大豆生长发育、根瘤互作、抗逆境、蛋白数据库等方面取得的研究成果,并对今后大豆蛋白质组学研究的发展进行了展望.【期刊名称】《中国油料作物学报》【年(卷),期】2014(036)005【总页数】9页(P667-675)【关键词】大豆;蛋白质组学;蛋白质组【作者】牛宁;李占军;金素娟;赵璇;王玉岭【作者单位】石家庄市农林科学研究院,河北石家庄,050041;石家庄市农林科学研究院,河北石家庄,050041;石家庄市农林科学研究院,河北石家庄,050041;石家庄市农林科学研究院,河北石家庄,050041;石家庄市农林科学研究院,河北石家庄,050041【正文语种】中文【中图分类】S565.1大豆作为重要的粮油经济作物，不但富含蛋白质、脂肪、矿质营养以及抗氧化剂、异黄酮等维持人类健康所必需的物质，同样还是畜牧业重要的营养来源，因此对大豆的研究也是世界各国研究人员关注的焦点。

蛋白质是生命现象的表现形式，是生理功能的执行者和生命活动的直接体现者。

研究蛋白质表达与功能的蛋白质组学自创立以来发展迅速，同时在大豆研究上的应用也是方兴未艾，加之2010年大豆品种Williams 82的基因组序列测定的完成[1]，给大豆诸多方面的分子机理研究带来了新的机遇，也为揭示大豆生长发育的本质提供了良好的途径。

日益增加的蛋白组信息，快速扩展的植物基因组和EST序列库，为蛋白质的鉴定提供了帮助，为研究大豆的蛋白表达提供了必要的基础。

近年来，蛋白质组学被广泛地应用于大豆的各方面研究，如生长发育、逆境胁迫、根瘤互作等方面，也取得了一系列新的进展。

这些研究加深了我们对大豆生命进程中蛋白质表达变化的认识，为研究大豆相关分子机理打下了良好的基础。

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５１０个／ｍＬ时，花生品种四粒红的愈伤组织诱导率最高，为１２．５％。
关键词：花生；小孢子；液体悬浮培养；愈伤组织；激素组合中图分类号：Ｑ８１３，Ｓ５６５．２０３文献标识码：Ａ文章编号：１００７－９０８４（２０１２）０６－０５９２－０６
等开
展了栽培种花生的花药培养研究，获得花药愈伤组较系统地研究了基本培养基、基因型和蔗糖浓度等多种因素在花生花药愈伤组织诱导中的作用，以及几种激素组合在诱导愈伤组织及分化形成体胚中的作用，但未见分化出单倍体幼苗的报道。关于花生小孢子液体悬浮培养技术，尚未见国内外报道。本文通过对供试材料的基因型、小孢子发育时期、培养基类型及其附加激素浓度和组合的研究，明确了小孢子发育时期与花蕾、花药外观的相关性，筛选出适宜花生游离小孢子培养的培养基、激素浓度和培养条件，为建立高频率游离小孢子诱导愈伤组织体系和愈伤组织成苗奠定了基础。
［１４］
，Ｂａｊａｊ等对四倍体的野生
［１６］
［５］
种和栽培种花生花药进行培养，获得的愈伤组织部ｌｌｃｏｘ分愈伤出现芽或根的分化。Ｗｉ和Ｂｅｒａ
［１８］［１７］
也对花药有一定研究，但还未成功。叶茂生织和部分体细胞胚和芽体。袁美
［１９］
Ｃａｌｌｕｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｆｒｏｍｉｓｏｌａｔｅｄｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅｃｕｌｔｕｒｅｏｆｐｅａｎｕｔ（ＡｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａＬ．）
ＺＨＡＮＧＪｉｎｇ－ｊｉｎｇ，ＭＵＧｕｏ－ｊｕｎ，ＨＯＵＭｉｎｇ－ｙｕ，ＣＨＥＮＨｕａｎ－ｙｉｎｇ，ＣＵＩＳｈｕｎ－ｌｉ，ＬＩＵＬｉ－ｆｅｎｇ
张景景，穆国俊，侯名语，陈焕英，崔顺立，刘立峰
（河北省作物种质资源重点实验室，河北农业大学农学院，河北保定，０７１００１）
摘要：通过镜检花粉各发育时期及其与花蕾、花药形态的相关性，探讨了花生基因型、液体培养基及附加激素
浓度对愈伤组织诱导率的影响。结果表明，当花蕾纵径长为２．４８～２．９６ｍｍ，小孢子基本处于四分体时期；长度在３．２６～４．１６ｍｍ时，以单核期为主；５．３８～９．９ｍｍ，为双核期。在小孢子单核靠边期取材诱导率最高，达９．３８％。本实验所用的六个花生品种中，四粒红的单蕾产胚数最高，达到０．１个胚／蕾（ＭＳ培养基）和０．０５个胚／蕾（ＮＬＮ培养基）；在附加４ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ，３ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ和０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ改良的ＭＳ液体培养基上且当小孢子密度为２．５×
５ｍｇ／ＬＮＡＡ，ｗｉｔｈ２．５×１０／ｍＬｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅ，ｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＳｉｌｉｈｏｎｇｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔａｔ
。Ｓａｔｏ等利用大白菜游离小孢子进
收稿日期：２０１２０４２３基金项目：现代农业产业技术体系建设专项基金（ＣＡＲＳ－１４）；河北省应用基础研究计划重点基础研究项目（１０９６０１２０Ｄ）；河北省自然科学基Ｃ２００９０００５９１）金（作者简介：张景景（１９８５－），女，河北大名县人，硕士，主要从事花生遗传育种研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｚｊ１１２７＠１６３．ｃｏｍ刘立峰（１９６６－），男，河北宁晋县人，博士，教授，主要从事花生基因组学与分子育种研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｌｉｆｅｎｇ＠ｈｅｂａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ通讯作者：
张景景等：花生（ＡｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａＬ．）游离小孢子培养获得愈伤组织研究
１２］１３］Ｌ．）［和水稻（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）［等作物上也都建立
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ＭＳ固体培养基，加入１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ，０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ，蔗糖３０ｇ／Ｌ和琼脂７～８ｇ／Ｌ。１．２．３培养液中的小孢子数量采用血球计数板方法计算每毫升培养液中所含的小孢子数。吸取混匀后的小孢子液体悬浮培养液滴在血球计数板（２５ × １６）上，当培养液充满计数室后，在显微镜下观察计数。逐个统计中央大方格内２５个中方格内的小孢子数，重复３次，计算出小孢子数量。每毫升培养
５液中小孢子数目设置７个梯度，分别为１× １０、１．５× ５５５５５５１０、２ × １０、２．５ × １０、３ × １０、３．５ × １０、４ × １０个。
了高效再生系统。Ｍａｒｔｉｎ和Ｒａｂｃｅｈａｕｌｔ首先报道了栽培品种花生花药培养研究进展
型油菜游离小孢子培养并获得再生植株，同年曹鸣
３］庆［等报道了小白菜游离小孢子培养实验。小孢
子培养在甘蓝型油菜获得成功后，其技术和应用研究发展较快
［４～６］
行了小孢子培养，只有部分形成了再生植株。在大
１１］ＨｏｒｄｅｕｍｖｕｌｇａｒｅＬ．）［、小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ麦（
１２．５％．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅａｎｕｔ；Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅ；Ｆｌｕｉｄｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅ；Ｃａｌｌｕｓ；Ｈｏｒｍｏｎａｌｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ游离小孢子培养技术是Ｎｉｔｓｃｈ在进行花药培养
（ＫｅｙｌａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＧｅｒｍｐｌａｓｍＲｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆＨｅｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ０７１００１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｃｅｏｆｐｏｌｌｅｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅｓ，ｓｈａｐｅｏｆｂｕｄａｎｄａｎｔｈｅｒｗａｓｄｉｓｃｕｓｓｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｋｉｎｄｓｏｆｌｉｑｕｉｄｍｅｄｉｕｍａｓｗｅｌｌａｓａｄｄｉｔｉｏｎａｌｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｃａｌｌｕｓｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ，ｗｈｅｎｔｈｅｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｂｕｄｗｅｒｅ２．４８～２．９６ｍｍ，３．２６～４．１６ｍｍａｎｄ５．３８～９．９ｍｍ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅｓｏｆｐｏｌｌｅｎｗｅｒｅｍｏｓｔｌｙａｔｔｅｔｒａｄ，ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｐｅｒｉｏｄａｎｄｕｎｉｎｕ，ｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ，ａｔ９．３８％．Ｓｉｘｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｐｅａｎｕｔｃｌｅａｔｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｔｌａｔｅ－ｕｎｉｎｕｃｌｅａｔｅｗｅｒｅｕｓｅｄｉｎｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｅｍｂｒｙｏｙｉｅｌｄｏｆＳｉｌｉｈｏｎｇｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ，ｗｉｔｈ０．１ｅｍｂｒｙｏｐｅｒｂｕｄ（ＭＳｍｅｄｉｕｍ）ａｎｄ０．０５ｅｍｂｒｙｏｐｅｒｂｕｄ（ＮＬＮｍｅｄｉｕｍ）．ＯｎＭＳｍｅｄｉｕｍｏｆ４ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ，３ｍｇ／Ｌ６－ＢＡａｎｄ０．３