大肠杆菌实验总结
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告大肠杆菌实验报告引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体没有害处，但某些菌株可能引起食物中毒和其他健康问题。
本实验旨在探究大肠杆菌的特性和其对环境的适应能力。
实验目的：1. 了解大肠杆菌的形态和结构特征；2. 探究大肠杆菌的生长条件和适应能力；3. 研究大肠杆菌在不同环境下的生长情况。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养基- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌移液管- 微量移液器- 恒温培养箱- 显微镜2. 实验步骤：1. 准备培养基：将大肠杆菌培养基按照说明书配制好，并灭菌处理。
2. 接种：使用微量移液器，将大肠杆菌接种到灭菌培养皿中。
3. 培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，并设置适当的温度和湿度条件。
4. 观察生长情况：每隔一段时间，观察培养皿中大肠杆菌的生长情况，并记录下来。
5. 形态和结构观察：取一部分培养物放在载玻片上，使用显微镜观察大肠杆菌的形态和结构特征。
实验结果：1. 大肠杆菌的形态和结构特征：在显微镜下观察，大肠杆菌呈现为短杆状，长度约为2-4微米，直径约为0.5微米。
细菌的表面有许多纤毛，这些纤毛有助于细菌的运动和附着。
大肠杆菌呈现为革兰阴性菌，其细胞壁主要由脂多糖和蛋白质组成。
2. 大肠杆菌的生长条件和适应能力：大肠杆菌在适宜的环境条件下能够迅速生长和繁殖。
它对温度、pH值和营养物的要求较为宽容。
一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37摄氏度，pH值在6.5-7.5之间。
此外，大肠杆菌对葡萄糖等简单糖类具有较高的利用能力，能够利用这些营养物进行代谢和生长。
3. 大肠杆菌在不同环境下的生长情况：大肠杆菌在不同环境条件下的生长情况可能有所不同。
例如，在高温环境下，大肠杆菌的生长速度会加快，而在低温环境下则会减慢。
此外，在酸性环境中，大肠杆菌的生长可能受到抑制。
然而，尽管大肠杆菌对环境的适应能力较强，但在极端条件下，如高温、高盐度等，它的生长可能会受到抑制或甚至死亡。
大肠杆菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生化特性，掌握大肠杆菌的鉴定方法。
2. 掌握微生物生化实验的基本操作技术，提高实验技能。
3. 通过实验，加深对微生物生化反应原理的理解。
二、实验原理大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，属于肠杆菌科。
在微生物学中，生化实验是鉴定细菌的重要手段之一。
通过观察细菌对特定底物的代谢能力，可以判断细菌的种类和特性。
本实验主要采用糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验等方法对大肠杆菌进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌种、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、甲基红试剂、卢戈氏碘液、乙醚、蒸馏水等。
2. 实验仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管、电子天平、纱布、脱脂棉、灭菌锅、PH计或PH试纸、电炉、石棉网、铁架台、100ml量筒、橡皮手套、超净台等。
四、实验步骤1. 糖发酵实验（1）将大肠杆菌接种于葡萄糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）观察培养基中是否产生气泡，若有气泡产生，则说明大肠杆菌能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验（1）将大肠杆菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养24小时。
（2）取少量培养液加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。
3. 甲基红试验（1）将大肠杆菌接种于乳糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌在葡萄糖发酵培养基中产生气泡，说明其能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验：大肠杆菌在蛋白胨水培养基中产生红色沉淀，说明其具有吲哚酶活性。
3. 甲基红试验：大肠杆菌在乳糖发酵培养基中不产生红色沉淀，说明其不能发酵乳糖。
根据实验结果，可以判断该菌株为大肠杆菌。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了微生物生化实验的基本操作技术，加深了对微生物生化反应原理的理解。
在实验过程中，我们学会了如何观察细菌对特定底物的代谢能力，从而对大肠杆菌进行鉴定。
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告
实验目的：研究大肠杆菌的生长规律和影响因素。
实验原理：
大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于自然环境中，如土壤、水体和动物的消化道中。
大肠杆菌是一种强大的生物工程工具，被广泛用于基因克隆、蛋白表达和生物制药等领域。
大肠杆菌的生长主要受到以下因素的影响：
1. 温度：大肠杆菌的适宜生长温度一般为37℃。
过高或过低
的温度都会抑制细菌的生长。
2. pH值：大肠杆菌对酸碱度有一定的耐受能力，适宜生长的pH范围为6.5-7.5。
3. 氧气含量：大肠杆菌是一种厌氧菌，但也可以在氧气存在的条件下进行生长。
4. 营养物质：大肠杆菌需要碳源、氮源、磷源等营养物质来进行生长。
实验步骤：
1. 准备培养基：将大肠杆菌营养琼脂混合溶解，并进行高温高压灭菌处理。
2. 用无菌移液管取一小滴大肠杆菌液，滴入含有营养琼脂的平板培养基上，轻轻摇晃平板，使细菌均匀分布于培养基上。
3. 将培养基置于恒温培养箱中，调节温度为37℃，培养一定
时间，观察菌落的形成和生长情况。
4. 在不同温度、pH值、氧气含量和营养物质条件下，重复步
骤2和3。
实验结果：
根据实验观察，大肠杆菌在37℃左右的温度下生长最好，pH 值在6.5-7.5之间时生长最快，适宜的氧气含量是气体和液体的界面。
实验结论：
大肠杆菌的生长受到温度、pH值、氧气含量和营养物质的影响。
掌握这些影响因素，能够更好地培养和利用大肠杆菌进行实验和工程应用。
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告大肠杆菌检测实验报告引言：大肠杆菌是一种常见的细菌，存在于人体和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体无害，但某些菌株可能会引起严重的食物中毒。
因此，对食品和饮用水中的大肠杆菌进行检测至关重要。
本实验旨在通过不同的检测方法，了解大肠杆菌的存在和浓度。
材料与方法：1. 食品和饮用水样本：我们选择了市场上常见的食品和饮用水样本，包括蔬菜、水果、肉类和瓶装水。
2. 大肠杆菌培养基：我们使用了含有大肠杆菌特异性营养物质的培养基。
3. 培养皿和培养试管：用于培养大肠杆菌。
4. 显微镜和染色剂：用于观察和鉴定大肠杆菌。
实验步骤：1. 样本准备：我们将食品和饮用水样本分别取样，并放入培养皿或培养试管中。
2. 培养：将样本放入预先准备好的大肠杆菌培养基中，然后将培养皿或培养试管放入恒温培养箱中，以促进大肠杆菌的生长。
3. 观察：在培养一段时间后，我们使用显微镜观察培养皿或培养试管中的样本。
为了更好地观察大肠杆菌，我们使用染色剂对样本进行染色。
4. 记录：记录观察到的大肠杆菌数量和形态特征。
结果与讨论：通过对不同食品和饮用水样本进行大肠杆菌检测，我们观察到了以下结果：1. 蔬菜和水果样本中的大肠杆菌数量较高。
这可能是因为蔬菜和水果在生长和加工过程中接触到了土壤或污染的水源。
2. 肉类样本中的大肠杆菌数量较低。
这可能是因为肉类在加工过程中经过了高温处理，杀死了大部分的细菌。
3. 瓶装水样本中没有观察到大肠杆菌。
这是因为瓶装水在生产和包装过程中经过了严格的卫生控制。
通过本实验，我们可以得出结论：大肠杆菌在食品和饮用水中的存在是普遍的，但其浓度和数量因样本类型而异。
这提醒我们在选择和处理食品和饮用水时要格外注意卫生和安全。
结论：本实验通过采用大肠杆菌检测方法，对不同食品和饮用水样本进行了分析。
结果表明，大肠杆菌在食品和饮用水中存在普遍，但其浓度和数量因样本类型而异。
这对我们提醒了食品安全和卫生的重要性。
【报告】大肠杆菌培养实验报告
【关键字】报告大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml 量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
微生物大肠杆菌实验报告
微生物大肠杆菌实验报告微生物大肠杆菌实验报告一、引言微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
其中，大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
大肠杆菌在人体内具有重要的生理功能，同时也是一种常见的食源性病原菌。
本实验旨在通过培养大肠杆菌并观察其生长情况，以加深对微生物的认识。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 营养琼脂平板- 大肠杆菌培养液- 恒温培养箱- 培养皿- 灭菌针2. 实验方法：- 将营养琼脂平板在恒温培养箱中加热至50℃，待其稍微冷却后，倒入培养皿中。
- 用灭菌针蘸取大肠杆菌培养液，均匀地在琼脂平板上划线。
- 将培养皿倒置放入恒温培养箱中，温度设置为37℃。
- 观察培养皿中大肠杆菌的生长情况，并记录下来。
三、实验结果与讨论经过一段时间的培养后，我们观察到培养皿中出现了大肠杆菌的生长。
大肠杆菌呈现出圆形、透明的菌落，数量逐渐增加。
这说明大肠杆菌在营养琼脂平板上能够良好地生长和繁殖。
大肠杆菌的生长需要适宜的温度、营养物质和湿度等环境条件。
在本实验中，我们将培养皿放入恒温培养箱中，温度设置为37℃，这是大肠杆菌生长的最适温度。
此外，琼脂平板提供了丰富的营养物质，为大肠杆菌提供了生长所需的碳源、氮源和微量元素等。
因此，大肠杆菌在琼脂平板上能够得到良好的生长条件。
大肠杆菌的生长速度与繁殖能力也与其遗传特性有关。
不同的大肠杆菌株可能存在差异，有些株系生长较快，繁殖能力较强，而有些株系则相对较慢。
此外，大肠杆菌的生长还受到其他因素的影响，如环境中的抗生素、pH值、氧气浓度等。
大肠杆菌在人体内具有重要的生理功能，如参与肠道内的营养吸收、合成维生素等。
然而，某些大肠杆菌株也可以引起食源性疾病，如腹泻和食物中毒等。
因此，在日常生活中，我们应该注意食品的卫生安全，避免摄入被大肠杆菌污染的食物。
四、结论通过本实验，我们成功培养了大肠杆菌，并观察到了其在琼脂平板上的生长情况。
大肠杆菌实验室实习报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的基本特性，掌握实验室大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
2. 学习国标法测定食品中大肠杆菌的数量，评估食品卫生安全。
二、实验原理1. 大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，具有特定的生理和生化特性。
2. 国标法测定大肠杆菌数量，主要采用滤膜法，即将样品过滤后，将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，经培养后计数具有典型特征的大肠杆菌菌落。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、伊红美蓝培养基、大肠杆菌标准菌株、实验用食品样品等。
2. 仪器：高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、生物显微镜、PH计、电子天平、移液器、培养皿、试管、滴定管等。
四、实验步骤1. 制备LB培养基：按照配方称量牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等，加蒸馏水溶解后，调节PH值，分装到锥形瓶中，高压蒸汽灭菌。
2. 分离纯化大肠杆菌：将食品样品稀释一定倍数，取0.1mL涂布于LB培养基，37℃培养24h。
挑取具有典型特征的菌落，纯化培养。
3. 鉴定大肠杆菌：观察菌落形态、革兰氏染色、生化反应等特征，确定为大肠杆菌。
4. 计数大肠杆菌：将纯化后的大肠杆菌液按一定倍数稀释，取0.1mL涂布于伊红美蓝培养基，37℃培养24h。
计数具有典型特征的大肠杆菌菌落。
5. 计算样品中大肠杆菌的数量：根据稀释倍数和计数结果，计算样品中大肠杆菌的数量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过分离纯化，从食品样品中成功获得大肠杆菌。
经过计数，样品中大肠杆菌的数量为XCFU/g。
2. 分析：本次实验成功分离纯化了大肠杆菌，并对其进行了计数。
结果表明，该食品样品中大肠杆菌的数量符合我国食品安全标准。
然而，在实验过程中，可能存在操作不当、样品污染等因素，导致实验结果略有偏差。
在今后的实验中，需加强操作规范，提高实验准确性。
六、实验总结通过本次实验，掌握了实验室大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法，学会了国标法测定食品中大肠杆菌的数量。
实验结果表明，该食品样品中大肠杆菌的数量符合我国食品安全标准。
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分离
划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。
涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。
（一）制备LB培养基（通用的细菌培养基）
1、配方：蛋白胨10.0克，牛肉膏5.0g，氯化钠10.0克，水1000ml
（配固体培养基再加琼脂20克）
2、流程
计算称量溶解调pH分装加塞，包扎灭菌倒平板
培养基配制(特)
培养基应现配现用，每次配置350ml，一次性使用完毕。
1、按下表称取物资配置LB培养基到500ml锥形瓶中：
2、用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、完全、
溶解。
待灭菌。
①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用___三角漏斗 _。
②加塞：试管用塑料盖或__棉花塞___；三角瓶口用_封口膜__或_6层纱布封口,再用__牛皮纸__或报纸封口。
③包扎：用_牛皮纸__或报纸
④灭菌：高压蒸气灭菌法 1）加水：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是不触及内胆 _.
2）装锅：物品放置的要求__整齐、稳定、留出空隙：加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_排气槽__内。
再以__两两对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺
栓松紧一致，勿使漏气。
3）加热排气：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后，关上排气阀。
4）保温保压：当锅内压力升到1_kg/cm2时，控制热源，维持压力至15 _min。
5）出锅：切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至_0_时，打开_排气阀__，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。
灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80 ℃_烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_污染_。
⑤倒平板、制斜面
操作平台：超净台
灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开__紫外线 _和_过滤风，灭菌30min.
倒平板：待培养基冷却至__60_ ℃时，将每只培养皿倒入_10~12_ml未凝固的固体培养基，置于_
水平_位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。
_倒置_备用。
制斜面：将未凝固的固体培养基的试管斜放，冷却待凝使即成为斜面。
思考题：
一、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？
1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。
2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。
3、整个操作在酒精灯火焰旁进行
4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。
二、培养基灭菌后，需要冷却到60后才倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度呢？
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
三、为何要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使
培养基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落培养基，造成污染。
四、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培
养微生物吗？为什么？
空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
五、如何检查培养基是否受杂菌的污染？
将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生则未受杂菌污染。
（重点）液体培养基接种培养
主要器具：接种环、摇床等
操作方法：先将接种环进行灼烧_灭菌, _冷却_后的接种环挑取少量菌种，放入三角瓶的液体培养基中，加塞。
置于_37___℃摇床振荡培养１２小时。
思考：如何冷却接种环？
可通过接触试管内壁或未长菌的培养基达到冷却的目的。
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。
2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
3.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
5、如何判断接种操作是否符合无菌要求？
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求。
（五）斜面接种及菌种保存
主要器具：接种环、恒温箱、冰箱
操作过程：在无菌操作下，用接种环挑取_单__菌落，再用划线法（自斜面底部向上轻轻划直线）接种在__斜面___上， __37___℃恒温培养箱中培养_24___小时后，__4__℃冰箱保存。
无菌操作：同前
思考：菌种保存为何采用斜面而不是平板？
试管斜面培养基密闭效果比平面的好很多,不容易进入杂菌，同时能用来做纯细菌的长期保存。
6、如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?
(1)胆大心细，操作快捷。
（2）注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染概率。
（3）注意微生物生长条件，如PH、渗透压、温度等。
细菌喜碱，喜蛋白质，喜37度；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30度
7、在培养后如何判断是否有杂菌污染?
（1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。
是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。
（2）显微镜观察其形态、大小、看是否有菌丝、孢子、芽孢。
是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。
（3）上述方法较难区别同类的不同物种，需借助化学和进一步的形态观察，如用革兰氏染色法等。
8、实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理?
所有接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤（特别是培养基）；使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。
实验一大肠杆菌的培养和分离
实验步骤：
一、配制LB培养基
计算称量溶解调pH分装加塞，包扎灭菌
二、倒平板、制斜面
三、大肠杆菌的培养使所需细菌大量繁殖
四、大肠杆菌的分离获得单菌落，纯化菌株
平板划线分离法（或稀释涂布平板法）
五、斜面接种培养目的菌株的纯培养和菌种保存
大肠杆菌的培养和分离实验操作
（一）培养基的配置与灭菌
取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。
封口膜：既通气又不使菌进入
LB液体培养基——细菌的扩大培养
LB固体培养基——细菌的划线分离
（二）倒平板
灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。
注意事项：
1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板
2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒
3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作.
4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌
5.平板冷凝后，要将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染.
（三）大肠杆菌的扩大培养
将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37℃摇床培养12小时。
注意事项:
1.火焰旁从斜面上用接种环取菌;
2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌,冷却后方能取菌;
3.取菌后封口膜和棉塞复原.
•菌种扩增摇床震荡培养12h（于LB液体培养基中）。