HPLC法测定人参根渣中氨基酸和皂苷的含量
人参不同部位中人参皂苷成分的分析
人参不同部位中人参皂苷成分的分析周卫松【摘要】This study was aimed to measure the content of ginsenoside in ginseng extract by UV/HPLC. Through the approximate translation comparison of two different testing results with UV and HPLC in current market, and several typical HPLC peaks ratio analysis on contents of different ginsenoside extracted from the root, stem and leaves of ginseng, in order to establish identification method of ginsenoside from different sources. The results showed that the ratio for Re:Rb1:Rc:Rd in ginseng root extract was approximately 1:2.20:0.94:0.97. And the ratio for Re:Rb1:Rc:Rdin ginseng leave extract was approximately1:(0.05~0.07):(0.10~0.16):(0.32~0.37). Compared with the mixture of ginseng root and ginseng leave extract, the theoretical value ofRe:Rb1:Rc:Rd should between those two ratios. It was concluded that this method was simple, stable and reliable, which can be used as the identification method of ginsenoside from ginseng root, stem and leaves.%目的：建立UV/HPLC法测定人参不同部位中人参皂苷含量。
HPLC法测定人参毛状根及不同人参样品中9种人参皂苷的含量
１ 仪器与试药
１ ．１ 仪器 Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ 高效液相色谱仪 （美国 Ａｇｉｌｅｎｔ 公司） ，配有在线脱气机 、四元泵 、自动进样 器 、柱温箱和二极管阵列检测器 （ＤＡＤ ） ；ＨＹＧ-Ａ 全 温摇瓶柜（江苏太仓） ；ＳＷ-ＣＪ-１Ｄ 超净工作台（苏州 净化） ；ＹＸＱ-ＬＳ-７５Ｓ Ⅱ 立式压力蒸汽灭菌器 （上海 博讯） ；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＳ １１０Ｓ 万分之一电子天平（德国 Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ 公司） 。 １ ．２ 药品和试剂 人参皂苷标准品 （纯度 ＞ ９８％ ， 成都曼斯特有限公司 ） ；工业用甲醇 （上海思炯化工 科技有限公司） ；色谱乙腈 （上海国药集团化学试剂 公司） ；娃哈哈纯净水 （杭州娃哈哈集团有限公司） ； ０ ．４５ μｍ 微孔滤器（ＦＩＮ Ｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌ ｔｄ ．） 。 人参主 根 、须根 、叶 、花和果取自吉林省通化市栽培的 ４ 年 人参 ，经第二军医大学秦路平教授鉴定为五加科植 物人参 。 人参饮片 （批号 ：１５０５０６ ，上海雷允上药业 有限公司） 。 人参毛状根由中南大学生命科学学院 医学遗传学国家重点实验室诱导并筛选获得 。 人参 毛状根在 １／２Ｍ Ｓ 培养基中悬浮培养 ，每 ３０ ｄ 继代 １ 次 ，在转速为 １３５ ｒ ／ｍｉｎ 的摇床上暗培养 ，温度
（２５ ± ２） ℃ 。
２ 方法与结果
２ ．１ 溶液的配制 ２ ．１ ．１ 标准品溶液 精密称取人参皂苷 Ｒｇ１ ４０ ｍｇ 溶于 １０ ｍｌ 甲醇 ；人参皂苷 Ｒｂ１ ２０ ｍｇ 溶于５ ｍｌ甲 醇 ；人参皂苷 Ｒｅ ４０ ｍｇ 溶于 ２ ｍｌ 甲醇 ；人参皂苷 Ｒｃ ２０ ｍｇ 溶于 ２ ｍｌ 甲醇 ；人参皂苷 Ｒｇ２ ８ ｍｇ 溶于 １０ ｍｌ 甲醇 ；人参皂苷 Ｒｈ２ ３５ ｍｇ 溶于 １０ ｍｌ 甲醇 ； 人参皂苷 Ｒｇ３ ２ ．５ ｍｇ 溶于 １０ ｍｌ 甲醇 ；人参皂苷 Ｒｂ２ ５０ ｍｇ 溶于 １０ ｍｌ 甲醇 ；人参皂苷 Ｒｄ ２０ ｍｇ溶 于 ２ ｍｌ 甲醇 。 得到上述各标准品母液 ，而后 ，精密 量取稀释后的母液各 ５０ μｌ ，即得混合标准品溶液 ， 置于４ ℃ 冰箱保存 。 ２ ．１ ．２ 样品溶液 精密称取 ０ ．５ ｇ 已干燥至恒重 的各样品粉末 （过 ２４ 目筛 ） ，加入 ２５０ ｍｌ 甲醇 ，于 ５５ ℃ 水浴恒温回流提取 １ ｈ ，过滤提取液 ，滤渣重复 提取 ２ 次 ，用适量体积的溶剂洗涤残渣 ，合并滤液 ， ６０ ℃ 减压浓缩 ，定容至 ５ ｍｌ ，用 ０ ．４５ μｍ 微孔滤膜 过滤 ，取续滤液作为供试品 。 ２ ．２ 色 谱 条 件 采 用 反 相 高 效 液 相 色 谱 Ｃ１８ 柱 （Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ Ｃ１８ 柱 ，４ ．６ ｍｍ × ２５０ ｍｍ ，５ μｍ ） ，保 护柱 Ｅｘ ｔｅｎｄ-Ｃ１８ 柱 （４ ．６ ｍｍ × １２ ．５ ｍｍ ，５ μｍ ） ；检 测波长 ：２０３ ｎｍ ；柱温 ：３５ ℃ ；进样量 ：２０ μｌ ，流速 ： １ ．０ ｍｌ／ｍｉｎ ；以乙腈-水为流动相 ，梯度洗脱程序见 表 １ ，对照品及样品的 ＨＰＬＣ 图见图 １ 。
高效液相色谱法测定14种人参皂苷的研究
高效液相色谱法测定14种人参皂苷的研究作者：陈书华朴文香白龙律迟美丽金恩华马正赫武伦鹏来源：《吉林农业·下半月》2014年第06期摘要：为准确可靠的定量分析14种人参皂苷，本文通过对高效液相色谱条件进行优化，确定了测定人参皂苷的HPLC条件，结果表明，最佳分析条件流动相为乙氰和水；C18柱；检测波长：203纳米；流速：1.0 毫升/分。
该分析方法可以达到很好的分离效果，通过精密度、稳定性和回收率的计算，证明该方法具有良好的准确性和稳定性，是一种简单、高效的多种人参皂苷分析方法。
关键词：人参皂苷；高效液相色谱；检测方法中图分类号： R49 文献标识码：A 文章编号： 1674-0432（2014）-12-22-21 材料与方法1.1 药品及试剂人参皂苷标准品Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD，三七皂苷标准品R1均购自成都曼思特生物科技有限公司；乙氰、甲醇为色谱纯均购自美国TEDIA公司。
1.2 实验仪器Agilent 1100型高效液相色谱仪购自美国安捷伦公司。
1.3 实验方法1.3.1 色谱条件色谱柱：BDS HYPERSIL C18柱（250 毫米×4.6毫米，5微米）；柱温：25℃；检测波长：203纳米；流动相：水（A）和乙氰（B）；流速：1.0 毫升/分；梯度洗脱条件见表2.1。
上述条件下标准混合溶液的分离效果见图1.1。
表1.1 高效液相色谱流动相梯度洗脱条件图1.1 13种人参皂苷和1种三七皂苷混合标准溶液的HPLC图（1, R1; 2, Rg1; 3, Re; 4, Rh1; 5, Rb1; 6, Rc; 7, F1; 8, Rb2;9, Rd; 10, F2; 11, Rg3; 12, C-K; 13, Rh2; 14, PPD.）1.3.2 溶液的配制分别称取人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1标准品（精确至0.1毫克），溶解于甲醇，得到14种皂苷的混合标准溶液。
高效液相色谱法测定人参超微粉中人参皂苷的含量
高效液相色谱法测定人参超微粉中人参皂苷的含量皂苷类是人参的主要成分和药效成分，采用高效液相色谱法可准确测定人参中各皂苷类成分，本文主要介绍采用液相色谱测定在超微粉碎技术下得到不同粒度的粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量。
标签：高效液相色谱法，人参，人参皂昔本品为五加科植物人参Pana：c ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎。
它具有大补元气，补脾益肺，生津养血，安神益智等之功效。
临床用于体虚欲脱，肺虚气喘，肢冷脉微，脾虚食少，口渴少津，内热消渴，气血不足等[1]。
皂苷类成分是人参的主要活性物质和药效成分，因此提高它的提取率就可增强其生物利用率，以下将介绍同一批次的人参，在样品经过振动磨型超微粉碎机粉碎后得到不同粒度的粉体的皂苷含量进行测量[2]。
1 实验仪器与材料1.1 实验仪器AEL-200电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司），AB204-N精密分析天平（METTLER TOLEDO），Agilent 1260型HPLC（Agilent Technologies），TKCD-1006超声波清洗仪（南昌科昌达超声波设备厂），Heal Force final Filter 超纯水機（上海浦东分析仪器设备厂），HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），SQW-25系列超微粉碎机（山东济南三清易辰）。
1.2 实验材料人参皂苷标准品Rb1，Re，Rg1：中国药品生物制品检定所；乙腈（HPLC）。
1.3 样品制备同一批次人参（吉林省长白山）：人参粗粉（过40目筛）；人参样品经过超微振动磨型得到粒径分别为76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm。
1.4 对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇定容；分别精密量取上述对照品溶液各1 mL，置于同一10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
HPLC法测定保健食品中人参皂甙的研究
【研究报告】〔文章编号〕100428685(2003)052560202HPLC法测定保健食品中人参皂甙的研究沈向红1,任一平1,陈翊2(1.浙江省疾病预防控制中心,杭州 310009;2.温州医学院,浙江 325000)摘 要 〔目的〕采用高效液相色谱法测定保健食品中人参皂甙的含量。
〔方法〕样品用甲醇水溶液浸提法处理,采用短色谱柱,低乙晴体积分数,非线性梯度洗脱对6种主要人参皂甙Rg1,Rb1,Re,Rb2,Rc Rd进行分析。
液相色谱条件: ODS-C18(4.6mm3150mm,5μm,);流动相:乙腈-水,流速1.0ml/min;166-A紫外检测器;波长:203nm。
〔结果〕6种人参皂甙和总皂甙的相对标准偏差为0.9%-4.4%。
最低检出浓度5.5μg/g,回收率95.56%-98.52%。
〔结论〕该方法快捷、简便,适用于保健食品中人参皂甙的测定。
关键词 保健食品;人参皂甙;HP LC;Detection of ginsenoside in health foods by HP LCShen Xianghong,Ren Yiping,Chen Yi.Zhejiang Provincial Center for Disease Control,Hangzhou310009,China Abstract Application of HP LC to determine G insenoside in s ome Healthy foods The samples were distilled with60percent methanol s olution.Main ginsenoside Rg1,Rb1,Re,Rb2,Rc.Rd were separated with shorter chromatogram column、lower acetaldehyde v olume and nonlinearity grads elution.The conditions of HP LC were as follows:ODS-C18:4.6nm3150mm,5μm,;the m obile is pure water-acetomitrile,its speed is1.0ml/min;166-AΜV-detector with203nm wave length.The results showed that:the relative stan2 dard deviation of six ginsenosides and total ginsenosides were0.91%-4.4%,that the minimum detection limit was5.5μg/g and the recovery of Rg1was95.56%-98.52%.It has the advantage of simplicity,repeatablility and was the same with determination in health foods.K ey Word Healthy Foods;G inseno side;HPLC〔中图分类号〕O657.7+2 〔文献标识码〕A 人参是一种传统的名贵中草药,祖国传统医学认为人参能大补元气,复脉固脱,补脾益肺。
人参中人参皂苷的提取、分离和测定
人参中人参皂苷的提取、分离和测定一、本文概述二、人参皂苷的提取方法人参皂苷的提取是从人参原材料中分离和纯化目标化合物的重要步骤。
提取方法的选择直接影响皂苷的得率和纯度。
常用的提取方法包括溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法以及超临界流体提取法等。
溶剂提取法：这是最常见且相对简单的方法，主要利用人参皂苷在不同溶剂中的溶解度差异进行提取。
常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮等。
通过浸泡、回流或渗漉等方式，使人参皂苷从原材料中溶解到溶剂中，再通过蒸发溶剂得到粗提物。
微波辅助提取法：微波提取是利用微波对溶剂和原材料的加热作用，提高提取效率和速度。
微波产生的热能可以使细胞壁破裂，加速溶剂对人参皂苷的渗透和溶解，从而缩短提取时间。
超声波辅助提取法：超声波提取是通过超声波产生的空化效应、机械效应和热效应等作用，增加溶剂对原材料的穿透力，提高人参皂苷的提取率。
同时，超声波还可以破坏细胞结构，使皂苷更容易释放到溶剂中。
超临界流体提取法：超临界流体提取是利用超临界状态下的流体（如二氧化碳）作为溶剂，通过调节压力和温度来控制流体的溶解能力，从而实现对人参皂苷的高效提取。
这种方法具有提取效率高、操作温度低、对原料破坏小等优点。
在实际应用中，可以根据人参原材料的性质、目标皂苷的特点以及实验条件等因素，选择最合适的提取方法。
为了提高提取效果，还可以结合使用多种提取方法，如先用溶剂提取法得到粗提物，再用超声波或微波辅助提取法进行进一步的纯化。
三、人参皂苷的分离技术人参皂苷的分离是提取过程后的关键步骤，其主要目标是从复杂的混合物中分离出单一或特定类型的人参皂苷。
这通常涉及到一系列的色谱技术，包括液-液分配色谱、固相萃取、柱色谱、薄层色谱以及高效液相色谱（HPLC）等。
液-液分配色谱，也称为液-液萃取，是基于不同物质在两种不相溶溶剂中的溶解度差异进行分离的。
这种方法对于初步分离人参皂苷和其他杂质非常有效。
固相萃取是一种基于吸附和解吸原理的分离技术。
3种人参中的皂苷的组成
3种人参中的皂苷的组成刘春莹;宋建国;李鹏飞;鱼红闪;金凤燮【摘要】研究了市销人参、西洋参和三七参根部中总皂苷的含量及组成.采用正丁醇萃取法提取总皂苷发现:总皂苷在人参主根、须根中的质量分数分别为4.0%、6.1%;在西洋参主根、须根中的质量分数分别为4.1%、6.3%;在三七参主根、须根中的质量分数分别为8.2%、1.7%.人参、西洋参须根中总皂苷的质量分数均高于主根,是其1.5倍;而三七参主根中总皂苷的质量分数高于须根,是其3倍.TLC和HPLC检测结果表明,人参中各种皂苷的质量分数差别不大,主根、须根的ω(PPD)/ω(PPT)分别为37:58、66:33,人参中含有特征皂苷Rf,其质量分数为5%～8%,人参中还含有微量R1.西洋参中Re、Rb1含量较高,占总皂苷的40%～50%,主根、须根的ω(PPD)/ω(PPT)分别为50:43、58:39,西洋参中不含有R1和Rf皂苷.三七参中Rg1、Rb1的质量分数较高,占总皂苷的70%,其主根、须根总皂苷组成相似,三七参中含有特征皂苷R1,其质量分数为9%～11%.%The component of ginsenosides in different ginseng was investigated. The content of total ginsenosides extracted by butanol from root and fiber was 4.0％ and 6.1％ in ginseng, 4. 1％ and 6.3 ％ in gen-seng and 8.2 ％ and 1.7 ％ in notoginseng. The ginsenoside in fiber is higher than that in root for ginseng and gen-seng, but ginsenoside in root is higher than that in fiber for notoginseng. When detected by TLC and HPLC, the value ofw(PPD)/w(PPT) were 48: 52 and 70: 30 in the root and fiber respectively and the content of Rf was 5％-8％. Ginseng also contained R1. The higher content of gen-seng is Re and Rb1 which is about 40％-50％ in total ginsenoside. The value of w(PPD)/w(PPT) is 57: 43 and 61: 39 in the rootand fiber respectively. R1 and Rf can not detected in gen-seng. The higher content of notoginseng is Rg1 and Rb1 with 70％ in the total ginsenoside. The composition of total ginsenoside in the root is similar to that in fiber of notoginseng. The characteristic ginsenoside in notoginseng is R1, content of which is 9 ％-11 ％.【期刊名称】《大连工业大学学报》【年(卷),期】2011(030)002【总页数】4页(P79-82)【关键词】人参;人参皂苷;皂苷组成;高效液相色谱【作者】刘春莹;宋建国;李鹏飞;鱼红闪;金凤燮【作者单位】大连工业大学,生物工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学,化工与材料学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学,生物工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学,生物工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学,生物工程学院,辽宁,大连,116034【正文语种】中文【中图分类】TS972.161;Q964.830 引言人参(Panax ginseng C. A. Meryer)属五加科(Araliaceae)植物,是我国传统的名贵中药,驰名中外。
HPLC法测定农田人参中9种人参皂苷单体含量
HPLC法测定农田人参中9种人参皂苷单体含量*郜玉钢郝建勋臧埔李然杨鹤王亚星李萍李学张连学*(吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118)摘要：为评价农田人参质量,采用RP-HPLC法对农田人参与伐林人参中9种人参皂苷单体含量进行比较分析，色谱条件：高效液相色谱仪（SHIMADZU LC-2010A）,色谱柱 (SHIMADZU 4.6 mm×150 mm, 5μm),乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱[0 min (18% A)→24 min (22% A)→26 min (26% A)→30 min (32% A)→50 min (33.5% A)→55 min (38% A)]，流速为1.0 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温35℃。
结果表明：农田人参含有与伐林人参相同种类的9种人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd。
6年生农田人参9种皂苷含量均高于6年生伐林人参，但除Rg1含量差异显著外（P<0.05），其它8种皂苷含量均不显著-(P>0.05）；4年生农田人参除Rg1、Rf显著高于4年生伐林人参（P<0.05）外，其它7种皂苷含量与4年生伐林人参差异均不显著（P>0.05）。
农田人参中Rgl、Rb1的含量、Rgl和Re含量之和、Rgl 和Re含量之和均超过中国药典、欧洲药典与美国药典的要求。
建立了同时测定农田人参中这9种人参皂苷单体含量的方法。
关键词：人参；反向-高效液相色谱（RP-HPLC）；人参皂苷单体；农田人参中图分类号：(R917)文献标识码：A 文章编号：20110127-257The Determination of Contents of 9 Ginsenoside Monomers in Farmland Ginseng by HPLC GAO Yu-gang, HAO Jian-xun, ZANG Pu, LI Ran, YANG He, WANG Yaxing, LI Ping, LI Xue, ZHANGLian-xue(Collage of Traditional Chinese Medicine, Jilin Agricultural University, Changchun 130118) Abstract:In order to evaluate the quality of farmland ginseng, the contents of 9 ginsenoside monomers were analyzed between farmland ginseng and cut forest ginseng by RP-HPLC. HPLC conditions: SHIMADZU LC-2010A, C18column (SHIMADZU 4.6 mm×150 mm, 5μm), mobile phase: ACN(A)-H2O(B), [0min(18%A)→24min(22%A)→26min(26%A)→30min(32%A)→50 min(33.5%A)→55min(38%A)], flow rate(1.0mL·min-1), UV detector (203nm), column temperature (35℃). The results indicated that there were nine kinds of ginsenoside monomers (Rg1, Re, Rf, Rg2, Rb1, Rc, Rb2, Rb3, Rd) in both farmland ginseng and cut forest ginseng. The contents of 9 ginsenoside monomers in six-year-old farmland ginseng were higher than six-year-old cut forest ginseng, and there were no significant differences(P>0.05) except the content of ginsenoside monomer Rg1(P<0.05). There were no significant differences of the contents of ginsenoside monomers between four-year-old farmland ginseng and four-year-old cut forest ginseng (P>0.05) except the contents of ginsenoside monomer Rg1and Rf(P<0.05). The contents of Rg1and Rb1, additive contents of Rg1and Re, Rb1 and Re in farmland ginseng are comply with quality standards in Chinese Pharmacopoeia ,European Pharmacopoeia and American Pharmacopoeia. So farmland ginseng can be used as medicine instead of ginseng. A simple and accurate HPLC method for the determination of 9 ginsenoside monomers in farmland ginseng was established.Key words: Ginseng, RP-HPLC, Ginsenoside Monomer. Farmland ginseng,由于野生人参的药用价值极高，人们近乎毁灭性地对其进行采挖，该资源濒临灭绝。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
HP LC法测定人参根渣中氨基酸和皂苷的含量张 晶 沈景林 周 虚 房恒通 唐鸿宇吉林大学畜牧兽医学院 摘 要 试验根据人参根渣的成分特性,以高效液相色谱法测定氨基酸和皂苷含量。
结果表明,人参根渣中15种氨基酸总量占190.77mg/g;3种皂苷总量为6.99%,其中Rb1为1.66%,Rg1和Re总量为5.33%。
关键词 人参根渣 氨基酸 人参皂苷中图分类号:S816.72 文献标识码:B 文章编号:1002-2813(2008)02-0045-02 人参(Panax ginseng)为五加科,属多年生草本植物,味甘、微苦,性温,入脾、肺、心三经,忌实证和热证。
能增强人体的免疫功能和对病毒的抵抗力,具有强心、抗休克、抗心肌缺血、扩张血管及调节血压等作用,可促进脑细胞发育,保护神经细胞,增加脑部供血和供氧,改善能量代谢,延缓人体衰老等重要生理作用。
目前,人们研究人参药效成分主要为人参皂苷、人参多糖和人参多肽,应用于人的保健和疾病防制。
野生人参称为野山参,人工栽培的称为园参,该试验所用的人参根渣即为园参残渣。
人参根渣是人参提取人用营养液和人参多糖后所剩残渣,仍具有一定的人参活性,对其氨基酸和人参皂苷含量进行分析,为人参根渣作为一种中草药饲料添加剂应用于饲料中提供理论依据。
人参按生长方式分为2类,随着人们对畜禽产品质量问题的重视和无抗奶及无药残肉的需要,人参根渣在动物饲料(尤其是奶牛饲料)中前景广阔。
1 材料与方法1.1 材料人参根渣由吉林省延边朝鲜族自治州图们市延边特产实业有限公司提供,粉状。
标准品购于中国药品生物制品检验所。
设备为LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)。
收稿日期:2007-10-22基金项目:中国博士后科学基金(20060390909)和吉林省牧业管理局基金通讯作者:张晶1.2 方法1.2.1 氨基酸测定方法色谱条件色谱柱为ODS色谱柱;检测波长360nm;流动相A0.05m ol/L乙酸钠缓冲溶液(pH 6.5,含10m L/L NN-二甲基甲酰胺);流动相B:乙腈-水(体积比1∶1);梯度洗脱;流速1.0m L/min;进样量20μL;梯度洗脱时间见表1。
样品的前处理:1)样品水解。
称量样品0.015g 加入6m ol/L HCl溶液20m L,110℃密闭水解24h,冷却至室温,用6m ol/L NaOH溶液中和至中性,用0.01m ol/L KH2O4溶液定容至50m L,得样品水解液。
2)衍生。
去氨基酸标样2.0m L,其余样品3.0m L,于10m L容量瓶中,加入0.5m ol/L NaHC O3溶液及含有10m L/L DNF B的乙腈溶液各1.0m L,于60℃水浴中避光加热1h,冷却至室温,用0.01m ol/L KH2O4溶液稀释至刻度,摇匀。
标准液的制备:取1m L氨基酸标样于10m L棕色容量瓶中,用0.1m ol/L HCl定容至10m L得贮备液。
C=0.24μm ol/m L。
1.2.2 皂苷测定方法色谱条件:色谱柱为ODS色谱柱;流动相:乙腈∶水=20∶80;检测波长203nm;流速1.0m L/min;进样量20μL。
样品前处理:取样品粉末(过4号筛)约1g,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷适量,加热回流3h,弃去三氯甲烷液,药渣挥干溶剂,连同滤纸移饲料检测 饲料研究 FEE D RESEARCH N O.2,2008 45表1 梯度洗脱m L/min项目时间0.01361224303742505560状态flow flow flow flow flow flow flow flow flow flow stop 流动相A0.840.840.760.70.60.50.020.20.84 1.0流动相B0.160.160.240.30.40.50.980.80.160入具塞锥形瓶中,精密加入饱和的正丁醇50m L,密塞,放置过夜,超声处理30min,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液25m L,旋转蒸发至干,残渣加甲醇溶解并转移至5m L容量瓶,加甲醇稀释到刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
标准液的制备:称取人参皂苷对照品,加甲醇制成每1m L中分别含0.5mg的混合溶液,摇匀,即得。
2 结果2.1 人参根渣中氨基酸含量(见表2)表2 人参根渣中氨基酸含量mg/g 氨基酸种类含量天门冬氨酸11.95谷氨酸13.96丝氨酸45.45甘氨酸 3.92苏氨酸 3.41精氨酸10.13丙氨酸0.39脯氨酸 3.09缬氨酸 1.06蛋氨酸24.57半胱氨酸 4.82异亮氨酸34.81亮氨酸11.40苯丙氨酸18.57组氨酸 3.2415种氨基酸总量190.77由表2可见,人参样品含有15种氨基酸,氨基酸总量达到19.08%。
其中,6种人体必需氨基酸总量达9.38%,占氨基酸总量的49.18%;其中异亮氨酸的含量最高,约占氨基酸总量的18.25%,其次是蛋氨酸、苯丙氨酸和亮氨酸,分别占氨基酸总量的12.88%、9.73%和5.98%。
非必需氨基酸中以丝氨酸含量最高,占氨基酸总量的23.82%。
2.2 人参根渣中皂苷含量(见表3)在人参和西洋参中含有多种人参皂苷,其中含量最高的是人参皂苷Re,其次为人参皂苷Rb1。
李向高(2004)报道,人参主根含Rb1为0.55%,须根中约2.00%,该项试验中测定Rb1为1.66%。
表3 人参根渣中皂苷的含量%样品Rg1+Re Rb1人参根渣 5.33 1.663 讨论3.1 人参根渣中氨基酸含量赵英(2002)报道,微喷灌和不喷灌条件下整株人参氨基酸平均含量与这项试验所用人参根渣氨基酸含量相比,除了精氨酸、丙氨酸和缬氨酸含量低于整株报道,其他12种氨基酸含量均高于报道,尤其丝氨酸、蛋氨酸和异亮氨酸是人参整株的10多倍,甚至更多。
这可能是由于根渣中氨基酸含量确实高,也可能由于种植环境、收获时节、品种及人参加工等因素直接影响人参及人参根渣的氨基酸含量。
因为植物营养成分的差异大于动物,它们会因环境不同有所不同。
3.2 人参根渣中皂苷含量赵英(2002)报道,微喷灌对人参不同部位皂苷总量为根5.95%,茎2.805%,叶片11.75%。
而该试验测定人参根渣(Rg1+Re)5.33%、Rb1 1.66%,三者总量为6.99%,此值介于根和叶片间,是根皂苷总量的1.17倍。
一个原因为皂苷总量除了Rg1、Re和Rb1,还包括其他皂苷,如人参皂苷Rg3(G-Rg3)具有抑制肿瘤细胞生长和转移等多种抗癌活性(Y un TK,2001);另一个原因就是外界因素的影响。
3.3 高效液相色谱法测定氨基酸和人参皂苷含量人参皂苷Rg1的含量测定所用流动相有多种(秦少容,2001),以乙腈-水(25∶75)为最佳。
陆国红(2007)报道,高效液相色谱法测定利心舒胶囊中人参皂苷Rg1的含量,方法为色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈-水(25∶75),流速1.2m L/min,检测波长203nm。
结果显示,人参皂苷 饲料检测46 饲料研究 FEE D RESEARCH N O.2,2008Rg1的线性范围为0.03～0.25mg/m L,平均回收率96.75%,RS D=2.29%。
结论为高效液相色谱法准确可靠,可用于利心舒胶囊的质量控制。
阮鸣(2007)报道,采用高效液相色谱法对人参中的人参皂苷Rg1和人参皂苷进行含量测定,方法为色谱柱K romasil C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-水系统线性梯度洗脱;柱温35℃,流速1.0m L/min;检测波长203nm。
试验结果表明,人参皂苷Re的线性范围分别为12.35～0.38μg, 12.46～0.38μg,平均回收率为98.7%(RS D)。
结论是此方法简单准确,重复性好,可作为该药材质量的控制方法。
综上所述,由于人参质量很难以某一项指标定论,要根据外部环境和生长时间等因素综合定论,存在误差较大。
试验直接采用高效液相色谱方法测定人参根渣的活性成分、皂苷含量和氨基酸含量,为人参根渣作为一种天然饲料添加剂—免疫增强剂应用到饲料中提供理论依据。
参考文献[1]李向高.人参皂苷Rb1的药理作用研究.吉林农业大学学报,2004,26(6):649-652[2]陆国红,沈金芳,曹惠明.高效液相色谱法测定利心舒胶囊中人参皂苷1的含量.医药导报, 2007,26(3):298[3]Y un T K,Lee Y S,Lee Y H,et al.Anticarcinogeniceffect of Panax ginseng C.A.Meyer and identification of active com pounds.J K orean Med.Sci.,2001,16(1):6-18[4]阮鸣.高效液相色谱法测定人参总皂苷的含量.时珍国医国药,2007,18(1):134-135[5]赵英,王秀全,蔡荣春.微喷灌对人参产量、皂苷及氨基酸含量的影响.吉林农业大学学报,2002, 24(6):50-53通讯地址:吉林长春西安大路5333号 130036动物保健冬春谨防仔猪白肌病王桂香 仔猪白肌病也叫硒和维生素E缺乏症,是由于仔猪体内缺硒和维生素E而引起的一种仔猪代谢病。
这种病由于土壤中缺硒,所以植物中含硒量也很低,这就使饲料中硒缺乏,因而母猪体内缺硒,自然引起哺乳仔猪体内硒的不足,再加上维生素E缺乏,便会发生仔猪白肌病。
此病多发于20日龄左右的仔猪,在冬春季节地方性流行。
我国东北、西北、华北、西南和华东沿海一带的部分地区为缺硒地带,故常有此病发生。
1 病状仔猪白肌病常发生于体质健壮的仔猪,有的病例病程较短,突然发病。
发病初期表现为精神不振,体质迅速衰退,往往出现起立困难,病势再发展,则四肢麻痹。
呼吸不匀,心跳加快,体温无异常变化。
病程约为3～8d,最后倒毙。
也有的病例不出现任何病状,即迅速死亡。
病猪主要表现食欲减少,精神沉郁,呼吸困难。
病程较长的表现为后肢强硬,拱背,站立困难,常表现前腿跪立或犬坐姿势。
严重者坐地不起,后躯麻痹,表现神经症状,如转圈运动,头向一侧歪等,呼吸困难,心脏衰弱,最后死亡。
患病仔猪精神不振,怕冷,喜卧。
走路打晃,四肢强硬,站立困难。
心跳和呼吸快而弱。
病变特征:腰、背和臀等肌肉变性,色淡,似煮肉样,而得名白肌病。
2 预防对母猪及仔猪要加强饲养管理,在寒冷季节应补充蛋白质和富含硒的饲料喂猪。
也可在猪的日粮中按每100kg饲料中添加0.022g无水亚硒酸钠和2～2.5g维生素E。
还可在母猪配种前和怀孕2个月时,肌肉注射亚硒酸钠溶液8m L。
对5日龄仔猪肌肉注射0.1%的亚硒酸钠溶液1m L/头,20d后再注1次。