白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)
溴甲酚紫法检测血清白蛋白方法学评价
仪检测 。分析仪 器经 校准 后每 天用 质控 物进行 室 内质 控监
测 ， 在控 。 均
收稿 日期 ：０ １１ —８ 修 回 日期 ：０ ２０ —２ ２ １ －１２ ； ２ １—３ ０
作者简介 ： 王北 宁（９ ３ ） 主任技师 ， １５ 一 ， 教授 ， 主要从 事检验科 管理和临床免疫学 检验 等研 究。Ｅ ｍ ｉ ｗ ｎｂｉｉｇｉａｔｍ － ａ ： ａｇｅｎｎｓ ．ｏ ｌ ｎ
料结合法测定 Ａ Ｂ广泛应用于临床 ， Ｌ 国内大多数 医院 目前仍 然沿用这一方法 。但 近年来 ， 已有 国外 公司推 出 了溴 甲酚 紫 （ ｒｍ ｒｓｌ ｕｐｅ Ｂ Ｐ 法 测定 血清 Ａ Ｂ的商 品试 剂 ， 了 ｂｏ ｃｅｏ ｐ ｒｌ， Ｃ ） Ｌ 为
由德 国罗 氏公 司提供 ， 使用罗 氏 ＭＯ Ｕ Ａ Ｄ Ｌ Ｒ全 自动 生化分析
疲劳 的发生 ］ 。因此 ， 对于参加训练期 的新兵而言 ，ｋ ５ ｍ最大 程度 的跑步 ， 能够对身体形 成较 大强度 的刺激。在训 练时 可 以适 度调整 ， 训练安排 上每周次 数不应过 多 ， 同时 ， 在跑 完 应 ５ ｍ越野后安排适 当歇息 ， ｋ 避免对机体刺激过强的训 练。
应量 ， 但仍不足 以满足 机体供 能需 要 ， 肉处 于缺氧状 态 ， 肌 糖 酵解 因之 加强 ， 以补充所需 的能量 ， 肌细胞 可生成高出安静状
态 数 倍 的 Ｌ Ｃ 生 产 的 Ｌ Ｃ进 入 血 液 引 起 血 Ｌ Ｃ升 高 。 Ａ ， Ａ Ａ
（ 陈泮 藻编辑 ）
溴 甲酚紫 法检 测 血 清 白蛋 白方 法 学 评 价
ｌ８ ８
Ｌａ ｅｅ ｍｍｕ ｏｓａ ｓ＆ Ｃｌ Ｍｅ Ｊ ｎ ２ ２， １１ Ｎｏ ３ ｎ
血清白蛋白测定及紫外分光光度计的使用
一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、方法学评价 六、注意事项
一、原理
在pH4.2缓冲液中，溴甲酚绿（BCG） 与白蛋白结合形成蓝色复合物（血清白蛋 白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在非离 子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的 染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物）， 在波长620nm处有最大吸收峰，其颜色深 浅与白蛋白浓度成正比。与经过同样处理 的白蛋白校准液进行比较，即可计算出样 品中白蛋白含量。
10 10
于空白管中加入蒸馏水10 μl，各管充分混匀。
2、分光光度计测定方法：波长620nm， 空白管调零，测定标准管和测定管吸光度 值，按公式计算测定结果。
计算公式：
A样 C样 C标 A标
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（40g/L）
三、参考值：
总蛋白：62~82 g/L 白蛋白：35~55g/L 球蛋白：20~30 g/L 白蛋白/球蛋白=1.5~2.5/1
溴甲酚绿（BCG）与血清蛋白呈非特异性反 应，但是在反应的30秒钟内溴甲酚绿（BCG）与 白蛋白结合形成蓝色复合物呈特异性反应。因此 反应结束后应立刻比色测取吸光度。
二、测定方法
1、加样： 试管三只
试剂
空白管（B） 标准管（C） 测定管（U） 工作试剂（ml） 2 2 2
标 准 液（μl） 样 品（μl）
四、临床意义：
• 1、白蛋白/球蛋白=1.5~2.5/1，通过
计算其比值可以判定肝脏的功能情况； • 2、白蛋白降低，其比值降低或倒置： 慢性肝炎（肝细胞功能降低）、肝硬 化（肝细胞坏死、肝腹水）； • 3、球蛋白大量降低：机体免疫功能降 低。
血清白蛋白测定标准操作规程
血清白蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清白蛋白测定（缩写ALB）;组合项目申请：血生化中肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2。
1标本采集2。
1.1常规静脉采血约2ml,不抗凝,置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2。
1。
2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2。
1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2。
1。
5下列标本为不合格标本2。
1。
5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本,或少于0。
1ml的血清或血浆。
2。
1。
5。
2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2。
1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的.2。
1。
5。
4其他如标识涂改、标本试管破裂等.2。
2标本保存2.2。
1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清.2.2.2标本保存时间：室温(15～25℃)下可稳定一周，普通冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.3标本采集的注意事项2.3。
1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2。
3.2不建议采集抗凝血标本,如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理血清中的白蛋白与溴甲酚绿在PH=4.2的条件下结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，通过在630nm处测定其吸光度可得出白蛋白的含量。
PH=4.2白蛋白 + 溴甲酚绿—-—-—-------———绿色复合物4 试剂及其他用品4.1试剂:溴甲酚绿法测定白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品.4。
2试剂盒保存：保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。
开盖后放于仪器的冰箱中至少稳定14天.开盖后避免污染。
变质指示：当试剂有浊度时,表明有细菌污染，不能继续使用.4.3试剂盒准备：液态单试剂型，即开即用，无特殊准备4.4试剂盒主要成分:缓冲液（pH 4.2）50 mmol/L，溴甲酚绿0.25 mmol/L,其中含有稳定剂与保护剂＜0.1%。
参考区间确定资料
第二类体外诊断试剂产品注册资料白蛋白测定试剂盒（溴甲酚绿法）参考区间确定资料XXXXXX有限公司一、参考依据依据NCCLS C28-A2 如何确定临床检验的参考区间：批准指南（2000）文件。
该文件是确定定量临床检验项目的参考区间的指南。
二、材料与方法1．标本来源按健康人群要求选择XXXXXXXXX医院健康体检者，收取该医院检验科检测已完成的临床样本。
样本采集/检验时间：XXXX.XX。
对象：在XX地区居住的性别不限、年龄不限的健康人。
健康人的要求：（1）一月内无急性感染史；（2）发育正常，无心血管、肺、肾和肝、胆、胰等器质性疾患；（3）半年内无输血和大手术史；（4）3月内未服用影响凝血功能的药物，2周内无中毒史，未接触毒物及其他有害物质；（5）妇女不在妊娠或哺乳期。
2．使用仪器HITACHI 7020全自动生化仪。
3．检测试剂XXXXXX有限公司生产的白蛋白测定试剂盒（溴甲酚绿法）。
规格：XXmL；批号：XXXXXX；生产日期：XXXXXXXX；有效期XXXXXXXX。
4. 质量控制按照技术要求3.1、3.3~3.6.1、3.7进行产品性能的测定，结果应符合要求。
5. 参考值确定根据项目制定双侧界限或单测界限，采用95％参考区间范围。
6．统计方法应用SPSS20进行数据统计分析。
正态性检验采用Kolmogorov–Smirnov(K-S) 检验。
结果属于正态分布的，用正态分布法计算参考区间范围，其95％参考区间范围分别用下式计算：双侧：SD.1X96单测下限：SD.1＋X64－单测上限：SD.1X64结果属于偏态分布的，用百分位法计算参考区间范围，其95％参考区间范围分别用下式计算：双侧：P2.5～P97.5单测下限：P5单侧上限：P95三、试验结果用白蛋白测定试剂盒（溴甲酚绿法）对收集到的标本进行测定，测定结果呈正态分布（见图1）。
95%参考区间用公式求出，得出了本试剂盒测定ALB的参考值范围上下限，见表1。
白蛋白测定试剂(盒)技术审评要点
白蛋白测定试剂(盒)技术审评要点吴丹;李平;匡佩琳;帅明珠;鄢峰【摘要】本文概述了白蛋白测定试剂(盒)技术审评要点,包括原材料研究、生产工艺及反应体系研究、分析性能评估、临床评价、产品技术要求、使用说明书六个方面的要求.为规范白蛋白测定试剂(盒)注册申报和技术审评工作提供指导.【期刊名称】《中国医疗器械信息》【年(卷),期】2017(023)013【总页数】4页(P55-57,60)【关键词】白蛋白测定试剂(盒);技术审评【作者】吴丹;李平;匡佩琳;帅明珠;鄢峰【作者单位】江西省药品审评中心江西南昌 330008;江西省药品审评中心江西南昌 330008;江西省药品审评中心江西南昌 330008;江西省药品审评中心江西南昌330008;江西省药品审评中心江西南昌 330008【正文语种】中文【中图分类】R446.6血清白蛋白在肝脏合成，血清白蛋白浓度升高常由于严重失水，血浆浓缩所致，并非蛋白质绝对量的增加。
临床上尚未发现单纯白蛋白浓度增高的疾病。
白蛋白浓度降低的原因与血清总蛋白浓度降低原因相同。
但有时总蛋白的浓度接近正常，而白蛋白的浓度降低，同时伴有球蛋白浓度的增高。
急性白蛋白浓度降低，主要由于急性大量出血或严重烫伤时血浆大量丢失。
慢性白蛋白浓度降低主要由于肝脏合成白蛋白功能障碍、腹水时白蛋白的丢失和肾病时白蛋白从尿液中的丢失。
严重时，白蛋白浓度可低于10g/L。
白蛋白浓度低于20g/L时，由于血浆胶体渗透压的下降，常可见到水肿等现象。
另外存在极少数先天性白蛋白缺乏症患者，由于白蛋白合成障碍，血清中几乎没有白蛋白，但患者并不出现水肿[1]。
白蛋白测定试剂（盒）使用溴甲酚绿法（BCG）、溴甲酚紫法（BCP）对血清、血浆中白蛋白进行定量检测。
包括手工试剂和在半自动、全自动生化分析仪上使用的试剂。
截止2015年底，全国已获证产品约70个（含国产和进口）。
为了规范该类产品的注册申报和技术审评工作，2015年本单位承担了国家食品药品监督管理总局关于白蛋白测定试剂（盒）注册技术审查指导原则的课题研究。
溴甲酚绿法测定血清白蛋白
溴甲酚绿法测定血清白蛋白溴甲酚绿法是一种常用的测定血清白蛋白含量的方法，其原理是利用溴甲酚绿与白蛋白混合后的光度变化来测定血清白蛋白的含量。
下面将详细介绍溴甲酚绿法测定血清白蛋白的具体操作过程。
实验原理血清中的白蛋白可以与溴甲酚绿形成复合物，形成的复合物的光学密度与白蛋白的含量呈正相关。
测定方法如下：步骤一：准备溴甲酚绿溶液将溴甲酚绿加入缓冲液中，制备浓度为0.01mg/mL的溴甲酚绿溶液。
步骤二：制备标准工作液将0.01mg/mL的溴甲酚绿溶液和1%的牛血清白蛋白溶液以1:5的比例混合，制备出浓度为0.002mg/mL的标准工作液。
步骤三：制备比色管取6mm x 100mm的试管，标出标准液和待测液的填充线，分别用吸管将标准液和待测液分别加入比色管中。
步骤四：光度测定将加入标准液和待测液的比色管分别放入分光光度计中，设置波长为628nm，测定各试管的吸光度值（OD值）。
步骤五：计算白蛋白含量比较标准工作液和待测液的吸光度值，根据标准曲线计算出待测液中白蛋白的含量。
实验要点1、比色管的选择：使用6mm x 100mm的试管即可。
3、比色管中待测液的加入：待测液的加入应加到标记线上方。
4、比色管中标准液和待测液的混合：比色管中标准液和待测液的混合应该彻底，避免混合不均导致误差。
5、波长的设置：溴甲酚绿法测定血清白蛋白的波长一般定在628nm。
实验注意事项1、实验过程中要保持实验环境的清洁和卫生，保证实验的准确性。
2、所有实验仪器和试剂必须在实验前检查是否正常。
3、实验过程中要严格按照实验步骤进行，保证结果的准确性。
4、实验结束后要保持实验环境整洁，清洁仪器和试管。
总结溴甲酚绿法是一种简单、快速、准确的血清白蛋白含量测定方法。
通过以上步骤，我们可以很容易地进行血清白蛋白含量的测定。
在实验过程中，需要注意实验细节和准确性，保障实验结果的准确性。
ALB溯源文件
白蛋白检测试剂盒(溴甲酚绿法）溯源性说明
白蛋白(ALB ）检测试剂盒（溴甲酚绿法）使用ALB 专用校准液校准，可以溯源至国际二级参考物质(ERM
—DA470K/IFCC ）。
常规样品测量结果的溯源性程序如下图所示。
一、 溯源链示意图
注:第一条虚线以上的操作由权威机构完成;
两条虚线之间操作由生产企业操作完成； 第二条虚线以下的操作由终端客户完成； 二级参考物质：ERM-DA470K/IFCC ；
溯源链中企业标准测量程序即：重庆中元生物技术有限公司白蛋白检测试剂盒（溴甲酚绿法）.
校准
定值
二、溯源性说明
关于ALB校准品定值的不确定度如下所述：
注:溯源选定仪器：贝克曼库尔特AU480全自动生化分析仪;
不同批号的校准品和质控品的值会稍有差异；
当制造工序及检验工序变更的时候，不确定度的计算方法也可能变更。
白蛋白检测操作程序
白蛋白检测操作程序白蛋白（albumin ，ALB ）是一种仅含有氨基酸的单纯蛋白质,在血浆中发挥多种生理功能。
溶于水和中性盐，易与阴离子染料结合，故本试验采用溴甲酚绿（阴离子染料）法测定,在反应中加入丁二酸缓冲液能够避免溶液混浊，降低空白吸光度。
主要用于肝、肾等疾病的诊断。
实验原理在pH4.2条件下，白蛋白与溴甲酚绿结合形成蓝绿色结合物,蓝绿色结合物与样本中白蛋白浓度成正比,在630nm 处测定吸光度值，即可求得样本中白蛋白的浓度。
试剂与仪器1. 试剂1.1. 白蛋白试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：溴甲酚绿0.35mmol/L 丁二酸缓冲液50mmol/L工作参数：在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。
技术性能指标:试剂空白起始吸光度（630nm37℃）≤0.20A 。
线性范围：50g/L ±10%。
准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。
精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。
储存条件、有效期：储存于2～25℃，避光可稳定18个月。
以蒸馏水为空白在630nm 处光吸收值高于0.3A时，则不能使用。
计算公式： 白蛋白深度(g/L )= ×校准液浓度(g/L )样品管吸光度校准管吸光度以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将校准液浓度值（Conc值）输入仪器即可。
1.2. 英国郎道（RANDOX）质控品，每次采用正常和异常两个水平，并参照质控品测试要求进行。
1.3. 校准液2. 仪器采用日立（HITACHI）7060型全自动生化分析仪。
选择波长340-800nm之间，能对终点、速率、两点、免疫比浊等方法的实验进行测定。
标本测定程序1. 开机：开机前要加清洗液、上打印纸、接蒸馏水等。
然后打开电源及中文计算机信息管理系统。
2. 试剂准备：开机后将所需试剂置于试剂盘相应位置。
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白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)
简介：
总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成，检测白蛋白的方法有双缩脲法、色氨酸法、染料结合法。
检测白蛋白的染料结合法可采用溴甲酚绿或溴甲酚紫染料结合，上述染料对白蛋白具有高度的亲和力，通常监测染料与白蛋白结合的初速率，该速率与样品中白蛋白浓度成正比。
Leagene 白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)检测原理是在酸性环境下，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚紫(Bromocresol purple ，BCP)结合生成绿色复合物，在603nm 处有吸收波，该复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，求得待测样品中白蛋白浓度。
本试剂盒多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的蛋白含量测定，该法操作简单、方法特异，既可手工操作，又可采用自动分析仪检测，对血清清蛋白的特异性比BCG 法(溴甲酚绿法)要好，不易受时间和温度变化的影响。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 离心管、小试管
2、 比色杯
3、 分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
1、 取白蛋白标准配制液或稀释液加入到白蛋白标准中，充分溶解后配制成40mg/ml 的白
蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的白蛋白标准溶液应-20℃保存。
亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml 。
特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，白蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取白蛋白标准溶解于蔗糖中。
一般也可以用NaCl 或PBS 作为溶解白蛋白标准品的稀释液。
2、 样本处理：血清、血浆样本直接取检测。
对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水比
例，加入生理盐水或PBS ，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。
编号 名称
TC0567 100T Storage
试剂(A): BCP 试剂 200ml 4℃ 避光
试剂(B): 白蛋白标准 20mg RT 试剂(C): 白蛋白标准配制液 100ml
RT
使用说明书
1份
3、白蛋白加样操作，按下表依次加入试剂：
加入物(ml) 空白管标准管待测管
白蛋白标准配制液0.01 −−
白蛋白标准溶液(40mg/ml) −0.01 −
待检样品(血清、血浆、组织匀浆液) −−0.01
BCP试剂 2.0 2.0 2.0
4、比色杯光径，先在分光光度计以空白管调零，逐管加入BCP试剂，并立即混匀。
5、放置(30±3)s，读取标准管和各待测管的吸光度。
6、当遇到脂血混浊，可设”样本空白管”：取待测样品加入白蛋白标准配制液，予以校正。
计算：
白蛋白(g/L)=(待测管吸光度/标准管吸光度)×白蛋白标准液浓度(g/L)
参考区间：
健康成年人36～46g/L
注意事项：
1、白蛋白标准粉末溶解于白蛋白标准配制液后，即获得白蛋白标准原液，该原液中含有
防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
使用酶标仪测定蛋白浓度时，每个试
剂盒可以测定的样品数量可能会显著增加。
3、本法线性范围是10～50g/L，在10～40g/L呈良好线性范围。
4、CV可达0.45%，回收率可达99.3%～102%，平均回收率达100.5%。
5、该法测定正常样本的批间变异系数为6.3%。
有效期：6个月有效。
白蛋白标准配制成溶液后应-20℃冻存。