高效液相及标准曲线谱图示例
液相色谱提取维生素C
图2火龙果样品的HPLC谱图
图3猕猴桃的HPLC谱图
图4鸭梨的HPLC谱图
3.3样品相关数据及Vc含量的计算
实验测得的样品相关数据如表2所示。
表2样品的液相色谱数据与样品质量
样品名称
保留时间/min
峰面积
质量/g
火龙果
2.931
57115
5.0177
猕猴桃
2.964
462889
2.2实验步骤
2.2.1仪器准备
按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。
2.2.2样品准备
准确称取切碎的蔬果样品5.0g，以1mol/L乙酸50 mL为萃取溶剂，微波功率设为自动，萃取时间为10 min，萃取温度设定为50℃，平行萃取两次（本次实验只萃取1次）。萃取液过滤后用1mol/L乙酸溶液定容至100 mL，制成供试品溶液。
2.2.3定性分析
分别取10μL 50 mg/L的Vc标准溶液和供试品溶液，进HPLC分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。
2.2.4校准曲线绘制
分别配制5，20，50，80，100 mg/L的Vc样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析，平行测定3次。以Vc色谱峰高对浓度作图，绘制校准曲线。
2.2.5定量分析
液相色谱法中常用的定性方法有用已知纯物质对照定性、用文献值进行定性分析、根据相对保留值定性、与其他方法联用定性（如与质谱联用）等方法。可根据峰面积或峰高进行定量分析，具体计算方法有归一化法、标准曲线法、内标法、标准加入法。
2、如何快速建立未知物的液相色谱方法？一般应考虑哪些主要因素？
答：建立未知物的液相色谱方法应该考虑两个方面的因素，一方面是选择合适的色谱柱，色谱柱是液相色谱分析的核心组件，应根据分析对象的性质选取合适的色谱柱，如正向色谱、反向色谱和离子交换色谱等等；另一方面是流动相的选择，溶剂的极性是选择的重要依据，应该使用高纯度试剂做流动相，防止微量杂质长期积累和损坏色谱柱和使检测器噪声增加，同时应避免流动相与固定相发生作用使柱效下降或者损坏柱子，试样在流动相中应有适宜的溶解度防止沉淀在柱中积累还有流动相要满足检测器需求。
高效液相色谱法测定葛根样品中淀粉含量
４０ Modern Scientific Instruments 2004 6高效液相色谱法测定葛根样品中淀粉含量韩振泰（中国林科院森林生态环境与保护研究所 北京 １０００９１）E-mail:fenxizx@摘 要 建立了葛根淀粉含量的高效液相色谱测定方法，样品经酸解后用高效液相色谱测定其葡萄糖含量后折算成淀粉。
用Ｓｕｇａｒ Ｐａｋ－Ｉ柱，以水为流动相，柱温保持８０℃。
本方法葡萄糖回收率为９６．４％～９７．８％，线性方程为Ｙ＝２２３８０４．３Ｘ－９２１５０．６，相关系数ｒ＝０．９９９８。
关键词 高效液相色谱；葛根；淀粉；葡萄糖；木糖；阿拉伯糖中图分类号 ＣＮ１１－２８３７／ＴＨDetermination of Starch Content of the Root of Kudzu VineBy High Performance Liquid ChromatographyHan Zhentai(The Reserch Institute of Forest Ecology,Environment and Protection,Chinese Academy of Forestry,Beijing 100091,China )Abstract A high performance liquid chromatography was proposed for the determination of starch content of the root of Kudzu vine. The starch of the root of Kudzu vine was hydrolyzed and converted to glucose.The glucose content was determined by HPLC.A Sugar Pak-I was used with water as mobile phase.The flow rate was 0.8ml/min.the differential refractometer was used and the column temperature was 80℃,r=0.9998.Recovery was 96.4%～97.8% and RSD was 1.32%(n=6) .Key words High performance liquid chromatography; root of kudzu vine; starch; glucose; xylose; arabinose收稿日期：２００４－０９－２１作者简介：韩振泰（１９６７－），男，工程师， 从事液相色谱工作，擅长天然产物提取及有机分析。
气相色谱法和高效液相色谱法测定废水中N,N—二甲基甲酰胺的比较
气相色谱法和高效液相色谱法测定废水中N，N—二甲基甲酰胺的比较作者：王芳耿建梅来源：《环境与发展》2014年第02期摘要：为比较气相色谱法和高效液相色谱法测定废水中N，N-二甲基甲酰胺是否存在显著性差异，分别使用这两种方法测定N，N-二甲基甲酰胺含量。
结果显示，两种方法的精密度、准确度和测定结果无显著性差异，均可作为测定废水中N，N-二甲基甲酰胺的方法。
关键词：气相色谱；高效液相色谱；N，N-二甲基甲酰胺中图分类号：X830 文献标识码：A 文章编号2095-627X（2014）01-0181-02Comparision on Determination of DMF in Wastewater by Gas Chromatography and High Performance Liquid ChromatographyWang Fang， Geng Jianmei（Huaian Environmental Monitoring Center， Jiangsu 223001）Abstract：To compare the gas chromatography and high performance liquid chromatography method for DMF， we colleceted 4 wastewater samples and detected the DMF content. The results indicated that there were not distinctive differences in the precision， accuracy and determination results of gas chromatography and high performance liquid chromatography. So DMFcontent in wastewaters could be determined by the two methods.Key words：Gas chromatography； High performance liquid chromatography ； N，N-DimethylformamideN，N-二甲基甲酰胺（N，N-dimethylformamide， DMF）作为“万能溶剂”[1]，虽然毒性相对较小，但废水排放量却极大[2-3]，因此准确测定DMF含量成为处理废水的关键。
高效液相色谱测定物质浓度
仪器分析实验报告实验名称：高效液相色谱测定物质浓度一、实验内容1、学习高效液相色谱仪的使用2、利用高效液相色谱法测定溶液中物质的浓度二、实验步骤分别向液相仪注射苯、萘、甲苯、混合四种液体，测定谱图，并利用标准曲线，测定其浓度。
三、数据处理标准曲线：实验数据：0.00.51.01.52.0 2.53.0 3.54.0 4.55.0 5.56.0 6.5min-7.5-5.0-2.50.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.530.032.535.037.540.042.545.047.550.0mAU254nm,4nm (1.00)1.401/6571311.872/71922.076/440242.315/176632.542/32972.731/14743.338/3466684.311/107074.829/722055.436/3447766.381/5633图四 苯0.00.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5min-10-505101520253035404550556065mAU254nm,4nm (1.00)4.280/810108图五 甲苯0.00.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5min-10010020030040050060070080090010001100mAU254nm,4nm (1.00)1.281/2692011.523/1123671.851/198352.054/339512.313/57782.523/16233.361/56544.306/46304.591/2586585.394/16492918图六 萘0.00.51.01.52.0 2.53.0 3.54.0 4.55.0 5.56.0 6.5min-20-100102030405060708090100110120130140150160mAU254nm,4nm (1.00)1.363/7093351.890/487072.107/685472.299/240562.512/86352.741/134203.331/4865384.265/8520234.813/1162295.403/26525186.383/5382图七 混合数据计算：表一 混合液中各物质保留时间、峰面积及浓度计算物质苯 甲苯 萘 保留时间（min ） 3.331 4.265 5.403 峰面积（mAu ） 496538 852023 2652518 浓度（ug/ml ）339.854374.9208.803四、数据分析1.谱图中存在一定的杂峰，可能是由于溶液被污染2.保留时间存在一定的差异，可能是由于混合溶液中各组分之间会相互影响3.实验中要注意清洗针头，避免相互污染，并且要尽量排除气泡。
高效液相色谱法测定人血浆中5_Fu浓度
administration［J］． J Ethnopharmacol，2013，150（1） ：175 － 180． ［3］ Zaugg J，Eickmeier E，Ｒueda DC，et al． HPLC － based activity pro-
2． 5 空白血浆处理方法 沉淀蛋白：取血浆样品 0． 50 mL，置 10 mL 具塞试管中，加水 0． 20 mL，涡旋 混匀，加入硫酸铵 0． 2 g，密塞，涡旋混匀。提取：加 入乙酸乙酯 4 mL，密塞，涡旋 5 min，离心（ 3 000 r ·min － 1 ） 10 min，分取上清液，置氮吹仪下吹干；在 上述残 留 血 浆 中，再 加 入 乙 酸 乙 酯 4 mL，涡 旋 5 min，离心（3 000 r·min － 1 ）10 min，分取上清液，并 入上述离心管中； 浓缩：再将离心管置氮吹仪下吹 干，向离心管中加入乙酸乙酯 1 mL，密封膜封口，涡 旋 3 min，洗涤上部管壁，去掉封口膜，再将离心管 置氮吹仪下吹干；重组：向离心管中精密加入流动 相 100 μL，密封膜封口，涡旋 5 min，超声 10 min，溶 液经 0． 22 μm 微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶 液。取供试品溶液 20 μL 注入液相色谱仪，记录色 谱图。 2． 6 血浆样品处理方法 取血浆样品 0． 50 mL，置 10 mL 具塞试管中，加入水 0． 10 mL，内标物 5-Bru 溶液（ 约 50 mg·L － 1 ） 100 μL，涡旋混匀，加入硫酸 铵 0． 2 g，密塞，涡旋混匀。其他同 2． 5 提取、浓缩及 重组项下依法操作。 2． 7 专属性考察 取空白血浆 0． 50 mL 按“2． 5” 项下操作，取滤液 20 μL 注入液相色谱仪，得空白血 浆色谱图，判断空白血浆色谱图干扰情况；取 5-Fu 对照品和 5-Bru 内标液混合，取 20 μL 注入色谱仪， 得 5-Fu 对照品 + 5-Bru 内标液色谱图；将空白血浆 和 5-Fu 对照品及 5-Bru 内标液混合，按“2． 6［将加 入水 100 μL 改为加 5-Fu 对照溶液（2 mg·L － 1 ）100 μL］”项下方法操作，取滤液 20 μL 注入液相色谱 仪，得空白血浆 + 5-Fu 对照品 + 5-Bru 内标液色谱 图。高效液相色谱图见图 1。 2． 8 线性关系考察 分别精密量取氟尿嘧啶对照 品溶液 5、10、20、30、40、50、60 μL，分别置 10 mL 具 塞试管中，各精密加入溴尿嘧啶内标溶液 30 μL，再 分别精密加水使成 100 μL（65、60、50、40、30、20、10 μL），各管中再分别精密加入空白血浆 0． 50 mL，涡 旋混匀，静置 10 min，再分别加硫酸铵 0． 2 g，密塞， 涡旋混匀。将上述内容列表，见表 1。 2． 9 精 密 度 与 准 确 度 试 验 配 制 低、中、高 （0． 021、0． 124、0． 206 mg·L － 1 ） 三种含 5-Fu 浓度不 同的血浆样，每种浓度 6 份，按“2． 5 ”项下方法处 理，与同日内和连续 5 日分别处理测定。将测得的 5-Fu 峰高 /5-Bru 峰高的比值代入当日的标准曲线， 得相应浓度，计算 ＲSD；将计算浓度与理论浓度相 比，求得方法回收率，详见表 2。 2． 10 样品稳定性试验 （1） 室温保存：在室温（25
高效液相色谱过氧化二异丙苯纯度的测定
用高效液相色谱测定过氧化二异丙苯含量用高效液相色谱测定过氧化二异丙苯含量摘要：建立了高效液相色谱及ODS反相色谱柱测定过氧化二异丙苯含量的方法，对同一样品进行测定的相对偏差小于1.4%。
此方法参照ASTM E755-94，只是在定量上采用内标法的峰面积为定量因子。
结果表明此方法误差范围符合原方法的要求，该方法相对于原方法具有分析速度快，条件易掌握等优点。
关键词：过氧化二异丙苯高效液相色谱法 ODS反相色谱柱一．前言过氧化二异丙苯(简称DCP)是一种有机过氧化物。
它是以异丙苯为起始剂，通过氧化、还原、缩合、提浓等工序制成，生产过程中的中间体和副反应所产生的杂质，主要有苄醇、苯乙酮、α-甲基苯乙烯、苯酚以及未反应的异丙苯等，这些杂质将直接影响DCP质量和单耗。
由于有机过氧化物不稳定，遇热易分解，不能直接采用气相色谱法测定含量，通常用的经典的化学碘量法操作繁琐且费时。
为进一步提高质量、降低单耗，同时也为更大地拓展国内外市场，采用近代的测试方法——高效液相色谱法分析已显得尤为重要。
本实验采用反相液相色谱法，在25分钟内完成DCP含量的测定。
本方法在技术上参照ASTM E755-94，在此基础上建立DCP含量的测试方法。
实验着重对DCP和其中的杂质进行定性，对流动相配比、检测波长和定量方法做了对比选择，并对方法的精密度和回收率进行了考察。
本实验中的分析方法在测定条件上与ASTM E755-94一致，只是在定量方法上，ASTM 方法中的采用峰高为定量因子，而本实验中在选择峰高为定量因子测定DCP含量时，其测定结果准确性、重复性较差，所以选定峰面积为定量因子，精密度达到ASTM E755-94要求，适用于DCP纯度分析。
二．实验部分1．仪器、设备WATERS BREEZE色谱操作系统Waters l525 Binary HPLC Pump (1525高效液相色谱泵)Waters 2487 Dual λAbsorbance Detector (2487双波长紫外检测器)Human Power I +，纯水/超纯水系统 有机相过滤器 (过滤膜：0.2um)2．试剂材料2.1 甲醇 HPLC 级； 2.2 超纯水 <18.3M Ω·cm ；2.3 DCP 标样 自制(经过三次重结晶)：2.4 Diheptyl phthalate 邻苯二甲酸二正庚酯(Fluka 色谱级)3．测定条件色谱柱： Waters spherisorb 5um ODS2，250×4.6mm 流动相 ： 甲醇:水 85:15 (V/V) 流 速 ： 1.0mL/min 检测器： 紫外检测器 检测波长： 254nm 柱温： 40℃ 定量管 ： 25uL4．分析步骤4.1 校正因子的测定 4.1.1 DCP 标准溶液的制备称取0.40±0.05g(称准至0.0001g)DCP 标样（DCP 重结晶样品）和0.20±0.05g(称准至0.0001g)内标物邻苯二甲酸二正庚酯；置于100mL 容量瓶中，加入50mL 甲醇，混合均匀，然后定容。
实验报告---绿原酸标准曲线的绘制
绿原酸标准曲线的绘制一、实验目的1.1 熟练掌握用高效液相色谱仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；1.2 熟练掌握用紫外分光光度仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；二、原理2.1 绿原酸简介绿原酸(chlorogenic acid)是由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quinic acid,即1-羟基六氢没食子酸)组成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caf-feoylquinic acid),分子式:C16H18O9,分子量:345.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。
2.2 高效液相色谱仪的工作原理：高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
三、试剂与仪器3.1 材料与试剂：绿原酸标准品；乙腈为色谱纯试剂，磷酸、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯；3.2 主要仪器：高效液相色谱仪，分析天平，25ml、50ml棕色容量瓶，滴定管，10ml,25ml,50ml,100ml容量瓶各7个，1ml、2ml、5ml的移液管，紫外分光光度仪，比色皿；擦镜纸；注射器。
四、实验步骤4.1 用紫外分光光度法所测的绿原酸标准曲线紫外分光光度法：精密称取绿原酸标准品0.0055g，用80%的乙醇溶解，转移到100ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，制得标准母液。
精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0ml于25ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，此为标准系列溶液。
高效液相色谱法原理与应用(详细版)课件PPT
保留时间(tR):
调整保留时间(t’R): tR' tR tM
死体积(VM): VMtMF0
保留体积(VR): VR tRF0
调整保留体积(V’R): V R ' tR ' F 0(tRtM )F 0
2021/3/10
16
2. 色谱分离基本方程
R tR(2) tR(1)
1 2
(W1
W2
)
R: 分离度 tR: 保留时间 t0：死时间 W：峰底宽度
2021/3/10
17
不同R值的峰重叠情况示意图
R>1.5可以得到基线分离
分离度R反映的是相邻两个峰的分开程度
R太小，两个峰无法彻底分离
R太大，分离时间过长，工作效率低下
一般要求R>1.5，也可遵循行业特殊规定
2021/3/10
18
色谱分离基本方程
高效液相色谱法原理与应用
参考书 《高效液相色谱及其应用》 《液相色谱检测方法》 《实用高效液相色谱法的建立》
2021/3/10
1
第1章 色谱基本原理
一、色谱法概述 1. 色谱法的定义与特点 2. 色谱法的分离原理 3. 色谱法的特点 4. 色谱法的分类
2021/3/10
2
1.色谱法的定义
2021/3/10
2021/3/10
46
校正归一化法
➢推导：
Ci%m mi 100m1
mi m2 mn
100
Ai fi
100
A1f1 A2f2 An fn
Ci%fifA iA i i 10% 0
2021/3/10
47
➢应用范围：当试样中各组分都能流出色谱柱，