薄层层析分离方法
中药薄层层析的操作方法
中药薄层层析的操作方法
中药薄层层析是一种常用的分离和鉴定中药有效成分的方法。
下面是中药薄层层析的操作方法：
1. 准备样品：将中药研磨成细粉，取适量样品称重。
2. 准备薄层板：将薄层板切成适当的大小，并在一侧标记样品的名称和位置。
3. 准备展开剂：将适量的展开剂溶解在合适的溶剂中，制备展开液。
4. 展开薄层板：将薄层板的标记面放在水平的工作台上，用玻璃棒均匀涂抹展开液，形成均匀的展开层。
5. 样品施加：将准备好的样品溶液或浸膏用微量注射器或毛细管均匀滴在展开层上。
6. 开始层析：将薄层板放入层析槽中，加入适量的层析剂，使液面高度超过薄层板的高度。
7. 进行层析：待溶剂渗透至展开层顶部后，取出薄层板，迅速晾干。
8. 显色：将晾干的薄层板放入显色槽中，使用合适的显色剂进行显色，使样品
斑点显现。
9. 分析结果：观察显色后的薄层板，记录样品斑点的颜色、形状和相对迁移距离等信息。
10. 鉴定成分：通过比对样品斑点与已知标准品斑点的色谱行为和颜色等特征，鉴定中药中的有效成分。
需要注意的是，中药薄层层析的操作过程需要严格控制温度、时间和药液浓度等因素，以保证分离和鉴定的准确性和可重复性。
同时，还要注意安全操作，避免有毒溶剂的接触和吸入。
薄层层析法分离色素
实验八色素的分离(层析法)一、目的要求1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法。
2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法。
3. 掌握偶氮苯和苏丹红（III）的分离方法二、实验原理薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。
把欲分离的样品点在薄层板的一端，然后将点样端浸入适宜的展开剂中, 在密闭的层析缸中展开，使混合物得以分离的方法。
由于层析在薄层上进行故而得名。
薄层层析是一种微量、快速的层析方法。
它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定，还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。
薄层层析根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素、硅胶、硅藻土)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。
薄层层析中以吸附薄层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶（氧化铝的活化温度为150℃－160℃，硅胶的活化温度为105℃－110℃）。
吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。
分配薄层层析在展开过程中，各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配，由于各成分在两相间的分配系数不同，因而可以达到相互分离的目的。
薄层层析选择展开剂视被分离物的极性及支持剂的性质而定。
如果薄层层析所用的支持剂是吸附剂，在同一吸附剂上，不同化合物的吸附性质有如下规律：1.饱和碳氢化合物不易被吸附；2.不饱和碳氢化合物易被吸附，分子中双键愈多，则吸附得愈紧密；3.当碳氢化合物被一个功能基取代后，吸附性增大。
吸附性较大的化合物，一般需用极性较大的溶剂才能推动它。
选择展开剂的另一个依据是溶剂的极性大小。
极性大的化合物需用极性大的展开剂，极性小的化合物需用极性小的展开剂。
一般情况下，先选用单一展开剂如苯、氯仿、乙醇等，如发现样品个组分的R f值较大，可改用或加入适量极性小的展开剂如石油醚等。
实验柱层析和薄层层析
实验柱层析和薄层层析层析法是通过分离混合物组分的一种方法，主要有柱层析和薄层层析两种。
本文将介绍它们的原理、步骤和应用。
实验柱层析原理实验柱层析是一种液相色谱分离技术，基于混合物组分在固定相和流动相之间相互分配的差异进行分离。
实验柱层析一般采用正交试验法，即通过改变柱填料、流动相、流速和溶质质量浓度等参数，以缩小响应面，得到最佳分离条件。
步骤1.选择合适的柱径和柱高，并选用合适的柱填料。
2.准备流动相，并过滤除杂质。
将柱填料与流动相充分浸泡，使柱填料达到平衡状态。
3.将混合物加到柱顶，并开始淋洗。
此时各组分在流动相和固定相之间交替分配，被固定相吸附或溶解，同时前进，终于分离。
4.根据检测结果，确定样品组分并计算出分离效果和纯度。
应用实验柱层析作为一种分离技术，广泛应用于医药、化学、生物学等领域。
常见的应用包括：1.分离蛋白质、核苷酸等生物大分子。
2.对化合物进行分离、纯化和定量分析。
3.分离和提取天然产物和药物。
薄层层析原理薄层层析是一种比较简单、快速的分离方法，其原理与柱层析类似，只是采用了薄层硅胶或氧化铝等作为固定相，可直接对液态和固态样品进行分离。
步骤1.准备薄层柱。
2.准备固定相毛细管与混合样品。
3.在薄层柱上涂上一层液态固定相，然后将其晾干。
4.将样品分别点于薄层柱的一端，放入发展槽中，加入足量发展剂。
5.等到液面距离薄层柱顶端约0.5cm时取出，划线，停发展，晾干。
6.在笼罩于发展剂蒸汽中的小钵中烘干至静止。
应用薄层层析作为快速分离、纯化和检测生物和化学样品的一种常用手段，其应用包括：1.对合成的物质进行纯化和分离。
2.植物药的含量测定。
3.对复杂化学物质进行溶剂系统选择和定性分析。
实验柱层析和薄层层析都是常见的层析法，虽然原理类似但有各自的优缺点和应用场景。
在实际应用中，需要根据具体的分离任务选择合适的方法。
中药化学分离方法及原理
中药化学分离方法及原理中药化学分离方法及原理中药是指源自植物、动物、矿物等天然物质，经过特定的加工方法制备而成的药物。
由于中药中含有大量的化合物，如何从中药中分离出目标化合物成为中药研究的重要一环。
为了实现中药中化合物的分离与纯化，研究者们开发出了多种中药化学分离方法。
本文将介绍常见的中药化学分离方法及其原理。
1.薄层层析法（Thin Layer Chromatography, TLC）薄层层析法是目前广泛应用于中药质控中的一种有效分离方法。
其原理是利用物质在固相上的吸附、分配和迁移的差异实现分离。
首先将待测物溶液点于薄层层析板上的起点位置，然后将层析板放入含有合适溶剂的封闭槽中，溶剂沿着层析板上升，使物质在固相上分离。
待移液行程到一定距离后，取出层析板，晾干后进行检测。
2.离子交换层析法（Ion Exchange Chromatography, IEC）离子交换层析法是一种基于样品中离子与交换相中离子的交换反应进行分离的方法。
其原理是将样品通过带电荷的固定相，利用样品中离子与交换相中离子的交换反应，实现目标化合物的分离。
该方法适用于分离具有不同电荷的化合物。
3.凝胶层析法（Gel Chromatography, GC）凝胶层析法是一种基于样品中化合物分子大小、形状等差异进行分离的方法。
其原理是利用多孔凝胶固体填料，将待测物通过填充柱，随着样品在凝胶中的迁移，分离出不同大小、形状的化合物。
较大分子将在凝胶孔隙内扩散较快，迁移速度较快，而较小分子则相反。
4.对流层析法（Column Chromatography, CC）对流层析法是一种适用于大量样品处理的常用分离方法。
其原理是将待测物样品通过填充在玻璃柱中的吸附剂，利用吸附剂对化合物的吸附能力不同进行分离。
通过在柱上加入适量的溶剂，使样品在柱中进行逐渐分离，进而获得目标化合物。
5.气相色谱法（Gas Chromatography, GC）气相色谱法是一种基于气相流动状态下化合物在固相或液相填充柱上的分配和迁移差异进行分离的方法。
五种层析方法和原理
五种层析方法和原理五种层析方法和原理1. 列点 1•新华字典定义：层析方法是一种通过分析物质内部不同成分在不同条件下的分布情况，从而推断物质组成、性质和结构的方法。
•原理：层析方法基于物质成分在固定相和流动相之间的分配行为。
固定相通常是固体或涂覆在固体上的物质，而流动相则是向上或向下流动的溶剂。
2. 列点 2•薄层层析法：–原理：薄层层析法是一种将样品溶解在溶剂中后涂覆在薄层板的表面上，然后通过毛细作用将溶剂上升至薄层表面，样品成分分离的方法。
根据样品成分的亲疏水性质和与固定相的相互作用，不同成分会以不同的速度在薄层板上移动，从而实现分离。
–应用：薄层层析法常用于化学品分析、食品检测和药物分析等领域。
3. 列点 3•气相层析法：–原理：气相层析法是利用气体（流动相）和涂覆在固体或涂覆在固体上的涂层（固定相）之间的分配作用，使样品成分在涂层上分离的方法。
样品经过蒸发后进入气化室，在高温和惰性气体的作用下，样品成分分解为气体状态，然后进入色谱柱，通过不同成分与固定相的相互作用，实现分离。
–应用：气相层析法广泛应用于环境监测、食品安全检测和生物医药领域。
4. 列点 4•液相层析法：–原理：液相层析法是通过溶液中样品成分与固定相之间的相互作用，实现样品分离的方法。
当溶液通过柱子时，样品成分会根据其与固定相的相互作用力的强度和性质不同，在固定相上停留的时间也不同，从而实现分离。
–应用：液相层析法广泛应用于药物分析、食品检测和环境监测等领域。
5. 列点 5•离子交换层析法：–原理：离子交换层析法利用带电粒子（离子）之间的静电相互作用，在一定条件下，使样品中的离子与固定相中的带电粒子发生相互作用，从而实现分离。
不同离子会在不同条件下被吸附或释放，从而实现分离。
–应用：离子交换层析法常用于水质分析、药物分析和环境监测等领域。
通过以上列点方式，我们对五种层析方法的原理和应用作了简要的介绍。
这些层析方法在不同领域的分析和检测中扮演重要角色，为我们获取准确的数据和信息提供了有效手段。
制备与使用薄层层析法分离混合物的方法指南
制备与使用薄层层析法分离混合物的方法指南混合物的分离是化学实验中常见的任务之一。
在分离混合物时，薄层层析法是一种简便有效的方法。
本文将介绍薄层层析法的制备和使用步骤，并提供一些实用的技巧和注意事项。
一、薄层层析法的制备步骤1. 准备薄层层析板：选择合适的薄层层析板，常见的有硅胶薄层板和铝箔支持的硅胶薄层板。
根据实验需要，选择适当的尺寸和厚度。
2. 准备层析溶剂系统：根据待分离混合物的性质选择合适的层析溶剂系统。
常用的有无水乙醇-正己烷、乙酸乙酯-正己烷等。
确保溶剂的纯度和质量。
3. 准备样品溶液：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，制备样品溶液。
根据实验需要，可以进行预处理，如过滤、稀释等。
4. 准备层析槽：将层析槽清洗干净，并用层析纸或滤纸铺底，以防止溶剂渗漏。
将薄层层析板放入层析槽中，确保其与槽壁紧密贴合。
5. 样品施加：用毛细管或微量注射器将样品溶液施加在薄层层析板的起点处。
注意施加的量要适中，避免溶液溢出。
二、薄层层析法的使用步骤1. 开展层析：将层析槽密封，将其放置在适当的温度下。
待溶剂前端移动到薄层层析板的顶端时，取出层析槽，视觉观察或使用紫外灯照射，标记出前端的位置。
2. 固定层析板：将薄层层析板固定在层析槽中，可使用夹子或胶带固定。
确保薄层层析板不会移动或滑动。
3. 开发层析：将层析槽中的溶剂加入到层析槽中，使其液面浸没薄层层析板的底部。
注意不要让溶剂液面超过薄层层析板的顶部。
4. 可视化分离：待溶剂前端移动到薄层层析板的顶端时，取出层析槽，视觉观察或使用紫外灯照射，标记出前端的位置。
将薄层层析板放置在适当的条件下，等待斑点的形成。
5. 斑点收集：根据需要，可以使用刮刀或玻璃棒将斑点刮下，收集到试管或烧杯中。
注意收集时的卫生和安全。
三、薄层层析法的技巧和注意事项1. 溶剂选择：根据待分离混合物的性质选择合适的溶剂系统，确保其溶解度和分离效果。
2. 层析板处理：在使用前，可以将薄层层析板在烘箱中加热一段时间，以去除潮湿和杂质。
薄层层析操作步骤
TLC操作步骤
1、配制展开剂
氯仿：甲醇：水=75: 35: 10
倒入层析缸≤1 cm，盖上盖子让层析缸饱和
2、准备薄层板
距离底边2 cm处用铅笔画线，间距1 cm标点，放烘箱30 min烘干
3、点样
拿出薄层板放到层析缸里没有展开剂的一侧，30 min，让板充分饱和；
用毛细管在铅笔标点处点一次样，用洗耳球迅速吹干，多次重复，样品直径不要超过3 mm 4、进行分离
放层析缸，盖盖子，分离约10 min，至顶端约4 cm处，拿出，用铅笔画出前沿线，吹干溶剂
5、显色
荧光板在试样展开后，在紫外灯下观察，背底发荧光，而试样组分点由于吸收了紫外光，就不发荧光或荧光较弱
6、计算Rf值
原点至斑点中心距离
原点至展开剂前沿距离。
氨基酸的分离原理
氨基酸的分离原理
氨基酸的分离原理主要是基于它们在不同条件下的溶解性、酸碱性和极性的差异。
以下是常用的氨基酸分离方法：
1. 薄层层析法：将氨基酸溶液均匀涂布在薄层层析板上，通过上机进行高效层析分离。
根据氨基酸在固定相和流动相中的相互作用力的不同，氨基酸在薄层上的迁移距离也不同，从而实现分离。
2. 离子交换色谱法：利用带电的树脂固定相对氨基酸进行分离。
树脂可以选择正离子交换树脂或阴离子交换树脂，根据氨基酸的酸碱性质进行选择。
溶液中的氨基酸通过与固定相发生离子交换，从而实现分离。
3. 气相色谱法：利用气相色谱仪将氨基酸蒸发后送入色谱柱进行分离。
根据氨基酸在固定相和载气中的分配系数不同，氨基酸在色谱柱中的保留时间也不同，从而实现分离。
4. 高效液相色谱法：利用高效液相色谱仪将氨基酸在流动相中进行分离。
根据氨基酸与固定相之间的亲疏水性差异，通过调节流动相组成及流速，实现氨基酸的分离。
综上所述，氨基酸的分离原理主要是利用它们在不同条件下的物理化学性质的差异，通过各种色谱方法实现分离。
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聚酰胺吸附作用原理
O
HO 流动相
Thin-Layer Chromatography: A Two-Component Mixture
solvent front
solvent front
component B
origin mixture
solvent front
component A origin
Increasing Development Time
4．二维展开
在正方形薄层板上，在两个垂直的方向
进行基于相同或不同机理的展开．将样品点 在薄层板的一个角上，第一方向展开适当距 离后，取出薄层板，并使溶剂完全蒸发，再 以与原点成90º方向展开。第二方向展开可采 用不同溶剂，也可将薄层板进行化学反应后， 再行第二方向展开，通称双向展开.
二维展开常用于复杂较多组分样品的展
4 注意事项： 4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠 ，光滑平整。
4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并 于室温下晾干后在110℃活化30 分钟，置于有干燥剂的干燥箱或 干燥器中备用。
4.3 点样点一般为圆点，不能太 大。
铺板
薄层层析分离技术
Thin-layer chromatography
• Thin-layer chromatography and column chromatography and are different types of liquid chromatography.
• The mobile (moving) phase is a liquid. The stationary phase is usually silica or alumina. This phase is very polar.
others unaffected.
Thin-Layer Chromatography: Determination of Rf Values
Rf of component A = dA dS
Rf of component B = dB dS
The Rf value is a decimal fraction, generally only reported to two decimal places
各种特制薄层
混合薄层 酸碱薄层和pH缓冲薄层 络合薄层 : 用AgNO3。等无机试剂的水溶液 代替水调硅胶糊来铺制络合薄层
涂布固定液的薄层
高效薄层:它是由粒度十分均匀，直径最小为5µm，—般为
10µm左右的硅胶吸附剂，加上高度惰性的粘合剂，铺成质地十分致 密、平滑的高效高层预制板。这种预制板性能极稳定，层析展开后 所得斑点仍保持圆形不拖尾，分离清晰，分离效果极好。理论塔板 高度最小可达12µm，一般在20～30µm。展开3~7cm，理论塔板数可 达数千，为一般薄层的十倍。
component B Less polar!
component A More polar!
origin
Important hint!
Be sure to remove the TLC plate when it appears that the solvent front isn’t moving!
接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入 一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏 （CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后 加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液 （0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于 玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄
2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻 璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄 层。 2.4 点样器：常用具支架的微量注射器 或定时毛细管，应能使点样位置正确集 中。 2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的 玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子 ，除另有规定外，底部应平整光滑，应 便于观察。
Reason: the solvent is evaporating as it moves up the plate.
Results: If you don’t remove the plate all of the spots will appear near the top of the plate!!!!! This isn’t a pretty sight and makes it difficult to get good Rf values!
A l
A l
A l
A l
A l
OOOOOO
Acidic: -Al-OH Neutral: -Al-OH + -Al-OBasic: -Al-O-
H 2C OC
H 2C H 2C H 2C H 2C
CH2
NH
OC
CH2 CH2 CH2
NH H 2C
CH2 H 2C
CH2 H 2C
CO
CO
HN
CH2 固定相
Stationary Phase: Silica (SiO2)
OH
OH
O
OH
OH
OH Si O
Si O O
Байду номын сангаас
Si O O
Si
O
O
Si O O
Si O O
Si O O
Si O O
Si O O
O O
Si O O
O
Si
O O
Si
O O
Stationary Phase: Alumina
O O H O H O H O H
• A visualization method can be:
– Ultraviolet light – Iodine vapors to stain spots – Colored reagents to stain spots – Reagents that selectively stain spots while leaving
3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于 薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，点样直径为2—4mm，点间距离约 为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况 以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤 薄层表面。
3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和， 可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴 二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展 开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正 文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开 室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层 板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂 中），密封室盖，等展开至规定距离（一般 为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各 品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对 色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色 谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。
2 仪器与材料： 2.1 玻板：除另有规定外，用 5cm×20cm，10cm×20cm或 20cm×20cm的规格，要求光滑
，平整、洗净后的不附水珠，晾 干。
2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶 GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、 硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、 微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求 直径为10—40μm。薄层涂布，一般可分无 粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直
2．上行展开 流动相沿薄层固定相向上运动
的展开方式。此时薄层板放置的 角度对流动相移动速率和
斑点形状有一定影响。薄层板水 平角度为75º时，对展开最为有利。 这种展开方式适合于含有粘合剂 的硬板展开。
3．下行展开
在展开槽内薄层板上端放置一个盛
展开剂的溶剂槽，用厚滤纸将溶剂引到 薄层板的上端，使展开剂自上而下流动。 下行法中展开剂受重力和毛细管作用双 重影响，因此展开速度较快。由于这种 展开方式采用的装置比较复杂，目前只 有在葡聚糖凝胶板上展开时或纸色谱中 采用．
• The principle of operation is the same!
Thin Layer Chromatography
The surface of the plate consists of a very thin layer of silica on a plastic or aluminum backing. The silica is very polar. This is the stationary phase. Spot the material at the origin (bottom) of the TLC plate. Place the plate into a glass jar with a small amount of a solvent in the glass jar. This solvent acts as the moving phase. Remove the plate from the bottle when the solvent is close to the top of the plate. Visualize the spots. Non-polar compounds will be less strongly attracted to the plate and will spend more time in the moving phase. This compound will move faster and will appear closer to the top of the plate. Polar compounds will be more strongly attracted to the plate and will spend less time in the moving phase and appear lower on the plate.
直线式展开
直线式展开技术可以分为 近水平展开、上行展开、下行 展开、双向展开和水平展开五 种形式，薄层色谱分寓一般样 品多采用上行展开方法。