DNA复制中的酶和蛋白质

结论
一、MCM复合物的附着需要82bp的DNA片段，ORC的附 着也需要80bp的DNA片段，被认为是G1期MCM附着 所需的DNA长度。
二、DNA片段长度超过82bp时，MCM复合物的数量显
著增加，而ORC保持不变；MCM复合物广泛分布在 ORC周围的DNA片段上。 三、MCM复合物在DNA片段上的附着需要CDC6和CDT1。 在没有ORC、CDC6、CDT1存在的DNA片段上没有 MCM附着。 四、MCM复合物附着后，ORC去除不会降低DNA合成的 效率。ORC后的MCM具有支持复制起始的作用
ORC和MCM被有效地富集于82-bp以上的 DNA片段上
MCM的附着与DNA长度有关， 而ORC与DNA长度无关
侧位MCM复合物紧紧附着于染 色质
附着于DNA上的CDC45是DNA复制的速度 限制因素
MCM复合物的磷酸化Baidu NhomakorabeaCDC7 依赖的
CDC45在染色体上的附着受放 线菌素D所促进
DNA复制起始模型
非洲爪蟾卵提取物中MCM2-7复合物 在染色质上复制起始复合物周围的分布
• 摘要：MCM2-7复合物被认为具有真核生物DNA复制
解旋酶功能。它通过复制起始复合物（ORC）、CDc6、 Cdt1而结合到DNA 链上，它在G1-S的过度期被CDc45 和蛋白质激酶CDc7、Cdk2所激活。但是，在染色体上， 结合的MCM复合物数量远比ORC复合物的数量多。为 了弄清楚原因，本实验用非洲爪蟾（XENOPUS）卵提 取物为材料，检测了结合在线性DNA片段上的各种蛋 白质进行了测定。实验发现，当DNA片段为80bp时， ORC和MCM之比为1：1；当DNA片段较长时，MCM 的比率迅速上升，证明MCM广泛分布在结合有CDc45 的DNA周围。MCM复合物并不是DNA复制的限制物，
DNA拓扑异构酶
单链结合蛋白（SSB）
核酸酶（nucleases）
• 是通过水解磷酸二酯键消化核酸的酶，
包括DNase 和 RNase两类，各类还包括 外切酶和内切酶两类。在复制中需要三 个特定的核酸酶活性：校正需要3‘-5’的 外切酶活性、引物的去除需要RNaseH、 5’-3’外切酶活性。
摘要（续）
• 它们在CDc7存在的情况下被磷酸化，他们能诱导Cdk2
依赖的CDc45的附着。非洲爪蟾卵提取物实验表明， DNA复制的起始包含着复杂的、分布广泛的、具有起 始作用的MCM2-7复合物。
染色体DNA的复制需要三个系统参与
非洲爪蟾胚胎期细胞从有丝分裂末期 至G1期末复制起始事件
固定在线性DNA碎片上的前复制复合物的 形成和激活
结论（续）
五、侧位MCM复合物被CDC7结合，MCM4被CDC7依赖 的反应磷酸化；在放线菌素D存在的情况下，CDC45： MCM约为1，表明每个侧位MCM可以招募一个CDC45。
六、DNA复制的起始事件被有规律地隔断，其原因是在 CDC45附着的一定距离的MCM复合物处于不活动状态。
七、研究表明，MCM复合物在哺乳动物细胞中普遍存在， 人类的细胞核中有106个MCM复合物；中国仓鼠卵巢 细胞中MCM复合物在G1期增多，在GI/S期的过度期达 到最高。
真核细胞DNA复制中的酶和蛋 白质
第九小组 刘少英、马丹炜、罗孟军、王萍
主讲：刘少英
细胞周期
DNA 复制有关酶
DNA聚合酶
DNA引发酶（PRIMASE）
• 是DNA合成中合成RNA引物的酶，引发
酶行使2个功能：首先在起点处起始先导 链的合成。其二在延伸中帮助岗奇片段 的反复起始。
DNA解旋酶
DNA连接酶
• DNA连接酶是在双链DNA中催化相邻核
苷酸形成磷酸二酯键的酶。她要求5‘断 的核苷酸必须有完整的磷酸基团、3’端 必须有完整的羟基。在真核生物中连接 酶需要ATP。DNA连接酶控制所有DNA 修复途径的最后阶段，哺乳动物有4种连 接酶活性，DNA连接酶I是涉及后滞链修 复的基本酶。