微生物平板划线法
微生物平板划线法
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培养基
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植 物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若 要研究其中某种细菌，就必须将各细菌进行 分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当 细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养 基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌
需要不同的培养基进行培养。
培养基的种类
按其物理性状分为： 固体培养基 液体培养基 半固体培养基
变形杆菌培养 物痢疾杆菌培
养物 半固体琼脂
培养基
平板划线法
平板划线法主要是借划线而将细菌在琼脂 平板表面分散开，使单个细菌能固定在某一点， 生长繁殖后形成单个的菌落从而达到分离纯种 的目的。常用于分离单个菌落，也可用于观察 细菌的生长状况和观察某些生化反应。
平板划线法——接种方法
（一）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种
（4）旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌 ，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此 视为四区。
各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐 渐稀释的目的。
平板划线法——接种方法
平板划线法——接种方法
（5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养 皿倒放，送进37℃温箱培养。
（6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平 板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边 缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
的菌名、接种者姓名、日期等。
平板划线法——接种方法
（二）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环
，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接 种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延 至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然 后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随 后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接 种环移开火焰，待其冷却。
细菌划线分离的操作方法
细菌划线分离的操作方法
细菌划线分离是一种常用的微生物学实验技术，它可以将混合菌液中的不同种类的细菌分离出来，以便进行单独的研究和分析。
下面将介绍细菌划线分离的操作方法。
准备好所需的实验器材和试剂，包括培养基、平板、移液管、酒精灯、无菌匀板器、无菌棉签等。
将培养基熔化并冷却至适宜的温度，然后将平板倒置于无菌工作台上。
接着，用无菌匀板器将混合菌液均匀地涂抹在平板上，然后用无菌棉签在涂有混合菌液的平板上划线。
划线的方法有两种，一种是直接在平板上划线，另一种是在平板上贴上无菌的划线纸，然后在划线纸上划线。
划线的目的是将不同种类的细菌分离开来，以便于单独的培养和观察。
划线完成后，将平板放入恒温箱中进行培养。
不同种类的细菌在不同的温度下生长，因此需要根据不同的细菌种类选择适宜的温度进行培养。
一般来说，常见的细菌在37℃下培养24小时左右即可。
培养完成后，观察平板上的菌落情况。
不同种类的细菌在平板上形成的菌落形状、颜色、大小等都有所不同，可以通过这些特征来判断不同种类的细菌是否被成功分离。
如果需要进一步鉴定细菌种类，可以进行生化试验或分子生物学检测等方法。
将分离出来的细菌进行单独的培养和保存。
单独培养可以更好地研
究细菌的生长特性、代谢途径、致病机制等，而保存可以保证细菌的长期保存和使用。
细菌划线分离是一种简单而有效的微生物学实验技术，可以将混合菌液中的不同种类的细菌分离出来，为后续的研究和分析提供了便利。
《平板划线试验》课件
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接种细菌：用无菌接种环蘸取细菌 培养物，在平板上均匀涂抹
观察结果：培养结束后，观察细菌 的生长情况，记录结果
划线分离
准备平板：选择合 适的平板，如琼脂 平板、培养基平板 等
划线：使用无菌操 作，将菌液或菌落 均匀地涂布在平板 上
干燥：将涂布好的 平板放在干燥箱中 干燥，使菌液或菌 落干燥
划线深度过浅或过深都会影响实验结 果，应保持适中的深度
划线角度过大或过小都会影响实验结 果，应保持适中的角度
划线过程中应避免划破平板，以免影 响实验结果
划线过程中应避免划破平板，以免影 响实验结果
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平板划线试验
汇报人：
目录
PART One
添加目录标题
PART Two
平板划线试验简介
PART Three
平板划线试验的步 骤
PART Five
平板划线试验的注 意事项
PART Four
平板划线试验的应 用
单击添加章节标题
平板划线试验简介
平板划线试验的定义
平板划线试验是一 种微生物分离和纯 化的方法
实验结束后，应及时清理实 验台和设备，保持实验室整 洁
实验结果应及时分析，包括 菌落形态、生长情况、抗药
性等
实验报告应及时撰写，包括 实验目的、方法、结果、讨
论等
影响实验结果的因素及解决方法
平板划线试验的准确性受划线速度、 划线深度、划线角度等因素的影响
划线速度过快或过慢都会影响实验结 果，应保持适中的速度
特性
菌落计数：通 过平板划线试 验，可以计算 细菌的数量和
微生物的实验室培养2
5、菌种的保存
1、临时保藏：
接种到固体斜面培 养基，菌落长成后 置于4℃冰箱保存。
2、长期保存：
甘油冷冻管藏法
微生物的类群
病毒界 原核生物界（如细菌、放线菌等） 真菌界（如酵母菌、霉菌等） 原生生物界
•细菌的结构
细胞壁 一般结构 细胞膜
细胞质(核糖体、质粒等) 拟核
特殊结构 荚膜、鞭毛、芽孢
培养基的配制
培养基的种类
• 理想的凝固剂应具备以下条件： –不会被微生物分解利用； –不会因高温灭菌而受到破坏； –在微生物生长的温度范围内保持固体状态 –对微生物及操作人员均无毒害作用； –透明度好、凝固力强； –价格低廉，配制方便。
• 常用的凝固剂——琼脂
–主要成分是硫酸半乳聚糖 –熔点为96℃
凝固点为40℃ –透明度强。
一、无菌技术
A.培养细菌用的培养基或培养皿 灭菌 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管 灭菌 C.接种环、接种针 灭菌 D.实验操作者的双手 消毒
二、基本操作程序
1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
A.培养细菌用的培养基或培养皿。 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管。 C.接种环、接种针。 D.实验操作者的双手。
一、无菌技术
消毒
使用较温和的物理或化学方法仅杀死物 体表面或内部一部分对人体有害的微生 物（不包括芽孢和孢子）。
灭菌
使用强烈的理化因素杀死物体内所有的 微生物，包括芽孢和孢子。
一、无菌技术
• 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌
• 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
• 加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞
平板划线法操作要点docx
平板划线法操作要点 .docx 平板划线法是一种常用的微生物分离纯化方法，用于将一个菌种的单个菌落进行分离、纯化和繁殖。
下面是平板划线法的操作要点：
1.准备所需材料：平皿、接种环、酒精灯、无菌棉签、镊子、培养基等。
2.将培养基倒入平皿中，用无菌棉签均匀涂布在培养基表面。
3.用镊子取出一块无菌滤纸，将其在酒精灯上灼烧后冷却，然后将其放置在培
养基表面。
4.用接种环取少量待分离的菌液，在滤纸上划线，注意不要将线划得过细或过
粗，以避免影响分离效果。
5.将平皿放置在适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
如果需要，可以进
行第二次划线，以进一步纯化菌落。
6.当菌落长成后，用镊子将单个菌落取出，并将其接种到新的培养基上，以进
行下一步的实验或保存。
注意事项：
1.整个操作过程中，必须保证无菌操作，以避免污染。
2.在划线时，要注意力度和角度，以避免菌液过多或过少。
3.在培养过程中，要保持适宜的温度和湿度，以促进菌落的生长。
4.在取出单个菌落时，要用镊子轻轻夹住菌落，避免将其周围的培养基弄碎。
5.在进行下一步实验或保存之前，要对菌落进行最后的检查，以确保其纯度和
质量。
平板划线法是一种简单而有效的微生物分离纯化方法，但需要一定的操作技巧和经验。
通过不断实践和总结经验，可以逐步提高操作水平和实验效果。
培养基平板划线法实训报告
一、实训目的1. 掌握平板划线法的原理和操作步骤。
2. 熟悉微生物分离纯化的基本方法。
3. 培养无菌操作技能和实验操作规范。
二、实训时间2022年10月15日三、实训地点生物实验室四、实训器材1. 实验材料：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、大肠杆菌混合菌悬液、无菌培养皿、接种环、酒精灯、无菌棉签等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜等。
五、实训原理平板划线法是一种常用的微生物分离纯化方法。
其原理是利用接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，最终在适宜的条件下形成单菌落，从而分离纯化微生物。
六、实训步骤1. 培养基制备：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化，待冷却至50℃左右，按无菌操作法倒入无菌培养皿中，平置待凝固。
2. 灭菌操作：点燃酒精灯，用无菌棉签蘸取酒精，在酒精灯火焰上方进行消毒，待酒精燃烧完毕后，用无菌接种环蘸取少量大肠杆菌混合菌悬液。
3. 划线操作：将接种环在平板培养基表面连续划线，划线方向应与上一划线方向呈垂直，划线次数根据菌种生长速度和菌液浓度进行调整。
4. 分区培养：将划线后的平板放入恒温培养箱中，根据菌种生长速度设定培养温度和时间。
5. 观察结果：观察培养皿中的菌落生长情况，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
6. 鉴定纯化：挑选典型单菌落，进行纯化培养，以获得纯种微生物。
七、实训结果与分析1. 划线操作：在平板划线过程中，接种环在培养基表面连续划线，划线方向应与上一划线方向呈垂直，划线次数根据菌种生长速度和菌液浓度进行调整。
2. 分区培养：将划线后的平板放入恒温培养箱中，根据菌种生长速度设定培养温度和时间。
本实验中，大肠杆菌生长速度较快，培养温度设定为37℃，培养时间为24小时。
3. 观察结果：在培养皿中观察到典型单菌落，菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐，颜色为白色。
记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
4. 鉴定纯化：挑选典型单菌落，进行纯化培养，以获得纯种微生物。
微生物平板划线试验
在液体培养基中加入一定量凝固 剂，使其成为固体状态，琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基 半固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
液体培养基
不加任何凝固剂 大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
平板划线实验实习
一、相关基础理论－－细菌的培养
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖， 以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为 了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除 采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外， 掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环 节。
1、培养基
圆形、突起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽， 不透明菌落，直径1～2mm
4、平板划线接种法
图2-4 灭菌接种环
4、平板划线接种法
（3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的 试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞， 将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取 一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口 再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来 的位置。
2、液体培养基接种方法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及 接种的肉汤管。 （3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内，在接近液面管壁处轻轻研磨， 蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 （4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉 汤管放37℃温箱培养，18～24小时后观察生长 情况。
平板划线接种法步骤
平板划线接种法步骤平板划线接种法是一种用于真菌、细菌等微生物的纯化和鉴定的一种常用方法。
它是通过将微生物的菌落传到平板上，然后用棉签或者铁环划线，将不同的菌落分离开来，以实现纯化和鉴定的目的。
下面将详细介绍平板划线接种法的步骤。
步骤一：准备工作1.打开洁净台，先用五氯酚消毒平板台面和其他实验用具，然后再用75%酒精擦洗。
确保实验室环境的洁净。
步骤二：取菌落1.找到需要接种的菌落，可以在菌液、菌片、菌种保存平板等上找到适合接种的菌落。
注意要选取状态良好、菌落独立、颜色明显的菌落。
2.使用无菌的铁环或棉签，在菌液、菌片、菌种保存平板等培养物上取菌。
取菌时要尽量避免将其他菌落混入。
步骤三：接种菌落1.将铁环或棉签放入需要接种的琼脂平板中，使用铁环主要是为了划线。
如果使用棉签，则可以先将棉签沾湿后再进行划线。
2.环绕铁环或棉签绕菌液、菌片等培养物附着的地方，注意不要刺破琼脂平板。
如果是用铁环进行划线，可以在琼脂平板上轻轻划动。
步骤四：连续纯化1.完成第一次接种后，在第一次接种的菌落周围进行第二次划线接种，接种方法同第一次。
2.每次划线时要注意将不同的菌落划到不同的区域，以确保菌落之间的纯化。
步骤五：培养和观察1.接种完成后，将平板盖子扣紧，将平板竖立放置，放在适当的温度下培养。
2.观察菌落的生长情况，可以根据菌落的形态、颜色、大小、透明度等性状进行鉴定，重复划线接种步骤，直到得到纯化的菌落。
以上就是平板划线接种法的步骤。
通过这种方法，可以有效地将不同的菌落分离开来，实现菌落的纯化和鉴定。
在操作过程中要注意无菌操作，尽量避免污染。
此外，根据不同的实验需求，还可以进行一系列的后续操作，如菌落转种、菌液接种等，以实现对微生物的进一步研究和应用。