浅析铁皮石斛原球茎增殖培养基配方的优化

合集下载

铁皮石斛原球茎的富硒培养条件优化

对铁皮石斛的深人研究及其经济附加值的提高具
有一定积极意义。
统名贵中草药Ｊ。《中国药典》记载具有益胃生
津、滋阴清热之功效。此外在增强机体免疫力、抗
１材料与方法
１．１试验材料
疲劳、促进胃液的分泌助消化、护肝利胆、增强降血糖、抗肿瘤等方面也有独特功效ｊ。硒是联合国卫生组织确定的人体必需微量元素，参与体内
１，２，４ａｎｄ６ｗｈｉｌｅｌｏｗ— ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏｃｉｅｍｅｒｇｅｄｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１２；ＳＳＲｍａｒｋｅｒａｎａｌｙｓｉｓｄａｔａａｎｄＳＴＲＵＣ— ＴＵＲＥ２．２ｓｏｆｔｗａｒｅｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔａｌｌｔｅｓｔｅｄｖａｒｉｅｔｉｅｓｃｏｕｌｄｂｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｓｅｖｅｎｓｕｂｇｒｏｕｐｓ，ｎａｍｅｄＰＯＰ１，ＰＯＰ２，
研究显示，有机硒的安全性及吸收率优于无机硒Ｊ，目前获取有机硒的途径主要是依靠植物转化技术来实现，利用生物转化提高有机硒的含量，从而进入食物链供人或动物食用Ｊ。现代药
理学研究证明铁皮石斛的某些功效与微量元素硒
２０１４．１

铁皮石斛组织培养研究进展组织培养.

铁皮石斛组织培养研究进展1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。

赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。

曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。

罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。

1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。

2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。

6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。

KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。

ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。

1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。

1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。

曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。

铁皮石斛类原球茎增殖和分化的研究

［&］和 :6" = ）浓度进行了优化，同时试验了几种不同激素［;， $］组合和不同天然附加物对 ]E^R 增殖生长的影响，以
期为进行工厂化育苗提供有效途径。铁皮石斛植株由上海中药研究所引进，
! ! 收稿日期： "##* 8 #& 8 #9 基金项目：宁德市科技计划项目（编号为 "##(:%" ）。作者简介：林丛发（%&** 8 ），男，副研究员，从事生物技术研究工作。
江西农业学报! "##$ ， %& （%）： ’( ) ’* +,-. +/01,23-20.4 51.6/71
铁皮石斛类原球茎增殖和分化的研究
林丛发，钟爱清，林云斌，陈芦根
（福建省宁德市农业科学研究所，福建宁德 ;99#%$ ）
摘! 要：通过单因素浓度试验和正交试验研究了 9 种金属离子、不同激素组合及不同天然附加物对铁皮石斛类原球茎增殖、分化的影响。试验结果表明， 9 种金属离子对类原球茎增殖影响的主次顺序为 </" = ! >4" = ! ?." = ! <6" = ! :6" = ，类原球茎增殖的最佳培养基为 % @ "<A = B++ #C 9D/ @ E = %#F 马铃薯汁 = ;F 蔗糖（含 </" = %C # DDG3 @ E、 ?." = "C # DDG3 @ E、 >4" = #C % DDG3 @ E、 <6" = #C %DDG3 @ E 和 :6" = #C #; DDG3 @ E）。培养基 % @ "<A = B++ #C 9D/ @ E = "#F 马铃薯汁 = 蔗糖 "#/ @ E = 琼脂 #C ’/ @ E 最适于铁皮石斛类原球茎的分化。关键词：铁皮石斛；类原球茎；金属离子；增殖；分化中图分类号： H&(&C $%’! 文献标识码： +! 文章编号： %##% 8 ’9’% （"##$） #% 8 ##’( 8 #;

铁皮石斛种子组织培养条件的优化

ｃａｎｄｉｄｕｍ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｏｃｏｒｍ— ｌｉｋｅｂｏｄｉｅｓｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ．Ｔｈｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｓｅｅｄｏｆＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍｗａｓｕｓｅｄａｓｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｅｅｄｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，ａｇａｒ，ｏｒｇａｎｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄａｎｄａｃｔｉｖａｔｅｄｃａｒｂｏｎｏｎａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｓｈｏｏｔｓｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇａｎｄｒｏｏｔｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｓｙｓｔｅｍｆｏｒｔｈｅｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｆｏＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍ
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＤｅｎｄｒｏｂｍｃａｎｄｉｄｕｍｓｅｅｄｓ

液体悬浮培养促进铁皮石斛原球茎高效诱导、增殖的研究

液体悬浮培养促进铁皮石斛原球茎高效诱导、增殖的研究
液体悬浮培养促进铁皮石斛原球茎高效诱导、增殖的研究
用正交设计方法对铁皮石斛原球茎具有高效增殖影响的激素(BA,NAA,KT,马铃薯汁)以及配比进行研究,结果表明:以茎段为外植体在培养基MS+BA2.0 mg/L+NAA2.0 mg/L+马铃薯汁10%+糖3%,具有很好的原球茎诱导作用,50 d后诱导率达95.20%;原球茎在1/2MS+BA2.0 mg/L+NAA1.0 mg/L+KT0.5 mg/L+糖3%的培养基上,以液体悬浮培养,原球茎增殖达49.032 g/50d.
作者：苏钛张晓南 Su Tai Zhang Xiaonan 作者单位：云南省药物研究所,云南,昆明,650111 刊名：中国野生植物资源英文刊名：CHINESE WILD PLANT RESOURCES 年，卷(期)：2009 28(4) 分类号：Q943.1 关键词：铁皮石斛原球茎悬浮培养。

NAA和6-BA浓度配比对铁皮石斛原球茎增殖、分化组织培养的影响

NAA和6-BA浓度配比对铁皮石斛原球茎增殖、分化组织培养的影响作者：李发良来源：《西部论丛》2020年第03期摘要：用铁皮石斛原球茎做材料，以组织培养为基础，研究两种植物激素NAA和6-BA 的不同浓度配比对铁皮石斛增殖、分化的影响及最适浓度配比。

结果显示，在原球茎组织培养过程中，两种激素浓度配比的不同使得石斛增殖、分化的效果也不同。

铁皮石斛原球茎增殖较为理想的培养基为MS+NAA 0.7mg/L+ 6-BA 1.5mg/L;铁皮石斛原球茎分化较为理想的培养基为MS+NAA 0.3mg/L+6-BA 2.0mg/L。

建议铁皮石斛原球茎在增殖培养至两个月时及时转瓶以保证其继续生长。

关键词：铁皮石斛;原球茎;组织培养;NAA;6-BA铁皮石斛（Dendrobiumcandidum）为兰科石斛属多年生常绿草本植物，是一种名贵药材[1]。

铁皮石斛的药用部分是新鲜或干燥茎，具有益胃生津、滋阴清热的功效[2]。

目前，有关铁皮石斛原球茎的研究主要集中于无机盐浓度、碳源以及有机附加物等对其增殖和分化的影响，而关于细胞分裂素和生长素不同浓度配比对其增殖和分化影响的研究较少。

现以铁皮石斛原球茎为研究材料，进一步研究NAA和6-BA对其增殖和分化的影响，以期为铁皮石斛原球茎的再生提供理论基础。

一、材料及实验方法（一）材料。

铁皮石斛原球茎（取自云南师范大学生命科学学院组培室），所有构成MS 培养基成分的原材料，以及实验所研究激素NAA和6-BA。

（二）培养基的配置。

按照MS培养基配方，先分别配置出充裕的大量元素母液、微量元素母液、有机母液、铁盐母液以及激素母液;接着按配方配置足量的MS培养基并分装到培养瓶中，每个培养瓶中约40ml;再分别按照预设的浓度梯度（见表1）向培养瓶中加入两种激素，并对培养瓶封口、编号。

将封好的培养基放入高温高压灭菌锅中灭菌，取出静止3天后，除凝固外无变化的即为可用。

（三）接种。

选取相同条件下生长良好的原球茎，切割成相同大小的小块。

铁皮石斛的组织培养

由于石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，加之人们掠夺性采挖，资源已严重枯竭。

而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题，故石斛药源一直处于紧张状态。

因此，组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大，甚为迫切。

石斛的组织培养，可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体，但以种子进行组培快繁的为多。

原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键，因此，研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。

特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗，是解决其种苗与发展生产的有效途径。

铁皮石斛的组织培养铁皮石斛，又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。

野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物（三级）。

由于其生长环境要求特殊，野生资源已濒临灭绝。

现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功，月出苗量50万瓶以上，为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。

1 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。

在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。

研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。

培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。

种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。

在实验中尚发现，石斛原球茎的增殖与胚龄相关，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45天以下，萌发率极低，萌发时间长；60天胚龄的胚具34个细胞，萌发率为6％；90天胚龄的胚细胞为74个，萌发率为87％；120天胚龄的细胞数为90个，萌发率95％以上。

A 铁皮石斛组培繁殖及其内生真菌的研究

１．１石斛属植物观赏价值
石斛属植物约有四分之一可供观赏，称为石斛兰（Ｄ．ｏｒｃｈｉｄｓ），以花艳丽而著称，石斛株型美观，茎干奇特，花多而密，花型优美，能给人以超凡脱俗的艺术感受，多用于盆栽观赏，可用于居室内装饰，摆放在阳台，窗台，或用吊盆悬挂客室，书房，凌空泼洒，别具一格。吊载或树载多见于公园，植物园，温室和各类休闲游览区，其模拟石斛兰原生种的野生状态，形成独特的热带附生植物景观，具有极佳的观赏效果。石斛兰具有秉承刚强，祥和可亲的气质，因此被誉为“成
功之花”。
今年来，石斛作为观赏植物发展迅速，同时它也是良好的杂交亲本，在国际花卉市场上占有重要的位置，已形成独立产业。当今世界上许多国家都广泛栽培，尤以东南亚最盛，其中以泰国产量最大。石斛兰在荷兰的总销售额已达３２０万美元，其中大部分直接销售给法国，德国，美国和意大利的批发商。东南亚国家出口石斛的主要品种为“蓬皮杜夫人”和“索尼娅”，前者每支价格为０．４１～０．６５美元，后者每支价格为０。３８～０．５７美元。在亚洲，日本是石斛兰最大的进口国，１９９３年市场销售２３０万盆，销售额为２８００万美元（王意成，２００７）。１．２石斛属植物的药用价值我国石斛植物中近４０种可作药用，主要有环草石斛（Ｄ．ｃｏｄｄｉｇｅｓｉｓ）、马鞭石斛（Ｄ．ｆｉｍｂｒｉａｔｕｍ）、铁皮石斛（Ｄ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、黄草石斛（Ｄ．ｃｈｒｙｓａｎｔｕｍ）和金钗石斛（Ｄ．ｎｏｂｉｌｅ）等。现代医学研究表明：石斛含有多种人体所需的微量元素、必需氨基酸、维生素、多糖、生物碱等，具有滋阴清热、生津益胃、止咳润肺之功效，其主要成分
２．１．２．１培养基的选择
选择合适的培养基是组织培养最关键的一步，不同的培养途径、不同的培养阶段和目的，所对应的培养基也不同。曾宋君等发现Ｎ６培养基对石斛胚的萌发和生长最好（１９９６），而以茎尖作为培养材料，Ｎ６培养基诱导愈伤组织能力明显不如ＭＳ。ＤｅｖｉＪ等利用Ｄ．ｍｏｓｃｈａｔｕｍ的茎尖在５种培养基上诱导形成拟原球茎，结果以Ｎｉｔｃｈ培养基的效果最好（高培元等，２００２）。高培元等在金钗石斛芽的诱导过程中发现ＭＳ培养基对侧芽诱导率最高，Ｂ５次之，ＫＣ最低（２００２）。２．１．２．２激素与添加物植物激素对植物细胞分裂、诱导器官形成和次生产物的合成都有重要作用。廖福琴等在石斛兰芽增殖培养过程中发现，ＮＡＡ浓度保持不变，当６．ＢＡ浓度为４．０ｍｇ・Ｌ以时，芽增殖倍数为最高，增殖７～ｌ２倍；当６－ＢＡ浓度增至５．０ｍｇ・Ｌ以时，芽增殖倍数下降，可见较高浓度的６－ＢＡ对芽的分化有抑制作用（廖福琴等，２００３）。赵天榜等在１／２Ｎ６培养基中加入０～Ｏ．５ｍｇ・Ｌｑ的ＮＡＡ，对石斛种胚苗

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

于铁皮石斛原球茎的增殖。
关键词：铁皮；石斛原球茎增殖配方；优化中图分类号：５６７．２文献标识码：Ａ
铁皮石斛（ＨｅｒｂａＤｅｎｄｒｏｄｉｉＯｆｉｃｉｎａｌｉｓ），兰科多年生附生草本植物。生于海拔达１６００ｍ的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐一５ ℃ 的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数１０种，铁皮石斛为石斛之极品，由于其具有药用价值和保健功能。是历代宫廷贡品，其价值就是药用植物界的 “ 大熊猫” ，名列中华九大仙草之首野生 “ 铁皮”石斛是国家重点二级保护的珍稀濒危植物，它因表皮呈铁绿色而得名＿ＩＪ。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药，中药名：石斛，属补益药中的补阴药】。自古以来，人们用药都是依靠上山采挖收集野生植株，而野生石斛的繁殖率又极低，人们如此只采挖野生的石斛却不人工种植，导致石斛中的上品—＿＿－铁皮石斛逐渐枯竭并引发其价格一涨再涨！目前，国际市场ｌｋｇ铁皮石斛干品高达１０００— ３０００美元，鲜品收购价ｌｋｇ仍在２０００元以上。铁皮石斛的逐渐枯竭，再加上开发生产其药用、保健、美容产品开发商家的逐年增加，导致铁皮石斛的成品几乎已无处收购、有价无货，人工种植迫在眉睫。随着科技的发展和社会的进步，人们也认识到这个严峻的问题，也有人员专门从事人工种植铁皮石斛，但是碍于石斛的生长周期长，生长环境要求高，人工种植产业发展前景不是很乐观。同时，许多国内外学者也利用铁皮石斛种子和茎尖来进行组织培养的研究，成果可观，但还是存在试管苗污染严重、增殖系数低、试管苗茎细弱、移栽成活率不高等诸多原因，影响了铁皮石斛试管苗快繁和大规模的工厂化种植。在石斛组织培养过程中，石斛原球茎增殖又十分关键。通过诱导石斛产生大量原球茎，将所得的原球茎切分进行分化形成大量丛生芽，再将丛生芽分苗，培养成小苗，小苗生长成一定高度的植株就可以炼苗种植，而达到快速繁殖的目的。用铁皮石斛茎段诱导出的原球茎通过在不同的基本培养基、碳源、激素水平、添加物及培养方式进行增殖培养，观察其生长情况。光照时间、强度恒定，上午８：００～１１：３０，下午１４：３０１７：３０，光照强度１０００～１６００ｌｘ，温度（２５ ±１）℃。以找出最适合铁皮石斛原球茎增殖的培养基以及培养方式，为人工种植铁皮石斛提供技术支持和种源口１。
基，每种培养基接种１３瓶，每瓶接种５—６ＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，６－ＢＡ分别为０、
０．５ｍｇ／Ｌ、１．０ｍｇ／Ｌ、１．５ｍｇ／Ｌ、２．０ｍｇ／Ｌ、２．５ｍｇ／Ｌ、３．０ｍｇ／Ｌ的情
况下培养，４５ｄ后观察。１．２－３不同浓度的ＮＡＡ筛选 ’ 选取切割的原球茎团块接种在ＭＳ、１／２ＭＳ为基本培养基，每种培养基接种１３瓶，每瓶接种５６个原球茎团，附加蔗糖ＺＳｇ／Ｌ，活性炭ｌｇ／Ｌ，ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ分别取０、０．５ｍｇ／Ｌ、１．０ｍｇ／Ｌ，１．５ｍｅｔｅ、２．０ｍｅｔＥ、２．５ｍ￣ＣＬ、３．０ｍｇ／Ｌ的情况下培养。１．２．４不同天然添加物质的筛选选取切割的原球茎团块接种在ＭＳ、１／２ＭＳ为基本培养基，每种培养基接种１３瓶，每瓶接种５～６个原球茎团，附加２８ｇ／Ｌ蔗糖，活性炭ｌｇ／Ｌ。香蕉提取液、马铃薯提取液和铃薯汁均为２００ｇ／Ｌ。４５ｄ后观察。１－５培养基选取切割的原球茎团块接种在ＭＳ、１／２ＭＳ为基本培养基，每种培养基接种１３瓶，每瓶接种４ —５个原球茎团，有光照和无光照做比较。２结果与分析２．１培养基对原球茎增值的影响培养基作为原球茎的直接营养来源，培养基成分和浓度的大小直接影响到原球茎的增值、增长情况，最适宜的培养基浓度可随外植体的形态和发育阶段的不同而不同。由表１可知，铁皮石斛原球茎在１／２ＭＳ培养基中增殖效果较在ＭＳ培养基中好，起在１／２ＭＳ培养基上长势好，苗较绿、较状。表１１／２ＭＳ和ＭＳ培养基原球茎长势比较
农业与技术
第３３卷
第４期
２０１３年４月
浅析铁皮石斛原球茎增殖培养基配方的优化
谢纯
（云南热带作物职业学院热带作物生产与技术系，云南普洱６６５０００）
摘要：铁皮石斛为兰科多年生附生草本植物，但是由于人类的大规模采集，在其需求量急剧增长的情况下，人工的培育变得尤为重要，通过研究铁皮石斛的原球茎增殖的培养基配方，发现１／２ＭＳ＋２８ｇ葡糖糖＋ｌｇ活性炭＋７ｇ琼脂＋１．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ最适合