细菌分离及常见致病菌1
临床细菌培养鉴定流程及报告.介绍
3．分离培养 ⑴一般培养: 用定量接种环或无菌微量 加样器取尿液0.001ml或0.01ml(已使用 抗生素患者),接种于血平板和麦康凯/中 国兰平板,不能定量时需用倾碟法记数， 35～37℃培养18～24小时。 (2)特殊培养: 对临床要求真菌、淋病奈 瑟菌及结核菌等培养者，根据细菌所需 条件接种相应特殊培养基，放臵相应条 件下进行培养。
(三 ) 尿 尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖 而引起的尿路炎症。从肾脏排泌出来的 尿液正常情况下是无菌的，如果在尿液 中分离出细菌（排除污染因素）即为菌 尿，同时伴有感染症状者称为尿路感染。 根据感染部位可分为上尿路感染（肾盂 肾炎）及下尿路感染（膀胱炎），男性 还可出现前列腺炎。
1.尿中常见分离菌
⑵采血时间及采血量 采血培养应该尽量在使
用抗菌药之前进行，在24小时内采集2～3份血
培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视
为单份血培养）。对间歇性寒战或发热应在寒 战或体温高峰到来之前0.5～1小时，采集血液， 或于寒战或发热后1小时进行。成人采血量8～ 10ml，儿童1～5ml。血液和肉汤之比1：5 ～1：
(2)标本采集 a.清洁中段尿 最好是晨尿，是临床上 最常留取尿标本的方法 b.耻骨上膀胱穿刺法 是评估膀胱内细 菌感染的“金标准” c.直接导尿法 d.小儿收集包 e.留臵导尿
(3)标本运送 标本采集后应及时送检， 2小时内进行接种，否则应臵4～8℃冰箱 保存，冷藏保存标本时间不得超过8小时。
(2)报告方式 初步报告：在分离出细菌后，进行革兰 氏染色，作出初步报告。 最终报告：有意义的阳性结果报告，应 报告菌落计数、细菌种名及药敏结果。 无意义的阳性结果报告，报告菌落 数、革兰氏染色形态特征，并注明是纯 培养或是混合菌生长。 阴性结果报告:应报告无菌生长和菌落计 数＜1000cfu/ml或 ＜100cfu/ml尿。
常见病原菌分离方法
常用的几种典型的病原菌分离方法1．斑点病原菌的分离从病斑部分切取每边3～5 mm的小块组织，在70％酒精中浸数秒钟后，移入0.1％的升汞水溶液中处理3～5 min，以灭菌水冲洗3次，移置培养皿的培养基中，然后培养。
2．维管束组织内病原菌的分离从根茎维管束组织分离病菌，可先将寄主病部表面用70％酒精擦拭消毒，将表皮组织用灭菌的解剖刀削去，然后切取其中小块变色的维管束组织，用升汞或漂白粉液消毒后。
，用灭菌水冲洗几次，移置培养基面上。
3．根腐病病原菌的分离根腐或基腐病的分离，由材料的大小决定。
材料小的可仿照斑点病的分离法，材料大的则可以用维管束组织内病原的分离法。
4．肉质组织中病原菌的分离多肉的根、茎及果实等，可以采用维管束组织内病菌分离法除去表面组织，切取小块病组织分离。
如有杂菌感染可采用“直接接种”法，待出现症状后，用此法再行分离。
5．种子内病原菌分离将整个种子或者种子的一部分进行表面消毒(升汞或漂白粉)，用灭菌水洗涤后，移置培养基上。
6．孢子分离法能产生大量孢子的病菌如青霉素、链格孢等，则可配制成孢子悬浮液以稀释法或划线法分离之。
7、土壤带菌分离法为了研究一些真菌在土壤中存活和分布的情形，从有病的土壤中分离它们是必要的。
分离方法是将土壤取出少许，配制成悬浮液，然后用稀释法或划线法分离。
附录2 真菌单孢子分离技术一、目的要求了解单孢分离技术的基本原理，掌握简便实用的单孢分离方法。
二、基本原理单孢分离的方法很多，如振落法、稀释法和直接挑取法。
振落法和稀释法的共同点都是采用某种方法，使真菌孢子较稀疏地分散在水琼脂平板上，然后在显微镜下检查寻找在水琼脂平板表面的单个孢子，一旦找到理想的单个孢子，就通过无菌操作将其(连同一部分培养基)移植到PDA斜面培养基上，置适温下培养，形成的菌落即为单孢系菌株。
直接挑取法是在实体解剖镜下直接挑取单个孢子进行分离纯化的方法。
三、材料、用具与仪器1．材料(依本地资源情况进行选择，下列材料供参考)(1) 稻瘟病叶、病节、病穗颈(Pyricolaria oryzae)。
常见致病菌的检测
常见致病菌的检测摘要：近年来食品药品安全的问题屡见不鲜，做好致病菌的检测，是防范于未然的措施，因而显得尤为的重要，也越来越受到人们的重视。
这就要求我们对一些常见的致病菌检测技术的要有一定的了解。
关键词：致病菌，肠球菌，霉菌和酵母菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌。
一.肠球菌（1）、形态与染色【1】肠球菌为革兰阳性（G+）球菌,广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。
20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。
因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。
肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。
本菌对营养要求较高，在含有血清的培养基上生长良好。
（3）致病性【1】一般而言，肠球菌的毒力不高。
与金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌相比，肠球菌对大多数动物的半数致死量（LD50）值相当高，而且肠球菌很少引起蜂窝织炎和呼吸道感染。
肠球菌只有在宿主组织寄殖，耐机体非特异及免疫防御机制，并引起病理改变，才能导致感染。
粘附测定显示肠球菌可通过细菌表面表达的为粘附素，吸附至肠道、尿路上皮细胞及心脏细胞。
这些粘附素的表达亦受细菌生长环境的影响。
另外，肠球菌可产生一种聚合物质（系一种蛋白表面物质，可聚集供体与受体菌，以利质粒转移），在体外增强其对肾小管上皮细胞的粘附。
细菌生长环境亦影响肠球菌与多形核白细胞反应。
血清中生长的肠球菌与多形核白细胞反应较弱，而肉汤中生长的细菌反应较强。
体外多形核白细胞对肠球菌的有效杀灭作用需血清补体蛋白参与，而抗肠球菌抗体可增强该作用。
（4）、肠球菌属主要检测步骤如下：【2】方法一：肠球菌平板计数法检验程序25g (mL) + 225 mL 缓冲蛋白胨水↓10 倍梯度稀释↓选择2 个~3 个适宜连续稀释度，各取1 mL 分别加入灭菌培养皿↙↘KF琼脂36℃士1℃ 48h 士2h肠球菌琼脂35℃士2℃ 24h士2h↘↙确证实验↓肠球菌阳性↓菌落计数及计算↓报告结果方法二：肠球菌最近似值（MPN ）测定法检验程序25g（mL ) + 225 mL 缓冲蛋白胨水↓10 倍梯度稀释↓选择3 个适宜连续稀释度，各取1 ml 分别加入肉汤中↙↘叠氮化钠葡萄糖肉汤管肠球菌肉汤管37℃士1℃ ,24h~48h 35C 士2 ℃ 24h 士2h↓↓↓↓无混浊混浊变黑不变黑↓↓↓↓肠球菌阴性确证实验确证实验肠球菌阴性↓↓肠球菌阳性肠球菌阳性↘↙MPN 值法报告肠球菌数／g(mI)二．霉菌和酵母菌（1）、形态【1】酵母菌是单细胞真核微生物。
细菌分离鉴定（完整版）
细菌分离鉴定细菌分离鉴定[细菌分离鉴定]细菌分离鉴定目的要求：熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法，细菌分离鉴定。
实验内容：一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的分离与鉴定(一)标本采集1.脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。
2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。
3.咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。
4.血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。
5.脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。
6.尿道、阴-道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右;女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。
(二)分离鉴定程序待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。
常见的致病性球菌检查程序如下。
直接涂片、革兰染色、镜检(形态、排列、染色性)脓、痰、咽拭子分泌物、脑脊液观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板→涂片、染色、镜检↑挑取可疑菌落生化反应血液、穿刺液→肉汤培养基纯分离致病性测定↓药敏试验如培养液混浊时可涂片、染色、镜检(三)常见临床标本的检查方法1．脓拭子在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。
材料(1) 标本：脓拭子(2) 培养基：血琼脂平板(3) 兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片方法脓汁→革兰染色→镜检↓↑血琼脂平板→观察菌落形态及溶血情况↓致病力试验(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)，鉴定材料《细菌分离鉴定》()。
致病菌分类
致病菌分类全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：致病菌是一类能够引起疾病的微生物，它们可以在人体内繁殖并造成各种不同的健康问题。
致病菌通常根据它们的形态、生物学特性和引起的感染类型进行分类。
在医学领域，对致病菌的分类对于治疗和预防疾病具有重要的意义，因为不同种类的致病菌对药物的敏感性和传播方式都有所不同。
一般来说，致病菌可以分为细菌、病毒、真菌和寄生虫等几类。
下面我们将逐一介绍这几类致病菌的特点和常见分类。
1. 细菌细菌是一类单细胞微生物，它们具有简单的细胞结构和较小的大小。
细菌可以分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两种类型。
革兰氏阳性菌的细胞壁含有高浓度的革兰染色阳性物质，而革兰氏阴性菌的细胞壁则含有脂多糖等成分。
常见的致病性细菌包括沙门氏菌、大肠杆菌、链球菌等，它们可以引起不同类型的感染，如肠道感染、呼吸道感染和皮肤感染等。
2. 病毒病毒是一种非细胞微生物，它们依靠寄生在宿主细胞内才能进行复制。
病毒可以分为DNA病毒和RNA病毒两类，它们通过感染宿主细胞并复制自身来引起疾病。
常见的致病性病毒包括流感病毒、艾滋病病毒、乙肝病毒等，它们可以导致呼吸道感染、性传播感染和肝炎等疾病。
3. 真菌真菌是一类真核生物，它们具有细胞核和细胞壁等结构，并且通常以孢子的方式进行繁殖。
真菌可以分为真菌和霉菌两类，其中真菌主要以分生子的方式进行繁殖，而霉菌则以菌丝和分生孢子繁殖。
常见的致病性真菌包括白色念珠菌、曲霉菌和组织胞浓梗等，它们可以引起真菌感染和皮肤感染等疾病。
4. 寄生虫寄生虫是一类多细胞微生物，它们依靠寄生在宿主体内或外来获取养分和生长。
寄生虫可以分为原虫和蠕虫两类，其中原虫为单细胞寄生虫，而蠕虫则为多细胞寄生虫。
常见的致病性寄生虫包括疟原虫、蛔虫和钩虫等，它们可以引起疟疾、肠道寄生虫病和皮肤寄生虫病等疾病。
在实际临床工作中，医生常常需要根据患者的病情和体征来确定致病菌的类型，以选择合适的治疗方案。
通过病原菌的检测和分离，可以帮助医生及时准确地诊断疾病，提高治疗效果和预防传播。
医院感染的常见细菌
医院感染的常见细菌医院感染是指患者在接受医疗服务过程中，由于暴露于医院环境或医疗操作而导致的感染疾病。
医院感染是医疗机构管理和质控的重要问题，它不仅给患者的康复带来困扰，还增加了医院的治疗负担。
常见的致病菌主要包括细菌、真菌、病毒等。
本文将重点介绍医院感染中常见的细菌。
首先，氧化革兰阳性球菌是医院感染中的常见细菌之一。
其中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染率日趋增高。
MRSA是一种对常规抗生素耐药的细菌，常见于医院环境和人群中。
它可以引起各种感染，如深部组织感染、呼吸道感染等，严重时还可引发败血症。
MRSA的传播主要通过接触感染源、医务人员和患者之间的交叉感染等途径。
因此，加强医护人员的手卫生、合理使用抗生素以及医疗设施和环境的清洁是预防MRSA感染的关键。
其次，肠杆菌科细菌也是医院感染中的常见致病菌。
其中最典型的是肠杆菌科革兰阴性菌和变形杆菌。
这类细菌可以引起尿路感染、呼吸道感染、消化道感染等。
论及肠杆菌科，必须提及多重耐药革兰阴性菌（MDR-GNB）。
MDR-GNB对多种抗生素产生耐药，给治疗带来巨大挑战。
这些细菌在医院内往往会传播，并引发暴发性感染。
预防MDR-GNB感染需协调多方面工作，包括医护人员的严格手卫生、控制患者感染源的扩散、加强医疗器具和环境的清洁消毒等。
另外，需特别提到的是厌氧菌感染。
厌氧菌是一类常见的细菌，不依赖氧气生存繁殖，主要存在于肠道和泥土等环境中。
在医院感染中，肠道厌氧菌、产气荚膜梭菌和丙酮菌等是常见的致病细菌。
这些细菌可引起腹部感染、手术切口感染以及内源性感染等。
提高手术室和病房环境的无菌操作、合理使用抗生素以及预防便秘等都是预防厌氧菌感染的重要措施。
除了上述常见的细菌外，还有一些其他细菌也存在于医院环境中。
例如，肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌等，它们通常滋生于患者的呼吸道或消化道中，在医院感染中引起呼吸道感染和消化道感染等。
此外，革兰阴性嗜盐菌也是一类在医院感染中引起严重感染的致病菌。
生活中有哪些常见的致病菌
生活中有哪些常见的致病菌一、人体中的常见的致病菌：1、葡萄球菌：属革兰氏阳性球菌。
是人体皮肤上寄居最多的致病菌，也见于鼻咽等处。
金黄色葡萄球菌致病力最强，主要产生溶血素、杀白细胞素和血浆凝固酶等，造成许多种感染，如疖、痈、脓肿和伤口感染等。
金黄色葡萄球菌感染的特点是局限性组织坏死，脓液稠厚、黄色、不臭。
也能引起全身性感染。
2、链球菌：属革兰氏染色阳性球菌。
存在于口、鼻、咽和肠腔内。
链球菌的种类很多，溶血性链球菌、绿色链球菌和粪链球菌是常见的致病菌。
溶血性链球菌能产生溶血素和透明质酸酶、链激酶等，溶解破坏细胞间质中的透明质酸、纤维蛋白和其他蛋白质，使炎症易扩散而缺乏局限化的倾向。
脓液特点是比较稀薄，淡红色，量较多。
典型的感染是急性蜂窝织炎、淋巴管炎等。
绿色链球菌是一些胆道感染和亚急性心内膜炎的致病菌。
粪链球菌属厌氧菌，常和大肠杆菌一同引起混合感染。
3、大肠杆菌：革兰氏染色阴性。
寄居于肠道内。
对维生素K的合成有重要作用。
它的单独致病力不大，若和其他致病菌在一起时，可造成严重的混合感染，如大面积烧伤感染、阑尾脓肿、急性胆囊炎等，产生的脓液稠厚，有粪臭。
4、绿脓杆菌：革兰氏染色阴性。
常寄居于肠道和皮肤上，它对大多数抗菌药物不敏感，故成为继发感染中的重要致病菌，特别是大面积烧伤感染时，可引起难以控制的绿脓杆菌败血症。
绿脓杆菌感染的伤口常不易愈合，其脓液呈淡绿色，有腥臭味。
5、变形杆菌：革兰氏染色阴性。
存在于肠道和前尿道，为尿路感染、急性腹膜炎和大面积烧伤感染的致病菌之一。
变形杆菌对大多数抗菌药物有耐药性。
脓液具有特殊的恶臭。
6、无芽胞厌氧菌：革兰氏染色阴性的专性厌氧菌。
在一般外科感染中，此类细菌为重要的病原体之一。
具有临床意义的有脆弱类杆菌、核梭形菌、消化球菌和消化链球菌等多种。
这些无芽胞厌氧菌寄生在人体内的腔道，特别是胃肠道（结肠内的数量最多）、口腔、阴道等处。
它们与需氧菌共同构成机体的正常菌群。
正常情况下保持菌群相对平衡，对人体无害。
常见病原细菌总结
常见病原细菌总结概述病原细菌是引起各种感染和疾病的主要微生物之一。
它们存在于人体内、环境中和其他生物体内，并具有感染性和致病性。
本文将对常见的病原细菌进行总结，以便更好地了解它们对人类健康的威胁。
常见病原细菌1. 枯草杆菌（Escherichia coli）枯草杆菌是一种革兰氏阴性杆菌，是人类和动物肠道中最常见的细菌之一。
虽然大多数枯草杆菌都是无害的，但某些菌株可以引起严重的食物中毒和感染。
常见的致病性枯草杆菌株包括致泻毒力大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC），可引起腹泻、出血性结肠炎和溶血性尿毒综合症。
2. 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）金黄色葡萄球菌是一种球状革兰氏阳性细菌，广泛存在于人体皮肤和鼻腔中。
它是导致各种感染和疾病的主要病原体之一。
金黄色葡萄球菌可引起皮肤感染、肺炎、脓毒症和心内膜炎等严重疾病。
此外，金黄色葡萄球菌还可以产生许多耐药性基因，对抗抗生素治疗。
3. 肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）肺炎克雷伯菌是一种革兰氏阴性菌，是人体肠道中正常存在的细菌之一。
它通常不会引起感染，但在免疫力下降的人群中可以引起多种感染，尤其是上呼吸道感染和尿道感染。
肺炎克雷伯菌还被广泛发现具有广谱β-内酰胺酶，这使得抗生素治疗变得困难。
4. 沙门氏菌（Salmonella）沙门氏菌是一种革兰氏阴性细菌，存在于许多动物的肠道中。
人们通常通过食用受污染的食物，如生肉和未经彻底加热的蛋类，感染沙门氏菌。
感染沙门氏菌可引起食物中毒，表现为腹泻、发热和腹痛。
严重的感染可能导致败血症。
5. 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌，是一种多耐药性细菌。
它广泛存在于环境中，如土壤、水和医疗设备。
铜绿假单胞菌可以引起各种感染，包括呼吸道感染、尿路感染和创伤感染。
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无色半透明、边缘整齐的菌落，其菌落特征与大肠杆菌相似。 ❖ 鉴别培养基：如麦康凯、伊红美蓝一般为无色菌落，XLD、
HE、DHL 、SS一般为黑色菌落。
HE琼脂
菌落为蓝绿色 至蓝色，多数菌株 产生大的有光泽的 黑色中心或几乎全 黑色。
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
液体样品10倍稀释
9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml
10
102 103 104 105 106 107
倾注法：各取1 ml 菌液至平皿再倾注培养基与菌液混匀；
涂布法：各取0.1 ml菌液至制备好的培养基上涂布均匀。
病料直接接种固体培养基方法
养殖场常见细菌&霉菌的分离与鉴定
中国农业大学畜禽疫病诊断中心 徐阳
2016.07.04
细菌分离基本方法 常见致病细菌的分离及初步鉴别 常见霉菌的分离及初步鉴别
养殖场进行细菌分离鉴定的意义
大部分细菌通常以条件致病菌的形式存在于环 境及鸡体。当个体因受到应激或者其他病原微生物 感染导致抵抗力下降时，条件致病菌就会导致继发 感染，从而造成很大的经济损失。一旦继发感染发 生，此时首先应该控制细菌问题，而细菌的分离鉴 定是明确病原的有效途径。
毛霉形态特征（与根霉 相似）
菌丝体上直接生出 单生、总状分枝或假轴 状分枝的孢囊梗。各分 枝顶端着生球形孢子囊， 内有形状各异的囊轴， 但无囊托。囊内产生大 量球形、椭圆形、壁薄、 光滑的孢囊孢子。
毛霉的孢囊孢子
根霉与毛霉主要区别：有无匍匐枝、假根和囊托
青霉形态特征
有隔多核的 多细胞菌丝,扫 帚状的分生孢子 头,分生孢子多 呈蓝绿色。
2、 检查细菌的形态学特征（菌落的形状、大 小、色泽、边缘、透明度、湿润度、溶血现 象等）。
3、涂片染色检查，观察是否与目的菌一样。
分离较难培养的病原菌、杂菌较多或目的菌 含量过少时： ❖ 取多种组织分别培养 ❖ 病料研磨处理，预增菌或选择性液体增菌 ❖ 培养基添加抗生素等
如何选择培养基提高目的菌的分离率？
一、细菌的分离、培养和鉴定的一般步骤
需要的工具
❖ 接种工具，酒精灯，试管（塞），移液管 ❖ 冰箱4℃，-20℃，-80 ℃ ❖ 高压蒸汽灭菌锅，高温烘烤箱 ❖ 恒温培养箱（需养、厌氧） ❖ 超净工作台、生物安全柜 ❖ 制备好的培养基
接种方式
细菌分离无菌意识 生物安全防护意识
接种方法
❖ 曲线划线法、分区划线法 ❖ 倾注法、涂布法（细菌计数） ❖ 斜面接种法（生化鉴定、保存菌种） ❖ 穿刺培养法（生化鉴定、保存菌种） ❖ 液体培养基接种法
大肠杆菌抗原性复杂，有不同的宿主范围 和致病性，判断分离菌是否有致病性通常鉴 定O抗原：用单因子O抗血清做玻片凝集或试 管凝集鉴定。
❖ 常见的致病性的血清型有O1、O2、O35、O36、 O78、O157等。
（2）沙门氏菌
鸡白痢和禽伤寒：无运动性，主要感染禽类 禽副伤寒：有运动性，感染人和动物
培养特性
3. 对采集的病变组织进行无菌划线操作接种到鉴别培 养基上如麦康凯培养基、伊红美蓝琼脂培养基（见下图）， 或者置于普通肉汤中进行增菌培养后接种到鉴别培养基上。
大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别
EMB平板典型大肠杆 菌菌落特征： 中心黑色或紫红色，有 金属光泽。
菌名
大肠埃希氏菌
肺炎克雷伯氏菌 阴沟肠杆菌 弗氏志贺氏菌 鼠伤寒沙门氏菌 粪链球菌
GB/T4789.4－2010沙门氏菌检验流程
前增菌：用无选择性的培 养基使处于濒死状态的细 菌恢复活力：BPW
选择性增菌：使沙门氏菌 优势繁殖，其它细菌变到 抑制：SC+TTB
选择性鉴别培养： BS+XLD/HE/显色培基
生化试验：鉴定分离出来 的细菌是否符合沙门氏菌 的生化谱
血清学鉴定：特异性诊断 血清鉴定到种。
菌丝
菌丝按结构分： 有隔菌丝和无隔菌丝。
孢子形态
曲霉形态特征 有隔菌丝，有足细胞，
球形分生孢子器，分生孢 子梗顶端膨大成为顶囊， 一般呈球形。顶囊表面长 满一层或两层辐射状小梗 (初生小梗与次生小梗)。 最上层小梗瓶状，顶端着 生成串的球形分生孢子。
通过显微镜观察孢子形态来分
❖ 曲霉的分生孢子
形态学鉴定辅以生化试验在细菌鉴定中具有 重要的意义（生化鉴定管、药敏实验等） 。
细菌的生化鉴定
不同细菌有不同的代谢类型，与各种试剂表现 不同反应，故用生化反应来鉴别细菌：
1、蛋白质和氨基酸的代谢试验：吲哚和硫化氢试验 2、碳源和氮源利用试验：柠檬酸盐利用试验 3、碳水化合物代谢试验：糖发酵试验、甲基红 （MR）试验、V—P试验 4、各种酶类试验：硝酸还原酶试验、淀粉水解试验
木糖赖氨酸去氧胆酸 钠琼脂（XLD）和SS 培养基
多数菌株产生大 的有光泽的黑色中心 或几乎全黑色。
❖ 急性感染：具有高度侵袭性，很多内脏组织中都可 作为诊断培养的样品。
❖ 慢性感染或常规检测：无明显病变，应采集几种脏 器进行单独或一起培养。
直接接种至固体培养基
研磨后接种至选择性增菌液体培养基，转至鉴别固 体培养基上
⒈ 采集相应的病变部位，选择适宜的培养基。
2、解剖病料及送检病料置于干净或无菌容器中，将表 面杂菌清除，接种环烧红冷却后（或无菌棉签）接 触病变部位内部，平板划线。
3、病料涂片或触片，染色，作出初步判断。
4、平板倒置于37℃ 恒温培养箱培养24h后，观察细菌 生长状况。
1、观察菌落是否在划线上，多数情况下，沿划 线生长较多的菌落，是待检病原菌的可能性 较大。
常见致病细菌
（1）禽致病性大肠杆菌（APEC）
肠杆菌科代表菌属：埃希菌属 本属5个种，代表种：大肠埃希菌，俗称大肠杆菌
病原分离
1. 可引起局部或全身性感染：从典型的病变中可分离 和鉴定到大肠杆菌，注意：病料避免受到粪便的污染。
2. 死禽中分离到的大肠杆菌结果判定应谨慎，大肠杆 菌能从肠道迅速扩散至组织中。
霉菌：孟加拉红培养基、马铃薯葡萄糖培养基
鉴别培养基:培养基中加入了能与目的菌代谢产物发生 显色反应的指示剂,从而只要辨别颜色就能把目的菌 从相似的菌落中找出来。
沙门氏菌：麦康凯琼脂，SS、XLD、DHL、三糖铁琼脂 大肠杆菌：麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂
鉴定细菌方法
（一）传统方法： 菌落形态学观察：主要观察菌落在其适合的培养基 上的生长状况。 细菌的个体形态学观察：即通过显微镜观察。
标准方法适用范围
❖ 鸡的组织样品、蛋内容物 ❖ 肠内容物、粪便、环境拭子、蛋壳
（3）传染性鼻炎
❖ 病原：副鸡嗜血杆菌 ❖ 本菌定殖于禽的上呼吸道及窦腔，离开活体很快死
亡。 ❖ 将无菌棉拭子伸入窦腔深部，沾取渗出物。
病原分离
❖ 在血琼脂平板上划横线，再接种上葡萄球菌 （该菌在普通培养基上不生长），置于厌氧 环境中培养，在葡萄球菌菌落边缘可长出一 种细小的卫星菌落。
菌落形态
紫黑色，有绿色金 属光泽
粉色，中心色深 粉色，中心色深
无色 无色 无色
麦康凯培养基
❖ 菌落呈现粉红色或桃 红色
❖ 沙门氏菌为无色浅黄 色
大多数在正常条件下是不致病的共栖菌，在特 定条件下可致病，病原性大肠杆菌正常情况下极少 存在于健康机体。
抗原结构 180个O抗原（菌体抗原） 60个H抗原（鞭毛抗原） 80个K抗原（荚膜抗原）
养时间颜色有变化 性状：绒毛状，粉末状，絮状，颗粒状，棉花状等 边缘：整齐，锯齿状、树枝状
曲霉菌落
毛霉和青霉菌落
常见霉菌显微镜下的初步鉴别
水浸片置于显微镜下观察 ❖ 菌丝 ❖ 孢子形态。
于洁净载玻片上，用解剖针（钩）从霉菌菌落 的边缘处取少量带有孢子的菌丝置于小滴生理盐水 中，再将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，轻 压，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观 察，必要时再换高倍镜。
常见霉菌的分离及鉴定
主要病原：烟曲霉，黄曲霉，黑曲霉， 青霉，头孢霉，毛霉等。
❖ 将病料（主要病变于肺和气囊）剪碎后接种于马铃 薯葡萄糖培养基或沙氏培养基等其他真菌培养基， 生长后进行鉴定，一般为3-5天。
❖ 点植法（固体） ❖ 划线法（液体）
霉菌的菌落特征
菌落特征是鉴定霉菌的重要依据之一。 大小：生长大小和培养时间有关 形态：平滑，凹或凸，同心圆，放射沟纹状等 颜色：褐色、绿色、黑色、黄色等，正面、背面颜选择： 1、基础培养基 2、选择培养基 3、鉴别培养基 4、保藏菌种用培养基
选择培养基:据特殊营养要求或对某理化因素的抗性而 设计的培养基，使得混合菌样的劣势菌变成优势菌。
细菌：改良Camp—BAP培养基（弯曲杆菌） 庆大霉素血琼脂（鼻气管鸟杆菌） 氯化镁孔雀绿肉汤、连四硫酸盐肉汤（沙门） 高盐甘露醇琼脂（葡萄球菌）