7腺病毒载体疫苗可直接使用.docx
腺病毒载体操作手册中文版解析
腺病毒载体操作手册中文版解析腺病毒载体操作手册中文版AdEasyTM操作手册目录缩写英文全称中文全称Ad Adenovirus 腺病毒Ad5 Adenovirus serotype 5 血清5型腺病毒AdV Adenoviral Vector 腺病毒载体Amp Ampicillin 氨苄青霉素β-Gal β-Galactosidase β-半乳糖苷酶bp Base Pair 碱基对BSA Bovine Serum Albumin 小牛血清白蛋白cDNA Complementary DNA 互补DNAcccDNA Closed Circular Coiled DNA 闭环螺旋DNACPE Cytopathic Effect 细胞病理效应CsCl Cesium Chloride 氯化铯DMEM Dulbecco’s Modified Eagle Medium DMEM培养基DMSO Dimethyl Sulfoxide 二甲基亚砜DTT Dithiothreitol 二硫苏糖醇EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸EtBr Ethidium Bromide 溴化乙锭FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清Hr Hour 小时ITR Inverted Terminal Repeat 反向末端重复Kan Kanamycin 卡那霉素kb Kilobases 千碱基对KDa KiloDaltons 千道尔顿LB Luria-Bertani ( broth ) LB培养基MCS Multiple Cloning Site 多克隆位点Min Minute 分钟MOI Multiplicity of Infection (Virus/Cell ) 感染复数mRNA Messenger RNA 信使RNAMWCO MOIecular Weight Cut-offPAGE PolyAcrylamide Gel Electrophoresis 聚丙烯凝胶电泳PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液PFU Plaque Forming Unit 空斑形成单位pi Post Infection 感染后RCA Replication Competent Adenovirus 增殖性腺病毒RITR Right Inverted Terminal Repeat 右侧反向末端重复SDS Sodium Dodecyl Sulfate 十二烷基硫酸钠TBE Tris Borate/EDTA 三羟甲基氨基甲烷硼酸盐/乙二胺四乙酸TCID50 Tissue Culture Infectious Dose 50 50%组织培养感染剂量TCP Total Cellular Protein 细胞总蛋白TE Tris/EDTA TE溶液wt Wild Type 野生型X-Gal 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-Galactopyranoside 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷第一章简介当今基因输送技术的发展日趋复杂，一些治疗药物（生长激素、干扰素、抗病毒和抗癌复合物）和诊断性蛋白（单克隆抗体）的设计、发展与合成需要更高效的基因输送工具。
腺病毒操作手册
Shanghai GeneChem Co. Ltd 重组腺病毒操作手册(Version 2.0)上海吉凯基因技术有限公司 二〇〇九年二月地址：上海张江高科技园区蔡伦路 720 弄 1 号 408 室 电话：86-21-51320189 网址： 邮编：201203 传真：86-21-51320179 Email：service@Page 1 of 4 Shanghai GeneChem Co. Ltd 重组腺病毒实验系统腺病毒是一种的线型双链 DNA 无包膜病毒， 它的 DNA 和核心蛋白形成的内核， 蛋白外壳 是直径约 80nm 的正二十面体，由 240 个六 面体和 12 个位于正二十面体顶部的五面体 构成。
Genechem 重组腺病毒系统是将携带外源基 因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒基因组的 包装质粒共转染 HEK293 细胞， 通过 Cre/loxP 系统的作用实现重组，产生重组腺病毒。
重组腺病毒能够表达较大的外源基因片段， 感染分裂和非分裂细胞，具有广泛的宿主。
GFP-adenovirus 感染的代表细胞――腺病毒可以感染绝大多数细胞TCA8113SGC-7901NRKPC-3Huh-7GliaRabbit Mesenchymal Stem CellsHuman Mesenchymal Stem CellRat Cardiac Fibroblasts地址：上海张江高科技园区蔡伦路 720 弄 1 号 408 室 电话：86-21-51320189 网址： 邮编：201203 传真：86-21-51320179 Email：service@Page 2 of 4 Shanghai GeneChem Co. Ltd 重组腺病毒操作过程一, 注意事项:1. 操作病毒时请尽量使用生物安全柜。
疫苗使用管理制度范本
疫苗使用管理制度范本第一章总则第一条为规范疫苗的使用管理，保障疫苗接种的安全和有效性，提高疫苗接种质量，制定本制度。
第二条本制度适用于所有疫苗的接种单位和接种人员。
疫苗接种单位包括但不限于医院、社区卫生服务中心、疾控中心等。
第三条疫苗使用管理应当遵循“优先安全、科学评估、信息公开、规范操作”的原则，确保疫苗接种工作的公正、公开和透明。
第四条疫苗使用管理应当依法进行，遵循行业相关的法律法规、规章制度和标准。
第五条疫苗接种单位应当建立健全疫苗使用管理制度，制定相应的操作规程，加强人员培训，提高疫苗接种工作的管理水平和服务质量。
第二章疫苗储存管理第六条疫苗接种单位应当具备相应的疫苗储存设施和设备，并按照要求进行管理和维护。
第七条疫苗储存设施应当符合相关的标准，保证疫苗的质量和稳定性。
疫苗储存设施应当设立专门负责人，负责疫苗的储存、调配和验收工作。
第八条疫苗的储存条件应当符合疫苗说明书中的要求，保证疫苗的安全性和有效性。
第九条疫苗的储存温度应当进行定期监测和记录，确保温度的稳定性和合格性。
第十条疫苗的储存环境应当保持清洁、干燥、通风，避免阳光直射和与其他物品污染接触。
第十一条疫苗的储存过程中应当进行相应的台账记录，包括疫苗的进货、调拨、退货和报废等情况。
第十二条疫苗的储存管理人员应当定期进行培训和考核，提高储存管理的专业水平和操作技能。
第三章疫苗接种管理第十三条疫苗接种单位应当具备相应的接种设施和设备，并按照要求进行管理和维护。
第十四条疫苗接种设施应当符合相关的标准，保证疫苗接种的安全性和有效性。
疫苗接种设施应当设立专门负责人，负责接种工作的安排、组织和监督。
第十五条疫苗接种前，接种单位应当向接种对象提供相关的知情告知，包括疫苗的适应症、禁忌症、不良反应等信息。
第十六条疫苗接种前，接种单位应当进行充分的评估，确保接种对象的适应症和接种条件。
第十七条疫苗接种过程中，接种单位应当做好相应的记录和报告工作，保留相关的接种证明和疫苗批号等信息。
新冠病毒疫苗技术指南 第一版 课件 PPT
（一）迟种补种及加强免疫
• 对2剂或3剂次程序的疫苗，未按程序完成接种者，建议尽早补种。免疫程序无需 重新开始，补种完成相应剂次即可。
• 对在14天内完成2剂新冠病毒灭活疫苗接种者，在第2剂接种3周后尽早补种1剂灭 活疫苗。
• 对在14-21天完成2剂新冠病毒灭活疫苗接种的，无需补种。 • 现阶段暂不推荐加强免疫。
特定人群接种建议
特定人群接种建议
60岁及以上人群——建议接种
60岁及以上人群为感染新冠病毒后的重症、死亡高风险人群。 目前，Ⅲ期临床试验研究该人群的数量有限，暂无疫苗对该人群的保护效力数据。 但Ⅰ/Ⅱ期临床研究数据显示，该人群疫苗接种安全性良好，疫苗对60岁以上人群也会产生一定的保护作用。
18岁以下人群——暂不推荐
灭活疫苗
腺病毒载体疫苗
重组亚单位
灭活疫苗
• 原理：使用非洲绿猴肾（Vero）细胞进行病毒培养扩增，经β丙内酯灭活病毒,保 留抗原成分以诱导机体产生免疫应答，并加用氢氧化铝佐剂以提高免疫原性。
• 附条件批准上市的3个产品 国药集团中国生物北京生物制品研究所有限责任公司（北京所） 武汉生物制品研究所有限责任公司（武汉所） 北京科兴中维生物技术有限公司（科兴中维）生产
品完成接种时，可采用相同种类的其他生产企业的疫苗产品完成接种。
（四）新冠病毒感染及抗体筛查
• 在疫苗接种前无需开展新冠病毒核酸及抗体检测。 • 接种后也不建议常规检测抗体作为免疫成功与否的依据。
（五）接种禁忌
通常的疫苗接种禁忌包括： 1.对疫苗的活性成分、任何一种非活性成分、生产工艺中使用的物质过敏者
对于灭活疫苗和重组亚单位疫苗，根据既往同类型疫苗的安全性特点，建议接种。
对于腺病毒载体疫苗，虽然所用载体病毒为复制缺陷型，但既往无同类型疫苗使用的安全性数据，建议经充分告
腺病毒载体疫苗
腺病毒载体疫苗什么是腺病毒载体疫苗腺病毒载体疫苗是指以腺病毒作为载体,将保护性抗原基因重组到腺病毒基因组中，使用能表达保护性抗原基因的重组腺病毒制成的疫苗。
腺病毒载体疫苗特点研究发现,携带各种抗原的腺病毒载体能刺激机体产生很强的体液免疫或细胞免疫.此外，由于腺病毒载体能感染呼吸道和肠道细胞，可以方便地通过黏膜进行免疫，并能诱导机体产生黏膜和系统免疫应答。
腺病毒载体疫苗的临床研究1、腺病毒载体诱导的天然免疫反应腺病毒载体本身的病原相关分子模式与细胞表面模式识别受体结合，促进炎性细胞因子的分泌和未成熟树突状细胞分化为专职抗原呈递细胞，激活宿主的天然免疫系统。
研究表明，通过静脉给小鼠注射大剂量的表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒,6h即可检测到IL-6、IL—1和TNF-α的分泌，脾脏边缘也有树突状细胞和巨噬细胞聚集,在恒河猴中也观察到类似现象.2、腺病毒载体疫苗能迅速刺激机体产生高水平的体液免疫很多疫苗是通过刺激机体产生中和抗体来发挥保护机体预防疾病作用的。
腺病毒载体疫苗能有效产生针对相应靶抗原的高水平抗体。
如携带狂犬病毒糖蛋白的复制缺陷型或复制型的5 型重组腺病毒载体疫苗，都能诱导高水平中和抗体,保护动物抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击.3、腺病毒载体疫苗能刺激机体产生很强的细胞免疫特异性T细胞免疫在对抗寄生虫病、病毒性疾病及肿瘤治疗中都具有重要作用。
大量的临床前和临床研究发现,腺病毒载体疫苗能刺激机体产生很强的针对外源基因的特异性T细胞反应。
有研究报道，携带恶性疟原虫抗原ME.TRAP的腺病毒载体疫苗能刺激小鼠产生很强的CD8+T细胞免疫反应,最高能达到92％的保护率。
4、腺病毒载体疫苗可方便地通过黏膜进行免疫能通过黏膜免疫诱导局部或全身体液免疫反应是腺病毒载体疫苗的一个重要特点.黏膜免疫与全身免疫相比有许多不同，注射免疫诱导的全身免疫虽然可以清除其感染，但通常不能保护黏膜表面；而经黏膜接种疫苗可以非侵入性地诱导机体产生黏膜和系统免疫应答，从而可以保护机体免受通过黏膜表面和其他途径的感染。
2021年新冠病毒疫苗接种技术指南(第一版)全文
2021年新冠病毒疫苗接种技术指南（第一版）全文目前，我国已有5个生产企业的新冠病毒疫苗批准附条件上市或紧急使用。
附条件批准上市的3个灭活疫苗和腺病毒载体疫苗III期临床试验期中分析结果显示，疫苗保护效力均达到国家药品监督管理局《新型冠状病毒预防用疫苗临床评价指导原则（试行）》的要求，也符合世界卫生组织《新冠病毒疫苗目标产品特性》推荐的指标要求。
临床试验和紧急使用阶段及前期重点人群较大规模接种后疑似预防接种异常反应监测数据表明，新冠病毒疫苗安全性良好。
获批紧急使用的重组新冠病毒疫苗（CH0细胞）II期临床试验结果显示具有良好的免疫原性和安全性。
基于我国获批疫苗的临床试验研究数据和新冠肺炎的流行病学特征，中国疾病预防控制中心新冠病毒疫苗工作组起草了本指南，并经国家免疫规划专家咨询委员会审议通过。
本指南供各级卫生健康部门、疾控机构指导预防接种单位开展新冠病毒疫苗预防接种使用。
一、疫苗种类（一）灭活疫苗附条件批准上市的3个新冠病毒灭活疫苗产品分别由国药集团中国生物北京生物制品研究所有限责任公司（北京所）、武汉生物制品研究所有限责任公司（武汉所）和北京科兴中维生物技术有限公司（科兴中维）生产。
其原理是使用非洲绿猴肾（Vero）细胞进行病毒培养扩増，经β丙内酯灭活病毒，保留抗原成分以诱导机体产生免疫应答，并加用氢氧化铝佐剂以提高免疫原性。
（二）腺病毒载体疫苗附条件批准上市的腺病毒载体疫苗为康希诺生物股份公司（康希诺）生产的重组新冠病毒疫苗（5型腺病毒载体）, 其原理是将新冠病毒的刺突糖蛋白（S蛋白）基因重组到复制缺陷型的人5型腺病毒基因内，基因重组腺病毒在体内表达新冠病毒S蛋白抗原，诱导机体产生免疫应答。
（三）重组亚单位疫苗获批紧急使用的重组亚单位疫苗为安徽智飞龙科马生物制药有限公司（智飞龙科马）生产的重组新冠病毒疫苗（CHO细胞），其原理是将新冠病毒S蛋白受体结合区（RBD）基因重组到中国仓鼠卵巢（CH0）细胞基因内，在体外表达形成RBD二聚体，并加用氢氧化铝佐剂以提高免疫原性。
腺病毒包装操作手册
汉恒重组腺病毒操作手册目录腺病毒安全使用和注意事项腺病毒储存与稀释的注意事项一、整体实验流程二、实验材料三、腺病毒包装和浓缩四、重组腺病毒滴度（PFU）的测定五、重组腺病毒感染目的细胞六、重组腺病毒用于动物实验附1：汉恒生物腺病毒载体附2：腺病毒感染细胞最佳MOI的摸索（表达荧光的病毒） 附3：汉恒生物常见三种病毒感染目的细胞比较腺病毒安全使用和注意事项➢腺病毒安全使用注意事项（*非常重要*）1) 腺病毒相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。
2) 操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。
3) 操作病毒时需要特别小心病毒溅出。
如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加 1%的SDS溶液擦拭干净。
4) 接触过病毒的枪头、离心管、培养板及培养瓶请用84消毒液浸泡后统一处理。
5) 如实验过程中需要离心，应使用密封性好的离心管，必要时请用封口膜封口后离心。
6) 病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌后处理。
7) 实验完毕后请用香皂清洗双手。
➢腺病毒储存与稀释的注意事项1）腺病毒的储存收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于 4℃保存（一周内使用完最佳）；如需长期保存请分装后放置于 -80 ℃ 。
注：a.反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会使病毒滴度降低10%~50%），因此在病毒使用过程中尽量避免反复冻融。
汉恒生物对病毒已进行分装（200 μl/tube），收到后请直接放置-80℃冰箱保存即可。
b.若病毒储存时间超过6个月，汉恒生物建议在使用前重新测定病毒滴度（参见附表2-慢病毒滴度测定方法）。
2）腺病毒的稀释需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用PBS或培养目的细胞用的无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后置于 4℃保存(一周内使用完最佳)。
重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。
七年级上学期综合能力练习语文试题
说明：1.全卷共7页，满分为120分，考试时间为120分钟。
2.答卷前，考生务必用黑色字迹的钢笔或签字笔在答题卡上填写自己的姓名、学号、班级、座位号，按要求填写在答题卡对应的空格内河源市新河实验学校2022—2023学年第一学期七年级综合能力练习语文试题。
3.选择题每小题选出答案后，用2B 铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案，答案不能答在试题上。
4.非选择题必须用黑色字迹钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新的答案；不准使用铅笔和涂改液。
不按以上要求作答的答案无效。
5.考生务必保持答题卷的整洁。
一、基础（31分）1.根据课文默写古诗文。
（共10分，答对一句得1分，满分不超过10分）（1）僵卧孤村不自哀，。
（陆游《十一月四日风雨大作》）（1分）（2），一夜征人尽望乡。
（李益《夜上受降城闻笛》）（1分）（3）《道德经》里提及的“善人者，不善人之师；不善人者，善人之资”，与《论语》中的“，”有异曲同工之妙。
（2分）（4）《观沧海》中通过丰富奇特的想象创造宏伟意境，表现了作者的宽广胸怀和豪迈气概的诗句是：，；，。
（4分）（5）请把李白的《闻王昌龄左迁龙标遥有此寄》默写完整。
（4分），。
，。
2．根据拼音写出相应的词语。
（4分）（1）她常常dīng zhǔ（）张妈好好照顾它们。
（2）动物行为学家常常与具有高度智慧的鸟或bǔrǔ（）动物打交道。
（3）回想此前和此后jiérán bùtóng（）的生活，我不能不感慨万分。
（4）每个人都suíshēng fùhè（）着，生怕别人认为自己是个笨人。
3．下列句子中加点的词语使用不恰当的一项是（）（3分）A.老师怂恿．．我们积极上进，做品学兼优的好学生。
B.梅花从不与百花争夺明艳的春天，也从不炫．耀．自己的美丽。
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腺病毒载体疫苗
什么是腺病毒载体疫苗
腺病毒载体疫苗是指以腺病毒作为载体，将保护性抗原基因重组到腺病毒基因组中，使用能表达保护性抗原基因的重组腺病毒制成的疫苗。
腺病毒载体疫苗特点
研究发现，携带各种抗原的腺病毒载体能刺激机体产生很强的体液免疫或细胞免疫。
此外，由于腺病毒载体能感染呼吸道和肠道细胞，可以方便地通过黏膜进行免疫，并能诱导机体产生黏膜和系统免疫应答。
腺病毒载体疫苗的临床研究
1、腺病毒载体诱导的天然免疫反应
腺病毒载体本身的病原相关分子模式与细胞表面模式识别受体结合，促进炎性细胞因子的分泌和未成熟树突状细胞分化为专职抗原呈递细胞，激活宿主的天然免疫系统。
研究表明，通过静脉给小鼠注射大剂量的表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒，6h即可检测到IL-6、IL-1和TNF-α的分泌，脾脏边缘也有树突状细胞和巨噬细胞聚集，在恒河猴中也观察到类似现象。
2、腺病毒载体疫苗能迅速刺激机体产生高水平的体液免疫
很多疫苗是通过刺激机体产生中和抗体来发挥保护机体预防疾病作用的。
腺病毒载体疫苗能有效产生针对相应靶抗原的高水平抗体。
如携带狂犬病毒糖蛋白的复制缺陷型或复制型的5 型重组腺病毒载体疫苗，都能诱导高水平中和抗体，保护动物抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击。
3、腺病毒载体疫苗能刺激机体产生很强的细胞免疫
特异性T细胞免疫在对抗寄生虫病、病毒性疾病及肿瘤治疗中都具有重要作用。
大量的临床前和临床研究发现，腺病毒载体疫苗能刺激机体产生很强的针对外源基因的特异性T 细胞反应。
有研究报道，携带恶性疟原虫抗原ME.TRAP的腺病毒载体疫苗能刺激小鼠产生很强的CD8+T细胞免疫反应，最高能达到92％的保护率。
4、腺病毒载体疫苗可方便地通过黏膜进行免疫
能通过黏膜免疫诱导局部或全身体液免疫反应是腺病毒载体疫苗的一个重要特点。
黏膜免疫与全身免疫相比有许多不同，注射免疫诱导的全身免疫虽然可以清除其感染，但通常不能保护黏膜表面；而经黏膜接种疫苗可以非侵入性地诱导机体产生黏膜和系统免疫应答，从而可以保护机体免受通过黏膜表面和其他途径的感染。
研究发现，在多种动物模型中，口服或滴鼻接种肺炎球菌、委内瑞拉马脑炎病毒、狂犬病毒、乙肝病毒的重组腺病毒载体疫苗，都能刺激机体产生很强的体液免疫和局部的黏膜反应，并保护机体免受相应病原的侵害。
腺病毒载体疫苗目前存在的问题
与其他载体疫苗一样，腺病毒载体疫苗最大的问题是机体针对载体的免疫反应问题：目前广泛应用的腺病毒载体是人血清型腺病毒AdHu2和AdHu5型，由于人群中普遍存在针对常见的人血清型腺病毒的中和抗体，削弱相应腺病毒载体诱导的免疫反应，阻碍了这些载体在临床上的应用。
远睿生物腺病毒载体疫苗构建服务
远睿生物采用的是黑猩猩AdC6型腺病毒载体，该载体规避了以往人源腺病毒载体容易引发机体免疫反应的缺陷，在动物实验中表现出良好的保护效果，在疫苗的生产过程中表现出高产、稳定等优点。
公司与中国科学院巴斯德研究所进行了长达四年的联合研发，成功研制出新型口服（注射）腺病毒载体狂犬病疫苗，该疫苗的专利号是ZL201300362921.8。
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