脑脊液(CSF)新型隐球菌墨汁染色
隐球菌性脑膜炎8例报告
隐球菌性脑膜炎8例报告摘要】目的分析隐球菌性脑膜炎(CNM)的临床特点,探讨其诊治方法。
方法对8例CNM患者的临床资料进行回顾性分析。
结果 8例脑脊液检查均异常,7例常规墨汁染色找到新型隐球菌,8例脑脊液细胞学(CSFC)呈混合细胞增多反应并查见隐球菌而确诊为CNM。
2例CSF培养出隐球菌。
结论 CNM以发热、间歇性头痛为主、可有恶心、食欲不振、神倦、乏力等。
CNM的诊断应用CSFC、墨汁染色及细菌培养等多种手段相结合以提高其早期确诊率。
两性霉素B或脂质体两性霉素联合5-氟胞嘧啶疗效较好。
【关键词】隐球菌性脑膜炎诊断治疗隐球菌性脑膜炎(Cryptococcal neoformans meningitis CNM)临床上仍不太少见；近年来随着免疫缺陷病的人群有所增长和应用皮质激素及广谱抗菌素等，CNM发病率有所增长[1]。
本病临床上仍与结核性脑膜炎易混淆，治疗上有效药物尚少，病死率较高，为寻求早期诊断和有效的治疗手段，现将2005年2月～2010年9月诊治的8例CNM报告如下。
1 一般资料本组8例，男5例，女3例，年龄15～55岁，其中小于18岁3例；24～33岁3例;50岁以上2例。
其中2例患有艾滋病及1例又并发肺脑结核。
2 症状及体征入院时均有发热、间歇性头痛、可有恶心、食欲不振、神倦、乏力等。
查体T37.1～38.7℃，R18～23次/分，P60～81次/分，BP10.7/6.8kPa2例,12～14/8～10.7kPa6例。
神志清楚，表情忧虑，8例均有痛苦貌、后期颈项强直，布氏征、克氏征(＋)，巴氏征(十)、外周血WBC增高5例（WBC11.50～14.3×109/L,N0.73～0.85）。
3 脑脊液(CSF)检查压力1.63～2.06kpa8例，无色微混5例，无色透明3例，蛋白(+)7例，葡萄糖减少6例。
CSF白细胞15～280×106/L7例，正常1例，多核细胞0.25～0.36、5例，0.09～0.24、3例，单核细胞0.64～0.75、5例，0.76～0.81、3例，7例常规墨汁染色找到新型隐球菌,2例CSF培养出隐球菌。
脑脊液常规检查
减低：中枢神经系统细菌及真菌性感染、 脑肿瘤、脑寄生虫病、神经梅毒、低血糖 增高：脑出血、糖尿病、脑干损伤
CSF
3.氯化物
血浆蛋白＞脑脊液蛋白 血浆氯化物＜脑脊液氯化物
参考值： 成人：120 ～130mmol/L 儿童：111 ～123mmol/L
CSF
氯化物
影响因素
①血氯浓度
②血-脑屏障通透性
无
可见致病菌 抗酸杆菌或结 核菌培养阳性
无
增加，L 主 新型隐球菌源自增加，N 为主无增加，L 为主
无
CSF
病例分析
某成人男性，突然嗜睡，唤醒后主诉头痛， 不能回答其他问题。体温39℃，脑膜刺激征 阳性。腰穿检查脑脊液，测得压力为 255mmH2O。脑脊液标本检查，外观混浊， Pandy试验(十十十)，蛋白定量2.4g/L，葡萄 糖0.9mmol/L，氯化物110 mmol/L，白细胞数 890×106/L，多个核细胞占93％，单个核细胞 占7％，试分析此结果，作出初步判断并指出 如何进行确诊。
③脑脊液蛋白质含量 ④pH值
临床意义
减低：细菌或真菌性脑膜炎、低氯血症
增高：见于尿毒症、脱水、心力衰竭
CSF
4.腺苷脱氨酶（ADA)
来源于红细胞、粒细胞、淋巴细胞
增高：结核性脑膜炎、化脓性脑膜 炎、脑出血等
CSF
5.髓鞘碱性蛋白（MBP)
髓鞘碱性蛋白（MBP)：神经组织独有的蛋 白质，脑组织实质性损伤的特异性标记， 含量与损伤范围、病情严重程度相关
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CSF
一、理学检查
31
透明度
2
颜色
3
凝固性
CSF
1.透明度
参考值：清晰透明 浑浊原因
体液实验室检查(脑脊液检查)
3. CSF的组成
• 正常CSF的化学成分基本上与血液相似。 • 由于血脑屏障的存在，脉络丛上皮对血浆中 各种物质的透过具有选择性。 • 钠、镁、氯离子最易通过，其次为白蛋白， 葡萄糖，乳酸，氨基酸，尿素和肌酐，大分子 如纤维蛋白原，补体，抗体及胆红素胆固醇等 极难通过。
4. CSF的生理功能
• 提供浮力保护脑和脊髓免受外力震荡损伤； • 调节颅内压力； • 参与神经组织的物质代谢； • 维持pH值，pＨ:７.31～７.34； • 参与神经内分泌调节。
外观 凝固 细胞 蛋白 糖 病菌 化脑 混 凝 多核 增 低 化脓菌 结脑 透明 薄膜 淋巴 增 低 结核菌 毒脑 透明 无 淋巴 轻 正常 无
中枢神经系统疾病的脑脊液实验室检查特点
疾病
外观
蛋白 G
Cl
定性
细胞总数 及分类
致病菌
化脓性脑 浑浊凝块 ++以上 重度 轻度下 显著增加，
膜炎
下降
降
可发现
脑肿瘤 清晰
+
正常或 正常 增加，淋巴为主 无
轻
度
下
降
思考
• 脑脊液理学检查包括哪些内容？ • 脑脊液细胞计数在不同的疾病中有何
特征性改变？
细胞反应 • 修复期：淋巴细胞反应
• 红细胞增多：见于脑出血、蛛网膜下腔 出血、脑血栓、硬膜下血肿等。
• 淋巴细胞增多：见于结核性脑膜炎、霉 菌性脑膜炎、病毒性脑膜炎、麻痹性痴 呆、乙型脑炎后期、脊髓灰质炎、脑肿 瘤、脑溢血、多发性神经炎。
• 嗜中性粒细胞增多：化脓性脑膜炎、流行性 脑脊髓膜炎、流行性脑炎、脑出血、脑脓肿、 结核性脑膜炎恶化期。
新鲜出血
穿刺不顺利，压力正常
颅内新型隐球菌感染联合检测在实验诊断中的应用
颅内新型隐球菌感染联合检测在实验诊断中的应用摘要】目的：探讨临床实验室常用的几种检测方法在早期新型隐球菌性脑膜炎诊断中的临床应用价值；方法：以脑脊液墨汁染色阳性和/或脑脊液真菌培养鉴定为新型隐球菌作为确诊新型隐球菌脑膜炎的金标准。
对37例新型隐球菌脑膜炎患者1次或多次腰穿脑脊液，同时以单纯墨汁染色、脑脊液培养、胶体金法、墨汁染色联合脑脊液培养方法分别检测脑膜炎新型隐球菌。
结果：单纯墨汁染色和单纯脑脊液培养初次腰穿检出率(48.6% vs 56.8%)比较无明显差异（P>0.05）。
墨汁染色联合脑脊液培养(81.1%)较上述两种方法单独检测初次腰穿检出率均显著增高（P<0.05），与胶体金法(94.6%)比较无明显差异（P>0.05），但胶体金法初次腰穿检出率看似更高一些。
胶体金法在2例非隐球菌性脑膜炎标本中出现假阳性。
结论：脑脊液墨汁染色联合脑脊液培养较该两种方法分别单纯检测明显提高新型隐球菌初次腰穿的检出率，该联合检测可做为颅内新型隐球菌感染灵敏、特异的实验室检测方法在临床早期诊断中应用。
胶体金法首次腰穿检出率最高，其阳性高度提示了新型隐球菌脑膜炎感染，但应注意假阳性的可能。
【关键词】颅内新型隐球菌感染；检测；应用价值【中图分类号】R742【文献标识码】A1、资料和方法1.1病例来源2010年1月～2015年10月在承德医学院附属医院住院确诊为新型隐球菌脑膜炎的37例患者。
所有检测标本为上述患者脑脊液标本。
以脑脊液墨汁染色阳性和、或脑脊液真菌培养鉴定为新型隐球菌作为确诊新型隐球菌脑膜炎的金标准。
1.2仪器试剂梅里埃VITEK 2 compact全自动细菌鉴定仪及YST酵母菌鉴定卡；梅里埃BACT/ALERT 3D全自动血培养仪及配套儿童型微生物培养瓶；IMMY公司CrAg Lateral Flow Assay隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）；珠海贝索公司印度墨汁染色试剂盒；温州康泰沙氏培养基及念珠菌鉴别琼脂。
新型隐球菌墨汁染色步骤-概述说明以及解释
新型隐球菌墨汁染色步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述隐球菌是一种普遍存在于自然环境中的真菌，它们可以引起隐球菌病，这是一种严重的感染性疾病。
隐球菌墨汁染色是一种常用的实验方法，用于快速检测和鉴定隐球菌的存在。
通过染色，可以使隐球菌在显微镜下更加清晰可见，从而提高诊断效果。
隐球菌墨汁染色步骤主要包括样本制备、染色操作和显微镜观察。
首先，需要采集合适的样本，比如体液或组织切片，然后进行固定和固化处理，以保持细胞的形态和结构。
接下来，将样本进行染色，常用的染色剂是隐球菌墨汁，它可以特异性地染色隐球菌。
在染色过程中，需注意控制染料浓度和染色时间，以确保染色效果的准确性和稳定性。
最后，利用显微镜观察染色后的样本，观察到隐球菌的形态特征，如菌落颜色和形状等，从而判断样本中是否存在隐球菌。
隐球菌墨汁染色的优点是操作简单、成本低廉且结果可靠。
然而，也有一些限制，比如可能存在假阳性结果和染色结果的主观性等。
因此，在进行隐球菌墨汁染色时，应注意控制实验条件，确保染色结果的可靠性和准确性。
总而言之，隐球菌墨汁染色是一种常用的实验方法，用于快速检测和鉴定隐球菌的存在。
在实际应用中，我们需要掌握正确的操作步骤和注意事项，以提高染色效果和准确性。
未来，随着科技的不断进步，相信隐球菌检测方法会变得更加快速、准确和可靠。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以按照以下方式编写：文章结构部分是对整篇长文的组织和布局进行介绍。
它描述了该文本的主要节（章节）的结构和内容，以帮助读者了解文章的框架和逻辑顺序。
本文将按照以下结构来组织内容：第一节引言部分概述了本文的主要内容和目的。
将介绍什么是隐球菌墨汁染色以及其在实验或临床应用中的重要性和作用。
同时，还会对文章的整体结构和框架进行简单介绍，为读者提供整个阅读过程的指南。
第二节正文部分将详细介绍新型隐球菌墨汁染色步骤的要点。
其中，2.1节将重点介绍染色步骤的要点1，可能包括准备实验材料、处理样本、选择合适的染色方法等内容。
墨汁染色新型隐球菌需注意的几个环节
可就 是 昂 贵 的 Ｂ Ｏ Ａ Ｒ Ｄ ２啊 ！从 日本 购 买 该 轴 流 风 机 时间 比较长 ，所 以就 在 电子 市场 中买 了一个 先 装
上 了 。如 果 没 有 发 现 此 隐 患 ，将 来 导 致 ＭＩ Ｖ 的
Ｃ Ｃ Ｕ中板子 损坏 了 ，那 就很 可惜 了。
总结 ：上述 三例故 障均 涉及 因风扇 散热 不 良而 导 致 。为避 免 同类 故 障 的发 生 ，维护 中我基本 一致 。 （ ６ ）在 镜检 时尽 量把 聚 光器 调 高 ，视 野 调 亮 ，
并先从 边 缘较 薄处移 向中心观 察 。 （ ２）故 障 二 ：点 检 和 维 修 中 要 注 意 Ｃ Ｏ Ｎ Ｓ Ｏ Ｌ
底 部这两 个小 风扇 的状态 ，另外 由于这 两个 小风 扇 往 里抽 风 ，所 以 Ｃ Ｏ Ｎ Ｓ Ｏ Ｌ内 的灰 尘 较 多 ，需 定 期 打开 Ｃ Ｏ Ｎ Ｓ Ｏ Ｌ除 尘 （ 如果 由 于 散 热 不 好 ，导致 了
厚 的墨 汁 将 隐 球 菌 覆 盖 ，即 便 有 典 型 的 “ 太 阳”
形 ，也 会 被 “ 浓 云 ” 遮 挡 ；墨 汁 过 少 ，染 不 成 “ 太 阳” 形 ，找起来 困难 ，易 漏检 。 （ ５ ） 正确 识 别 隐球 菌 的 形 态 也 很 重 要 ，染 色
环节 上掌 握不 够好 ，时有漏 检错报 现 象 。我 们从 多 年 的染 色 中 ，得 出一些 体会 供 同行参 考 。
20130325墨汁染色新型隐球菌需注意的几个环节杨有利闫正平王延福解放军第十医院甘肃武威733000近年来随着抗生素和免疫抑制剂使用的增多真菌感染率呈逐年上升的趋势新型隐球菌性脑膜炎下称隐脑也在逐年增加而隐脑和结核性脑膜炎病毒性脑膜炎在临床表现上没有明显的区别仅靠临床表现鉴别较为困难易造成误诊
中枢神经系统新型隐球菌病
中枢神经系统新型隐球菌病中枢神经系统新型隐球菌病，简称新型隐球菌病(Crytococcosis)是由新型隐球菌感染引起的亚急性或慢性深部真菌病。
新型隐球菌可以通过呼吸道、皮肤黏膜、消化道等途径侵入人体，在局部或经血流、淋巴循环侵及中枢神经系统、肺、淋巴腺、骨等组织，从而引起中枢神经系统有更高的亲和性，所以新型隐球菌病中，以中枢神经隐球菌病最常见。
据国内外统计，中枢神经隐球菌病占隐球菌病的70%～80%。
新型隐球菌根据其荚膜抗原性质，分A，B，C，D四个血清型。
本菌侵入中枢神经系统(CNS)后，常表现为脑膜炎或脑膜脑炎，并可进入脑实质内，形成血管炎和肉芽肿。
以往认为本病系罕见病。
但近年来世界各地的报道日渐增多。
其原因是：①使用攻击性更强的抗肿瘤药物;②长期应用广谱抗生素;③接受激素治疗的病人数增加;④获得性免疫缺陷病人数增加;⑤烧伤和外科大手术增多;⑥高价营养液输注;⑦应用更多的导管和修复器械;⑧诊断技术的提高。
一、病因与病理新型隐球菌是一种酵母样霉菌。
广泛地存在于水果、牛奶、草地、蜂巢、鸽粪中。
其中鸽是人感染新型隐球菌的中间宿主，是主要的感染源。
感染的主要途径是呼吸道(因为在正常人体内咽部可以分离出纯菌种，多数病人发病前有呼吸道感染或伴有肺部感染)，当然还可以由皮肤、黏膜或消化道侵入。
人体抵抗力降低成为易感人群。
如白血病、淋巴肉瘤、系统性红斑狼疮、类风湿、肝肾疾患、结核、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的患者，再如接受大量抗生素、激素、抗癌药物、免疫抑制剂治疗的人群。
所以，从某种意义上讲，新型隐球菌是一种条件致病菌。
新型隐球菌的致病因素主要包括以下两个方面：①新型隐球菌的荚膜：这是该菌的主要致病因素。
荚膜可作为屏障，同时可以抑制吞噬细胞调理因子与受体结合;②酚氧化酶：该酶可以氧化酚类，从而在菌的细胞壁形成黑色素沉积，抵抗宿主的杀伤。
新型隐球菌可以侵犯肺、中枢神经系统、骨骼、肾上腺等。
但对中枢神经系统有更高的亲和性，其原因有以下几点：①中枢神经系统封闭性高，机体的免疫机能不易起作用;②有适合的营养物质和气体环境，利于荚膜形成;③该系统代谢最旺盛，葡萄糖含量低，可刺激酚氧化酶活性;④该系统有大量的儿茶酚胺，可作为酚氧化酶的底物;⑤由呼吸道感染的隐球菌经溶菌酶作用而发生变性，致病性减弱，但播散到脑膜后易恢复而致病。
脑脊液常规检查及注意事项
·144·脑脊液常规检查主要是对中枢神经系统疾病开展诊断及预后判断的重要检验项目，包括一般形状检查、细胞计数与分类、蛋白定性与定量、葡萄糖定量测定、微生物学检查、细胞学检查等检查内容，脑脊液由于采集难度较高，操作繁琐，检查结果易受到主观因素影响。
因此，在开展脑脊液常规检查时，需要严格做好质量控制，使实验的准确性、精确性、可靠性有效提高。
本文对脑脊液常规检查的内容及检查过程中相关注意事项进行总结，论述如下。
1标本收集与处理流程开展脑脊液检查时，需要抽取脑脊液3管，收集时应选择带盖的无菌管，以避免外界细菌感染脑脊液。
第一管脑脊液开展细菌培养，第二管脑脊液开展化学检查、免疫学检查，第3管开始一般性状检查、细胞学检查。
脑脊液标本采集后要立即送检，采集至送检时间应控制在1小时以内，避免标本采集后放置过久，脑脊液的性质发生改变，对检验结果准确性造成不良影响。
2一般形状检查标本为血性时主要是由于穿刺损伤出现的新鲜出血，蛛网膜下腔出血的陈旧性出血产生。
想要对出血性状进行检查时，可根据三管试验观察，若前后三管红色逐渐变浅则为新鲜出血，而红色均匀一致则为陈旧性出血。
离心处理后，上清液颜色透明无色者为新鲜出血，而呈现黄色或淡红色时为陈旧性出血。
穿刺损伤出现的新鲜血液，经上清液隐血实验为阴性，而观察红细胞形态与白细胞数时均无改变。
蛛网膜下腔出血开展隐血试验时为阳性，红细胞形态呈现锯齿状、皱缩，白细胞计数可出现反应性增加。
蛛网膜下腔梗阻会因脑脊液长期滞留，检查时，蛋白含量＞1.5g/L，颜色变黄，且蛋白含量越高颜色越黄，达到30~50g/L时，脑脊液可自凝，出现黄色胶冻状。
脑脊液胆红素＞8.5μmol/L时，可被黄染。
穿刺出血后脑脊液可检出红细胞，出现液体微微浑浊，而白细胞数＞300×106/ L时可见明显浑浊。
3细胞计数与分类血性脑脊液发生后应校正白细胞计数，主要是以白细胞与红细胞1：700比例，根据红细胞数量对白细胞进行估算。