甲型肝炎病毒IgM抗体测定.ppt
合集下载
甲型肝炎汇报ppt课件
养成良好的卫生习惯，如 勤洗手、不喝生水、不生 食海鲜等。
饮食卫生
加强食品卫生监管，确保 食品清洁安全，避免食用 被甲肝病毒污染的食物。
疫苗接种
接种甲肝疫苗是预防甲型 肝炎的有效手段，疫苗可 提高人体免疫力，降低感 染风险。
患者教育与心理支持
知识普及
向患者及家属普及甲型肝炎的相 关知识，包括传播途径、症状表
分型
根据临床表现可分为轻型、中型和重型三种类型。轻型患者症状轻微，病程较短；中型患者症状较重，病程较长 ；重型患者症状严重，可出现肝衰竭等严重并发症。
02
诊断与鉴别诊断
诊断依据与方法
01
02
03
流行病学史
发病前2-6周内有不洁饮 食史或与甲型肝炎患者密 切接触史。
临床表现
急性起病，有畏寒、发热 、食欲减退、恶心、疲乏 等症状，部分患者有肝大 、肝区疼痛等体征。
实验室检查
血清抗-HAV IgM阳性， 或抗-HAV IgG急性期阴 性、恢复期阳性，且滴度 升高4倍以上。
鉴别诊断相关疾病
乙型肝炎
与甲型肝炎相似，但乙型肝炎病程较 长，多呈慢性经过，且常有肝外表现 。
丙型肝炎
药物性肝炎
有明确的服药史，停药后肝功能可逐 渐恢复。
主要通过血液传播，临床表现较轻， 易漏诊。
易感人群
人群普遍易感，但儿童、青少年及免疫力低 下者更易感染。感染后可获得持久免疫力， 再次感染少见。
临床表现及分型
临床表现
潜伏期一般为2～6周，平均4周。临床上分为急性黄疸型和无黄疸型两种类型。急性黄疸型患者起病较急，有发 热、乏力、食欲减退、恶心、呕吐等症状，随后出现黄疸、肝肿大及肝功能异常等表现。无黄疸型患者症状较轻 ，仅表现为轻度乏力、食欲减退等，无黄疸表现。
饮食卫生
加强食品卫生监管，确保 食品清洁安全，避免食用 被甲肝病毒污染的食物。
疫苗接种
接种甲肝疫苗是预防甲型 肝炎的有效手段，疫苗可 提高人体免疫力，降低感 染风险。
患者教育与心理支持
知识普及
向患者及家属普及甲型肝炎的相 关知识，包括传播途径、症状表
分型
根据临床表现可分为轻型、中型和重型三种类型。轻型患者症状轻微，病程较短；中型患者症状较重，病程较长 ；重型患者症状严重，可出现肝衰竭等严重并发症。
02
诊断与鉴别诊断
诊断依据与方法
01
02
03
流行病学史
发病前2-6周内有不洁饮 食史或与甲型肝炎患者密 切接触史。
临床表现
急性起病，有畏寒、发热 、食欲减退、恶心、疲乏 等症状，部分患者有肝大 、肝区疼痛等体征。
实验室检查
血清抗-HAV IgM阳性， 或抗-HAV IgG急性期阴 性、恢复期阳性，且滴度 升高4倍以上。
鉴别诊断相关疾病
乙型肝炎
与甲型肝炎相似，但乙型肝炎病程较 长，多呈慢性经过，且常有肝外表现 。
丙型肝炎
药物性肝炎
有明确的服药史，停药后肝功能可逐 渐恢复。
主要通过血液传播，临床表现较轻， 易漏诊。
易感人群
人群普遍易感，但儿童、青少年及免疫力低 下者更易感染。感染后可获得持久免疫力， 再次感染少见。
临床表现及分型
临床表现
潜伏期一般为2～6周，平均4周。临床上分为急性黄疸型和无黄疸型两种类型。急性黄疸型患者起病较急，有发 热、乏力、食欲减退、恶心、呕吐等症状，随后出现黄疸、肝肿大及肝功能异常等表现。无黄疸型患者症状较轻 ，仅表现为轻度乏力、食欲减退等，无黄疸表现。
肝炎病毒抗原抗体检测的PPT课件
21.09.2020
9
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 竞争法测抗体
1.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争 与固相抗原结合。
2.标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈 少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。
3. 抗HBc.抗 Hbe: ELISA一般采用此法。
21.09.2020
10
试剂盒选择
◎卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂， 梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品 检定所检定合格，并贴有防伪标签的产 品，试剂 应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性， 安全性及经济性作出全面的评价。 ◎灵敏度：
1）为试剂检出被检物质的最低量的能力； 2）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性
越少越好） ，取决于包被物的全面性。 3) 每一批新试剂应作实验对照
21.09.2020
11
血液检测HBsAg ELISA阳性结果确证分析 中华医学实践杂志 > 2004年第3卷第5期 >
1.以卫生部临床检验中心的1ng/ml HBsAg质控血清，用正常血清稀释随标 本检测，国产试剂检测灵敏度为0.5ng/ml，进口试剂为0.10ng/ml。
3.其中进口试剂S/CO值分布以>3为大多数，占91.7%，表 明进口试剂灵敏 度高，不易漏检。国产试剂S/CO值分布以1～10之间为多数占65.5%，而 1～0.7区间有11例，占9%，表明试剂灵敏度欠佳。
21.09.2020
4
两对半与美国Abbott试剂的比较
1.本次试验Abbott Axsym系统检测标本中HBsAg结 果最高至210 S/CO，HBsAb结果最高至6000 mIU/mL，HBeAg最高至11600 PEIU/mL，以Abbott 试剂测定标本的S/CO值为横坐标，五家试剂测定 相应标本的OD值为纵坐标，分别绘出了HBsAg、 HBsAb及HBeAg的浓度关系图，故在实际应用中的 许多一步法试剂仍有HOOK效应存在。对于 HBsAg,A、C、D三家试剂存在HOOK效应；对于 HBsAb,A试剂存在HOOK效应；对于HBeAg，D试 剂存在HOOK效应。此结果可供临床检验部门参考。
甲肝抗体IGM的检测课件
ELISA类型
夹心法 间接法测抗体 竞争法 捕获法
捕获法测IgM抗体
血清中针对某些抗原 的特异性 IgM 常 和特异 性IgG同时存在，后者会 干扰IgM 抗体的测定 。 因此测定 IgM 抗 体多用 捕获法
➢ 包被抗体：用抗人μ链抗体包被固相载体上,形成固相抗 人μ链;
➢ 加入病人的血清标本; ➢ 加入特异性抗原试剂;， ➢ 加入针对特异性抗原的酶标抗体， ➢ 加底物显色．
抗HAV总抗体 抗HAV-IgM
临床意义
• 血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(发病后数日)抗体的效价很快升 到峰值并持续较长时间(2-4周),经1-2个月后抗体的效价和阳性率明 显不降,于3个月后消失.因此抗HAVIgM阳性,尤其是效价较高时,表明 处于感染的早期,被公认为早期诊断甲肝的依据,是区别是急性感染 还是慢性感染的有力佐证。
甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 (捕获法)
黄艳
酶联免疫吸附试验（ELISA法）
将抗体(抗原)包被在固相表面后，按不同的步骤加入 待测抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)，充分反应后用洗涤的方 法，使固相上形成的抗原抗体复合物与其他物质分离，洗 去游离的酶标抗体(抗原)，最后加入底物，根据酶对底物 催化的显色反应程度，而对标本中的抗原(抗体)进行定性 或定量。
操作步骤
1．将微孔条固定在支架上，按顺序编号。 2．分别将待测标本，阴、阳性对照100μl（2滴）加入相应的 孔中，设空白对照孔。置37℃20分钟。 3．洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，共 三次，每次洗后均需扣干。 4．每孔加HA·Ag50μl，酶结合物50μl（空白对照除外），振 荡混匀，置37℃20分钟。 5．洗涤：重复上述3 6．显色：每孔加显色剂A液50μl，再加显色剂B液50μl，振荡 混匀，置37℃15分钟。 7.每孔加终止液50μl
甲型肝炎病毒IgM抗体操作步骤
甲型肝炎病毒IgM抗体操作步骤1．检验目的：检测人血清或血浆中的抗HA V-IgM。
2．检测原理：本品系用抗人-IgM（u链）包被的微孔板，配以纯甲型肝炎抗原（HA V-Ag）和酶标记的甲型肝炎病毒抗体（抗HA V-HRP）及其它试剂，采用捕获法原理，检测人血清或血浆中的抗-HA V-IgM。
34．操作：4.1 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有结晶析出应充分溶解）浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
4.2 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
4.3 加样：待测样本用生理盐水作1：1000稀释，每个样本检测孔加入稀释样本100 uL。
设阴阳对照各1孔，每孔加入100 uL，并设空白对照1孔。
4.4 温育：置37℃温育20分钟，室温平衡2分钟。
4.5 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
4.6 加抗原、酶：每孔加入抗原（HA V-Ag）30 uL、酶标记抗体50uL（1滴），充分混匀。
4.7 温育：置37℃温育20分钟。
4.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
4.9 显色：每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置15分钟。
4.10 终止：每孔加终止液50uL，混匀。
4.11 测定：用酶标仪单波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定需设定空白对照一孔，30分钟完成测定，并记录结果）。
5. 结果判定：5.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD均值N×2.1阴性对照OD值低于0.050←0.050计算，高于0.050按实际OD值计算。
5.2结果判定：样品OD值S/C.O.≥1者为HA V-IgM阳性样品OD值S/C.O.＜1者为HA V-IgM阴性5.3 失效：如果阳性对照OD均值小于0.05，则表明不正常的操作或试剂盒已变质损坏。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。
甲型病毒性肝炎演示课件
与甲肝症状相似，但病原体不 同，通过检测特异性抗体和病
毒RNA进行鉴别。
药物性肝损害
某些药物可引起肝损害，表现 为肝功能异常，需详细询问用 药史，结合实验室检查进行鉴 别。
酒精性肝病
长期大量饮酒可导致肝功能异 常，结合饮酒史、肝功能检查 和影像学检查进行鉴别。
自身免疫性肝病
可出现肝功能异常和自身抗体 阳性，需检测相关自身抗体并
症状较轻，主要为全身乏力、食欲减 退、恶心、呕吐、腹胀等症状。肝肿 大、质较软，有压痛和叩痛。此型肝 炎症状轻常被忽视诊断。病程长短不 一，部分患者迁延不愈，反复发作， 可发展为慢性肝炎和重型肝炎。
临床表现及分型
• 瘀胆型：旧称毛细胆管性肝炎，现证明其原发病变在肝细胞泌胆机制而不在毛细胆管，故原称病名已不用。主要是急性甲 型肝炎引起的肝细胞裂解导致胆汁分泌下降，血液中胆红素水平上升和胆酸浓度增加，引起黄疸和全身皮肤瘙痒。起病类 似急性黄疸型肝炎，但消化道症状较轻。该病病程较长，黄疸至少持续3～6个月。本型为黄疸型的一种特殊表现，临床特 点是胃肠道症状较轻，发热时间较长，肝内梗阻性黄疸持续较久（数周至数月），可有腹胀、皮肤瘙痒、一过性大便颜色 变浅，尿色深呈浓茶色，肝肿大、有压痛。需与其他肝内、外梗阻性黄疸鉴别。
免疫调节治疗
通过调节患者免疫系统功能，增强机体抗病毒能力，已成为甲肝治疗的新方向。例如，采 用免疫调节剂、细胞因子等治疗手段，可改善患者免疫功能，降低病毒载量。
肝移植治疗
对于严重肝功能衰竭的患者，肝移植是一种有效的治疗手段。随着移植技术的不断发展和 完善，肝移植在甲肝治疗中的应用前景广阔。
未来发展趋势预测
流行病学特点
地区分布
全球范围内均有分布，但在发展 中国家尤为常见。
毒RNA进行鉴别。
药物性肝损害
某些药物可引起肝损害，表现 为肝功能异常，需详细询问用 药史，结合实验室检查进行鉴 别。
酒精性肝病
长期大量饮酒可导致肝功能异 常，结合饮酒史、肝功能检查 和影像学检查进行鉴别。
自身免疫性肝病
可出现肝功能异常和自身抗体 阳性，需检测相关自身抗体并
症状较轻，主要为全身乏力、食欲减 退、恶心、呕吐、腹胀等症状。肝肿 大、质较软，有压痛和叩痛。此型肝 炎症状轻常被忽视诊断。病程长短不 一，部分患者迁延不愈，反复发作， 可发展为慢性肝炎和重型肝炎。
临床表现及分型
• 瘀胆型：旧称毛细胆管性肝炎，现证明其原发病变在肝细胞泌胆机制而不在毛细胆管，故原称病名已不用。主要是急性甲 型肝炎引起的肝细胞裂解导致胆汁分泌下降，血液中胆红素水平上升和胆酸浓度增加，引起黄疸和全身皮肤瘙痒。起病类 似急性黄疸型肝炎，但消化道症状较轻。该病病程较长，黄疸至少持续3～6个月。本型为黄疸型的一种特殊表现，临床特 点是胃肠道症状较轻，发热时间较长，肝内梗阻性黄疸持续较久（数周至数月），可有腹胀、皮肤瘙痒、一过性大便颜色 变浅，尿色深呈浓茶色，肝肿大、有压痛。需与其他肝内、外梗阻性黄疸鉴别。
免疫调节治疗
通过调节患者免疫系统功能，增强机体抗病毒能力，已成为甲肝治疗的新方向。例如，采 用免疫调节剂、细胞因子等治疗手段，可改善患者免疫功能，降低病毒载量。
肝移植治疗
对于严重肝功能衰竭的患者，肝移植是一种有效的治疗手段。随着移植技术的不断发展和 完善，肝移植在甲肝治疗中的应用前景广阔。
未来发展趋势预测
流行病学特点
地区分布
全球范围内均有分布，但在发展 中国家尤为常见。
甲型肝炎 PPT课件
ppt课件
4
直径27－28nm，无包膜，球形，32个壳粒组成的20面体
ppt课件
5
单股正链RNA，7500个核苷酸，不同 HAV毒株具有相同的序列，可用此区的 核苷酸序列作探针，进行核酸杂交，或 用RT-PCR检测标本中的HAV 迄今为止，世界各地HAV一个血清型。 抗体: 抗HAV-IgM，起病后3～6个月之内， 近期感染的标志；抗HAV-IgG，可保存 多年，既往感染的标志
ppt课件
26
慢加急性（亚急性）肝衰竭
（acute-on-chronic liver failure, ACLF）
在慢性肝病基础上出现的急性肝功能失代偿
慢性肝衰竭（chronic liver failure, CLF）
在肝硬化基础上，肝功能进行性减退导致的以腹水或门脉 高压、凝血功能障碍和肝性脑病等为主要表现的慢性肝功能 失代偿
ppt课件
46
肝衰竭：综合支持疗法
热卡:1800-2200佧/天，液体 1200ml---2000ml左右 注意电解质酸碱平衡 补充蛋白及血浆 NH3中毒 抗生素
ppt课件 47
预防和治疗出血 胃粘膜保护药 输凝血酶原复合物 鲜血浆，鲜血，纤维蛋白原等 促进肝细胞增生的药物 防治肾功能不全： 多巴胺、前列腺素E1等
高，患者多因脑水肿、脑疝、消化道出血、肝肾功能衰竭等死亡，
病程不超过3周。
ppt课件
25
亚急性肝衰竭（subacute liver failure, SALF）:
又称亚急性肝坏死
起病较急，发病15d～26周内出现肝衰竭症候群
脑病型: 首先出现Ⅱ度以上肝性脑病者
腹水型: 首先出现腹水及相关症候者 晚期可有难治性并发症: 脑水肿，消化道大出血，严重感染， 电解质紊乱及酸碱平衡失调，肝肾综合征
病毒性肝炎血清学检测的基础与实践PPT课件
HBsAg 抗- HBeAg 抗- 抗-
HBs
HBe HBc
临床意义
+
-
+
-
+
感染、传染性强
+
-
-
+
+
感染、有传染性
+
-
-
+
-
感染、有传染性
+
-
-
-
+
感染、有传染性
+
-
+
-
-
感染、传染性强
+
+ +/- +/- +/- 感染、有传染性、病毒
可能变异
+
-
-
-
- 感染潜伏期、有传染性
+
-
-
-
- 接种疫苗后、无传染性
Fab段
CH1
CL s-s
s-s
s-s
CH2 s-s
CH3 Fc段
CDR1 CDR2 CDR3
Fab段
IgM是五聚体，与抗原具有5或10价结合力。
Fab：fragment antigen-binding CDR：complementarity determining region
抗体产生过程简图
间接ELISA检测抗体
HBV双层壳膜结构，外层是HBsAg，内层是HBcAg
HBV基因与基因产物
pre-S1 pre-S1
pre-S2 pre-S2
ORF S
HBsAg
HBcAg ORF C HBeAg pre-C
- + 5’ 5’
ORF X HBxAg
教学查房甲肝PPT课件
黄疸期 患者皮肤、巩膜黄染在发病后10天自觉症状加 重。患者病程中未出现肝区痛，肝脏肿大，无压痛和叩 痛，未出现脾肿大。出现肝功能明显异常。会持续2～6 周，此患者至今3周多。
19
六、实验室检查
1血尿常规：外周血常规白细胞计数一般减少或在正 常范围，可伴有轻度淋巴细胞或单核细胞比例增高 ，病程早期尿中尿胆原增加，黄疸期尿胆红素及尿 胆原均增加。肝功能检查以血清ALT、AST、总胆红 素水平检测最为有用，有研究显示甲型肝炎患者的 ALT平均峰值可达1952IU/L,AST可达1442IU/L,多数
及炝虾等水产品被彻底纳入“禁食”行列。
4
定义
甲型病毒性肝炎，简称甲型肝炎、甲肝，是由 甲型肝炎病毒（HAV）引起的，以肝脏炎症病变 为主的传染病，主要通过粪-口途径传播，临床上 以疲乏，食欲减退，肝肿大，肝功能异常为主要 表现，部分病例出现黄疸，主要表现为急性肝炎 ，无症状感染者常见。任何年龄均可患本病，但 主要为儿童和青少年。成人甲肝的临床症状一般 较儿童为重。冬春季节常是甲肝发病的高峰期。 本病病程呈自限性，无慢性化，引起急性重型肝 炎者极为少见，随着灭活疫苗在全世界的使用， 甲型肝炎的流行已得到有效的控制。此次教学查房
性感染。 1.急性黄疸型 （1）潜伏期 甲型肝炎潜伏期为15～45日，平均持续30天。患者在此期常无自 觉症状，但在潜伏期后期，大约感染25天以后，粪便中有大量的HAV排出，潜伏 期的患者的传染性最强。 （2）黄疸前期 起病急，急数患者有发热畏寒，体温在38～39℃之间。平均热 程3日，少数达5日，全身乏力、食欲不振、厌油、恶心、呕吐、上腹部饱胀感 或轻度腹泻。少数患者以上呼吸道感染症状为主要表现，尿色逐渐加深呈浓茶 色。本期持续5～7日。 （3）黄疸期 自觉症状好转，热退后黄疸出现，可见巩膜、皮肤不同程度黄染 ，肝区痛，肝脏肿大，有压痛和叩痛，部分患者有脾肿大。本期可有短期大便 颜色变浅，皮肤瘙痒。肝功能明显异常。持续2～6周。 （4）恢复期 黄疸逐渐消退，症状好转以至消失，肝脾回缩到正常，肝功能逐 渐恢复正常，IgG介导的免疫系统建立。本期持续2周至4月，平均1个月。
19
六、实验室检查
1血尿常规：外周血常规白细胞计数一般减少或在正 常范围，可伴有轻度淋巴细胞或单核细胞比例增高 ，病程早期尿中尿胆原增加，黄疸期尿胆红素及尿 胆原均增加。肝功能检查以血清ALT、AST、总胆红 素水平检测最为有用，有研究显示甲型肝炎患者的 ALT平均峰值可达1952IU/L,AST可达1442IU/L,多数
及炝虾等水产品被彻底纳入“禁食”行列。
4
定义
甲型病毒性肝炎，简称甲型肝炎、甲肝，是由 甲型肝炎病毒（HAV）引起的，以肝脏炎症病变 为主的传染病，主要通过粪-口途径传播，临床上 以疲乏，食欲减退，肝肿大，肝功能异常为主要 表现，部分病例出现黄疸，主要表现为急性肝炎 ，无症状感染者常见。任何年龄均可患本病，但 主要为儿童和青少年。成人甲肝的临床症状一般 较儿童为重。冬春季节常是甲肝发病的高峰期。 本病病程呈自限性，无慢性化，引起急性重型肝 炎者极为少见，随着灭活疫苗在全世界的使用， 甲型肝炎的流行已得到有效的控制。此次教学查房
性感染。 1.急性黄疸型 （1）潜伏期 甲型肝炎潜伏期为15～45日，平均持续30天。患者在此期常无自 觉症状，但在潜伏期后期，大约感染25天以后，粪便中有大量的HAV排出，潜伏 期的患者的传染性最强。 （2）黄疸前期 起病急，急数患者有发热畏寒，体温在38～39℃之间。平均热 程3日，少数达5日，全身乏力、食欲不振、厌油、恶心、呕吐、上腹部饱胀感 或轻度腹泻。少数患者以上呼吸道感染症状为主要表现，尿色逐渐加深呈浓茶 色。本期持续5～7日。 （3）黄疸期 自觉症状好转，热退后黄疸出现，可见巩膜、皮肤不同程度黄染 ，肝区痛，肝脏肿大，有压痛和叩痛，部分患者有脾肿大。本期可有短期大便 颜色变浅，皮肤瘙痒。肝功能明显异常。持续2～6周。 （4）恢复期 黄疸逐渐消退，症状好转以至消失，肝脾回缩到正常，肝功能逐 渐恢复正常，IgG介导的免疫系统建立。本期持续2周至4月，平均1个月。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
ELISA类型
• 夹心法
• 间接法测抗体
• 竞争法 • 捕获法
捕获法测IgM抗体
血清中针对某些 抗原的特异性IgM 常和特异性IgG同 时存在，后者会干 扰IgM抗体的测定。 因此测定IgM抗本 多用捕获法。
• （1）包被抗体：用抗人μ 链抗体包被 固相载体上,形成固相抗人μ 链; • （2）加入病人的血清标本; • （3）加入特异性抗原试剂;， • （4）加入针对特异性抗原的酶标抗体，
• （5）加底物显色．来自免疫球蛋白的结构一、基本结构：四肽链结构 由两条相同的轻链 （Light Chain）和两 条相同的重链（Heavy chain）通过链间二硫 键连结形成。 分子式为：H2L2 四条肽链两端游离的 NH2和COOH方向一致 分别命名为N端和C端
（一）轻链和重链
轻链（L链） κ链 轻链决定型别 κ型 正常人κ：λ≈2 ：1 λ链 λ型
结果判定
• 酶标仪读数：450nm波长630nm副波长读 数， • 临界值=阴性对照孔 OD 均值 × 2.1( 阴 性对照 OD 小于 0.05 以 0.05 计算) • 结果判定: S/CO≥1 为 HAV-IgM 阳性， • S/CO<1为 HAV-IgM 阴性。
Cut off value(临界值)
试剂盒组成
• • • • • • 1 抗-μ 链包被干板条 4×12 孔 2 抗-HAVIgM 阴性对照 1 ml×1 瓶 3 抗-HAVIgM 阳性对照 1 ml×1 瓶 4 HA-Ag 2.6 ml×1 瓶 5 酶结合物 2.6 ml×1 瓶 6浓缩洗涤液 20 ml×1 瓶（用蒸馏水 1： 20 稀释） • 7 显色剂 A 3 ml×1 瓶 • 8 显色剂 B 3 ml×1 瓶
甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 (捕获法)
酶联免疫吸附试验（ELISA法）
• 将抗体(抗原)包被在固相表面后，按不同 的步骤加入待测抗原(抗体)和酶标抗体 (抗原)，充分反应后用洗涤的方法，使固 相上形成的抗原抗体复合物与其他物质 分离，洗去游离的酶标抗体(抗原)，最后 加入底物，根据酶对底物催化的显色反 应程度，而对标本中的抗原(抗体)进行定 性或定量。
思考题
• 血清的类风湿因子及其它非特异 IGM是影响捕获法检测中的主要 物质，如何避免这些物质的影响？
Cut off value(临界值)：阴阳性判断值，简称 CO值。 夹心法：若S/CO值>1，为阳性； S/CO值<1，为阴性； 竞争抑制法：若S/CO值<1，为阳性； S/CO值>1，为阴性。
HAV HBV 肝炎病毒---- HCV HDV HEV 其他（HGV、TTV） （SEN、TLMV）
甲型肝炎急性期血清标志物出现过程
重链（H链）:根据其抗原性的差异，人类Ig的H链分 为 链 链 链 链 链 重链决定Ig类别 IgG IgA IgM IgD IgE
捕获法
• 主要用于 血清中某种抗体亚型成分（如 IgM）的测定。
实验原理
• 用抗人μ链抗体包被酶标板，用以捕获血 清中 IgM 类抗体，然后用特异性 HAVAg 与 IgM 抗体结合，再加酶标抗 HAV 抗体， 最后加底物显色，显色深浅与 HAVIgM 的含量成正相关。
要点： 1. HAV的传播途径(粪—口) 2. HAV的潜伏期(30天±2周) 3. 血清标志物出现的规律 4. 免疫学检测指标—HAV Ag 抗HAV总抗体 抗HAV-IgM
临床意义
• 血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(发病后数 日),抗体的效价很快升到峰值并持续较长时间 (2-4周),经1-2个月后抗体的效价和阳性率明显 不降,于3个月后消失.因此抗HAVIgM阳性,尤其 是效价较高时,表明处于感染的早期,被公认为 早期诊断甲肝的依据,是区别是急性感染还是慢 性感染的有力佐证。
• 9 终止液 3 ml×1瓶
操作步骤
• 1．将微孔条固定在支架上，按顺序编号。 • 2．分别将待测标本，阴、阳性对照100μl（2滴） 加入相应的孔中，设空白对照孔。置37℃20分 钟。 • 3 ．洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔， 静置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。 • 4．每孔加HA· Ag50μl，酶结合物50μl（空白对 照除外），振荡混匀，置37℃20分钟。 • 5．洗涤：重复上述3 • 6．显色：每孔加显色剂A液50μl，再加显色剂 B液50μl，振荡混匀，置37℃15分钟。 • 7.每孔加终止液50μl