单核细胞增生李斯特菌
单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探
单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性杆菌，可以引起食物中毒和严重的感染疾病。
在感染宿主细胞过程中，李斯特菌可以通过分泌多种类型的蛋白质来促进其内化和生存。
其中，李斯特菌内化素G（Internalin G）是一个被广泛研究的蛋白质，被认为在李斯特菌的侵袭性中起着重要的作用。
李斯特菌内化素G是一种表面蛋白，能够结合并激活宿主单核细胞的内化过程。
内化素G的结构特点包括一个N端的信号肽序列、多个内源性的抗原结构域和一个C端的细胞外膜锚定序列。
根据先前的研究，内化素G可以在静态环境中与单核细胞表面的受体相互作用，进而激活细胞内信号通路，并引导细胞吞噬李斯特菌。
经过多年的研究，科学家们逐渐揭示了内化素G在单核细胞增生中的功能。
研究发现，内化素G与单核细胞膜上的受体TLR2（Toll-like receptor 2）结合后，可以激活多种信号传导通路，包括MAPK（mitogen-activated protein kinase）通路和NF-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells）通路。
通过这些通路的激活，内化素G可以诱导单核细胞的增殖和巨噬细胞的分化，并促进细胞对病原体的内化和清除。
内化素G的功能不仅局限于单核细胞的增殖和巨噬细胞的分化，还涉及到炎症反应的调节。
研究发现，内化素G可以诱导多种炎症因子的产生，如IL-1β（interleukin-1 beta）、IL-6（interleukin-6）和TNF-α（tumor necrosis factor-alpha），从而参与抗菌活性和免疫调节。
此外，内化素G还可以激活多种细胞因子和趋化因子的产生，如IFN-γ（interferon-gamma）、IL-8（interleukin-8）和MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1），进一步增强单核细胞和巨噬细胞对感染的反应和防御能力。
单核增生李斯特菌形态特征
单核增生李斯特菌形态特征单核增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性、无芽孢、无鞭毛、不能运动、可产生荚膜的细菌。
它是一种人畜共患病原体，可导致食物中毒、脑膜炎、败血症等疾病。
本文将详细介绍单核增生李斯特菌的形态特征。
一、细菌的大小和形状单核增生李斯特菌的个体大小不一，一般为（1-2）μm×（0.5-1.5）μm，有时可达2μm×1μm。
其形状为短杆状或略呈球形，有时可见到丝状或连成链状。
二、细菌的细胞结构单核增生李斯特菌的细胞结构与其他革兰氏阳性菌相似，由细胞壁、细胞膜、细胞质和核质构成。
其细胞壁厚约20-30nm，表面有脂多糖（LPS）层，可引起强烈的炎症反应。
细胞膜由脂蛋白和脂质双层组成，可将细胞与外界环境隔开，维持细菌内部的稳定环境。
细胞质内有核糖体、核蛋白体和核酸等重要成分。
核质是细菌遗传物质，由双螺旋DNA和蛋白质组成。
三、细菌的繁殖方式单核增生李斯特菌的繁殖方式是二分裂，分裂时将遗传物质平均分配给两个子代细胞，完成一次分裂需要约20分钟。
在适宜的生长条件下，单核增生李斯特菌可形成芽孢，但该芽孢无繁殖能力，仅作为休眠形式存在。
四、细菌的荚膜单核增生李斯特菌在生长过程中可产生一层荚膜，主要由多糖组成。
荚膜对细菌具有保护作用，可增强其抗逆性，有利于细菌在自然环境中的存活。
根据荚膜的不同，单核增生李斯特菌可分为13个血清型，其中最常见的是血清型1/2a和血清型4b。
五、细菌的运动能力单核增生李斯特菌不能运动，也没有鞭毛，因此不能自主移动。
这与其他革兰氏阳性菌如肺炎链球菌等有所不同。
六、细菌的抵抗力单核增生李斯特菌对热和干燥具有较强的抵抗力，在25-30℃之间能生长良好，4℃下可存活数周，在冰冻食品中能存活数月。
它对酸性环境有一定耐受能力，能在pH 4.2-9.3范围内生长。
此外，单核增生李斯特菌对多种抗生素和消毒剂具有抗性，如对青霉素G、氨苄西林、红霉素、四环素等具有抗性。
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究引言：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种潜伏在食品中常见的致病菌，能引起严重的食物中毒，威胁着人类的健康与生命安全。
因此，研究和发展一种快速、高效的检测技术对于食品安全至关重要。
本文旨在探讨目前关于单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术的研究进展，并为进一步的研究和应用提供参考。
一、单核细胞增生性李斯特菌简介单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，能在广泛的温度（0-45℃）和pH（4.4-9.6）范围内生长，且具有金属抗药性。
在食品中，该菌可以通过肉类、蔬菜和奶制品等途径传播，使其成为食品安全的重要隐患之一。
由于该菌对常规的煮沸和加热处理具有一定的抵抗能力，因此需借助有效的检测技术对其进行快速、准确的检测。
二、传统检测方法的局限性目前常用的单核细胞增生性李斯特菌检测方法主要包括传统培养方法、蛋白酶结合效应（ELISA）和分子生物学方法等。
然而，这些方法存在着以下局限性：1. 传统培养方法耗时长，需要较长的培养时间才能获得结果，无法快速检测；2. ELISA方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其需要复杂的样品处理和实验步骤，使得检测过程繁琐；3. 分子生物学方法虽然能够提供较快的检测结果，但其仪器成本高，技术要求较高，限制了其在实际应用中的推广。
三、快速检测技术的研究进展随着科学技术的发展，研究人员不断探索和开发更为快速、准确的单核细胞增生性李斯特菌检测技术。
以下是几种常见的快速检测技术：1. 荧光定量聚合酶链反应（qPCR）技术：该技术以其高效、精确和快速的特点，被广泛应用于单核细胞增生性李斯特菌的检测。
qPCR技术可以快速扩增和定量样品中的特定基因片段，结合荧光定量技术实现李斯特菌的快速检测和定量。
2. 微生物芯片技术：微生物芯片是基于生物芯片技术的一种新型检测平台，可实现对多种菌种的快速识别和检测。
单核细胞增生李斯特氏菌MPN计数法
二、单核细胞增生李斯特氏菌定性检验-GB 4789.30-2016 第一法
※初筛 自选择性琼脂平板上分别挑取3个~5个典型或可疑菌落，分别接种木糖、
鼠李糖发酵管，于36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，同时在TSA-YE平板上划线，于 36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h，然后选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续 进行鉴定。
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一、单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性
※生化特征 ※单核细胞增生李斯特氏菌(L. monocytogenes）37 ℃、24 h培养,可以 分解葡萄糖、果糖、海藻糖、水杨苷、鼠李糖，产酸不产气；不分解棉 子糖、肌醇、菊淀粉、卫茅醇、侧金盏花醇、木糖和甘露醇。MR和VP 试验阳性，不产生靛基质，硫化氢阴性。
※ 确认实验-鉴定 ：染色镜检、动力试验、生化鉴定、溶血试验、协同溶血试 验cAMP(可选项目)
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三、单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法-GB 4789.30-2016 第二法
※典型菌落计数以及对应的计算公式的应用 ※计数范围要求：选择有典型菌落的平板，菌落数合计在15 CFU~150 CFU之间的平板，计数典型菌落数。 ※计算公式1计算公式2.
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三、单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法-GB 4789.30-2016 第二法
※样品的接种 ※根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜连续稀释度的样品匀 液(液体样品可包括原液)，每个稀释度的样品匀液分别吸取1 mL以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL的接种量分别加入3块李斯特氏菌显色平板，用 无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。
※小鼠毒力试验(可选项目)
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二、单核细胞增生李斯特氏菌定性检验-GB 4789.30-2016 第一法
单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么
龙源期刊网 单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么作者：周林来源：《学习与科普》2019年第31期单核细胞增生李斯特菌包含在食源性致病菌范围当中。
就目前来看，免疫学检测方法和分子学检测方法是很多单增李斯特菌检测方法中使用最频繁的两种方法。
免疫学检测方法具有操作简便、时间短的特点，然而其非常依赖高特异性的抗体，结果容易出现失误，需要对检测结果进行详细判定。
和免疫学检测法相比，分子学检测方法具有灵敏度高、省时省力等特点，然而分子学检测方法在使用过程中需要较多的操作经验，同时不能在大批量检测中应用。
一、单核细胞增生李斯特菌概述（一）生物学特征单核细胞增生李斯特菌是一种革兰阳性短杆菌，其对营养的需求量较少，生长温度通常最低不能低于2摄氏度，最高不能超过42摄氏度，同时可以在弱酸、弱碱和6.5%NaCl肉汤中得到快速成长，并且能够形成β-溶血。
在其生长过程中还可以发酵出很多种糖类物质，按照O抗原以及H抗原能够分解成十三中血清型，其中1/2a与4b这两种类型在致病菌株中的占比最大。
（二）污染源及流行病学单核细胞增生李斯特菌是自然界中常见的一种致病菌，抗冻能力非常强，其主要传播路径是通过粪-口这种方式进行。
健康人粪便中的单核细胞增生李斯特菌携带率通常为0.6%至16.0%，然而奶制品、水产品以及家禽中均携带相应的单核细胞增生李斯特菌。
另外，单核细胞增生李斯特菌通过胎盘、黏膜、性以及产道鞥部位都可以进入到体内，从而导致感染。
单核细胞增生李斯特菌的致病性与其具有的毒作用、宿主的免疫状况以及年龄具有密不可分的关系，宿主的细胞免疫可以有效的解除单核细胞增生李斯特菌中存在的病菌。
各种免疫力弱的人群都属于易感人群，比如新生儿、四十岁以上的成人等。
健康成人感染后会出现和感冒相似的情况，然而其他免疫力功能较低的人可能会出现更加严重的症状，乃至会直接死亡。
二、相关检测技术（一）聚合酶链反应技术就目前来看，聚合酶链反应技术得到了广泛的普及与运用。
单核细胞增生李斯特氏菌
羊肝浸出液琼脂上的 菌落：圆形，光滑， 奶油状，稍扁平，用 透过光观察是透明的。
在5-7%的血平板 上，菌落通常也不大， 灰白色，刺种血平板 培养后可产生窄小的 β-溶血环。
• 该菌生长需要B族维生素（生长素、核黄素、 硫胺素和硫辛酸）和氨基酸。
• 葡萄糖能促进所有的李斯特氏菌生长并生成 L(+)乳酸
五、致病性
• 该菌进入人体后是 否发病，与李斯特 氏菌的毒力和宿主 的年龄、免疫状态 有关
• 无免疫缺陷的未怀 孕的健康人对单核 细胞李斯特氏菌感 染具有很强的抵抗 力
• 很少有证据表明这 样的健康人能够感 染此菌
电镜下的单核细胞增生李斯特氏菌
抵抗力
• 该菌对理化因素抵抗力较强。 在土壤、粪 便、青储饲料和干草内能长期存活。
• 针对李斯特菌病疫情，加拿大卫生管理局给出了 食品安全的8项建议：
• 1.砧板的卫生状况很重要，要有专门切肉、蔬菜、 家禽、海鲜的砧板和刀，且每次烹饪完毕后一定 要对刀具与砧板进行全面清洁。
• 清洗盖子，开罐器在每次使用后也应该消毒。
• 3.将一些小型器具如食品加工机、绞肉机及搅拌 机分开，使用后进行全面清洁与消毒。
• 目前，中国输往欧、美、日的肉类产品， 李斯特菌是应检项目
• 2001年11月以来，中国质检部门多次从美国、加 拿大、法国、爱尔兰、比利时、丹麦等二十多家 肉类加工厂进口的猪腰、猪肚、猪耳、小排等三 十多批近千吨猪副产品中检出单增李斯特菌、沙 门氏菌等致病菌。
冰箱中的“杀手”！？
• 冰箱在给人们生活带来极大方便的同时，却也伴 随着健康的隐患。
• 近年来由于吃放在冰箱里的食物而闹肚子、得胃 炎，甚至患上肺炎的人数在不断增加。
• 更为恐怖的是，无锡市疾控中心食品污染物监测 点在冰箱食物中竟然发现了一种致命细菌——李 斯特氏菌，该细菌喜冷不爱热，在低温环境中可 大量繁殖，如果人被感染，将有三成的病死率， 且大多数都是老人。
单核细胞增生李斯特菌检验
血清学分型:
Lm是根据O抗原和H抗原的差异进行血清 学分型.虽然Lm有16种血清型,1/2a、1/2b 、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、 4d、4e、5、6a、6b和7,但只有3种血清型 <1/2a、1/2b、4b>可引起疾病.从食品和患 者中分离的菌株95％以上是1/2a,1/2b,1/2c 和4b等血清型,而3a、3b、3c、4a、4c、4e 、4d和7等血清型在食品中非常少见,也没 有引起李斯特菌病的报道.
溶血反应 ＋ － ＋ － ＋ －
协同溶血
葡萄糖
麦芽糖
MR-VP
甘露醇
鼠李糖
木糖
七叶苷
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动力试验
将TSA-YE平板上的疑似菌落穿刺接种到SIM培 养基中,于30℃培养24h-48h,李斯特菌有动力, 呈伞状生长.
PCR检测方法：〔1取1ml被检样李斯特氏 菌增菌肉汤用于提取DNA的,模板DNA的 制备, 根据试剂盒说明书进行；〔2PCR反 应体系：20μl .
H2O<二馏灭菌水>12.8μl,
10×buffer2.0μl,
Mg2+<25mol/l> 2.0μl,4×dNTP<10mmol/ml> 1.6μl,Primer<30pmol/μl>各0.25μl,
食品中单增李斯特菌检测
食品中单增李斯特菌检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测实验目的1）了解单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性。
2）熟悉单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定方法。
基本原理单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)归属于李斯特菌属(Listeria)。
单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中唯一对人致病的病菌。
李斯特菌是一种细胞内寄生菌，它不仅可能存在于肉类产品中，也可能存在于乳制品、蔬菜、沙拉及海产品等日常食物里面。
此菌广泛分布于自然界中，在土壤、排污下水、地表水、青贮饲料、烂菜中均可分离到。
人也可作为无症状携带者。
据报道，健康人粪便中该菌的携带率为0.6％～16％，4％～8％的水产品、5％～10％的奶及其制品、30％以上的肉制品及15％以上的家禽均被该菌污染。
李斯特菌能在1～45℃的温度下生存，能在家用电冰箱的冷藏室内较长时间生长、繁殖。
该菌为革兰氏阳性短杆菌，有的菌体略弯曲，两端钝圆，大小约为0.4～0.5μm ′0.5～2.0μm。
多单在，有时是V字型排列。
无芽孢，不产生荚膜。
在陈旧培养物中或粗糙型菌落的菌体长度可达6～20μm 或更长的丝状。
在20～25℃培养时可产生2～4根鞭毛而运动，但在37℃培养时鞭毛发育不良，无运动性。
本菌需氧或兼性厌氧，生长温度为1～45℃，最适温度为30～37℃。
对营养要求不高，可在普通琼脂培养基中生长，但在血琼脂培养基或胰酪胴琼脂上生长更好。
加入0.2％～1％(W/V)的葡萄糖及2％～3％(V/V)的甘油生长更佳。
在含1%(W/V)NaCl的复合培养基中能生长。
在4℃可缓慢增殖，形成菌落约需7d。
在液体培养基中培养18～24h后，肉汤呈轻度均匀混浊，数天后形成粘稠沉淀附着于管底，摇动时沉淀呈螺旋状，继续培养可形成颗粒状沉淀。
不形成菌环、菌膜。
在营养琼脂上，光滑(S)型可形成直径0.5～1.5mm、圆形、露滴状半透明、低隆起、边缘整齐、表面有细致纹理的蓝灰色菌落，斜射光照射时，菌落呈特征性蓝绿光泽。
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单核细胞增生李斯特菌
形态特征：
①革兰氏阳性的类球形杆菌
②大小约为0.4~0.5µm x 0.5～2.0µm
③两端钝圆
④在有些培养基中稍弯，单个、成V形或成对平行排列
⑤在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性
⑥兼性厌氧，无芽孢，一般不产生荚膜
⑦在20~25℃时以4根周毛运动，在37℃时只有较少的鞭毛或1根鞭毛
培养特性：
①需氧和兼性厌氧
②生长范围为2-42℃
③最适温度为35-37℃
④pH中性至弱碱性（pH9.6）
⑤在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。
⑥在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。
⑦在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
⑧在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。
⑨在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
生化特性：（甘露醇、木糖为阴性，其他为阳）
1.该菌触酶阳性，氧化酶阴性。
2.发酵多种糖类，产酸不产气。
发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。
不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。
3.不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。
4.吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。
5.MR-VP试验和精氨酸水解阳性。
生化试验：
①动力试验+
原理：有动力的细菌扩散生长，培养基浑浊，无动力的细菌培养基澄清。
（结果：有动力，呈伞状生长，底为弯月牙形）
②过氧化氢酶试验（触酶试验）+
原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。
（结果：汽包产生为+）
应用：葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
③MR-VP试验+
原理：葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸→pH4以下→（+甲基红指示剂）→培养基变红
V-P试验：葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇(强碱+V-P试剂)→二乙酰(胍基)→培养基变红
糖发酵试验
葡萄糖和麦芽糖发酵试验+
原理：有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸产气，培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（－），培养基仍为紫（蓝）色。
（结果：黄+）
七叶苷水解试验+
原理：某些细菌（如类肠球菌）可水解七叶苷，生成葡萄糖和七叶素。
七叶素可与培养基中的柠檬酸铁试剂的二价铁离子反应生成黑色化
合物沉淀，是培养基变黑。
（结果：黑+，黄-）
甘露醇发酵试验-
原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，有的能分解多种糖类，有的仅能分解1~2种糖类，还有的不能分解。
细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点鉴别细菌。
（结果：黄+，绿-)
木糖发酵试验-
原理：某些细菌能利用D-木糖作为碳源。
木糖本身有抗细菌和霉菌的功能，尤其是革兰氏阴性菌及白色念珠菌。
(结果：黄+）
鼠李糖发酵试验+
原理：鼠李糖在细菌中以多糖或脂多糖存在与细胞表面。
（结果：黄+）
24h
1℃，。