单核细胞增生李斯特菌检验PPT课件
李斯特菌感染PPT课件
基本概述
• 李斯特菌（学名：Listeria monocytogenes），又名单核球增多性 李斯特菌、李氏菌，是一种兼性厌氧 细菌，为李斯特菌症的病原体。李斯 特菌是革兰氏阳性菌，属厚壁菌门， 取名自约瑟夫·李斯特。它主要以食 物为传染媒介，是最致命的食源性病 原体之一 。
• 3．溶血素，即李斯特杆菌溶血素O，可以从 培养物上清液中获得，为SH活化的细胞溶素， 有 α和β两种，为U
2019/7/11
临床表现
1、脑膜炎是本病最常见的表现形式。起病 可急可缓。新生儿可在通过产道时或产 后被感染，产后1～3周发病，主要表现 为拒食、多哭、易激惹、高热、恶心、 呕吐、嗜睡、惊厥、囟门突出及脑膜刺 激征。成人患者常表现高热、头痛、恶 心、呕吐、颈强直、昏迷，个别病人还 可出现抽搐、偏瘫、脑疝。白细胞增高 以粒细胞为主，偶见单核细胞增高。脑 脊液改变与其他化脓性脑膜炎相似。
特点
• 1、季节性特点：春季可发生，而发病 率在夏、秋季呈季节性增长。
• 2、分布广：存在于土壤、水域(地表 水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、 鱼、鸟、野生动物、家禽。
• 3、生存环境可塑性大：能在2-42℃下 生存(也有报道0℃能缓慢生长)能在冰 箱冷藏室内较长时间生长繁殖。
• 4．适应范围大：酸性、碱性条件下都 适应。
防控措施
• 1、李斯特菌通常存在于潮湿区域和辅助 清洗设备中，例如：地面、排水沟、洗 涤池、天花板、冷凝水、拖把、海绵、 盐水冷冻设备及剥皮机。因此，控制李 斯特氏菌的数量对减少深加工过程中的 污染是很有必要的。
• 4、孕妇患李斯特氏菌病后可能表现为亚 临床型，亦可有急性发热而与流感相似， 有时又类似肾盂肾炎。病情多不严重，但 妊娠5个月后发病者，胎儿可能受严重影 响。
李斯特菌感染ppt课件
人主要通过食入软奶酪、未充分加热 的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、 巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、 卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅 饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的 病例是由被污染的食品引起的。
2、该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进 入体内而造成感染，孕妇感染后通过 胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于 阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性 接触也是本病传播的可能途径，且有 上升趋势。
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流行病 学
1、单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中， 不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在 土壤、地表水、污水、废水、植物、青 储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动 物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的 途径进行传播。据报道，健康人粪便中 单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70% 的人可短期带菌，4-8%的水产品、510%的奶及其产品、30%以上的肉制品 及15%以上的家禽均被该菌污染。
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潜伏期
在感染后3-70天出现症状，健康成人可出现 轻微类似流感症状，易感者突然发热，剧烈 头痛、恶心、呕吐、腹泻、败血症、脑膜炎、 孕妇出现流产。
单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的致 病性与毒力机理如下：
1．寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进 入肠细胞与巨噬细胞。
2．抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性 过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内 的过氧物（为杀菌的毒性游离基团）分解。
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防控措施
1、李斯特菌通常存在于潮湿区域和辅助清 洗设备中，例如：地面、排水沟、洗涤池、 天花板、冷凝水、拖把、海绵、盐水冷冻 设备及剥皮机。因此，控制李斯特氏菌的 数量对减少深加工过程中的污染是很有必 要的。
2、控制李斯特菌这类病原菌的最好方法是 降低交叉污染。使原料和成品操作分离， 保持区域干燥，以防细菌生长和减少微生 物扩散。
李斯特菌 PPT课件
• 多发生于发达国家，主要以散发性为主
地区分布
• 新生儿，孕妇，老人50-59岁，免疫缺陷 易感人群 人群
2019/9/13
• 农场动物牛、羊、猪、鸡、马、鹿、鸽 宿主 子、海鸥等均可能为李斯特菌的携带者
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产单核细胞李斯特菌为需氧或兼性厌氧，感染后患者病死率高 达30％
该 菌 对 各 种 应 激 （低温、高盐、低 ｐＨ、氧 化 应 激 等） 条 件 有 很 强 的 耐 受性，进一步增大了该菌的危害性。此 菌不产生内毒素，可 产 生 一 种 溶 血 性 外 毒 素，对 人 类 致 病 性强
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发病机制
• 产单核细胞李斯特菌能产生 ２ 种磷脂酶Ｃ：磷脂酰肌磷 脂酶 Ｃ(ＰＩ－ＰＬＣ）和宽范围的磷脂酶Ｃ（ＰＣ－Ｐ ＬＣ）
• ＰＩ－ＰＬＣ毒性相对较小，对细菌在细胞间扩散作用 不 大，主 要 是 协 同 ＰＣ－ＰＬＣ 发 挥 作 用。 而ＰＣ －ＰＬＣ的功能则较复杂，它使细菌从吞噬泡中逃逸出来， 能破坏宿主细胞的信号通路，能调节细胞因子和化学因子 的合成，还能通过二酰基甘油、神经酰胺、肌醇磷酸盐等 调节细胞的生长、分化、凋亡等
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临床表现
• 李斯特菌脑膜炎与其他细菌性脑膜炎相似 • 一般起病急，90%病例的首发症状为发热 • 有严重的头痛、眩晕、恶心、呕吐 • 脑膜刺激征明显，且常伴有意识障碍，如木僵、谵妄等亦
可发生抽搐
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临床表现
• 重症者可在24～48h内昏迷 • 少数起病缓慢，病程较长而有反复 • 如病变累及脑实质则可有脑炎和脑脓肿的表现 • 个别发生脑干炎而呈复视、发音和吞咽困难、面神经瘫痪
胞被吸引到炎症部位，导致炎症清除 • 体液免疫对该菌感染无保护作用，故在细胞免疫
8.单增李斯特检测
血平板
英诺克李斯特氏菌 ATCC 33090
36h，35℃培养
血平板
绵羊李斯特氏菌 ATCC 19119
24h，35℃培养
血平板
单增李斯特氏菌 ATCC 19117
36h，35℃培养
API Listeria
VITEK
结果报告
❖ 报告： 25g(ml)样品中检出或未检出单核细胞增生李 斯特氏菌。
步骤3---初筛试验
❖ 分别挑取5个以上的可疑菌落；初筛
木糖
阴性（-）
鼠李糖 阳性（+）
注意：①在接种糖发酵管的同事时，接种一个
TSA-YE平板用于生化试验，
②选择上述结果的菌株进行系统生化鉴定
步骤4—鉴定
❖ 传统生化 ❖ 生化鉴定系统 如API 10300 ❖ 全自动微生物鉴定系统
动 力 试
30℃±1 ℃24h
木糖—、鼠李糖+
鉴定
结果报告
❖ 步骤1 ❖ 步骤2 ❖ 步骤3 ❖ 步骤4
检验步骤
增菌 分离培养 初筛 鉴定
步骤1---增菌
1、称取样品25 g（mL）于225 mL LB1中，均质， 30±1℃ 24h培养
2、吸取LB1培养物 0.1 mL，转种于10 mL LB2 内，30 ℃±1 ℃ 18 - 24h
通常只有单增李斯特氏菌和人类的李斯特氏菌 症相关。因此，李斯特氏菌中最有检测意义的是 单核细胞增生李斯特氏菌。
概况
❖ 1981年加拿大由卷心菜引起的一次单增李 斯特氏菌引起的食物中毒爆发流行后，首 次明确了该菌是食源性病源菌
❖ 1981以后发生了多次世界范围的大流行 ❖ 2001年后我国检测机构多次从美国、加拿
❖ PALCAM培养基，分离原理主要是基于李斯特菌具 有β－D－葡萄糖苷酶的活性，能水解培养基中的七 叶灵，产生并七叶苷并与铁离子产生颜色反应，使 菌落为棕褐色，并带有褐色晕圈。但所有的李斯特 氏菌都能发生这种反应
单核细胞增生李斯特氏菌MPN计数法
二、单核细胞增生李斯特氏菌定性检验-GB 4789.30-2016 第一法
※初筛 自选择性琼脂平板上分别挑取3个~5个典型或可疑菌落，分别接种木糖、
鼠李糖发酵管，于36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，同时在TSA-YE平板上划线，于 36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h，然后选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续 进行鉴定。
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一、单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性
※生化特征 ※单核细胞增生李斯特氏菌(L. monocytogenes）37 ℃、24 h培养,可以 分解葡萄糖、果糖、海藻糖、水杨苷、鼠李糖，产酸不产气；不分解棉 子糖、肌醇、菊淀粉、卫茅醇、侧金盏花醇、木糖和甘露醇。MR和VP 试验阳性，不产生靛基质，硫化氢阴性。
※ 确认实验-鉴定 ：染色镜检、动力试验、生化鉴定、溶血试验、协同溶血试 验cAMP(可选项目)
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三、单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法-GB 4789.30-2016 第二法
※典型菌落计数以及对应的计算公式的应用 ※计数范围要求：选择有典型菌落的平板，菌落数合计在15 CFU~150 CFU之间的平板，计数典型菌落数。 ※计算公式1计算公式2.
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三、单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法-GB 4789.30-2016 第二法
※样品的接种 ※根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜连续稀释度的样品匀 液(液体样品可包括原液)，每个稀释度的样品匀液分别吸取1 mL以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL的接种量分别加入3块李斯特氏菌显色平板，用 无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。
※小鼠毒力试验(可选项目)
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二、单核细胞增生李斯特氏菌定性检验-GB 4789.30-2016 第一法
单核细胞增生李斯特菌
单核细胞增生李斯特菌形态特征：①革兰氏阳性的类球形杆菌②大小约为0.4~0.5µm x 0.5～2.0µm③两端钝圆④在有些培养基中稍弯，单个、成V形或成对平行排列⑤在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性⑥兼性厌氧，无芽孢，一般不产生荚膜⑦在20~25℃时以4根周毛运动，在37℃时只有较少的鞭毛或1根鞭毛培养特性：①需氧和兼性厌氧②生长范围为2-42℃③最适温度为35-37℃④pH中性至弱碱性（pH9.6）⑤在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。
⑥在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。
⑦在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
⑧在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。
⑨在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
生化特性：（甘露醇、木糖为阴性，其他为阳）1.该菌触酶阳性，氧化酶阴性。
2.发酵多种糖类，产酸不产气。
发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。
不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。
3.不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。
4.吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。
5.MR-VP试验和精氨酸水解阳性。
生化试验：①动力试验+原理：有动力的细菌扩散生长，培养基浑浊，无动力的细菌培养基澄清。
（结果：有动力，呈伞状生长，底为弯月牙形）②过氧化氢酶试验（触酶试验）+原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。
（结果：汽包产生为+）应用：葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
MMFSCNJ出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法
MM_FS_CNJ_03出口食品单核细胞增生李斯特氏菌斜射光镜MM_FS_CNJ_0344 出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法1. 适用范围本方法适用于牛乳、乳制品、水产品、肉及肉制品食品。
其他食品可参照采用。
2. 原理概要单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起人畜共患疾病的致病菌。
在胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TS2 YE、选择性培养基（MMA等平板上用45°角斜射光照射可观察到蓝色菌落；水解七叶苷并与柠檬酸铁铵反应产生黑色菌落。
3. 主要试剂和仪器. 主要试剂（包括培养基）胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤（TSB-YE （见B1）；胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TSA- YE （见B2）; 增菌培养液（EB （见B3 ；选择性培养基（MMA （见B4 ；牛津琼脂（见B5 ；改良缓冲蛋白胨水（MBP （见B6 ；7％羊血琼脂（见B7 ；糖发酵培养基（见B8 ；半固体琼脂；尿素琼脂；硝酸盐培养基；MR- VP培养基；三糖铁琼脂（TSI 。
胰酪蛋白胨（或胰蛋白胨；盐酸吖啶黄素；萘啶酮酸；复达新；甘氨酸酐；氯化锂；苯乙醇；放线菌酮；多粘菌素E；头孢双硫唑甲氧；磷霉素；柠檬酸铁铵；七叶苷；酚红；D—葡萄糖；D—甘露醇；哥伦比亚琼脂；酵母浸膏；牛肉浸膏。
. 仪器微生物学实验室常用设备；解剖镜；斜射灯；平面镜。
4. 过程简述. 样品如为冷冻食品，应于2〜5C解冻，且不超过18h,若不能及时检验，应置于 -15C保存。
非冷冻的易腐样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于4C 冰箱保存，在24h 之内检验。
. 前增菌和增菌前增菌：巴氏消毒乳、乳制品、冷冻水产品，冻肉及其它加工食品均应进行前增菌。
无菌操作称取25g样品，加入装有225mL改良缓冲蛋白胨水（MBP的均质杯内，高速均质1〜2min，制成1 : 10样品匀液，转入500ml T口瓶内；液体食品可用吸管吸取25mL样品，加入装有225mL改良缓冲蛋白胨水（MBP的广口内，充分振摇制成1 : 10样品匀液，于30C培养24、48h。
单核细胞增生李斯特菌检验
单核细胞增生李斯特菌检验
一、生物学特性
形态及染色：该菌为革兰氏阳性短 杆菌，大小约0.5um×1.0um～2.0um， 直或稍弯，两端钝圆，常呈v字型排 列，偶有球状、双球状，兼性厌氧、 无芽胞，一般不形成荚膜，但在营 养丰富的环境中可形成荚膜，在陈 旧培养基中的菌体可呈丝状及革兰 氏阴性，该菌有4根周毛和1根端毛， 但周毛易脱落。
产道感染胎儿或新生儿，栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接解也是本 病传播的可能途径，且有上升趋势。 临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者 等表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自 然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
单核细胞增生李斯特菌检验
胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)平板
用 途：用于单增李氏菌分纯 、培养。
原 理：胰蛋白胨、多价胨和 酵母浸粉提供氮源、维生素 和生长因子；氯化钠维持均 衡的渗透压；葡萄糖提供碳 源；磷酸氢二钾为缓冲剂。
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
动物检疫检验技术 专业教学资源库
动物性食品微生物检验
单核细胞增生李斯特菌检验
主讲人：王福红
单核细胞增生李斯特菌检验
知识目标：
• 理解单核细胞增生李斯特菌的生物学特性。 • 了解单核细胞增生李斯特菌的致病性。 • 掌握单核细胞增生李斯特菌标准检验方法。
能力目标：
• 会制备单核细胞增生李斯特菌检验用培养基。 • 会对单核细胞增生李斯特菌进行检验。
电镜下的李特氏菌
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
单核细胞增生李斯特菌检验