单核细胞增生李斯特菌
单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探
单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性杆菌，可以引起食物中毒和严重的感染疾病。
在感染宿主细胞过程中，李斯特菌可以通过分泌多种类型的蛋白质来促进其内化和生存。
其中，李斯特菌内化素G（Internalin G）是一个被广泛研究的蛋白质，被认为在李斯特菌的侵袭性中起着重要的作用。
李斯特菌内化素G是一种表面蛋白，能够结合并激活宿主单核细胞的内化过程。
内化素G的结构特点包括一个N端的信号肽序列、多个内源性的抗原结构域和一个C端的细胞外膜锚定序列。
根据先前的研究，内化素G可以在静态环境中与单核细胞表面的受体相互作用，进而激活细胞内信号通路，并引导细胞吞噬李斯特菌。
经过多年的研究，科学家们逐渐揭示了内化素G在单核细胞增生中的功能。
研究发现，内化素G与单核细胞膜上的受体TLR2（Toll-like receptor 2）结合后，可以激活多种信号传导通路，包括MAPK（mitogen-activated protein kinase）通路和NF-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells）通路。
通过这些通路的激活，内化素G可以诱导单核细胞的增殖和巨噬细胞的分化，并促进细胞对病原体的内化和清除。
内化素G的功能不仅局限于单核细胞的增殖和巨噬细胞的分化，还涉及到炎症反应的调节。
研究发现，内化素G可以诱导多种炎症因子的产生，如IL-1β（interleukin-1 beta）、IL-6（interleukin-6）和TNF-α（tumor necrosis factor-alpha），从而参与抗菌活性和免疫调节。
此外，内化素G还可以激活多种细胞因子和趋化因子的产生，如IFN-γ（interferon-gamma）、IL-8（interleukin-8）和MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1），进一步增强单核细胞和巨噬细胞对感染的反应和防御能力。
单核细胞增生李斯特氏菌MPN计数法
二、单核细胞增生李斯特氏菌定性检验-GB 4789.30-2016 第一法
※初筛 自选择性琼脂平板上分别挑取3个~5个典型或可疑菌落，分别接种木糖、
鼠李糖发酵管，于36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，同时在TSA-YE平板上划线，于 36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h，然后选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续 进行鉴定。
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一、单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性
※生化特征 ※单核细胞增生李斯特氏菌(L. monocytogenes）37 ℃、24 h培养,可以 分解葡萄糖、果糖、海藻糖、水杨苷、鼠李糖，产酸不产气；不分解棉 子糖、肌醇、菊淀粉、卫茅醇、侧金盏花醇、木糖和甘露醇。MR和VP 试验阳性，不产生靛基质，硫化氢阴性。
※ 确认实验-鉴定 ：染色镜检、动力试验、生化鉴定、溶血试验、协同溶血试 验cAMP(可选项目)
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三、单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法-GB 4789.30-2016 第二法
※典型菌落计数以及对应的计算公式的应用 ※计数范围要求：选择有典型菌落的平板，菌落数合计在15 CFU~150 CFU之间的平板，计数典型菌落数。 ※计算公式1计算公式2.
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三、单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法-GB 4789.30-2016 第二法
※样品的接种 ※根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜连续稀释度的样品匀 液(液体样品可包括原液)，每个稀释度的样品匀液分别吸取1 mL以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL的接种量分别加入3块李斯特氏菌显色平板，用 无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。
※小鼠毒力试验(可选项目)
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二、单核细胞增生李斯特氏菌定性检验-GB 4789.30-2016 第一法
单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么
龙源期刊网 单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么作者：周林来源：《学习与科普》2019年第31期单核细胞增生李斯特菌包含在食源性致病菌范围当中。
就目前来看，免疫学检测方法和分子学检测方法是很多单增李斯特菌检测方法中使用最频繁的两种方法。
免疫学检测方法具有操作简便、时间短的特点，然而其非常依赖高特异性的抗体，结果容易出现失误，需要对检测结果进行详细判定。
和免疫学检测法相比，分子学检测方法具有灵敏度高、省时省力等特点，然而分子学检测方法在使用过程中需要较多的操作经验，同时不能在大批量检测中应用。
一、单核细胞增生李斯特菌概述（一）生物学特征单核细胞增生李斯特菌是一种革兰阳性短杆菌，其对营养的需求量较少，生长温度通常最低不能低于2摄氏度，最高不能超过42摄氏度，同时可以在弱酸、弱碱和6.5%NaCl肉汤中得到快速成长，并且能够形成β-溶血。
在其生长过程中还可以发酵出很多种糖类物质，按照O抗原以及H抗原能够分解成十三中血清型，其中1/2a与4b这两种类型在致病菌株中的占比最大。
（二）污染源及流行病学单核细胞增生李斯特菌是自然界中常见的一种致病菌，抗冻能力非常强，其主要传播路径是通过粪-口这种方式进行。
健康人粪便中的单核细胞增生李斯特菌携带率通常为0.6%至16.0%，然而奶制品、水产品以及家禽中均携带相应的单核细胞增生李斯特菌。
另外，单核细胞增生李斯特菌通过胎盘、黏膜、性以及产道鞥部位都可以进入到体内，从而导致感染。
单核细胞增生李斯特菌的致病性与其具有的毒作用、宿主的免疫状况以及年龄具有密不可分的关系，宿主的细胞免疫可以有效的解除单核细胞增生李斯特菌中存在的病菌。
各种免疫力弱的人群都属于易感人群，比如新生儿、四十岁以上的成人等。
健康成人感染后会出现和感冒相似的情况，然而其他免疫力功能较低的人可能会出现更加严重的症状，乃至会直接死亡。
二、相关检测技术（一）聚合酶链反应技术就目前来看，聚合酶链反应技术得到了广泛的普及与运用。
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究引言：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种潜伏在食品中常见的致病菌，能引起严重的食物中毒，威胁着人类的健康与生命安全。
因此，研究和发展一种快速、高效的检测技术对于食品安全至关重要。
本文旨在探讨目前关于单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术的研究进展，并为进一步的研究和应用提供参考。
一、单核细胞增生性李斯特菌简介单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，能在广泛的温度（0-45℃）和pH（4.4-9.6）范围内生长，且具有金属抗药性。
在食品中，该菌可以通过肉类、蔬菜和奶制品等途径传播，使其成为食品安全的重要隐患之一。
由于该菌对常规的煮沸和加热处理具有一定的抵抗能力，因此需借助有效的检测技术对其进行快速、准确的检测。
二、传统检测方法的局限性目前常用的单核细胞增生性李斯特菌检测方法主要包括传统培养方法、蛋白酶结合效应（ELISA）和分子生物学方法等。
然而，这些方法存在着以下局限性：1. 传统培养方法耗时长，需要较长的培养时间才能获得结果，无法快速检测；2. ELISA方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其需要复杂的样品处理和实验步骤，使得检测过程繁琐；3. 分子生物学方法虽然能够提供较快的检测结果，但其仪器成本高，技术要求较高，限制了其在实际应用中的推广。
三、快速检测技术的研究进展随着科学技术的发展，研究人员不断探索和开发更为快速、准确的单核细胞增生性李斯特菌检测技术。
以下是几种常见的快速检测技术：1. 荧光定量聚合酶链反应（qPCR）技术：该技术以其高效、精确和快速的特点，被广泛应用于单核细胞增生性李斯特菌的检测。
qPCR技术可以快速扩增和定量样品中的特定基因片段，结合荧光定量技术实现李斯特菌的快速检测和定量。
2. 微生物芯片技术：微生物芯片是基于生物芯片技术的一种新型检测平台，可实现对多种菌种的快速识别和检测。
研究人员通过设计特定的探针，可以在芯片上同时检测多种致病菌，包括单核细胞增生性李斯特菌，提高了检测效率和准确性。
单核细胞增生性李斯特菌可视化检测方法的建立与评价
单核细胞增生性李斯特菌可视化检测方法的建立与评价单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）是一种常见的食源性致病菌。
近年来,由该菌引起的食品安全事件频繁发生,严重威胁着人类的健康和社会经济的发展。
该菌可感染人和动物引发李斯特菌病。
临床症状为脑炎、脑膜炎、败血症等,病死率较高。
因此,对其进行现场监控与快速准确检测已成为公共卫生检测领域的研究热点问题之一。
目前,单增李斯特菌的实验室检测方法,主要有传统分离培养生化鉴定法、免疫学检测方法和分子生物学检测方法,这些方法均存在着耗时长、灵敏性低、对实验条件和操作人员要求较高等不足。
因此开发具有操作简单、快速、灵敏的单增李斯特菌检测新方法,对于李斯特菌病的防控工作具有重要的意义。
本课题研究旨在依据单增李斯特菌的结构性质和致病机制,将分子生物学技术,纳米技术相结合,构建针对食品中单增李斯特菌的快速、灵敏、简便的可视化检测方法。
为环境生物毒素研究提供新思路和新方法,也为食品安全的现场检测提供技术支持。
主要研究内容包括以下四个部分:第一部分单增李斯特菌鸡卵黄抗体IgY的制备及纯化鉴定（1）以单增李斯特菌灭活菌悬液,分别制备弗氏完全佐剂疫苗和弗氏不完全佐剂疫苗。
采用皮下多点注射法将疫苗接种于鸡胸处皮下,收集免疫前后鸡蛋,采用聚乙二醇沉淀法提取卵黄抗体,采用凝胶过滤层析法对卵黄抗体IgY进行分离纯化,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对所得抗体IgY进行纯度鉴定。
结果显示,纯化前的IgY除目标链之外出现多条杂带,纯化之后的IgY仅有目标链显现,表明纯化后抗体纯度较高。
（2）采用BCA蛋白定量试剂盒测定卵黄抗体蛋白含量。
经测定所提取IgY 的蛋白含量范围为5.51-22.89mg mL<sup>-1</sup>,第15周所提取的IgY的蛋白含量最高,为22.89 mg·mL<sup>-1</sup>。
单核增生李斯特菌
该菌可通过眼及破损皮肤、 该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成 感染， 感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生 儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接 栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染， 栖居于阴道 也是本病传播的可能途径，且有上升趋势。 触也是本病传播的可能途径，且有上升趋势。 携带该菌的动物或人，尤其是食品从业者，均可 携带该菌的动物或人，尤其是食品从业者， 成为该菌的污染源。 成为该菌的污染源。 食品的交叉污染或出售的食品消毒不好是造成该 菌食物中毒的主要原因。 菌食物中毒的主要原因。
（四）致病物质 1. 溶血素 溶血素O 也为 溶血素。溶血素 最主要作用为 也为α-溶血素 溶血素O最主要作用为 溶血素。 介导细菌溶解。溶血是LM致病的一项重要标志 致病的一项重要标志， 介导细菌溶解。溶血是 致病的一项重要标志，临床 分离的LM全部溶血 不溶血的无毒性。溶血素O还可 全部溶血， 分离的 全部溶血，不溶血的无毒性。溶血素 还可 通过抑制巨噬细胞抗原的递呈而建立感染。 抑制巨噬细胞抗原的递呈而建立感染 通过抑制巨噬细胞抗原的递呈而建立感染。除溶血素 O外还发现另外一种形式的溶血素 为一种2.0kb基因 O外还发现另外一种形式的溶血素，为一种2.0kb基因 外还发现另外一种形式的溶血素， 片段编码的2.3× 蛋白， 片段编码的 ×103蛋白，与链球菌溶血素和溶血素 蛋白 O抗血清无交叉反应，称为 溶血素，β-溶血素也与 抗血清无交叉反应， 溶血素， 溶血素 溶血素也与 抗血清无交叉反应 称为β-溶血素 LM菌在细胞内生存和增殖有关，对动物有毒性，能协 菌在细胞内生存和增殖有关， 菌在细胞内生存和增殖有关 对动物有毒性， 同金黄色葡萄球菌和马红球菌的溶血（ 同金黄色葡萄球菌和马红球菌的溶血（即cAMP现 现 象）。
单核细胞增生李斯特氏菌
羊肝浸出液琼脂上的 菌落：圆形，光滑， 奶油状，稍扁平，用 透过光观察是透明的。
在5-7%的血平板 上，菌落通常也不大， 灰白色，刺种血平板 培养后可产生窄小的 β-溶血环。
• 该菌生长需要B族维生素（生长素、核黄素、 硫胺素和硫辛酸）和氨基酸。
• 葡萄糖能促进所有的李斯特氏菌生长并生成 L(+)乳酸
五、致病性
• 该菌进入人体后是 否发病，与李斯特 氏菌的毒力和宿主 的年龄、免疫状态 有关
• 无免疫缺陷的未怀 孕的健康人对单核 细胞李斯特氏菌感 染具有很强的抵抗 力
• 很少有证据表明这 样的健康人能够感 染此菌
电镜下的单核细胞增生李斯特氏菌
抵抗力
• 该菌对理化因素抵抗力较强。 在土壤、粪 便、青储饲料和干草内能长期存活。
• 针对李斯特菌病疫情，加拿大卫生管理局给出了 食品安全的8项建议：
• 1.砧板的卫生状况很重要，要有专门切肉、蔬菜、 家禽、海鲜的砧板和刀，且每次烹饪完毕后一定 要对刀具与砧板进行全面清洁。
• 清洗盖子，开罐器在每次使用后也应该消毒。
• 3.将一些小型器具如食品加工机、绞肉机及搅拌 机分开，使用后进行全面清洁与消毒。
• 目前，中国输往欧、美、日的肉类产品， 李斯特菌是应检项目
• 2001年11月以来，中国质检部门多次从美国、加 拿大、法国、爱尔兰、比利时、丹麦等二十多家 肉类加工厂进口的猪腰、猪肚、猪耳、小排等三 十多批近千吨猪副产品中检出单增李斯特菌、沙 门氏菌等致病菌。
冰箱中的“杀手”！？
• 冰箱在给人们生活带来极大方便的同时，却也伴 随着健康的隐患。
• 近年来由于吃放在冰箱里的食物而闹肚子、得胃 炎，甚至患上肺炎的人数在不断增加。
• 更为恐怖的是，无锡市疾控中心食品污染物监测 点在冰箱食物中竟然发现了一种致命细菌——李 斯特氏菌，该细菌喜冷不爱热，在低温环境中可 大量繁殖，如果人被感染，将有三成的病死率， 且大多数都是老人。
食源性单核细胞增生李斯特菌病诊断要点
食源性单核细胞增生李斯特菌病诊断要点
1 流行病学特点
1.1 发病季节：全年都可能发生。
1.2 发病原因：经口食入被单核细胞增生李斯特氏菌污染的食物导致的感染型食源性疾病。
1.3 致病食品：主要为生肉及肉制品、鸡蛋、蔬菜沙拉、乳与乳制品、海产品及即食食品和直接或间接被本菌污染的其他食品。
1.4 易感人群：新生儿、孕妇、免疫缺陷患者
2 临床表现
2.1 潜伏期一般为 4 d～21 d，最短 3 d，最长 70 d。
2.2 主要症状为健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、早产、死产、脑膜炎、败血症直至死亡。
3 实验室检验
3.1 由可疑食物中检出＞10 2 cfu/g（ml）数量的单核细胞增生李斯特氏菌。
3.2 患者粪便或肛拭子中检出单核细胞增生李斯特氏菌。
3.3 由可疑食物中检出与患者粪便或肛拭子中相同血清型的单核细胞增生李斯特氏菌。
3.4 由患者的血液或脑脊液检测出单核细胞增生李斯特氏菌。
3.5 按 GB 4789.30 进行检验。
4 诊断
4.1 符合流行病学特点与临床表现，由可疑食物中检出与患者粪便或肛拭子中相同血清型的单核细胞增生李斯特氏菌，即可确诊。
4.2 符合本菌的流行病学特点与临床表现，由可疑食物中检出＞10 2 cfu/g(ml)数量的单核细胞增生李斯特氏菌，即使患者粪便或肛拭子中未检出单核细胞增生李斯特氏菌，也可以确诊。
4.3 其他情况，按照 GB 14938.1 执行。
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单核细胞增生李斯特菌
形态特征：
①革兰氏阳性的类球形杆菌
②大小约为0.4~0.5µm x 0.5～2.0µm
③两端钝圆
④在有些培养基中稍弯，单个、成V形或成对平行排列
⑤在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性
⑥兼性厌氧，无芽孢，一般不产生荚膜
⑦在20~25℃时以4根周毛运动，在37℃时只有较少的鞭毛或1根鞭毛
培养特性：
①需氧和兼性厌氧
②生长范围为2-42℃
③最适温度为35-37℃
④pH中性至弱碱性（pH9.6）
⑤在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。
⑥在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。
⑦在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
⑧在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。
⑨在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
生化特性：（甘露醇、木糖为阴性，其他为阳）
1.该菌触酶阳性，氧化酶阴性。
2.发酵多种糖类，产酸不产气。
发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。
不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。
3.不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。
4.吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。
5.MR-VP试验和精氨酸水解阳性。
生化试验：
①动力试验+
原理：有动力的细菌扩散生长，培养基浑浊，无动力的细菌培养基澄清。
（结果：有动力，呈伞状生长，底为弯月牙形）
②过氧化氢酶试验（触酶试验）+
原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。
（结果：汽包产生为+）
应用：葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
③MR-VP试验+
原理：葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸→pH4以下→（+甲基红指示剂）→培养基变红
V-P试验：葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇(强碱+V-P试剂)→二乙酰(胍基)→培养基变红
糖发酵试验
葡萄糖和麦芽糖发酵试验+
原理：有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸产气，培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（－），培养基仍为紫（蓝）色。
（结果：黄+）
七叶苷水解试验+
原理：某些细菌（如类肠球菌）可水解七叶苷，生成葡萄糖和七叶素。
七叶素可与培养基中的柠檬酸铁试剂的二价铁离子反应生成黑色化
合物沉淀，是培养基变黑。
（结果：黑+，黄-）
甘露醇发酵试验-
原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，有的能分解多种糖类，有的仅能分解1~2种糖类，还有的不能分解。
细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点鉴别细菌。
（结果：黄+，绿-)
木糖发酵试验-
原理：某些细菌能利用D-木糖作为碳源。
木糖本身有抗细菌和霉菌的功能，尤其是革兰氏阴性菌及白色念珠菌。
(结果：黄+）
鼠李糖发酵试验+
原理：鼠李糖在细菌中以多糖或脂多糖存在与细胞表面。
（结果：黄+）
24h
1℃，。