单核细胞增生李斯特菌检验
乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果与分析
乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果与分析樊惠华，侯磊磊，方 莹，柴梅梅（榆林市食品检验检测中心，陕西榆林 719000）摘 要：为了提升食品检验检测机构对食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验能力，提高微生物实验室外部质量控制水平。
本实验室参加中国检验检疫科学研究院测试评估中心组织的ACAS-PT1108（2021）乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证，参考参试指导书、《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》（GB 4789.30—2016）、海博单增李斯特氏菌成套生化鉴定管和MicroScan WalkAway 40 Plus全自动微生物生化鉴定仪。
结果表明，参试样品编号21-T031为单核细胞增生李斯特氏菌，样品编号21-U887未检出单核细胞增生李斯特氏菌，经鉴定为伊氏李斯特氏菌，最终能力验证结果评价为满意，可见本实验室具有成熟的单核细胞增生李斯特氏菌检验能力。
关键词：乳粉；单核细胞增生李斯特氏菌；能力验证Results and Analysis of the Proficiency Testing of ListeriaMonocytogenes in Milk PowderFAN Huihua, HOU Leilei, FANG Ying, CHAI Meimei(Yulin Food Inspection and Testing Center, Yulin 719000, China)Abstract: In order to improve the ability of food inspection and testing institutions to detect Listeria monocytogenes in food and to improve the external quality control level of microbiology laboratory. The laboratory participated in the proficiency testing of Listeria monocytogenes in ACAS-PT1108 (2021) milk powder organized by the Testing and Evaluation Center of the Chinese Academy of Inspection and Quarantine Sciences. Reference was made to the test guidelines, the GB 4789.30—2016, the complete biochemical identification tubes of Listeria monocytogenes in Haibo and the MicroScan WalkAway 40 Plus automatic microbial biochemical identification instrument. The results showed that the sample number 21-T031 was detected as Listeria monocytogenes, and the sample number 21-U887 was not detected as Listeria monocytogenes, which was identified as Listeria.ivanovii. The final proficiency test results were satisfactory. It can be seen that the laboratory has a mature ability to test Listeria monocytogenes.Keywords: milk powder; Listeria monocytogenes; proficiency test李斯特菌属目前包括17种公认的短杆状革兰氏阳性菌，其中单核细胞增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌被认为是病原体[1]。
单核增生李斯特氏菌检测概述
培养基中稍弯，两端钝圆，单个、成短链、细胞彼 此连成V形，或成群的细胞沿长轴方向平行排列， 在较老的或生长不良的培养物中，可能形成丝状； 20-25℃周生鞭毛运动，在37℃只有较少的鞭毛或1根
鞭毛；
无芽孢、无荚膜。
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内容
简介李斯特氏菌属 单核增生李斯特氏菌生物学特性 流行病学 致病性 实验室危害及其预防 检测程序 快速检测方法
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李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分类学
研究表明，其分为六个种：
单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） 绵羊（伊氏）李斯特氏菌（Listeria ivanovii） 英诺克（无害）李斯特氏菌（Listeria innocua） 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）
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生物学特性
---血清型
根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增 李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、 1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、 4e 和“7”。
致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、 3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。
血平板
单核增生李斯特氏 菌 ATCC 19117
36h，35℃培养
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血平板
无害李斯特氏菌 ATCC 33090
36h，35℃培养
第三十一页，共48页。
血平板
单核细胞增生李斯特菌污染调查及快速检验方法的比较(精)
单核细胞增生李斯特菌污染调查及快速检验方法的比较余淑冰1 梁景涛1 周强忠1 孔繁钧1 陈庆韶1 李婉霞2单核细胞增生李斯特菌(LM)能引起人畜共患病，致病性强，临床病死率高达30%～70%。
目前，国际上对其研究非常重视，已将其列为90年代食品四大致病菌(致病性大肠菌、肉毒梭菌、亲水气单胞菌和LM)之一。
我国在LM研究及检验起步较晚，经验较少，1994年才颁布该菌的标准检验方法。
为了解食品中LM的污染状况，开展应用快速检验方法，作者于1996年5月至1997年4月对佛山地区的市场销售点，抽取6类不同的食品共309份，作为LM污染调查对象，同时根据现有的检验方法，探索出一种快速可行的检验方法，现报告如下：一、材料与方法1.样本来源：选取佛山市区5个肉菜市场的各个肉档、鱼档、烧腊档、菜农等6类食品，每类食品50份以上。
其中乳和水产品分别由水牛奶厂和水产加工场提供。
6类食品具体包括有：①生肉类：猪肉、猪肉馅、鸡肉、牛肉、羊肉。
②熟肉制品：猪肉、猪肉肠、鸡肉、牛肉。
③乳类：生牛奶、消毒牛奶。
④乳制品：冰淇淋、奶酪、酸奶、果奶。
⑤蔬菜：黄瓜、香菜(去根)、菠菜(去根)、菜花(指花菜)、莲藕。
⑥水产品：鱼、虾。
2.标准菌株：LM(54004和54007)、金黄色葡萄球菌、马红球菌(R.equi)由卫生部食品卫生监督检验所提供。
3.培养基和试剂：本实验室配制，并以有关阳性菌株进行质量控制。
4.试验动物：采用广东省卫生厅医用实验动物所饲养的瑞士小白鼠，选取体重在16～18 g之间作试验用。
5.试剂盒：由生物-梅里埃公司提供，使用时按说明书进行。
6.方法：按国标食品卫生检验方法GB4789.30-94进行。
二、结果1.6类食品检测情况：在受检的6类食品共309份中，检出阳性菌株16份(已由卫生部食品卫生监督检验所鉴定)，总污染率为5.18%(16/309)，其中在生肉、熟肉制品、生牛奶和水产品中均检出LM。
采用LB法检出率为62.5%(10/16)，EB法检出率为37.5%(6/16)，LB法明显高于EB法，见表1。
单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么
龙源期刊网 单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么作者：周林来源：《学习与科普》2019年第31期单核细胞增生李斯特菌包含在食源性致病菌范围当中。
就目前来看，免疫学检测方法和分子学检测方法是很多单增李斯特菌检测方法中使用最频繁的两种方法。
免疫学检测方法具有操作简便、时间短的特点，然而其非常依赖高特异性的抗体，结果容易出现失误，需要对检测结果进行详细判定。
和免疫学检测法相比，分子学检测方法具有灵敏度高、省时省力等特点，然而分子学检测方法在使用过程中需要较多的操作经验，同时不能在大批量检测中应用。
一、单核细胞增生李斯特菌概述（一）生物学特征单核细胞增生李斯特菌是一种革兰阳性短杆菌，其对营养的需求量较少，生长温度通常最低不能低于2摄氏度，最高不能超过42摄氏度，同时可以在弱酸、弱碱和6.5%NaCl肉汤中得到快速成长，并且能够形成β-溶血。
在其生长过程中还可以发酵出很多种糖类物质，按照O抗原以及H抗原能够分解成十三中血清型，其中1/2a与4b这两种类型在致病菌株中的占比最大。
（二）污染源及流行病学单核细胞增生李斯特菌是自然界中常见的一种致病菌，抗冻能力非常强，其主要传播路径是通过粪-口这种方式进行。
健康人粪便中的单核细胞增生李斯特菌携带率通常为0.6%至16.0%，然而奶制品、水产品以及家禽中均携带相应的单核细胞增生李斯特菌。
另外，单核细胞增生李斯特菌通过胎盘、黏膜、性以及产道鞥部位都可以进入到体内，从而导致感染。
单核细胞增生李斯特菌的致病性与其具有的毒作用、宿主的免疫状况以及年龄具有密不可分的关系，宿主的细胞免疫可以有效的解除单核细胞增生李斯特菌中存在的病菌。
各种免疫力弱的人群都属于易感人群，比如新生儿、四十岁以上的成人等。
健康成人感染后会出现和感冒相似的情况，然而其他免疫力功能较低的人可能会出现更加严重的症状，乃至会直接死亡。
二、相关检测技术（一）聚合酶链反应技术就目前来看，聚合酶链反应技术得到了广泛的普及与运用。
单核细胞增生李斯特氏菌检测方法进展
食品微生物期末考核题目：单核细胞增生李斯特氏菌检测方法进展姓名：学号：班级：单核细胞增生李斯特氏菌检测方法进展康阳妃西南大学食品科学学院，重庆400715摘要：单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起人畜共患病的食源性致病菌之一，在自然界中分布广泛。
近年来，在许多国家，它是卫生部门重点监测的几种食源性致病菌之一。
本文介绍了单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性，流行病学特征。
总结了单核细胞增生李斯特氏菌现行有效的的常规和快速的检测方法及流程，并对各方法的优缺点进行了比较。
关键词：单核细胞增生李斯特氏菌；生物学特征；流行病学特性；检测；致病菌The progress of detection methods to ListeriamonocytogenesKang yangfeiCollege of Food Science ,Southwest University,Chongqing 400715Abstract:Listeria monocytogenes is one of foodborne pathogens that can cause zoonosis,it is found ubiquitously in the environment. In recent years, it is one of several kind of foodborne pathogens that the Health department focus on surveillance to in many countries.This paper introduce the biological and epidemiological characteristics of Listeria monocytogenes. Summarize the current effective conventional and rapid detection methods and processes of Listeria monocytogenes.Key words:Listeria monocytogenes; biological characteristics;epidemiological characteristics ; Detection;pathogens引言单核细胞增生性李斯特菌是一种短小的革兰氏阳性无芽胞杆菌，是一种人畜共患病的致病菌，可使人和动物患李斯特菌病。
食品中单增李斯特菌检测
食品中单增李斯特菌检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测实验目的1）了解单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性。
2）熟悉单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定方法。
基本原理单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)归属于李斯特菌属(Listeria)。
单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中唯一对人致病的病菌。
李斯特菌是一种细胞内寄生菌，它不仅可能存在于肉类产品中，也可能存在于乳制品、蔬菜、沙拉及海产品等日常食物里面。
此菌广泛分布于自然界中，在土壤、排污下水、地表水、青贮饲料、烂菜中均可分离到。
人也可作为无症状携带者。
据报道，健康人粪便中该菌的携带率为0.6％～16％，4％～8％的水产品、5％～10％的奶及其制品、30％以上的肉制品及15％以上的家禽均被该菌污染。
李斯特菌能在1～45℃的温度下生存，能在家用电冰箱的冷藏室内较长时间生长、繁殖。
该菌为革兰氏阳性短杆菌，有的菌体略弯曲，两端钝圆，大小约为0.4～0.5μm ′0.5～2.0μm。
多单在，有时是V字型排列。
无芽孢，不产生荚膜。
在陈旧培养物中或粗糙型菌落的菌体长度可达6～20μm 或更长的丝状。
在20～25℃培养时可产生2～4根鞭毛而运动，但在37℃培养时鞭毛发育不良，无运动性。
本菌需氧或兼性厌氧，生长温度为1～45℃，最适温度为30～37℃。
对营养要求不高，可在普通琼脂培养基中生长，但在血琼脂培养基或胰酪胴琼脂上生长更好。
加入0.2％～1％(W/V)的葡萄糖及2％～3％(V/V)的甘油生长更佳。
在含1%(W/V)NaCl的复合培养基中能生长。
在4℃可缓慢增殖，形成菌落约需7d。
在液体培养基中培养18～24h后，肉汤呈轻度均匀混浊，数天后形成粘稠沉淀附着于管底，摇动时沉淀呈螺旋状，继续培养可形成颗粒状沉淀。
不形成菌环、菌膜。
在营养琼脂上，光滑(S)型可形成直径0.5～1.5mm、圆形、露滴状半透明、低隆起、边缘整齐、表面有细致纹理的蓝灰色菌落，斜射光照射时，菌落呈特征性蓝绿光泽。
单核细胞增生李斯特氏菌检测原始记录表-
受控编号：
单核细胞增生李斯特氏菌检测原始记录表
检测项目：☑单核细胞增生李斯特氏菌检测依据：☑GB 4789.30-2016
样品状态：□液态☑固态□完好□已开封□其他：检测日期： 2023.12.4-12.6 环境条件： 25 ℃ 47 ％ RH
存放条件：□室温□冷藏☑冷冻检测仪器：☑生化培养箱WTHF1010A1-002 □电热恒温培养箱 WTHK1001A-1001
样品处理：1单核细胞增生李斯特氏菌检验：按无菌操作称取25g（mL）样品，加入225mL LB1增菌液中，研成匀浆制成混悬液，置30℃恒温培养24h，取上述增菌液0.1mL接种至10mL LB2增菌液中，混匀后置30℃恒温培养18h~24h。
委托单编号：
备注：1.“+”表示选择性平板上有可疑或典型菌落生长或生化试验呈阳性，“-”表示选择性平板上无可疑或典型菌落生长或生化试验呈阴性。
2.“ND”表示未检出。
检验员：复核人：审核人：。
单核增生李斯特氏菌检测概述
单核增生李斯特氏菌检测概述单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的致病菌，能够在低温下生存繁殖，并在恶劣环境中形成生物被膜，使其对抗不良条件。
该菌可引起人类的李斯特菌病（Listeriosis），也是一种可以通过食品传播的重要病原体。
李斯特菌病在免疫功能低下的人群中很容易引起严重感染，包括孕妇、老年人、免疫抑制患者和新生儿。
检测单核增生李斯特氏菌的方法主要包括传统的培养方法和现代的分子生物学方法。
1.传统培养方法传统的培养方法是检测单核增生李斯特氏菌的主要方法之一、常用的培养基包括PALCAM（Polymyxin, Acriflavine, Lithium chloride and Cycloheximide）和OXOID Listeria Selective Agar等。
培养温度通常在30-37℃之间，因为单核增生李斯特氏菌可以在低温下生长。
在培养过程中，从食品样品或其他可能受污染的样品中提取菌落，并在培养基上进行培养。
培养时间通常为1-2天，培养过程中需要注意去除其他菌落的干扰。
2.分子生物学方法分子生物学方法是现代检测单核增生李斯特氏菌的常用方法，主要包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR等。
这些方法的优势在于其高度敏感性和特异性。
通过检测单核增生李斯特氏菌特有的基因或序列，可以快速准确地鉴定与检测其存在。
3.培养与分子生物学相结合的方法为了更好地检测单核增生李斯特氏菌，有些方法将传统培养与分子生物学相结合。
这种方法通常先进行培养，然后使用PCR或实时荧光定量PCR等技术进行进一步检测和鉴定。
这种方法较为耗时，但能够进一步提高检测的准确性。
需要注意的是，由于单核增生李斯特氏菌能够在低温下生存，因此在食品或样品中的检测非常重要。
常见的食品样品包括生肉、海鲜、冷冻食品、奶制品等。
对于食品企业来说，建立完善的食品安全管理体系和进行规范的监测是防止单核增生李斯特氏菌传播的重要措施。
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单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病，感染后 主要表现为败血症、脑膜炎和流产等。它广泛存在于自然界 中。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都可被污 染。该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人 类健康的主要病原菌之一。 其易感人群主要为孕妇、老人、新生儿和免疫缺陷人群。大 多数发达国家人类李斯特菌病发生率约为每一百万人2-15例， 死亡率为13-34% 加拿大由单增李斯特氏菌污染肉制品引发李斯特菌病暴发， 导致十几人死亡。很多国家都已经采取措施来控制食品中的 单增李斯特氏菌，并制定了相应的标准。
MMA 30℃48h菌落 针尖大小、形 态不典型，与 杂菌难区分抑 制性强
PALCAM
OXA
CHROMagar
37℃24h－48h， 30℃24h－ 37℃18h-24h, 2mm灰绿色中 48h,2mm灰黑 蓝色菌落周围 心黑色凹陷， 色菌落周围呈 呈白色晕圈 菌落周围呈棕 棕黑色水解圈 黑色水解圈
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册 1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB1增菌液225 mL，均质
30 ℃±1 ℃，24 h
0.1 mL+10 mL LB2增菌液
30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
PALCAM琼脂
协同溶血试验 (cAMP): 在血平板上平行接种金黄色葡萄球菌和马红球菌 (R.equi), 在它们中两者之间垂直接种可疑李斯 特菌, 但不要触及它们, 于30℃培养24h～48 h, 检查平板中垂直接种点对溶血环的影响。靠近金 黄色葡萄球菌接种点的单核细胞增生李斯特菌的 溶血增强, 斯氏李斯特菌（L.seeligeri）的溶血 也增强, 而伊氏李斯特菌（L.ivanovii）在马红 球菌附近的溶血增强。
API10300
L.M的API10300鉴定结果
试验
有效成分 反应/酶 酶底物 七叶灵水 解
结果 浅橙色浅褐色灰褐色 浅黄色
结果 + 橙色 黑色
DIM ESC
MAN
DAPL
甘露糖苷 酶
阿拉伯糖
无色
红色/橙红色
黄色
黄色/橙黄 色
XYL
RHA
木糖
鼠李糖
MDG
RIB GIP TAG
葡萄糖苷
核糖 葡萄糖 塔格糖
接种木糖、鼠李糖， 36 ℃±1 ℃ ， 24 h ；同时于 TSA-YE 平板划线纯化， 30 ℃±1 ℃，24 h～48 h
木糖-，鼠李糖+
鉴定
结果报告
增菌培养:LB1增菌液225 mL，于 30℃培养24h, 吸取0.1 mL，加入 10mL LB2增菌液中二次增菌。 分离培养:LB2 二次增菌液转种于选 择培养基PALCAM和科玛嘉琼脂平板 上，于37℃培养24 h，观察各个平板 上生长的菌落,各个平板上的菌落特征 见表1。
一方面血清是进口的，无国产的；另一 方面只存在“O”抗原因子血清，并且各 型之间含有多种共同的抗原因子，因此 其血清学上鉴别意义不大。
2.商业生化鉴定系统的应用 原国标中未涉及，FDA、AOAC标准使用 API 10300、Vitek GNI（AOAC 989.13），这些方法都比较成熟，稳定性 较好，已被许多国家和组织的标准采用。 我国许多单位也积累了较多的经验，使用 最广泛的是API 10300, Vitek GNI， 考虑到各种系统在国内的实际应用现状， 拟定在生化鉴定方面“采纳API10300或 Vitek GNI为传统生化鉴定方法的选择性 替代方法”。
血清学分型: Lm是根据O抗原和H抗原的差异进行血清学 分型。虽然Lm有16种血清型，1/2a、1/2b 、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c 、4d、4e、5、6a、6b和7，但只有3种血 清型 (1/2a、1/2b、4b)可引起疾病。从 食品和患者中分离的菌株95％以上是1/2a ，1/2b，1/2c和4b等血清型，而3a、3b、 3c、4a、4c、4e、4d和7等血清型在食品 中非常少见，也没有引起李斯特菌病的报 道。
PCR检测方法：（1）取1ml被检样李斯特 氏菌增菌肉汤用于提取DNA的，模板DNA 的制备， 根据试剂盒说明书进行；（2 ）PCR反应体系：20μl 。 H2O(二馏灭菌水) 12.8μl， 10×buffer2.0μl， Mg2+(25mol/l) 2.0μl， 4×dNTP(10mmol/ml) 1.6μl， Primer(30pmol/μl) 各0.25μl， Taq E（2.5U/μl）0.1μl DNA(20-30ng/μl )1.0μl；
该菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌，在纯培养物 中呈短小杆菌，在初龄培养物中呈球杆菌状 ，在老龄培养物中呈长丝的长杆菌状，有些 细菌因此而变成革兰氏阴性；为需氧或兼性 厌氧菌，在20～25℃培养时能形成4根鞭毛 ，运动活泼；在37℃培养时无鞭毛，运动消 失。
1.初筛 在我们前期工作中发现，高污染样品在选 择性琼脂平板上可疑菌落较多，为避免漏检 和减少工作量，增加初筛步骤：挑取典型或 可疑菌落接种在木糖、鼠李糖发酵管中，无 须烧环同时TSA-YE平板上划线分离纯菌。
金葡
伊氏李
马红
单核
对小鼠的毒力试验 （可选择） 将符合上述特性的纯培养物接种于TSB-YE 中, 于30℃培养24 h, 离心, 弃上清液，用 0.85无菌生理盐水制备成浓度为1010cfu/mL的 菌悬液, 取此菌悬液进行小鼠腹腔注射 3～5只 , 每只0.5 mL，观察小鼠死亡情况。致病株于2 ～5d 内死亡。试验时可用已知菌作对照。单核 细胞增生利斯特菌、伊氏利斯特菌（ L.ivanovii）对小鼠有致病性。
谢谢！！！
于35℃培养24h-48h，穿刺时尽量接近底 部，但不要触到底面，同时避免琼脂破裂 。 于明亮处观察洁净的血琼脂平板，单 增李斯特菌和斯氏李斯特菌在刺种点周围 产生狭小的透明溶血环，无害李斯特菌无 溶血环，伊氏利斯特菌产生大的透明溶血 环。注意：不要据此来区别李斯特氏各种 菌，仅仅是一种溶血现象。用CAMP试验来 确证李斯特氏各种菌。
单增李斯特菌编码: 2410、2510、2550、6010、6110、6150、 6410、6450、6510
VITEK
采用聚合酶链式反应技术（PCR）特异 性扩增单核细胞增生李斯特氏菌溶血 素基因(hlyA)，并评价该方法的特异 性与敏感性。 结果 在706bp处出现 nuc基因的目的片断，只有单增李氏菌 的目的片段获得扩增其它菌种扩增均 呈阴性；该方法可以检测到3.3pg/μl 的DNA。
引物 针对单核细胞增生李斯特氏菌溶 血素基因（hlyA）设计引物，委托上海 生物工程技术服务有限公司合成。单核 细胞增生李斯特氏菌特异性引物序列如 下： 上游（F）： 5´--GCCTGCAAGTCCTAAGACGCCAATC—3´ 下游（R）： 5´--CTTGCAACTGCTCTTTAGTAACAGC--3´
表1 单核细胞增生李斯特菌在选择性平板 上的菌落特征 选择性琼脂平板单核细胞增生李斯特菌科 玛嘉显色培养基菌落为:蓝色，周围有白色 晕圈. PALCAM琼脂菌落:为灰绿色，小的圆形菌落 ，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色 凹陷
L.M在 Chromagar培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
L.M在PALCAM培养基生长特征
MMA抑制性强，菌落小、形态不典型，很难 与杂菌区分 进口PALCAM 、进口OXA菌落较典型，易与 杂菌区分 CHROMagar菌落较典型，易与杂菌区分，对 高污染食品中的杂菌抑制性较差
染色镜检 将上述可疑纯培养物做革兰氏染色并做湿片 检查; 利斯特菌为革兰氏阳性短杆菌, 大小 为0.4～0.5μm×0.5～2.0μm；用生理盐水 制成菌悬液, 在油镜或相差显微镜下观察, 该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动。
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伊氏李斯特氏菌 (L.ivanovii) (绵羊) 英诺克李斯特氏菌 (L.innocua) (无害)
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注：＋阳性；－阴性；V反应不定。
动力试验 将TSA-YE平板上的疑似菌落穿刺接种到SIM培 养基中，于30℃培养24h-48h，李斯特菌有动 力，呈伞状生长。 溶血实验： 将7%羊血琼脂平板底面划分为20-25个小格， 从TSA-YE上挑取菌落刺种到血平板上，每格刺 种一个菌落，并刺种阳性对照菌(单增李斯特 菌和绵羊李斯特菌)和阴性对照菌(英诺克李斯 特菌)，
（3）扩增条件：预变性94℃ 5min， 变性95℃60s退火 63℃ 60s ，延伸 72℃ 60s 30个循环，再延伸 72℃8min，20℃ pause。 （4）结果观察：PCR产物用1.5％琼脂 糖凝胶，100v电压电泳，溴化乙锭 (EB)染色，凝胶成像分析仪中观察扩 增结果，扩增片段长度为706bp。
菌种 单核细胞增生李斯特氏菌 (L.monocytogenes)
溶血反应
协同溶血
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葡萄糖
麦芽糖
MR-VP
甘露醇
鼠李糖
木糖
七叶苷
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格氏李斯特氏菌 (L.grayi) 斯氏李斯特氏菌 (L.seeligeri)
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