单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定
单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定
引言
单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的食源性致病菌，可引起严重的食物中毒和感染疾病。为了及时诊断和控制该菌的传播，对其进行准确的生化鉴定非常重要。本文将介绍单核细胞增生李斯特氏菌的生化鉴定方法及相关实验步骤。
实验材料与方法
实验材料
•单核细胞增生李斯特氏菌培养基
•Listeria Enrichment Broth（LEB）
•Listeria Agar Base（LAB）
•乳清素蛋白水解物培养基（Trypticase Soy Broth，TSB）
•乳清素蛋白水解物琼脂培养基（Trypticase Soy Agar，TSA）
•碱性亮绿液
实验方法
1.取一份食物样品，如肉类、奶制品等，加入适量LEB中，并在37℃孵育24
小时。
2.取0.1ml培养液，在TSB中进行预培养，37℃孵育24小时。
3.从TSB中取出适量菌液，用胶体金法进行菌落计数，并将菌液稀释至10-4
倍。
4.取适量的稀释液分别接种于LAB和TSA琼脂培养基上，并在37℃孵育24小
时。
5.观察菌落形态、颜色等特征，并记录下来。
生化鉴定实验
单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定步骤如下：
1.琼脂凝胶双扩散试验：将单核细胞增生李斯特氏菌抗原与相应的抗血清共同
扩散于琼脂凝胶板上，观察是否发生免疫反应。若有明显的线条或沉淀形成，则说明存在抗原-抗体反应，可以初步判断为单核细胞增生李斯特氏菌。
2.碱性亮绿液试验：将培养基中的单核细胞增生李斯特氏菌与碱性亮绿液接触，
观察是否产生绿色荧光。若产生绿色荧光，则说明菌株具有单核细胞增生李
斯特氏菌的特性。
3.单核细胞增生李斯特氏菌脂多糖（LPS）鉴定：采用酚-硫酸法或酚-硝基苯
法，将培养基中的单核细胞增生李斯特氏菌进行LPS提取，然后进行比色反
应。若出现红色或紫色沉淀，则说明存在LPS，可以进一步确认为单核细胞
增生李斯特氏菌。
结果与讨论
通过上述实验方法，我们可以对食物样品中的单核细胞增生李斯特氏菌进行生化鉴定。通过观察菌落形态、颜色等特征以及进行碱性亮绿液试验和LPS鉴定，可以初步判断是否存在单核细胞增生李斯特氏菌。然而，为了确保结果的准确性，还需要进一步进行分子生物学方法的检测。
总结起来，单核细胞增生李斯特氏菌的生化鉴定是一项重要且复杂的实验工作。通过合理选择实验方法和仔细操作，可以准确鉴定出单核细胞增生李斯特氏菌的存在，并为进一步的研究和防控提供重要依据。
参考文献
1.Buchrieser, C., Rusniok, C., Kunst, F., et al.（2003）. The genome
sequence of the foodborne pathogen Listeria monocytogenes reveals
genetic adaptations to the gastrointestinal tract. Science,
301(5630), 1919-1923.
2.Graves, L.M., Helsel, L.O., Steigerwalt, A.G., et al.（2010）.
Listeria marthii sp. nov., isolated from the natural environment,
Finger Lakes National Forest. International Journal of Systematic
and Evolutionary Microbiology, 60(6), 1280-1288.
3.Gray, M.L., & Killinger, A.H.（1966）. Listeria monocytogenes and
listeric infections. Bacteriological Reviews, 30(2), 309-382.
以上是对单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定的内容介绍，希望能对相关研究和实验工作有所帮助。
乳与乳制品病原微生物检验方法单增李斯特菌的检验
乳与乳制品病原微生物检验方法单增李斯特菌的检验 YLNB 4.6 1. 仪器及器材 1.1 恒温培养箱：30±1℃、24±1℃ 1.2 恒温水浴锅：46±1℃。 1.3 显微镜：10×～100× 1.4 离心机：4000 r/min 1.5 均质器或灭菌乳钵。 1.6 灭菌平皿：直径90mm。 1.7 灭菌试管： 16mm×160mm 1.8 灭菌吸管：1mL（具有0.01mL刻度）、10mL（具有0.1mL 刻度）。 1.9 冰箱：0－4℃ 1.10 锥形瓶：100mL、500mL。 1.11 架盘药物天平：0g～500g,精确至0.5g。 1.12 离心管：30mm×300mm。 1.13 灭菌注射器：1 1.14 单核细胞增生李斯特氏菌标准株。 1.15 马红球菌。 1.16 小白鼠：16g～18g。 2. 培养基和试剂
2.1含0.6%酵母浸膏的胰酪大豆肉汤(TSB－YE)：见附录 A1。 2.2含0.6%酵母浸膏的胰酪大豆琼脂(TSA－YE)：见附录 A2。 2.3 EB增菌液：见附录A3。 2.4 LB增菌液(LB1，LB2)：见附录A4。 2.5 三糖铁(TSI)琼脂：GB/T4789.28中4.26，4.27。 2.6 SIM动力培养基：见附录A5。 2.7 血琼脂：GB/T4789.28中4.6。 2.8 改良的Mc Bride(MMA)琼脂：见附录A5。 2.9 硝酸盐培养基：GB/T 4789.28中 3.17。 2.10 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)：GB/T4789.28中 3.4。 2.11 糖发酵培养基：GB/T4789.28中 3.2。 2.12 过氧化氢酶试验：GB/T4789.28中4.38。 2.13 盐酸吖啶黄(AcriflavineHCl)(Sigma)。 2.14 萘啶酮酸钠盐(Naladixicacid)(Sigma)。 3. 检验程序 单核细胞增生李斯特氏菌检验程序如下： 检样25g(ml) EB增菌液225ml LB1增菌液225ml
ISO标准(参考译文)单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法
国际标准ISO11290-1 第一版1996-12-15 食品和动物饲料微生物学---单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法第一部分 检测方法 目录 内容页次 1 范围 1 2 参考标准 1 3 定义 1 4 原理 2 5 培养基和试剂 2 6 设备和玻璃仪器 3 7 取样 3 8 取样前处理 3 9 步骤 3 10 结果表述7 11 检验报告7 附录 A 检验步骤图8 B 培养基和试剂的组成和配制9 C 亨氏证明试验16
食品和动物饲料微生物—单核增生李斯特氏菌检测和计数的水平方法 第一部分 检测方法 警告：为了保障实验室人员的安全，强烈推荐执行单核增生李斯特氏菌检验应在具备相应设备条件的实验室进行，在有经验的微生物专家控制下，保温后的一切丢弃物应小心处理。特别是，强烈推荐孕妇不能操作单核增生李斯特氏菌的培养。 1 范围 本ISO11290详细说明了单核增生李斯特氏菌检测和计数的水平方法。 限于简介中讨论的条件，本ISO11290适用于给人消费和作为动物饲料的产品。 2 参考标准 以下标准包含的条件；通过参照这些内容，组成了这部分ISO11290的条件。出版时，引用的这些版本是有效的。所有标准都需要修订，而各机构对本部分基于ISO11290的批准应鼓励调查和应用以下引用标准的最近版本。IEC和ISO成员保留目前有效的国际标准的注册。 ISO6887：1983，微生物学---微生物检验中稀释液制备的一般导则 ISO7281：1996，食品及动物饲料微生物学---微生物检验通则 3 有关定义 本部分ISO11290适用以下定义： 3.1 单核增生李斯特氏菌依据本部分ISO11290实施检验，在固体选择性培养基上形成典型菌落并呈现固有形态、生理生化特征的微生物。 3.2单核增生李斯特氏菌的检验依据本部分ISO11290实施检验，在给定产品的质量和体积的条件下，检验这些微生物的存在或不存在。 4.原理 在本部分ISO11290范围内，单核增生李斯特氏菌检验需要四个连续的阶段（见附录A检验流程图） 注意1：李斯特氏菌可能存在量少并与大量的其它种类细菌混杂，因此需要选择性富集。同时也必须检测受破坏的李斯特氏菌，初级选择性富集培养基，含有降
单核细胞增生李斯特菌
单核细胞增生李斯特菌 形态特征： ①革兰氏阳性的类球形杆菌 ②大小约为0.4~0.5µm x 0.5～2.0µm ③两端钝圆 ④在有些培养基中稍弯，单个、成V形或成对平行排列 ⑤在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性 ⑥兼性厌氧，无芽孢，一般不产生荚膜 ⑦在20~25℃时以4根周毛运动，在37℃时只有较少的鞭毛或1根鞭毛 培养特性： ①需氧和兼性厌氧 ②生长范围为2-42℃ ③最适温度为35-37℃ ④pH中性至弱碱性（pH9.6） ⑤在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。 ⑥在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。 ⑦在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
⑧在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。 ⑨在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。 生化特性：（甘露醇、木糖为阴性，其他为阳） 1.该菌触酶阳性，氧化酶阴性。 2.发酵多种糖类，产酸不产气。 发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。 不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。 3.不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。 4.吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。 5.MR-VP试验和精氨酸水解阳性。 生化试验： ①动力试验+ 原理：有动力的细菌扩散生长，培养基浑浊，无动力的细菌培养基澄清。（结果：有动力，呈伞状生长，底为弯月牙形）
李斯特菌检验
李斯特氏菌 李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。李斯特氏菌 - 概况 李斯特菌 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。李斯特氏菌 - 特点 李斯特菌快速检测试剂盒 1、分布广：存在于土壤、水域(地表水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、鱼、鸟、野生动物、家禽。 2、生存环境可塑性大：能在2-42℃下生存(也有报道0℃能缓慢生长)能在冰箱冷藏室内较
单核细胞增生李斯特氏菌检验检测细则
单核细胞增生李斯特氏菌检验检测细则 1、目的 根据《中华人民共和国国家标准》GB/T4789.30-2003单核细胞增生李斯特氏菌检验进行单核细胞增生李斯特氏菌检验。 2、适用范围 适用于食品和食物中毒样品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。 3、职责 检测人员负责按照本规程对被测样品进行检测；校核人员负责对检测操作人员是否规范以及检测结果是否准确进行审核；授权签字人负责综合管理和检测报告的签发。 4、试剂及器材 4.1 单核细胞增生李斯特氏菌标准菌株 4.2 马红球菌 4.3 小白鼠：16-18g 4.4 TSB-YE 4.5 TSA-YE 4.6 EB增菌液 4.7 李氏增菌液（LB1，LB2） 4.8 三糖铁琼脂 4.9SIM动力培养基 4.10 琼脂 4.11 改良的Mc Bride琼脂（MMA） 4.12 硝酸盐培养基 4.13 缓冲葡萄糖蛋白胨水 4.14 糖发酵培养基 4.15 过氧化氢 4.16 1%盐酸丫啶黄溶液 4.17 1%萘啶酮酸盐溶液 5、仪器设备 5.1 恒温培养箱：30±1℃、24℃±1℃ 5.2 恒温水浴锅：46±1℃ 5.3 离心机：4000r/min 5.4 显微镜 5.5 均质器 6、检测步骤 6.1样品的收集及处理：无菌取样25g（ml）放灭菌均质器中加225mlEB和LB1 增菌液中，充分搅拌成均质。如不能及时检验，可暂存4℃冰箱。 6.2增菌培养：EB增菌液30℃培养48小时，LB1增菌液225ml放30℃培养24 小时，吸取0.1ml，加入10ml LB2增菌液中二次增菌。 6.3分离培养：将EB增菌液和LB2二次增菌分离于选择培养基MMA琼脂平板 上，培养30℃48小时，挑选可疑菌落，用白织灯45。角斜光照射平板。
李斯特氏菌的检验
李斯特氏菌的检验 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南 非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发觉的，为纪念近代消毒手 术之父、英国生理学家约瑟夫李斯特（1827～1912），1940年被第 三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。单核细胞增生李斯特氏 菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染 后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然 界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的平安具有危急，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威逼人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必需加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证明是李 斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严峻的可引起血液和脑组织感染， 许多国家都已经实行措施来掌握食品中的李斯特菌，并制定了相应 的标准。 其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯 特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。 试验步骤 1. 增菌培育 将未开封的测试片贮藏在8℃的环境下，并在包装上标示的有效
期内使用。在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。取回的样品应在4℃下处理、存放和运输，假如是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。 取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培育4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，连续培育20h和44h.。 2. 分别 共培育24h和48h后，取EB培育物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培育24-48h，LPM平板在30℃培育24-48h。然后，把LPM平板放于解剖镜载物台上，以450角入射光从平板下面照耀平板，通过目镜垂直向下观看查找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对比。 已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。 加入七叶苷和Fe3 的LPM平板不用斜射光系统，选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落四周有一个黑色环，其它菌也可形成黑色环，但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相像。在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落，分别
单核细胞增生李斯特氏菌的研究进展资料
单核细胞增生李斯特氏菌的研究进展 摘要:单核细胞增生性李斯特氏菌是人类一种重要的食源性致病菌，单核增生李斯特氏菌的危害近年来引起世界各国食品和卫生部门的广泛关注. 本文主要阐述了单核细胞增生性李斯特氏菌的生长特性，包括生物学特性、流行病学、致病性的一些研究，以及对该菌的传统分离方法、免疫学检测方法、核酸检测等方法的最新进展进行了综述，为进行该菌的准确、快速检测奠定了基础. 关键词：单核细胞增生性李斯特氏菌 , 生物学特性 , 检测方法 Research Advance on Listeria Monocyto--genes Dong Qian College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400715, China Abstract: listeria monocytogenes is one of the important food-derived pathogens for human, and listeria monocytogenes have been paid close attention by public health and food bureaus the world over. The growth characteristic including biological characteristics, epidemiological, pathogenic, epidemiology, and recent advances of listeria monocytogenes detection methods, including traditional detection procedures, immunity detection patterns and nuclear acid assays were reviewed. Thus, a foundation of rapid and accurate detection methods of the bacteria were laid. Key word: Listeria monocytogenes , Biological characteristics , Detection method
单增李斯特氏菌检验原始记录
单增李斯特氏菌检验原始记录 __________疾病预防控制中心 单核细胞增生李斯特氏菌检验原始记录 共页第页 检验者：审核者：年月日 样品编号样品名称 检验依据 GB/T4789.30-2003 检验环境 温度℃ 湿度 %RH 检验日期 仪器设备名称、规格型号、精度、编号电子天平: YP-1002 0.01g 105 有计量合格标识，并在检定有效期内. 恒温培养箱: DH6000 0.1℃ 88 有计量合格标识，并在检定有效期内. 样品复苏 __月__日_____ 无菌操作，将待检样品磁珠置于10mL 无菌营养肉汤中37℃温育24h 复苏。 样品制备__月__日_____按无菌操作取待检肉汤1mL 置于10mL LB 1增菌液中 增菌 1．将上述均质好的LB 1增菌液，于30±1℃培养24h 。 2．__月__日 ____取LB 1增菌液0.1ml 转种于10ml LB 2增菌液内,于30±1℃培养24h 。 选择性琼脂平板 观察现象结果分离 MMA 琼脂 要求36℃±1℃；48h 。 培养 ___日____时至___日____时。 ＿＿显色培养基 要求36℃±1℃；24h ～48h 。培养 ___日____时至___日____时。初筛
TSI 琼脂 要求36℃±1℃；18h ～24h 。培养 ___日____时至___日____时。 TSA-YE 培养基要求30℃±1℃；24-48h 。培养 ___日____时至___日____时。 动力试验 SIM 动力培养基 要求25℃±1℃；18～24h 。培养___日____时至___日____时。血平板溶血实验要求36℃±1℃；18h ～24h 。培养 ___日____时至___日____时。 染色镜检 现象 结果 API （Listeria 10300）生化 鉴定试剂盒 编码结果 实验结果样品中单核细胞增生李斯特氏菌 备注
乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果与分析
乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果与分析 单核细胞（monocytes）是一类存在于人体血液和组织中的白细胞（leukocytes）。它们作为免疫系统中的重要成分，具有很强的吞噬能力 和免疫调节功能。李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏 阳性杆菌，它能够引起严重的人类食物中毒，尤其是婴儿和免疫缺陷患者。乳粉作为婴幼儿的主要食物，其安全性尤为重要。 为了对乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌的能力进行验证，可以进行以 下步骤： 1.材料准备: -乳粉样品 - 特定培养基（如Listeria Enrichment Broth） -李斯特氏菌（已知培养物） -离心管 -培养皿 2.试验步骤: a.预处理乳粉样品: -取适量的乳粉样品，加入适量的特定培养基 -将混合物在摇床上以适当速度摇匀 -使用离心机将样品离心，以除去悬浮的杂质 b.培养李斯特氏菌:
-取一定量的已知培养物，加入特定培养基中 -在适当的温度和湿度下，培养李斯特氏菌至适宜的生长期 c.接种乳粉样品: -取适量的乳粉样品，加入特定培养基中 -添加已培养的李斯特氏菌（适量）到乳粉样品中 -使混合物充分混合 d.孵化和观察: -将接种混合物接种到适当的培养皿中 -将培养皿置于适当的环境中（温度、湿度等） -在一定时间内观察培养皿中是否有李斯特氏菌的生长 3.结果与分析: 通过观察培养皿中的生长情况，可以得出以下结论和分析： -如果培养皿中出现了李斯特氏菌的生长，说明乳粉样品中存在单核细胞增生的李斯特氏菌能力。 -如果培养皿中未观察到李斯特氏菌的生长，说明乳粉样品中不存在单核细胞增生的李斯特氏菌能力。 -结果应与对照组进行比较，以确定是否存在显著差异。 需要注意的是，这是仅仅通过培养方法进行初步验证，不能判断乳粉样品的感染风险和食用安全性。为了更准确地评估乳粉中李斯特氏菌的存在和潜在传播风险，还需要进一步的实验和分析方法，如PCR检测、测定
单增李斯特氏菌检验原始记录
__________疾病预防控制中心 单核细胞增生李斯特氏菌检验原始记录 共 页 第 页 检验者： 审核者： 年 月 日 样品编号 样品名称 检验依据 GB/T4789.30-2003 检验环境 温度 ℃ 湿度 %RH 检验日期 仪器设备名称、规格型号、精度、编号 电子天平: YP-1002 0.01g 105 有计量合格标识，并在检定有效期内. 恒温培养箱: DH6000 0.1℃ 88 有计量合格标识，并在检定有效期内. 样品复苏 __月__日_____ 无菌操作，将待检样品磁珠置于10mL 无菌营养肉汤中37℃温育24h 复苏。 样品制备 __月__日 _____按无菌操作取待检肉汤1mL 置于10mL LB 1增菌液中 增菌 1．将上述均质好的LB 1增菌液，于30±1℃培养24h 。 2．__月__日 ____取LB 1增菌液0.1ml 转种于10ml LB 2增菌液内,于30±1℃培养24h 。 选择性琼脂平板 观察现象 结果 分离 MMA 琼脂 要求 36℃±1℃；48h 。 培养 ___日____时至___日____时。 ＿＿显色培养基 要求 36℃±1℃；24h ～48h 。 培养 ___日____时至___日____时。 初筛 TSI 琼脂 要求 36℃±1℃；18h ～24h 。 培养 ___日____时至___日____时。 TSA-YE 培养基 要求 30℃±1℃；24-48h 。 培养 ___日____时至___日____时。 动力试验 SIM 动力培养基 要求 25℃±1℃；18～24h 。 培养 ___日____时至___日____时。 血平板溶血实验 要求 36℃±1℃；18h ～24h 。 培养 ___日____时至___日____时。 染色镜检 现象 结果 API （Listeria 10300）生化 鉴定试剂盒 编码 结果 实验结果 样品中 单核细胞增生李斯特氏菌 备注
单增李斯特氏菌及其检测方式
单增李斯特氏菌及其检测方式 —、单增李斯特氏菌 单増李斯特氏菌，学名Usteria monocytogenes ,—种革兰氏阳性菌，是李斯特菌属。李斯特菌属(Listeria)共分为2个群，7个种：第一群包括单核细胞増生性李斯特菌(L monocytogenes , LM)(亦称产单核细胞李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L ivanovii)(亦称绵羊李斯特菌)、英诺克李斯特菌(Linnocua)(亦称无害李斯特菌)、丰氏李斯特菌(L welshimei)、塞氏李斯特菌(L seeligeri),第二群包括格氏李斯特菌(L grayi)和莫氏李斯特菌(L mulTayi)0其中，单増李斯特菌是唯一能引发疾病的人畜共患病的。它能引发人、畜的李氏特菌病，感染后要紧表现为、和单核细胞増多。 二、单增李斯特氏菌检测方式 1.细菌培育法 该菌营养要求不高，兼性厌氧，最适在含有C02的微需氧环境中生长，生长温度范围°＜：45。＜：, 最适温度为30°C-37°C ,能在一般冰箱冷藏室生长，是一种典型的耐冷性细菌，同时还具有耐盐性。LM 在一般琼脂平板上呈细小直径约、半透明露珠样菌落。在血琼脂平板上有P溶血环。在显色培育基上呈蓝绿色。 2.生化鉴定法 该菌要紧生化特性如下： ®触酶阳性； ②氧化酶阴性； ③发酵多种糖类； ④产酸不产宅；
⑤不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二塘； ⑥不利用枸檢酸盐，40%胆汁不溶解； ⑦D引嗥、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、乌氨酸均阴性； ® VP、甲基红实验和精氨酸水解实验阳性； ®对碱和盐抗击力强，60・70°C经5-20分钟可杀死，70%酒精5min. %石碳酸、％氢氧化钠、% 福尔马林20min可杀死此菌。 ⑩该菌对青霉素、氨苯青霉素、四环素、磺胺均灵敏。 3.血清凝集法 依照菌体抗原和鞭毛抗原，L M分为16个血清型：1/2比l/2b. l/2c. 3a. 3b、3c、4a、4ab. 4b. 4c、4d、4e、五、6a. 6b、7e抗原结构与毒力无关,对人致病的要紧为血清型l/2a. l/2b. 4b,占全世界本病病例约90%。 关于血清凝隼法用的诊断血清方面推荐天津生物芯片公司生产的单増李斯特氏菌全套诊断血清产品，该菌最多见的0:3,0:5,0:8和0:9型的诊断血清被纳入这套产品，详情如下: 二十三、单增李瞬菌诊断 血清
李斯特菌检验应用
李斯特氏菌 李斯特菌 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的 李斯特菌快速检测试剂盒 1、分布广：存在于土壤、水域(地表水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、鱼、鸟、野生动物、家禽。 2、生存环境可塑性大：能在2-42℃下生存(也有报道0℃能缓慢生长)能在冰箱冷藏室内较
长时间生长繁殖。 3、适应范围大：酸性、碱性条件下都适应。 4、带菌较高的食品有：牛奶和乳制品；肉类(特别是牛肉)；蔬菜；沙拉；海产品；冰淇凌 单核细胞李斯特菌在半固体培养基上生长情况 李斯特菌具有较强的反抗力，秋冬时期在土壤中能存活5个月以上，在冰块内也可存活3～5个月，许多冷冻肉类都是它的“温床”。这种细菌对高温的反抗力也比较强，能在100℃下挺15～30分钟，在70℃下可存活30分钟以上。 单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道，健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。 该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接触也是本病传播的可能途径，且有 1、形态与染色
【慧眼识菌】1例血培养检出单核细胞增生李斯特菌分享
【慧眼识菌】1例血培养检出单核细胞增生李斯特菌分享 责任编辑：刘颖梅王辉 1例血培养检出单核细胞增生李斯特菌分享 段宁王利君 北京清华长庚医院检验科 患者，女，86岁，主因“无明显诱因发热38.5℃”，3.16 急诊就诊后入院，入院诊断肝硬化、泌尿系感染。 一、病例特征 1. 患者无明显诱因出现发热38.5 ℃，并伴有周身酸痛，无头痛，咽痛，咳嗽，咳痰。无腹痛，腹泻等其他不适症状。 2. 既往：肝硬化，上消化道出血1年。1年前行胃镜下食管静脉曲张结扎术，术后未再发消化道出血。 3. 体温：39.4℃；脉搏：88次/分；呼吸：18次/分；收缩压：172mmHg；舒张压：66mmHg；血氧：100%。 4. 神清语利，咽略充血，双扁桃体不大，双肺呼吸音清，未闻及明显干湿啰音，心律齐，腹软无压痛，双下肢不肿。 二、辅助检查： 1. 尿常规：比重<1.005，白细胞>1.005，白细胞>μl，亚硝酸盐阳性，白细胞（镜检）满视野cells/HPF。 2. 血常规：白细胞5.15×109/L，中性粒细胞百分比 81.20%，血红蛋白 41.00g/L，血小板19.00×109/L。 3. 3.19日 PCT 1.82ng/ml。 4. 微生物培养 (1)痰培养：涂片不合格，肺炎克雷伯菌中量。（注：不合格痰，我院只报告优势菌菌名，不出药敏。） (2)尿培养：1ul接种，培养阴性。
(3)血培养：3.16送检血培养，1天9小时报警阳性，涂片革兰氏阳性杆菌,20日报告菌名。3.19 仍高热继续送检血培养，2天5小时报警阳性，革兰氏阳性杆菌，24日报告菌名。 三、治疗 3.16-3.18头孢曲松2g qd治疗泌尿系感染3日，3.19晚上发热仍然不退，抽取血培养及PCT，同时升级抗生素为亚胺培南，次日患者体温下降，21日出院，继续院外口服阿莫西林。 四、微生物鉴定过程 1.血培养报阳后，涂片镜下可见革兰阳性短杆菌，见图1 图1：血培养瓶革兰染色涂片，镜下可见革兰氏阳性成簇小杆菌 2.血培养阳性瓶转种，37℃5% CO2条件下培养24h后见灰白色、半透明的菌落(图2)，平板背面可见溶血（图3），刮掉菌落后出现狭窄溶血环（图4）。菌落革兰氏染色显示革兰阳性球杆状（图5）。
十单核细胞增生李斯特氏菌检验标准操作程序
DBS22 DBS22/019—2012 吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测2013年发布 2013年实施 吉林省卫生厅发布 前言 本标准根据GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的要求编写. 本标准分为两种检测方法： 第一法：单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法; 第二法：MPN计数法。 其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品. 本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心、长春市疾病预防控制中心。 本标准负责起草人:刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇
吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测 1 范围 本操作程序规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的定量检验方法。本操作程序适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下: 2。1 冰箱：2℃～5℃和—18℃。 2.2 恒温培养箱:30℃±1℃、36℃±1℃。 2。3 均质器。 2。4 显微镜：10×～100×. 2.5 电子天平：感量0。1 g. 2.6 锥形瓶：100 mL、500 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL(具0。01 mL刻度）、10 mL（具0。1 mL刻度)。 2。8 无菌平皿:直径90 mm。 2。9 无菌试管：16 mm×160 mm.。 2.10 离心管:30 mm×100 mm。 2.11 无菌注射器：1 mL. 2。12 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）。 2。13 马红球菌（Rhodococcus equi）。 2.14 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3。1 含0。6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB—YE）：见附录A中A.1。 3。2 含0。6％酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA—YE）：见附录A中A。2。 3。3 李氏增菌肉汤LB（LB1，LB2）：见附录A中A.3。 3。4 1％盐酸吖啶黄（acriflavine HCl）溶液：见附录A中A。3.2。1。 3.5 1%萘啶酮酸钠盐（naladixic acid）溶液:见附录A中A.3.2。1。 3.6 PALCAM琼脂：见附录A中A。4。 3。7 革兰氏染液：见附录A中A.5。 3.8 SIM动力培养基：见附录A中A。6。 3。9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红（MR)和V-P试验用]：见附录A中A.7。3.10 5%-8%羊血琼脂：见附录A中A.8。 3。11 糖发酵管:见附录A中A。9. 3.12 过氧化氢酶试验：见附录A中A。10. 3.13 李斯特氏菌显色培养基。 3。14 API listeria 10300生化鉴定试剂盒. 第一法单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法 4 检验程序
单核细胞增生李斯特氏菌检验 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准 食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 1.范围 本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的检验方法。 本标准第一法适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定性检验；第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较高的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的计数；第三法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的计数。 2.设备和材料 注: 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。 2.2 恒温培养箱：30 ℃±1 ℃、36 ℃±1 ℃、20 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 显微镜：10倍～100倍。 2.5 电子天平：感量0.1 g 。 2.6 锥形瓶：100 mL、500 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。 2.8 无菌平皿：直径90 mm。 2.9 无菌试管：16 mm×160 mm。 2.10 离心管：30 mm×100 mm。 2.11 无菌注射器：1 mL。 2.12 单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes A TCC19111或CMCC54004）、英诺克李斯特氏菌（Listeria innocua ATCC33090）、伊氏李斯特氏菌（Listeria ivanovii ATCC19119）、斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri ATCC35967）或具相同效果的标准株。 2.13 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC25923或其他产β-溶血环金葡菌）。 2.14 马红球菌（Rhodococcus equi ATCC6939或NCTC1621）。 2.15 小白鼠：ICR体重18 g～22 g。 2.16 全自动微生物生化鉴定系统。