单核细胞增生李斯特菌InlC基因缺失株的构建及其毒力和环境耐受性的研究
单核细胞增生李斯特菌血清型、耐药性研究
Ａ ｓｒ ｅ ０ｂ ｔ ｅ Ｔ ｖ ｓ ｇ ｔ ｔｅｓｒｔｐ ｎ ｅｓ ｓｅｔ ｉｔ ｎｉ ｃｏ ｉｌ ｇ ｎｓｉ ｉｔ ｉ ｂ ｔａ ｔ ｊｃｉ ｏｉ ｅｔ ａ ｅｏｙ ｅａ ｄｔ ｕ ｃｐｉ ｌｙｔ ａ ｔ ｒｂａ ａ ｅ ｔ ｎＬｓ ｒ ｅ ｖ ｎ ｉ ｅｈ ｈ ｂｉ ｏ ｍｉ ｅａ
（ Ｃ ｌ ｇ ｆ ｉ ｔｎ ｕｔ ｄ ｏ ｄＳ ｉ ｃｓＳ ｕｈ ｈｎ ｎｖｒｉ ｆ ｅｈ ｏｏ ｙＧ ａｇ ｈｕ５ ０ ４ ； ａ ｄ ｇ ｏａｉｎｌｎ １ ｏｌ ｅ Ｌｇ ｄ ｓｙａ ｏ ｃ ｎ ｅ， ｏ ｔ ｉａ ｉｅｓｙｏ Ｔ ｃｎ ｌｇ ， ｕｎ ｚｏ １６０ ２ ｏ ｉ ｃｔ ａ ａｄ ｅ ｏ ｈＩ ｒ ｎＦ ｅ Ｃ Ｕ ｔ Ｂ ｎＶ ｏ
ｉ ｅ ｅｉ ｒ ｎ ｕ ｎ ｔ ｒ ｐ ｙ ｔ ｅ ｂ ｏ ｈ ｍ ｉｒ ｄ ｌ ｔｏ ｔ ｏｄ ｎ ｖ ｔ ｒｎａ ｙ ａ ｄ ｈ ｍａ ｈｅ ａ ｙ ｂ ｈ ｒ ｔ ｃ ｏ ｉｕ ｉ ｎ ｍｅｈ ．Ｒｅ ｕｉｓ Ａｍｏ ｈｅ ９１ ｓ ａｅ ｈ ｒ ｒ ｓ ｔ ｎｇ ｔ ｏｌｔ ｓｔ ｅ ｅ ｗｅ ｅ ５ ｉ
Ｓｔ ｙ ｏ ｅ ｏ ｙ ｎｄ ａ ｔｂｉｔｃｒ ｓｓａ ｅｉ ｓｅ ｉ ｎｏ ｙｔｇｅ ｓ ｕｄ ｎ ｓ ｒ ｔ ｐｅａ ｎ ｉ ｏ ｉ ｅ ｉｔ ｎｃ ｎ Ｌｉｔｒａ ｍｏ ｃ ｏ ｎｅ
Ｙａ Ｗ ａ ｇＢｉ Ｓ ｉ ｏ ｚ ｏ ｇ ， ｅ ｇ Ｈｅ ｃ ｅ ｇ ａ ｄ Ｓ ｉ ｉ ｎ Ｈｅ ， ｎ ｎ ， ｈ Ｂａ ・ ｈ ｎ Ｍ ｎ － ｈ ｎ ｎ ｈ Ｌｅ
摘 要 ： 目的 了解 河 北 省２ ０ ～ ０７ ９ 株食 源 性 致 病 菌 单 核 细 胞增 生李 斯 特 血 清 型 、 耐 药性 特 点 。方 法 血 清 凝 集 试 验 ０５２０年 １ 确 定 实 验 菌 株 的 血 清 型 ；微 量 肉 汤稀 释 法 检 测 实验 菌 株 对 Ｂ 内酰 胺 类 、喹 诺 酮 类 、 氨 基 糖 苷 类 、 四环 素 类 、大 环 内酯 类 、 糖 肽 ． 类 、磺 胺 类 等 抗 生 素 的 药物 敏 感 性 。结 果 ９ 株 单 核 细 胞 增 生 李斯 特 菌 分 属 ５ 血 清 型 （／ａ １ ｂ １ ｃ ｂ ３） １ 个 Ｉ ， ／ ， ／ ，４ 和 ａ，主 要 血 清 型 ２ ２ ２ 为 １２型 ， 占４ ．％， 分 离 Ｎ ８ 致 病 力 较 强 的４ 血 清 型 。耐 药 性 分 析 表 明 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 菌 对 四环 素 耐 受 最 为 严 重 ，耐 药 ／ａ ９５ 株 ｂ 率 为 １ ．％（４９ ） 且４４ ４９ ） 株对 强力 霉 素 交 叉 耐 药 ；少 量 菌株 对 临床 治疗 李 斯 特 菌 病 抗 生 素 氨 苄 西林 、庆 大 霉 素 、复 方 ５ ４ １／１， ． ％（／１菌
单增李斯特菌lmo2193基因缺失株的构建及其部分生物学特性研究
单增李斯特菌lmo2193基因缺失株的构建及其部分生物学特性研究单增李斯特菌lmo2193基因缺失株的构建及其部分生物学特性研究摘要：单增李斯特菌是一种广泛存在于自然环境中的革兰氏阳性杆菌，具有高度的致病性和传染性。
本文通过基因缺失技术构建了单增李斯特菌lmo2193基因缺失株，并对其进行了部分生物学特性的研究。
结果表明，lmo2193基因缺失株在生长速率、菌落形态和耐受性方面与野生型株存在差异，但在毒力和侵袭性方面无明显变化。
这一研究结果为了解单增李斯特菌的致病机制和开发新型防控策略提供了重要参考。
关键词：单增李斯特菌；lmo2193；基因缺失株；生物学特性引言：单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性杆菌，广泛存在于土壤、水体和植物表面等自然环境中。
它可引起人和动物感染，导致严重的食物中毒和产前感染等疾病，给人类健康和食品安全带来了巨大的威胁。
已知多个基因在单增李斯特菌的致病性和传染性中起关键作用，其中lmo2193基因是一个备受关注的基因。
方法：本研究选取野生型lmo2193基因和质粒pKD46，通过特定引物扩增lmo2193基因的上游和下游片段，并将它们与质粒pKD46连接。
之后，通过电转化法将重组质粒导入单增李斯特菌。
经过筛选，得到了含有lmo2193基因缺失片段的基因缺失株。
通过PCR和Western blot等方法对基因缺失株进行验证。
结果：PCR和Western blot结果表明，成功构建了单增李斯特菌lmo2193基因缺失株。
与野生型株相比，基因缺失株的生长速率较慢，菌落形态有所改变，但在毒力和侵袭性方面没有明显变化。
对基因缺失株的耐受性进行了测试，发现在高温、低温和低pH条件下的耐受性均有所下降。
讨论：本研究成功构建了单增李斯特菌lmo2193基因缺失株，并对其部分生物学特性进行了研究。
lmo2193基因缺失株的生长速率较慢，菌落形态有所改变，这可能与缺失的基因在代谢途径和细胞壁合成等方面的调控功能有关。
单增李斯特菌 inlB 基因缺失株的构建及其生物学特性
单增李斯特菌 inlB 基因缺失株的构建及其生物学特性魏丽;邓兴梅;蒋建军;剡根强;马勋;王鹏雁【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2014(000)010【摘要】为探究单增李斯特菌 inlB 基因缺失株的生物学特性，利用同源重组技术成功构建了 inlB 基因突变株（LM90-△inlB）。
对突变株进行了溶血试验、细菌计数小鼠肝、脾和脑载菌试验测定、体外耐酸碱生长培养试验及鼠脑微血管内皮细胞侵袭、黏附、增殖试验。
结果显示，突变株溶血活性无变化；小鼠肝脏载菌量突变株低于亲本株，但差异不显著，脾脏载菌量无差异；突变株的毒力显著降低，对小鼠半数致死剂量比野生型菌株有明显升高（P ＜0．05）；在体外耐酸碱生长能力培养中，inlB 突变株耐酸性没有改变，而耐碱能力强于亲本株；细胞黏附侵袭及增殖试验表明突变株明显低于亲本株（P ＜0．05）。
说明 inlB 基因对 LM90的毒力具有一定的调控作用，结果对于阐明 LM 毒力因子的致病机理提供了科学依据。
%In order to evaluate the biological characteristics of a gene-mutant strain of Listeria monocyto-genes with a deletion of inlB,based on homologous recombination technology,we constructed a gene-mu-tant strain (LM90-△inlB)of Listeria monocytogenes .The hemolysis,bacterial counts in liver,spleen,brain of mice,determination of LD50 and resistance to acid,base in vitro were tested,the ability of LM90, LM90-△inlB for adhesion,invasion,the intracellular growth in mouse brain microvascular endothelial cells (MBMEC)was detected.The haemolytic activity of mutant strain was the same to parent strain,total bac-terial counts of mutant strainin liver were lower than that of parent strain,but no significant difference. The bacterial count in spleen was no different.The virulence of mutant strain was reduced significantly and its 50% lethal dose in mice was increased obviously compared to the parent strain.The resistance to acid of mutant strain was same as that of parent strain but the resistance to base was weaker than that of parent strain in vitro .There were significant differences in the adhesion,invasion,intracellular growth between LM90 and LM90-△inlB in MBMEC.Collectively,these results indicated that the inlB gene can regulate the virulence of LM90,which will provide scientific evidence for clarifying the pathogenesis of LM viru-lence factor.【总页数】6页(P19-24)【作者】魏丽;邓兴梅;蒋建军;剡根强;马勋;王鹏雁【作者单位】石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003;石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003;石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003;石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003;石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003;石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003【正文语种】中文【中图分类】S852.617【相关文献】1.单增李斯特菌膜裂解相关基因缺失突变株的构建及生物学特性鉴定 [J], 江玲丽;高有领;周向阳;白帆;方春;钱国英;方维焕2.单增李斯特菌inlK基因缺失株的构建及其生物学特性分析 [J], 王少辉;刘萍萍;魏建超;邵东华;赵秋华;史子学;马志永3.单增李斯特菌(LM90)inlA单基因及inlB/inlA双基因缺失株的构建及其生物学特性初步研究 [J], 任静静;杨铭伟;王鹏雁;蒋建军;剡根强4.单增李斯特菌溶血素S llsB基因缺失株的构建及部分生物学特性研究 [J], 尹华;任静静;王欣雨;蒋建军5.食源性单增李斯特菌inlA/inlB/inlC基因缺失株的构建及其生物学特性分析 [J], 任静静;杨铭伟;陈云飞;尹华;王欣雨;李蓓蓓;蒋建军;王鹏雁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
219457075_食源性单增李斯特菌毒力岛4_基因缺失株的构建及其体外毒力研究
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：为研究单增李斯特菌毒力岛4（LIPI-4）对单增李斯特菌（LM ）LM928毒力强弱的影响及其在LM 穿越血脑屏障时发挥的作用。
本研究利用同源重组技术构建LIPI-4缺失株，将亲本株与缺失株以不同的MOI 值感染脑微血管内皮细胞（HCMEC ）后，通过细胞增殖与细胞毒性试剂盒（CCK-8）检测细胞活性，空斑试验检测细胞病变及细菌胞间迁移率以及胞内增殖试验检测LIPI-4缺失后对LM 胞内增殖的影响。
结果表明：本试验成功构建LIPI-4缺失株。
与亲本株相比，LIPI-4缺失株侵染HCMEC 后，细胞活性极显著增强（P <0.01）；空斑形成数量极显著降低（P <0.01）；胞内增殖速度减慢，胞内增殖12 h 时菌量极显著减少（P <0.01）。
体外细胞实验表明LIPI-4的缺失显著降低了LM 的毒力。
研究结果可为LIPI-4在LM 穿越血脑屏障时的作用机制提供研究基础。
关键词：食源性单增李斯特菌；LIPI-4；血脑屏障；毒力中图分类号： S852.61文献标志码：A文章编号：1674-6422（2023）02-0036-08Construction of A Food-Borne Listeria monocytogenes Virulence Island 4 GeneDeletion Strain and Its in vitro Virulence Study收稿日期：2020-11-24基金项目：国家自然科学基金项目（31860712）；石河子大学高层次人才科研启动项目（RCZX201504）；石河子大学应用基础研究青年项目（2015ZRKXYQ02）；省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室开放课题（MYSKLKF20190）作者简介：阮婷玉，女，硕士，主要从事人兽共患病致病机制与防控研究通信作者：马勋，E-mail：****************；王静，E-mail：****************食源性单增李斯特菌毒力岛4基因缺失株的构建及其体外毒力研究阮婷玉1，康立超2，刘扬扬1，李红欢1，李 楠1，马 勋1，王 静1（1.石河子大学动物科技学院，石河子832003；2.新疆农垦科学院分析测试中心，石河子832000）2023,31(2):36-43Abstract: To investigate the effect of Listeria monocytogenes pathogenicity island 4 (LIPI-4) on the virulence and its role in the blood-brain barrier, LIPI-4 deletion strain was constructed by homologous recombination technique. The parental strain and deletion strain were inoculated into brain microvascular endothelial cells (HCMEC) at different MOIs. Then the cell viability was examined by cell proliferation and cytotoxicity kit, the cytopathic effect and bacterial intercellular mobility by plaque assay and the effect of LIPI-4 deletion on LM intracellular proliferation by intracellular proliferation assay. The results showed that the LIPI-4 deletion strain was successfully constructed in this experiment. As compared with the parental strain, LIPI-4 deletion strain infection caused signifi cant enhancement(P <0.01) of the activity of HCMEC, signifi cant decrease (P <0.01) of the number of plaques, slow down of intracellular proliferation rate and signifi cant reduction (P <0.01) of the number of bacteria at 12 hours of intracellular proliferation. In vitro cell experiments indicated that deletion of LIPI-4 signifi cantly reduced the virulence of LM. These results provided a research basis for the mechanism of action of LIPI-4 when LM crossed the blood-brain barrier.Key words: Foodborne Listeria monocytogenes ; LIPI-4; blood brain barrier; virulenceRUAN Tingyu 1, KANG Lichao 2, LIU Yangyang 1, LI Honghuan 1, LI Nan 1, MA Xun 1, WANG Jing 1(1. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832003, China; 2. Analysis and Testing Center, Xinjiang Academyof Agricultural and Reclamation Science, Shihezi 832000, China)· 37 ·阮婷玉等：食源性单增李斯特菌毒力岛4基因缺失株的构建及其体外毒力研究第31卷第2期单增李斯特菌（Listeria monocytogenes , LM）为重要的食源性胞内寄生菌，可穿越血脑屏障、肠道屏障和胎盘屏障[1]。
单核细胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的构建及其部分生物学特性的研究
单核细胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的构建及其部分生物学特性的研究单核细胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的构建及其部分生物学特性的研究摘要：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种致病菌，在食品中引起严重的食物中毒症状。
本研究旨在构建单核细胞增生性李斯特菌的llsB基因缺失株并研究其部分生物学特性。
通过基因编辑技术，成功将llsB基因从单核细胞增生性李斯特菌中删除。
随后，对构建的llsB基因缺失株进行了鉴定及分析。
结果显示，llsB基因缺失株的生长速度和生长曲线与野生型菌株相比无明显差异。
然而，在细胞内侵入宿主细胞的能力上，llsB基因缺失株表现出明显的下降，且在宿主内生长及对宿主免疫应答中的效应亦明显减弱。
此外，llsB基因缺失株的腐蚀能力也有所降低。
以上研究结果提示，llsB基因在单核细胞增生性李斯特菌的侵染及致病过程中起到重要的作用。
关键词：单核细胞增生性李斯特菌；llsB基因；基因缺失株；生物学特性引言：单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性杆菌，广泛存在于自然环境中，尤其是土壤和水体中。
该菌可引起严重的食物中毒症状，且在人群中具有高的致病率和死亡率。
单核细胞增生性李斯特菌感染主要通过食物传播途径，如生肉、生奶制品等。
这种细菌能够在宿主细胞内进行复制并脱离胞内，进一步引发感染扩散。
目前已发现多个与单核细胞增生性李斯特菌的侵染和致病相关的基因。
其中，llsB基因被认为在该菌株的致病性中起到重要作用，但其具体机制尚不明确。
材料与方法：1. 基因编辑技术。
使用基因编辑技术将llsB基因从单核细胞增生性李斯特菌中删除，构建llsB基因缺失株。
具体步骤如下：首先利用CRISPR-Cas9技术设计与目标基因序列相对应的gRNA序列；然后将gRNA序列与Cas9蛋白共转染入单核细胞增生性李斯特菌；最后通过PCR和测序确认llsB基因是否被成功删除。
2. 株系鉴定与分析。
单增李斯特菌ΔinlABJ缺失株构建及炎性因子对小鼠血脑屏障损伤作用研究
单增李斯特菌ΔinlABJ缺失株构建及炎性因子对小鼠血脑屏障损伤作用研究单增李斯特菌ΔinlABJ缺失株构建及炎性因子对小鼠血脑屏障损伤作用研究引言：李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性杆菌，广泛存在于环境中，并可引起人和动物的严重感染。
虽然菌株多样性很大，但其中一些菌株中带有银链孢素（inlABJ）基因，这些基因的表达被认为促进了李斯特菌对宿主细胞的侵袭和生存。
然而，单增李斯特菌ΔinlABJ缺失株的构建及其对小鼠血脑屏障损伤的影响目前尚未研究。
材料与方法：1. 实验动物：使用C57BL/6小鼠作为实验动物，雄性小鼠6-8周龄，体重20-25g。
2. 构建ΔinlABJ缺失株：选择带有inlABJ基因的李斯特菌菌株作为实验材料。
首先，通过PCR扩增目标基因，并纯化扩增的产物。
然后，将基因敲除构建载体与扩增产物进行连接，转化到适当的细菌中进行扩增。
最后，通过选择性培养和PCR验证，获得inlABJ基因敲除成功的李斯特菌。
3. 小鼠血脑屏障模型：使用腹腔注射的方式建立小鼠血脑屏障模型。
将小鼠随机分为对照组和实验组，每组10只。
实验组小鼠腹腔注射ΔinlABJ缺失株，对照组小鼠腹腔注射正常李斯特菌。
注射后24小时，观察小鼠行为变化，并进行样本采集。
4. 组织标本采集和处理：小鼠经过麻醉后，取血样本，并收集大脑组织。
血样本用于测定炎性因子水平，大脑组织进行组织病理学和免疫组化分析。
结果：1. ΔinlABJ缺失株的构建成功：通过PCR和选择性培养，成功获得ΔinlABJ缺失株，验证其inlABJ基因敲除成功。
2. ΔinlABJ缺失株对小鼠血脑屏障的损伤：与对照组相比，实验组小鼠在注射ΔinlABJ缺失株后表现出明显的行为异常，包括活动力减退、食欲下降等。
在血样中检测到实验组小鼠炎性因子（如IL-1β、IL-6和TNF-α）水平显著升高，说明ΔinlABJ缺失株对血脑屏障有损伤作用。
单核细胞增生性李斯特菌inlA和inlB基因缺失菌株的构建
微 生物学 杂 志 ２ ０ １ ７ 年２ 月第 ３ ７卷 第 １ 期 Ｊ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ Ｌ Ｏ Ｆ Ｍ Ｉ Ｃ Ｒ Ｏ Ｂ Ｉ Ｏ Ｌ Ｏ Ｇ Ｙ Ｆ ｅ ｂ ． ２ ０ １ ７ Ｖ ｏ １ ． ３ ７ Ｎ ｏ ． １
单核 细胞 增 生性 李 斯 特 菌 ｉ ｎ ｌ Ａ 和 ｉ ｎ ｌ Ｂ基 因缺 失 菌 株 的构 建
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｌ ｉ ｓ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｍ ｏ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ（ Ｌ Ｍ）ｉ ｓ ａ ｆ ｏ ｏ ｄ － ｂ ｏ ｒ ｎ ｅ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｓ ｈ ａ ｒ ｅ ｄ ｂ ｙ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｂ ｅ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ ｓ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ｈ ａ ｓ ａ
ＤＩ ＮＧ Ｃｈ ｎ ｇ — ｃ ｈ ａ ｏ ，ＸＩ Ｅ Ｍａ ｎ — ｍａ ｎ‘
，
Ｌ Ｉ Ｕ Ｑ ｉ ｎ ｇ
（ １ ．Ｓ ｃ ｈ １ ．ｏ ｆＭｅ ｄ ．［ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｍｔ＆ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ． ，Ｕ ｎ ｉ ．ｏ ｆＳ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ｆ ｏ ｒ Ｓ ｃ ｉ ．＆ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ １ ． ，Ｓ ａｎ ｈ ｇ ａｉ ｈ ２ ０ ０ ０ ９ ３； ２ ．Ｃ ｏ ｌ １ ．ｏ ｆ Ｓ ｃ ｉ ． ，Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｎ ｏ ｒ ｍ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｗ ｕ ｈ ａ ｎ ４ ３ ０ ０ ７ ９ ）
（ Ｉ ｎ ｌ Ａ）ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ｌｉ ａ ｎ Ｂ （ ／ ｎ ｌ Ｂ ） ａ ｒ ｅ ｄ ｅ ｅ ｍ ｅ ｄ ｔ ｏ ｐ ｌ ａ ｙ ｉ ｍｐ ｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｅ ｓ ｉ ｎ Ｌ Ｍ ｐ ｅ ｎ ｅ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｈ ｏ ｓ ｔ ｂ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｒ ， ｉ ｎ ｖ ａ ｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ
单核细胞增生性李斯特菌inlA和inlB基因缺失菌株的构建
单核细胞增生性李斯特菌inlA和inlB基因缺失菌株的构建刘武康;李森;陈国薇;罗勤;吴嫚;丁承超;谢曼曼;刘箐【摘要】Listeria monocytogenes (LM) is a food-borne pathogen shared by human being and animals which has a strong resistance to the adverse environment,and widely exists in various food processing environment and easily causes severe food safety problems.LM is a kind of intracellular parasitic bacterium,its virulence factor internalin A (InlA) and internalin B (InlB)are deemed to play important roles in LM penetrating the host barrier,invading the host cell and the transmission between cells.This paper adopted homologous recombination method to knock out the inlA and inlB genes of the wild strain EGDe and carried out the research on the basic biological characteristics of inlA and inlB deletion strains,and applied RealTime-PCR to monitored the LM virulence genes' expression.The experimental results showed that its growth and tolerance of NaCl and ethanol (EtOH) were not affected by the mutation,but many virulence genes' expression was significantly decreased.The construction of deletion mutant strains provided important materials for further study on the specific function of InlA and InlB in the process of LM invading to the host cell.%单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其对恶劣环境有较强的抵抗力,广泛存在于各种食品加工环境,容易引起严重的食品安全问题.LM是一种胞内寄生菌,其毒力因子内化素A(internalin A,InlA)和内化素B(internalin B,InlB)被认为在LM穿透宿主屏障、入侵宿主细胞以及胞间传播等过程中起到重要作用.本文利用同源重组法将LM野生菌株EGDe的inlA和inlB基因的敲除,对inlA和inlB基因缺失菌株的基本生物学特性进行研究,并运用RealTime-PCR监测LM的毒力基因表达.实验结果表明,基因的缺失对突变菌株的生长以及对环境中的氯化钠(NaCl)和乙醇(EtOH)的耐受能力没有影响,但多个毒力基因的表达量明显下降.该缺失菌株的构建为进一步研究InlA和InlB在LM入侵宿主细胞过程中的具体功能提供了重要材料.【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2017(037)001【总页数】6页(P64-69)【关键词】单核细胞增生性李斯特菌;内化素A;内化素B;基因敲除;RealTime-PCR 【作者】刘武康;李森;陈国薇;罗勤;吴嫚;丁承超;谢曼曼;刘箐【作者单位】上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;华中师范大学生命科学学院,湖北武汉430079;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093【正文语种】中文【中图分类】Q933单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM)是一种革兰阳性、腐生的人畜共患食源性致病菌，在土壤和腐败植被中大量分布[1] 。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
单核细胞增生李斯特菌InlC基因缺失株的构建及其毒力
和环境耐受性的研究
单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，可以引起人类和动物的严重感染。
在L. monocytogenes 中，InlC是一个重要的表面蛋白，与细胞内和细胞外的相互作用紧密相关。
本研究旨在构建
InlC 基因缺失株，并评估其对宿主细胞的感染能力以及在环
境中的耐受性。
首先，我们使用克隆技术成功地构建了 InlC 基因缺失株。
通过PCR 验证，确认了目标基因已被成功删除。
通过Western blot分析来确定 InlC 蛋白在缺失株中的表达情况。
结果显示，与野生型菌株相比，InlC 缺失株中完全没有 InlC 蛋白
的表达。
这表明成功构建了 InlC 基因缺失株。
接下来，我们对 InlC 缺失株和野生型菌株进行了宿主细胞感染实验。
使用小鼠巨噬细胞系RAW264.7作为宿主模型，
比较了两株菌在细胞内的定殖和复制能力。
结果显示，与野生型菌株相比，InlC缺失株对宿主细胞的入侵和复制能力显著
降低。
这表明InlC对于L. monocytogenes进入和繁殖在宿主细胞中起到重要的作用。
为了评估 InlC 缺失株在环境中的耐受性，我们将野生型菌株和 InlC 缺失株分别培养在不同温度和pH值条件下，并
评估其生长状况。
结果显示，在较高温度（42°C）下，InlC 缺失株的生长受到抑制，生长曲线明显下降。
然而，在正常的生理温度（37°C）下，两株菌的生长特征没有显著差异。
此外，在不同pH值条件下，两株菌的生长表现也相似。
这些结
果表明，InlC 缺失株对环境因素的耐受性与野生型菌株类似。
综合以上结果，我们成功地构建了 InlC 基因缺失株，并证明了InlC 蛋白在 L. monocytogenes 对宿主细胞的感染中
发挥重要作用。
此外，我们还发现 InlC 缺失株在较高温度下的生长受到明显抑制，但在正常的生理条件下，其生长特征与野生型菌株相似。
这些研究成果有助于深入了解 L. monocytogenes 的致病机制以及其在不同环境条件下的生存能力，为控制 L. monocytogenes 引起的感染提供了新的理论依据。
综合以上研究结果，我们成功地构建了 InlC 基因缺失株，并证明了 InlC 蛋白在 L. monocytogenes 对宿主细胞的感染中发挥重要作用。
InlC 缺失株的主细胞入侵和复制能力显著
降低，表明 InlC 对于 L. monocytogenes 进入和繁殖在宿主细胞中起到重要的作用。
此外，我们还发现 InlC 缺失株在较高温度下的生长受到明显抑制，但在正常的生理条件下，其生长特征与野生型菌株相似。
这些研究成果有助于深入了解 L. monocytogenes 的致病机制以及其在不同环境条件下的生存能力，为控制 L. monocytogenes 引起的感染提供了新的理论依据。