细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书中文版
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。
电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。
线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。
ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。
呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。
正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容介质液（Reagent A）毫升态底物液（Reagent B）微升态底物液（Reagent C）微升产品说明书 1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。
然后进行下列操作。
1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入xx微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加5％）6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降）（8．继续注射加入xx微升态底物液（Reagent C注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用GENMED线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注态底物液（Reagent B）和态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
FLIPR 钙6 检测试剂盒(Molecular Devices)
钙流高效筛选的不二之选 ——FLIPR 钙 6 检测试剂盒
Molecular Devices 公司生产的FLIPR® 钙离子检测试
剂盒采用了钙离子敏感的指示剂以及专利的屏蔽染料 以确保研究者进行高灵敏的用于 G 蛋白偶联受体、离 子通道和其它钙离子敏感的靶标的荧光筛选。采用新 型的染料构成进一步的提升了钙流结果的检测窗口和 实验稳健性，同时实验方案更灵活。如图 1 所示，FLIPR 钙 6 试剂含有的屏蔽成分不进入细胞内部，但显著性 的降低胞外钙离子指示染料残留、培养基和其它成分 引起的背景荧光。FLIPR 钙 6-QF 检测试剂盒成分 （也如图 1 所示）不含有屏蔽组分，对淬灭剂敏感 靶标或多通道应用试验提供了一种新的、灵活的选 择。另外的应用便利之处在于试验中要求很小的或不 加入丙磺舒也可以。许多细胞（例如 CHO）具有阴 离子交换蛋白，需要加入阴离子再摄取抑制剂，例如 丙磺舒，以保持细胞内钙离子指示染料不被转出。
Part number R6133
公司简介 FLIPR®Calcium6-QF Assay Sample Kit
(2) vials of component A*
(1) bottle of dilution buffer (Component B) (2) vials of component C
R6134
FLIPR 钙 6 试剂盒可用于大部分的细胞株。图4所示， “实验就绪”的1321N1冻存细胞在FlexStation® 3微孔 读板机上进行检测，其表达了内源性组胺1受体（来自 ECACC，Porton Down, Salisbury, UK）。使用FLIPR 钙 5 试剂盒、Fluo-4 Direct试剂盒、FLIPR 钙 6 试剂盒 和FLIPR 钙 6-QF试剂盒检测到组胺浓度增加引起的 组胺受体效应变化的对比结果表明了FLIPR 钙 6 试剂 盒可得到最大的信号窗口。SoftMax Pro软件计算得到的 EC50 值在预期数值对数一半以内。
线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-10)使用说明
线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）使用说明产品货号：CA1310产品规格：100T产品内容：产品名称包装JC-10（200×）100µL/管，共5管超纯90mLJC-10染缓冲液（5×）80mLCCCP20µL保存条件：-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，有效期一年。
超纯水和JC-10染色缓冲液（5×）也可4℃保存。
产品简介：线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）是一种以JC-10为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。
JC-10是一种广泛用于检测线粒体膜电位Ψm△的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-10聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-10不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-10为单体，可以产生绿色荧光。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-10从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-10从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-10单体的最大激发波长为515nm，最大发射波长为529nm；JC-10聚合物的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
本试剂盒提供了CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。
操作步骤：1、JC-10染色工作液的配制：六孔板每孔所需JC-10染色工作液的量为1mL，其他培养器皿的JC-10染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50～100万细胞需0.5mL JC-10染色工作液。
活体细胞线粒体膜通道孔(MPTP)红色荧光(TMRM)检测
活体细胞线粒体膜通道孔（MPTP）红色荧光（TMRM）检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途活体细胞线粒体膜通道孔（MPTP）红色荧光（TMRM）检测试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，一旦释放到细胞浆，即刻发生荧光淬灭，来分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种活体细胞线粒体（动物、人体、昆虫等）膜通道孔活性（开放状态）的检测。
产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。
技术背景线粒体膜通道孔（mitochondrial permeability transition pore；MPTP）是由线粒体内外膜成分构成的非特异性且钙离子依赖性通道。
在细胞凋亡或坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中。
线粒体膜电位的去极化（depolarization），导致膜通道孔的开放，显著改变线粒体的通透性，使之线粒体膨胀（swelling），内容物释放。
其中钙离子过度进入、线粒体谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等导致膜通道孔的持续开放，而造成细胞色素C的释放和线粒体膜电位的消失。
四甲基罗丹明甲酯（tetramethylrhodamine methyl ester；TMRM），为罗丹明衍生物阳离子染料，作为电势测定（potentiometric）荧光探针：第一，具有亲脂性的；第二，与线粒体内膜负电极结合而聚集；第三，容易进入细胞及其线粒体。
四甲基罗丹明甲酯进入细胞后，被细胞内酯酶切离，产生四甲基罗丹明。
四甲基罗丹明进入线粒体后，被线粒体俘获，呈现强烈荧光。
一旦线粒体膜通道孔开放，四甲基罗丹明释放出来而在胞浆重新分布，其荧光性显著降低。
线粒体内荧光的变化，表明膜通道孔的开放状态。
产品内容清理液（Reagent A）毫升染色液（Reagent B）微升稀释液（Reagent C）毫升产品说明书1份保存方式保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备24孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器1.5毫升离心管：用于染色工作液配制和细胞染色的容器微型台式离心机：用于沉淀细胞培养箱：用于染色孵育（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于细胞荧光定量分析细胞流式仪：用于细胞荧光分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。
GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书范文(中文版)
GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书范文(中文版)GMS10015v.A主要用途GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂是一种旨在通过一种毒性较小的碱性染料特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色，从而判断线粒体功能的完整性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）制备物的功能检测。
产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。
线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌、肝、肾等器官和组织的细胞中。
大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。
在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。
詹纳斯绿B（JanugreenB），是一种毒性较小的碱性染料。
它可以对活细胞进行直接染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体的线粒体。
线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。
产品内容毫升毫升毫升份保存方式保存在－20℃冰箱里；GENMED染色液(ReagentB)，避免光照；有效保证6月用户自备毫升离心管：用于线粒体染色的容器光学显微镜：用于线粒体染色观察分析实验步骤实验开始前，将℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（ReagentB）置于冰槽里融化，并放在暗室里。
然后进行下列操作。
一、纯化线粒体染色1．从纯化的线粒体样品中移出至微升（含细胞中提取的线粒体）到新的预冷的毫升离心管，置于冰槽里（注意：线粒体须均匀分布，没有聚集成团）2．加入等量微升的GENMED染色液（ReagentB），轻柔混匀3．放进暗室里，在室温下孵育1分钟4．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片5．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色圆形或椭圆形颗粒（注意：可见蓝绿色渐渐变淡现象）6．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失二、活体细胞染色1．将待测细胞（某细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf5415）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED清理液（ReagentC）或GENMED保存液（ReagentA）5．加入微升GENMED染色液（ReagentB），充分混匀6．放进暗室里，在冰槽里孵育分钟7．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片8．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色线状或颗粒小体9．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失注意事项1．本产品为20次（活体细胞）或400次（纯化线粒体）操作2．所有操作均须无菌状态下进行3．线粒体样品操作须在低温下进行，且操作快速4．操作时，须戴手套5．建议染色完成后，即刻进行显微镜观察分析6．孵育时，须避免光照7．本公司提供系列线粒体试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定显色清晰使用承诺友情提醒IFITDOESN’TWORK，RECHECKYOURE某PERIMENTTOSEEWHATYOUDIDWRONG。
线粒体钙离子荧光探针
线粒体钙离子荧光探针引言：线粒体是细胞内的一个重要器官，负责细胞能量代谢和调节细胞死亡等过程。
线粒体功能障碍与多种疾病的发生发展密切相关。
钙离子是线粒体内重要的调节离子，对细胞的生理功能起着重要作用。
因此，研究线粒体钙离子荧光探针对于揭示线粒体功能及其在疾病发生中的作用具有重要意义。
一、线粒体钙离子的重要性线粒体是细胞内的能量中心，通过氧化磷酸化产生ATP，维持细胞正常的能量供应。
而钙离子是细胞内重要的信号分子，在细胞生理活动中起着重要作用。
线粒体钙离子的高浓度可以调节线粒体的能量代谢、细胞呼吸和氧化磷酸化。
线粒体内的钙离子浓度调节紊乱与多种疾病的发生发展密切相关，如心脏病、中风和神经退行性疾病等。
因此，研究线粒体钙离子荧光探针对于理解线粒体功能和疾病机制具有重要意义。
二、线粒体钙离子荧光探针的原理线粒体钙离子荧光探针是一种用于监测线粒体内钙离子浓度的工具。
目前常用的线粒体钙离子荧光探针有Rhod-2、Fluo-4和Cyt-2等。
这些探针通过与线粒体内的钙离子结合，发生荧光增强或猝灭反应，从而实现对钙离子浓度的监测。
其中，Rhod-2是一种具有强荧光信号的探针，广泛应用于线粒体钙离子的研究。
三、线粒体钙离子荧光探针的应用1. 线粒体功能研究：线粒体钙离子荧光探针可以用于研究线粒体的功能状态。
通过监测线粒体内钙离子的浓度变化，可以了解线粒体的能量代谢、呼吸和氧化磷酸化等过程，进而揭示线粒体在细胞生理活动中的作用机制。
2. 疾病机制研究：线粒体功能障碍与多种疾病的发生发展密切相关。
线粒体钙离子荧光探针可以用于研究疾病发生机制。
通过监测线粒体内钙离子的浓度变化，可以了解线粒体在疾病发生过程中的作用，如心脏病、中风和神经退行性疾病等。
3. 药物筛选：线粒体钙离子荧光探针可以用于药物筛选。
通过监测线粒体内钙离子的浓度变化，可以评估药物对线粒体功能的影响，进而筛选出具有线粒体保护作用的药物。
四、线粒体钙离子荧光探针的优势与局限性线粒体钙离子荧光探针具有以下优势：1. 高灵敏度：线粒体钙离子荧光探针可以灵敏地监测线粒体内钙离子的浓度变化，能够提供准确的实验数据。
GENMED纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书(中文版)
纯化细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 真菌/酵母细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒
植物细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 线粒体功能詹纳斯绿 B（JGB）染色试剂盒 细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 活体组织氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 活体细胞氧化应激活性氧（ROS）染色试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）染色试剂盒 活体细胞氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒 细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒
4
GMS50004 GMS30034.1 GMS30034.2 GMS30034.3 GMS30034.4 GMS30034.5 GMS30034.6 GMS50005 GMS50006 GMS50007
GMS50008 GMS50009
GMS50010
GMS50083
GMS10063.1 GMS10063.2 GMS10063.3 GMS10095 GMS12198 GMS50067 GMS50068.1
名称 动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒 动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒
动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒 动物硬组织活性线粒体分离试剂盒 动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒 纯化线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 完全线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 活体组织线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒
线粒体的染色方法(红色荧光)
2、 细胞染色 2.1 对于贴壁细胞
1）培养皿/培养板准备细胞样本。 2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量 37℃预热的含探针工作液。于
生长状态下孵育 15 分钟～45 分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实 验优化）。
【注】: 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
技术支持： 产品技术问题可发邮件至 bestbio@ 咨询。 如果您有任何关于产品性能或者新应用和技术的建议，欢迎您随时联系我们。
产品简介： 贝博 TM BBcellProbeTM M11 线粒体染色试剂盒是利用 BBcellProbeTM M 系列探针进行线
粒体特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的 BBcellProbeTM M11 线粒体染色探针为红色荧光标 记的线粒体探针，具有 579/599nm 的最大激发/发射波长。本品适合双标实验，因其红色荧 光与其他的绿色荧光探针具有良好的分辨率。
虽然传统的线粒体荧光探针如 TMR 和罗丹明 123，也能很容易的聚集在功能线粒体上， 但是一旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉，从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体 能量状态影响因子的实验中，使其应用大受限制，而 BBcellProbeTM M 系列探针不受线粒体 膜电位影响。
BBcellProbeTM M 系列线粒体探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色 标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，贝博还可以提供绿色、蓝色、橙色等颜色的染色
BBcellProbeTM M 系列探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的线粒体体进行选择性染色 的一类新型荧光染料，该系列探针可以选择性标记线粒体，包含标记线粒体的弱巯基反应性
的氯甲基官能团。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上。可有效
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细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂是一种旨在通过线粒体钙离子特异性荧光探针Rhod-2，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定细胞线粒体中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种活体细胞（动物、人体等）内线粒体钙离子的浓度检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。
技术背景
钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。
其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。
非骨组织钙成分主要存在于细胞内。
钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。
钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。
在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。
其中线粒体钙离子在调节线粒体代谢、保持线粒体的A TP产量达到细胞需求，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。
线粒体钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要线粒体纯化。
Rhod-2，罗丹明123（rhodamine 123）的衍生产物，一种与钙离子结合产生荧光，同时其正电荷特性，特异性地聚集在线粒体里，由此用于测定线粒体内钙离子水平。
在荧光分光光度仪下，激发波长550nm，散发波长590nm，来定量测定线粒体的钙浓度。
产品内容
清理液（Reagent A）40毫升
染色液（Reagent B）30微升
介导液（Reagent C）600微升
饱和液（Reagent D）2毫升
阴性液（Reagent E）2毫升
产品说明书1份
保存方式
保存染色液（Reagent B）和介导液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
细胞培养箱：用于染色孵育
黑色96孔板：用于样品操作的容器
荧光酶标仪：用于荧光分析
（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光染色观察
实验步骤
一、测定准备
1．设定好荧光酶标仪（22℃）：激发波长550nm，散发波长590nm
2．测定开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）室温下融化，然后分别移出30微升介导液（Reagent C）和1.5微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，标记为染色工作液，并放在暗室里备用。
然后进行下列操作。
二、荧光酶标仪检测
1．准备1个黑色96孔细胞培养板，标记为：细胞样品孔、空白对照孔（不含细胞）、最大对照孔（不含细胞）
2．小心抽去细胞样品孔的培养液
3．加入100微升清理液（Reagent A）到细胞样品孔里
4．加入100微升饱和液（Reagent D）到最大对照孔里
5．加入100微升阴性液（Reagent E）到空白对照孔里
6．分别加入10微升染色工作液到所有孔里
7．轻轻摇动酶标板，混匀
8．室温下（22℃），孵育30分钟，避免光照
9．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟，避免光照
10．小心抽去细胞样品孔里的上清液
11．小心加入100微升清理液（Reagent A）到细胞样品孔里
12．重复实验步骤12和13一次
13．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟
14．即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（relative fluorescence unit；RFU）
15．计算样品线粒体钙离子浓度
【（样品RFU－空白对照孔RFU）÷（最大对照孔RFU－样品RFU）】X 570（纳摩尔；解离常数）
三、（共聚焦）或荧光显微镜检测
1．准备1个待测的细胞爬片样品
2．小心加上500微升清理液（Reagent A），覆盖样品表面
3．小心移去样品上的清理液（Reagent A）
4．移取300微升清理液（Reagent A）到新的1.5毫升离心管
5．加入30微升染色工作液，混匀
6．小心加上上述染色工作液到样品上，覆盖样品表面
7．室温下（22℃），孵育30分钟，避免光照
8．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟，避免光照
9．小心移去样品上的染色工作液
10．小心加上500微升新鲜的清理液（Reagent A）
11．小心移去清理液（Reagent A）
12．小心加上500微升新鲜的清理液（Reagent A）
13．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟
14．小心移去清理液（Reagent A）
15．盖上盖玻片
16．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长550nm，散发波长590nm（线粒体钙离子呈现红色）
注意事项
1．本产品为20次（显微镜）或60次（96孔板）操作
2．操作时，须戴手套
3．避免使用EDTA等处理样品
4．孵育反应完成后即刻进行荧光测定
5．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
6．检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围
7．可以使用荧光分光光度仪检测
8．本公司提供系列钙生化检测试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感。