人类性染色质小体制备与观察31页PPT
形态实验学PPT：人类X小体的检测-形态学自设计实验
——形态学自设计实验
一、实验目的
掌握人类X小体玻片标片的制作方法。 观察识别X小体形态特征及所在部位。
二、实验原理
发现：
1949年，加拿大学者Barr在研究猫的神经元 细胞时，发现雌猫神经元细胞核边缘有一个 染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有这种 结构。进一步研究发现，所有雌性哺乳动物 细胞中都有这种小体，能显示性别差异。 在人类，男性细胞中很少或没有这种小体， 而女性有一个。
3.固定：
（ 1 ） 加 入 固 定 液 1ml ， 混 匀 ， 室 温 预 固 定 2min ， 1200r/min离心8min，弃上清。
（2）加入固定液5ml，吹打混匀，室温固定15min， 1200r/mi。
固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，使蛋白凝固，终止细胞代谢过 程，并保持细胞核染色体结构的完整性，并且能够增强染色体的嗜碱 性，达到优良的染色效果。
剂量补偿（dosage compensation effect）
女性有两条X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只 有1个X染色体的男性是一样多的。这种男女X连锁基因产 物相等的现象在遗传学上称为剂量补偿。
对这一现象的解释是女性的X染色体中只有1个保持活性， 而另一个是晚复制的，没有活性。结果无论男女都只有一 条有功能的X染色体。
该失活的染色体在形态学上呈异固缩状态（细胞分裂周期 中与大部分染色质不同步的螺旋化现象），DNA螺旋压 的很紧，故染色深而致密。
应用：
1. 鉴定个体的性别
取材：口腔上皮细胞、毛囊细胞、羊水细胞
用途：优生学中进行胎儿性别检查，预防性染色体遗传性 疾病的发生。奥运会运动员性别鉴定。
2. 诊断性染色体异常综合征
弃上清时，用吸管吸取上清，弃去，接近下方沉淀时，应 小心吸取。
《X染色质的观察》课件
通过本PPT的学习过程，总结X染色体在遗传和科学研究中的重要性。
2 X染色体对生物的影响
探索X染色体在生物发育和体型特征方面的作用。
3 X染色体研究的未来前景
展望未来X染色体研究的重点和方向，以及未来科研工作者所要面对的挑战。
1
使用显微镜观察X染色体
学习如何用显微镜观察这种微小的生命体。
2
X染色体的特殊之处
与其他染色体相比，X染色体有什么不同之处？
3
X染色体的颜色和形状
学习X染色体的颜色和形状以及如何区分不同的染色体。
X染色体的研究进展
在过去的几十年中，科学家们不断深入研究X染色体，取得了很多突破性的发现。本节将着重介绍有关X 染色体的研究进展。
X染色体的研究历史
学习过去几十年X染色体研究 的历史及其背后的故事。
X染色体研究的意义
探索X染色体研究的重要性及 其意义。
X染色体的未来研究方向
简要了解未来X染色体相关的 研究方法和技术。
结论
在这个PPT的最后，我们可以再次总结X染色体的重要性，它对生物的影响以及X染色体研究的未 来前景。同时，我们也需要意识到X染色体研究中所存在的一些难点和困境，并展望未来科研工 作者将如何攻克这些难题。
性别决定
学习X染色体是如何决定人类和其他哺乳动物性别的。
X染色体遗传疾病
探索与X染色体相关的遗传疾病，比如色盲和血友病。
X染色体基因突变
了解X染色体基因突变如何影响生物的外观和性格特点。
观察X染色体
在本节中，我们将学习如何使用显微镜观察X染色体以及它们的特殊之处和形状。相信这一部分你一定会 被镜头里微小却神奇的世界所吸引。
X染色体介绍
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要X染色质（巴氏小体）是除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体。
本实验选取口腔粘膜细胞和毛囊细胞，通过解离、染色、压片等方法观察巴氏小体在细胞核内的分布及形态等特征，并且通过显微观察对巴氏小体进行计数，估计巴氏小体在不同性别和不同性格人体细胞中的出现率。
此外，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点也是本实验的目的之一。
关键词X染色质（巴氏小体）口腔黏膜细胞毛囊细胞1.引言X染色质小体（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm、贴近于核膜边缘的染色小体。
巴氏小体在细胞分裂间期细胞核中出现异固缩现象，表现出浓缩、染色深、无活性的特点。
巴氏小体在不同细胞中呈现不同的形态，有卵圆形，三角形，月牙形，线性等。
一般来说，正常女性口腔粘膜细胞中约30-50%有一个巴氏小体，男性则低于1-2%。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现，Barr称这种小体为“核仁随体”，并推测小体是由两条性染色体的异染色质衍化来的。
1955年，Barr在女性的口腔细胞中发现Barr body（巴氏小体），Moor与Barr 用口腔黏膜上皮细胞检测Barr body，制作出日后被广泛使用的颊涂片。
1959年，人们把性染色体异常造成的畸形与巴氏小体的研究联系起来。
1960年，Ohno和Hauschka发现，X染色质小体实际上是一条在细胞分裂间期，收缩的、异染色质化的X染色体，与核仁并无关系，也不是Barr推测的那样由两条性染色体各贡献一部分异染色质形成。
受此启发，Lyon（1961，1962）研究了小鼠X染色体连锁的皮毛颜色基因突变体，进一步指出异染色质化的X染色体可以来自父方，也可以来自母本；异染色质化的染色体在遗传上没有活性（后来的研究表明异染色质化的染色体中还是有部分基因保持活性）；这种随机失活是性别决定为XX-XY的动物为平衡两性之间性染色体上的基因剂量而采取的一种特殊的调控方式（因为Y染色体上的基因数量很少，因此雌性个体必须通过减少X染色体上基因剂量的方式使两性个体间基因剂量取得均衡），即所谓的“剂量补偿”，这是X染色体失活的意义所在。
人类染色体演示文稿
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端粒 随体 副缢痕 短臂 着丝粒
长臂
端粒
2.染色体的类型
7/8
染色体根据着丝粒的位置分
为三种类型:
5/8
1.中央着丝粒染色体
）
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人类染色体
有丝分裂中期是观察染色体的数目、结构 和形态最清晰的时期，此期每条染色体由两条 染色单体构成（称姐妹染色单体），借着丝点 连接。 着丝粒将染色体横向分为两臂，较长的称为 长臂（q），较短的称为短臂（p）。
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形态
标定一条带时，需要由连续书写的四个符号 表示：染色体序号；臂的符号；区号；带号。这 些项目依次连续列出，符号间无间隔，也不加标
点符号。如9q34
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显带核型
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1p31 1q12
显带核型
高分辨显带技术使对染色体的分析达 到了亚带水平，即在原有的带内又分出亚 带，这时若表示某条亚带可在带的序号之 后加小数点，然后写上亚带的序号。如：
Xp22.3表示X染色体短臂2区2带第3亚带 。如亚带再细分，即次亚带只要在原亚 带编号后加上数字，不必再加标点。
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显带核型
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染色体的研究方法
10
46，XX
女性
01
46，XY
男性
00
45，X
人类性染色质标本的制备和观察
内容步骤
实验一
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察
2、观察（高倍镜）
实验一
1、几对基本概念 2、X染色质形成机制——Lyon假说
实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
（1）正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性，另 一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
（2）X染色体失活发生在胚胎早期。 （3）X染色体失活的随机性和恒定性。
实质：失活的X染色体 意义：X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
（2）识别X染色质的标准：（高倍镜下） 位置：紧贴核膜内侧缘，轮廓清楚，唯一深染的小体 大小：直径为1-1.5um，即小于核直径的1/10 形态：一般为平凸形，三角形或为卵圆形
实验一
内容步骤
实验一
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察
人类性染色质标本的制备、 分析和PTC尝味实验
实验一
目的与要求
1. 掌握：人类间期细胞核中性染色质的形成 机制。（重点，难点）
2.熟悉：X染色质标本的制作方法；熟悉人类 间期细胞核中性染色质的形态特征和分布。
3.了解： PTC尝味实验方法及这种单基因遗传 性状的遗传规律。
内容步骤
人类X染色质（巴氏小体）制备与观察
⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）制备与观察⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）的制备与观察摘要巴⽒⼩体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染⾊体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染⾊⼩体，在遗传学、细胞观察⽅⾯有重要意义。
实验中作者取⼈⼝腔颊部上⽪细胞与发根⽑囊细胞进⾏硫瑾染⾊操作，通过显微观察对巴⽒⼩体进⾏识别与计数，描述巴⽒⼩体的形态，并统计其在不同性别⼈体细胞中的出现率。
引⾔在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除⼀条X染⾊体外，其余的X染⾊体失活并呈异固缩状态，此即为巴⽒⼩体。
⼜称X⼩体、性染⾊质，直径约1µm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿⼤学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现⼀种染⾊很深的⼩体，⽽在雄性猫中则极少出现[1]。
通常⼈类男性细胞核中很少或没有巴⽒⼩体，⽽⼥性有1个，性染⾊体异常的患者如XXY、XXYY、XXX、XXXY等，巴⽒⼩体的数量＝X染⾊体数量－1。
综合巴⽒⼩体与哺乳动物性染⾊体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染⾊体只有⼀条在遗传上有活性，另外⼀条失活；(2)X染⾊体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合⼦中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染⾊体全部是⽗⽅的。
(3)失活发⽣在胚胎发育的早期，如⼈在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
⼀个细胞的⼀条染⾊体⼀旦失活，这个细胞的后代细胞中该染⾊体均失活。
Lyon假说虽然可以解释⼀些问题但不是全部，如⼈类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着⽣物学和医学的发展⼈们已经认识到单条X染⾊体失活现象是普遍存在的，但失活的染⾊体上存在失活区和⾮失活的。
如⼈类中位于X染⾊体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶⾎第Ⅷ因⼦）等是⾮失活的，⽽Xg⾎型基因是失活的。
13：人类性染色质制备与观察liuchunhua
了解X染色质检测方法及其意义； 了解X染色质的形态特点；
初步掌握镜下X染色质的识别方法；
1949年，Barr在猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体。仔细研 究发现这种小体出现在多数雌猫神经元中，而在雄猫的神经元中则极 少出现。他以更多的动物组织做了深入的研究，结果发现食肉类、偶 蹄类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同样显示 这种性别差异。Barr称这种小体为核仁随体（现在我们通常称之为 Barr小体，性染色质小体，或X染色质。下文统称这种小体为X染色质 ），并推论这种小体是由性染色体的异染色质衍化来的；
X染色质数目=X染色体数目-1 通过毛囊、口腔上皮细胞，羊水细胞等间期细胞的性染 色质检查，可判断个体的核性别，此方法快捷、简便， 在临床上可作为性别异常疾病的一种辅助诊断。
（1）巴尔小体是一个失活的X染色体，失活的过程就称为 莱昂化（lyonization）； （2）在哺乳动物中，雌雄个体细胞中的两个X染色体中有 一个X染色体在受精后的第16天（受精卵增殖到5000-6000 ，植入子宫壁时）失活； （3）两条X染色体中哪一条失活是随机的； （4）X染色体失活后，细胞继续分裂形成的克隆中，此条 染色体都是失活的； （5）生殖细胞形成时失活的 X染色体可得到恢复的。 1974年Lyon又提出了新莱昂假说，认为X染色体的失活是 部分片段的失活。
内面的团块状结构，直径约1um，染色程度较其他 染色质深。其形态不一，常呈三角、半圆、平凸或 球形。利用放射自显影技术研究发现，女性的两条 x染色体中有一条DNA复制延迟，称迟复制x。迟复 制的x染色体在间期时表现为x染色质。当细胞内有 一条以上x染色体时，在间期时除一条x染色体外， 其余的x染色体均表现为x染色质，因此间期细胞核 中的x染色质数目等于x染色体数减去1。
9人类性染色质小体的制备与观察
人类在受精后的第16天（受精卵分裂到 5000-6000），植入子宫壁时发生lyon化。
剂量补偿：
由于雌性细胞中的两个X染色体中的一 个发生异固缩（也称Lyon化），失去活性， 这样保证了雌雄两性细胞中都只有一条X染 色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物 的量保持在相同水平上。这种效应称为X染 色体的剂量补偿。
➢ 进一步研究发现，其他雌性哺乳动物（包括人 类）也同样有这种显示性别差异的结构。而且不 仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以 见到这一结构，称之为巴氏小体，也称为X染色 质。大小在1µm左右，呈三角形、卵形、短棒形 等。
研究发现，间期核内X染色质的数目总是 比X染色体的数目少1。
进一步研究表明： X染色质是一条异染 色质化（兼性异染色质）的X染色体，在间 期复制要比其他的染色体晚。
知识回顾 Knowledge Review
祝您成功！
实验十 人类性染色质小体 的制备与观察
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题
掌握莱昂假说和X染色体剂量补偿的含义。
掌握观察与鉴别X染色质的简易方法，识别 其形态特征及所在部位，为进一步研究人 体染色体的畸变与疾病提供参考依据。
发现
➢ 1949年，Barr在雌猫的神经元间期细胞核中首 次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没 有。
达，则产生橙黄色毛斑。
Y染色质
正常男性的间期细胞用荧光染料染色后， 在细胞核内可出现一荧光小体，直径为0.3-1μm左右，称为Y染色质。 Y染色质在间期 也呈现异固缩状态。Y染色体长臂远端部分 为异染色质，可被荧光染料染色后发出荧 光。这是男性特有的，女性细胞中不存在。 细胞中Y染色质的数目与Y染色体的数目相 同。