犃犻Ⅰ型犉犞全衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的狊犪犕犇表达和免疫活性分析

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IHNV核衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

2 9 ( 3 ) : 3 6 -4 0 华北农学报 ·2 0 1 4 ，
IHNV 核衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定
1， 2 1 2 谢三磊，王雯慧，孙惠玲（ 1．甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070； 2．北京市农林科学院畜牧兽医研究所，畜禽疫病防控技术北京市重点实验室，北京 100097）
Expression and Identification of Nucleocapsid Protein of IHNV in Baculovirus Expression System
2 XIE Sanlei1，， WANG Wenhui1 ， SUN Huiling2
（ 1． College of Veterinary Medicine， Gansu Agricultural University， Lanzhou 730070， China； 2． Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences， Beijing 100097， China） Abstract： To study the major structural nucleoprotein （ N ） of infectious hematopoietic necrosis virus （ IHNV ） by baculovirus systems， in this study nucleoprotein （ N） gene（ 1 176 bp） was amplified by ＲTPCＲ from infectious hematopoietic necrosis virus （ IHNV） and inserted into the baculovirus vector pFBLICBse to construct a recombinant plasmid pFBLICBseN． The constructed recombinant transposition plasmid pFBLICBseN was transformed to competent E． coli DH10Bac to get recombinant bacmids rBacmidN． The obtained recombinant bacmid rBacmidN was transfected to insect Sf9 cells， and the recombinant baculovirus that contained N gene was obtained． IFA and Western Blot analysis showed that the recombinant N protein can be recognized by horseradish peroxidase （ HＲP ） labeled histidine monoclonal antibody （ antiHis） which indicated IHNV N gene has been successfully expressed in Sf9 cells infected with recombinant baculovirus． The study laid a foundation of further study on N protein structure ， function and immunological characteristics． Key words： Infectious hematopoietic necrosis virus； N gene；Ｒecombinant baculovirus 传染性造血器官坏死病（ Infectious haematopoietic necrosis， IHN ）是鲑、鳟鱼类的一种以造血组织严重坏死、显著贫血、肝、脾、肾褪色为主要特征的传染性疾病。不同种类鲑、鳟鱼类对病原的易感性不同。病原为传染性造血器官坏死病病毒（ Infectious haematopoietic necrosis virus， IHNV ），属弹状病毒科（ Novirhabdovirus ），的粒弹状病毒属同属的水生动物病毒还有病毒性出血性败血症病毒（ Viral haemorrhagic septicaemia ， VHSV ）、牙鲆弹状病毒（ Hirame rhabdovirus， HＲV）和鳢弹状病毒（ Snakehead Ｒhabdovirus， SＲV）。IHNV 是该属的代表种， IHNV 的代 1392 ）。病毒粒表株是 WＲAC 株（ ATCC 编码为 VＲ子形态为弹状，直径约 80 ～ 90 nm，长度为 160 ～ 180

牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞中的表达

牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞中的表达范晴;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;谢丽基;罗思思【摘要】为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒E2囊膜蛋白,利用PCR方法扩增牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒.将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经PCR 鉴定获得转座杆粒Bacmid-E2.转座杆粒Bacmid-E2转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,感染细胞后,收获得到目的蛋白,用SDS-PAGE和Western blot对重组的表达蛋白进行分析.结果表明,重组E2蛋白大小为43.6 ku,与预期值相符,该蛋白能与牛病毒性腹泻病毒阳性血清发生特异性反应,为进一步研发牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒奠定基础.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2013(034)004【总页数】4页(P9-12)【关键词】牛病毒性腹泻病毒;E2蛋白;杆状病毒表达体系;昆虫细胞【作者】范晴;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;谢丽基;罗思思【作者单位】广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室,广西南宁530001;广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室,广西南宁530001;广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室,广西南宁530001;广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室,广西南宁530001;广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室,广西南宁530001;广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室,广西南宁530001;广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室,广西南宁530001;广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室,广西南宁530001【正文语种】中文【中图分类】Q786牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）可引起的牛的致死性腹泻，呼吸障碍及繁殖失败。

SARS-CoV、MERS-CoV、SARS-CoV-2的基因结构特点与致病机制

［收稿日期］　２０２０－０７－０６［基金项目］　国家自然科学基金资助项目（８２０７４２５０、８１７７４１２６）；湖南省自然科学基金项目（２０２０ＪＪ４０６３）；湖南省研究生创新课题（ＣＸ２０１８Ｂ４８１）；湖南中医药大学中西医结合一流学科开放基金（２０１８ＺＸＹＪＨ２０）；湖南省高校科技创新团队《感染性疾病中医药防治研究》资助项目（ＮＯ：１５）；湖南中医药大学一流学科《基础医学》资助项目（ＮＯ：０１）［作者简介］　赵澄（１９９５－），女（汉族），湖南省湘潭市人，硕士研究生，主要从事感染性疾病中医药防治研究。

［通信作者］　卢芳国Ｅｍａｉｌ：ｌｕｆａｎｇｇｕｏ０７３１＠１６３．ｃｏｍ犇犗犐：１０．１２１３８／犼．犻狊狊狀．１６７１－９６３８．２０２０７７４５·综述·犛犃犚犛犆狅犞、犕犈犚犛犆狅犞、犛犃犚犛犆狅犞２的基因结构特点与致病机制赵　澄１，卢芳国２（湖南中医药大学　１．中西医结合学院；２．医学院，湖南长沙　４１０２０８）［摘　要］　高致病性冠状病毒具有高发病率、高病死率以及全球大流行等特点，严重威胁人类健康，给社会经济带来巨大挑战。

目前关于高致病冠状病毒的致病机制，主要从直接细胞病变效应和间接免疫病理损伤两方面进行讨论，但具体作用基因的研究尚需进一步深入。

本文从高致病性冠状病毒的基因结构特点与致病机制的相关性进行综述，为预防和治疗高致病性冠状病毒感染提供参考。

［关　键　词］　高致病性冠状病毒；基因结构；致病机制；ＳＡＲＳＣＯＶ、ＭＥＲＳＣＯＶ、ＳＡＲＳＣＯＶ２［中图分类号］　Ｒ３７３犌犲狀犲狊狋狉狌犮狋狌狉犲犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊犪狀犱狆犪狋犺狅犵犲狀犻犮犿犲犮犺犪狀犻狊犿狅犳犛犃犚犛犆狅犞，犕犈犚犛犆狅犞犪狀犱犛犃犚犛犆狅犞２犣犎犃犗犆犺犲狀犵１，犔犝犉犪狀犵犵狌狅２（１．犛犮犺狅狅犾狅犳狋犺犲犐狀狋犲犵狉犪狋犲犱犜狉犪犱犻狋犻狅狀犪犾犆犺犻狀犲狊犲犪狀犱犠犲狊狋犲狉狀犕犲犱犻犮犻狀犲；２．犕犲犱犻犮犪犾犛犮犺狅狅犾，犎狌狀犪狀犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犆犺犻狀犲狊犲犕犲犱犻犮犻狀犲，犆犺犪狀犵狊犺犪４１０２０８，犆犺犻狀犪）［犃犫狊狋狉犪犮狋］　Ｈｉｇｈｌｙｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ（ＨＰＣ）ｉｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｈｉｇｈｉｎｃｉｄｅｎｃｅ，ｈｉｇｈｍｏｒｔａｌｉｔｙａｎｄｇｌｏｂａｌｐａｎｄｅｍｉｃ，ｉｔｓｅｒｉｏｕｓｌｙｔｈｒｅａｔｅｎｓｈｕｍａｎｈｅａｌｔｈａｎｄｐｏｓｅｓｇｒｅａｔｃｈａｌｌｅｎｇｅｔｏｓｏｃｉａｌｅｃｏｎｏｍｙ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨＰＣｉｓｍａｉｎｌｙｄｉｓｃｕｓｓｅｄｆｒｏｍｔｗｏａｓｐｅｃｔｓ：ｔｈｅｄｉｒｅｃｔｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔａｎｄｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄａｍａｇｅ，ｂｕｔｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｎｇｇｅｎｅｓｓｔｉｌｌｎｅｅｄｓｆｕｒｔｈｅｒｉｎｄｅｐｔｈｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｇｅｎｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨＰＣｉｓｒｅｖｉｅｗｅｄ，ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＨＰＣｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．［犓犲狔狑狅狉犱狊］　ｈｉｇｈｌｙｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ；ｇｅｎｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ；ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍ；ＳＡＲＳＣｏＶ，ＭＥＲＳＣｏＶ，ＳＡＲＳＣｏＶ２冠状病毒最先于１９３７年从鸡身上分离出来，１９６５年从普通感冒患者鼻洗液中分离出，并相继从人胚肾细胞和人胚气管中分离。

牦牛干扰素tau基因的克隆表达及其活性测定

牦牛干扰素tau基因的克隆表达及其活性测定
张灿;汪明
【期刊名称】《中国兽医杂志》
【年(卷),期】2009(045)010
【摘要】@@ 作为Ⅰ型干扰素,IFN-tau具有很高的抗病毒和抗增殖活性和免疫调节等功能,近年来研究还发现IFN-tau具有较高的抑制人类免疫缺陷病毒(HIV)复制的活性[1].与其他干扰素不同的是IFN-tau仅在反刍动物妊娠发育初期的胚胎滋养层细胞中表达,无需病毒诱导,有延长黄体发挥功能的时间的作用.
【总页数】2页(P32-33)
【作者】张灿;汪明
【作者单位】青岛农业大学动物科技学院,山东,青岛,266109;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100193
【正文语种】中文
【中图分类】Q78
【相关文献】
1.猪干扰素-γ基因在大肠杆菌中的克隆表达及其活性测定 [J], 王丽;刘金波;何涛;郑小莉;梅志强;李洪
2.荷斯坦奶牛干扰素tau基因的克隆表达及生物活性分析 [J], 张灿
3.德国牧羊犬γ干扰素基因克隆表达与抗病毒活性测定 [J], 吴艳花;汪明;吴志光
4.猫ω干扰素基因的克隆表达及其活性测定 [J], 许秋香;刘娜;刘了;施振声;刘文军
5.牦牛IFN-α基因的克隆表达及抗病毒活性研究 [J], 蔡进忠;史喜菊;李少勇;韩雪;汪明
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犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性分析

犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性分析毕振威;王永山;范红结【摘要】The nucleocapsid（N） protein gene of an atypical Canine distemper virus（CDV） was cloned into pFastBacHTA donor plasmid.The recombinant donor plasmid pFastBac-N containing N gene was constructed and transformed into competent E.coli DH10Bac cells that were grown on LB plate containing 3 antibiotics.Recombinant Bacmid DNA （rBacmid-N） was obtained and used to transfect insect cells Sf9 with Lipofectamine to produce baculovirus vBacmid-N.The expressed recombinant N protein band of approximate 62 kDa was detected in Western blot.The recombinant vBacmid-N antigen was visualized in infected Sf9 cells in indirect immunofluorescence assay.Purified recombinant N protein was used to establish indirect ELISA for the detection of antibody against CDV.The absorbance values at 450 nm of all CD-positive serum samples were above 0.4 whereas CD-negative serum samples were below 0.05.%将非典型犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid protein,N）基因克隆到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建含N基因的重组供体质粒pFastBac-N,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经筛选获得含N基因的重组Bacmid DNA （rBacmid-N）,脂质体法转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒vBacmid-N。

基于机器视觉的杏鲍菇外观品质分级系统设计

基金项目：国家自然科学基金（编号：３１７７２０４５）作者简介：刘浩，男，福建农林大学在读硕士研究生。

通信作者：陈学永（１９７０—），男，福建农林大学教授，博士。

Ｅｍａｉｌ：１３９０５００１０９３＠１６３．ｃｏｍ收稿日期：２０２２１１１２改回日期：２０２３０２２０犇犗犐：１０．１３６５２／犼．狊狆犼狓．１００３．５７８８．２０２２．８０９０７［文章编号］１００３５７８８（２０２３）０６０１０５０７基于机器视觉的杏鲍菇外观品质分级系统设计Ｄｅｓｉｇｎｏｆａｐｐｅａｒａｎｃｅｑｕａｌｉｔｙｇｒａｄｉｎｇｓｙｓｔｅｍｆｏｒａｐｒｉｃｏｔｍｕｓｈｒｏｏｍｂａｓｅｄｏｎｍａｃｈｉｎｅｖｉｓｉｏｎ刘　浩犔犐犝犎犪狅　林新华犔犐犖犡犻狀犺狌犪　朱亚男犣犎犝犢犪狀犪狀　周　柱犣犎犗犝犣犺狌　王　敏犠犃犖犌犕犻狀　陈学永犆犎犈犖犡狌犲狔狅狀犵（福建农林大学，福建福州　３５０００２）（犉狌犼犻犪狀犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲犪狀犱犉狅狉犲狊狋狉狔犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犉狌狕犺狅狌，犉狌犼犻犪狀３５０００２，犆犺犻狀犪）摘要：目的：将机器视觉技术引入到杏鲍菇的外观检测中。

方法：提出一种双边滤波代替高斯滤波作为图像平滑滤波器，Ｏｓｔｕ最大类间方差法代替固定双阈值分割的改进型Ｃａｎｎｙ算子，并作为边缘检测算法。

利用ＨＡＬＣＯＮ算子和颜色空间转换，完成杏鲍菇的长度、直径、弯曲度、均匀度、色泽及菇帽缺损特征要素提取。

使用ＨＡＬＣＯＮ１８．０５联合Ｃ＃在ＶＳ２０１７开发环境下完成视觉软件功能模块开发设计。

结果：随机获取２００根杏鲍菇，对算法处理准确度和视觉软件工作性能进行检测。

杏鲍菇直径分级精度为８３％，其余特征要素可达９５％以上，装置整体各规格杏鲍菇分级精度达９０％以上。

结论：通过算法的改进和视觉软件的设计可以完成杏鲍菇的外观品质的分级。

关键词：杏鲍菇；ＨＡＬＣＯＮ；分级分选；图像处理犃犫狊狋狉犪犮狋：犗犫犼犲犮狋犻狏犲：Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙａｉｍｅｄｔｏｉｎｄｕｃｅｔｈｅｍａｃｈｉｎｅｖｉｓｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｔｏｔｈｅａｐｐｅａｒａｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ犘犾犲狌狉狅狋狌狊犲狉狔狀犵犻犻．犕犲狋犺狅犱狊：ＡｂｉｌａｔｅｒａｌｆｉｌｔｅｒｗａｓｐｒｏｐｏｓｅｄｔｏｒｅｐｌａｃｅＧａｕｓｓｉａｎｆｉｌｔｅｒａｓｉｍａｇｅｓｍｏｏｔｈｉｎｇｆｉｌｔｅｒ，ａｎｄＯｓｔｕｍａｘｉｍｕｍｉｎｔｅｒｃｌａｓｓｖａｒｉａｎｃｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｐｒｏｐｏｓｅｄｔｏｒｅｐｌａｃｅｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄＣａｎｎｙｏｐｅｒａｔｏｒ，ｂａｓｅｄｏｎｆｉｘｅｄｄｏｕｂｌｅｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓｅｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ａｎｄｕｓｅｄａｓｅｄｇｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｌｇｏｒｉｔｈｍ．ＨＡＬＣＯＮｏｐｅｒａｔｏｒａｎｄｃｏｌｏｒｓｐａｃｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｔｈｅｌｅｎｇｔｈ，ｄｉａｍｅｔｅｒ，ｃｕｒｖａｔｕｒｅ，ｅｖｅｎｎｅｓｓ，ｃｏｌｏｒａｎｄｃａｐｄｅｆｅｃｔｓｏｆ犘．犲狉狔狀犻犻，ａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｄｅｓｉｇｎｏｆｖｉｓｕａｌｓｏｆｔｗａｒｅｆｕｎｃｔｉｏｎｍｏｄｕｌｅｓｗｅｒｅｃｏｍｐｌｅｔｅｄ，ｕｎｄｅｒｔｈｅＶＳ２０１７ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｗｉｔｈＨＡＬＣＯＮ１８．０５ａｎｄＣ＃．犚犲狊狌犾狋狊：２００ｐｉｅｃｅｓｏｆ犘．犲狉狔狀犵犻犻ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｏｂｔａｉｎｅｄｔｏｔｅｓｔｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｔｈｅａｌｇｏｒｉｔｈｍａｎｄｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅｖｉｓｕａｌｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｔｈｅｄｉａｍｅｔｅｒｇｒａｄｉｎｇａｃｃｕｒａｃｙｏｆｔｈｅ犘犾犲狌狉狅狋狌狊犲狉狔狀犵犻犻ｗａｓ８３％，ａｎｄｔｈｅｒｅｍａｉｎｉｎｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｅｌｅｍｅｎｔｓｃｏｕｌｄｒｅａｃｈｍｏｒｅｔｈａｎ９５％，ｗｉｔｈｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎａｃｃｕｒａｃｙｏｆａｌｌｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｍｏｒｅｔｈａｎ９０％．犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀：Ｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｐｐｅａｒａｎｃｅｑｕａｌｉｔｙｏｆ犘．犲狉狔狀犵犻犻ｃａｎｂｅｃｏｍｐｌｅｔｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆａｌｇｏｒｉｔｈｍａｎｄｔｈｅｄｅｓｉｇｎｏｆｖｉｓｕａｌｓｏｆｔｗａｒｅ．犓犲狔狑狅狉犱狊：ａｐｒｉｃｏｔｍｕｓｈｒｏｏｍ；ＨＡＬＣＯＮ；ｇｒａｄｉｎｇａｎｄｓｏｒｔｉｎｇ；ｉｍａｇｅｐｒｏｃｅｓｓ杏鲍菇营养丰富，有很高的食用、营养及经济价值，是中国工厂化栽培的经济食用菌品种之一［１］。

奶牛γ-干扰素基因的克隆及其在COS-1细胞中的表达

*基金项目：江苏省“333”工程人才培养基金资助。

许金俊：男，1972生，博士研究生。

**通讯作者。

Author for correspondence.E-mail ：<aijian@ >.收稿日期：2003-05-26接受日期：2003-10-30农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12(3):273~277·研究论文·奶牛γ-干扰素基因的克隆及其在COS-1细胞中的表达*许金俊秦爱建**金文杰刘岳龙（扬州大学畜牧兽医学院，扬州225009）摘要：应用RT-PCR 技术从经体外植物血凝素（PHA ）刺激诱导的奶牛外周血淋巴细胞的总RNA 中扩增出牛γ-干扰素（bovine interferon-γ，）基因。

将扩增出的克隆到PMD18-T 载体中，经过限制性酶切分析筛选正向插入的克隆。

测序结果表明，所克隆到的基因编码区序列与已报道基因存在3个核苷酸的差异。

将该基因片段从PMD18-T 载体中用d Ⅲ和H Ⅰ双酶切后克隆到真核表达载体pcDNA3.1/zeo c （+）中，构建真核表达载体pcDNA-，通过脂质体转染COS-1细胞，用鼠抗BovIFN-γ高免血清和FITC 标记的羊抗鼠IgG 进行间接免疫荧光实验（IFA ）检测，结果表明，在COS-1细胞的细胞膜和胞浆内均有rBovIFN-γ表达，细胞病变抑制实验证实，转染后细胞培养上清液具有一定的干扰素活性，转染后72h 细胞培养上清液在MDBK 细胞上抑制VSV 病毒的效价可达到128IU/mL 。

研究结果为进一步筛选稳定表达基因细胞系、开发奶牛疾病预防控制的新产品以及开展奶牛疾病的基因治疗奠定了基础。

关键词：奶牛；γ-干扰素基因；真核表达Cloning of Bovine Interferon-gamma Gene andIts Expression in COS-1Cells*XU Jin-JunQIN Ai-Jian**JIN Wen-Jie LIU Yue-Long(College of Animal Science and Veterinary Medicine,Yangzhou University,Yangzhou225009,China)interferon-gamma()gene with signal peptide encoding region was amplified by reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR)from total RNA of bovine peripheral blood lymphocytes stimulated with phytohemagglutinin (PHA).The products of RT-PCR were cloned into PMD18-T vector.Postive recombinant clone named -T4was identifiedby restriction enzyme digestion and sequencing.The fragment of γin the PMD18-T vector was subcloned into mammalian expression vector pcDNA3.1,which was named with pcDNA-.Eukaryotic expression plasmid pcDNA-weretransfected into COS-1cells by lipofectin,rBovIFN-γexpression was identified in the cytoplasms and cytomembranes of COS-1cells in IFA at 72h posttransfection.The interferon titer in the supernatant of transfected COS-1cells was up to 128IU/mL.These results suggested that pcDNA-could be used to establish a cell line expressing rBovIFN-γstably,and rBovIFN-γcould be servedas a new product in the control of bovinediseases.bovine ；interferon-γgene ；eukaryotic expressionγ-干扰素（γ-interferon,IFN-γ）又称Ⅱ型干扰素，是一种由CD4+Th1型、CD8+T 细胞以及NK 细胞产生的细胞因子，它不仅具有Ⅰ型IFN （α-干扰素、β-干扰素）的抗病毒和抗肿瘤活性，更重要的是它还具有促进MHC Ⅱ类抗原表达、增强APC 细胞与T 细胞的相互作用、增强T 细胞辅助抗体产生和细胞毒T细胞产生的能力等诸多免疫调节活性，不仅能单独作为生物制剂应用于一些疾病的防治，而且可作为免疫佐剂，增强疫苗的免疫效果，还能与一些病原微生物的保护性抗原基因共表达，从而加强和改善疫苗的免疫效果[1]。

13455021_Wnt信号通路在牛胎盘发育过程中的功能研究进展

中国畜牧兽医　２０１７，４４（１）：１６１１６６犆犺犻狀犪犃狀犻犿犪犾犎狌狊犫犪狀犱狉狔牔犞犲狋犲狉犻狀犪狉狔犕犲犱犻犮犻狀犲ｄｏｉ：１０．１６４３１／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１７２３６．２０１７．０１．０２２犠狀狋信号通路在牛胎盘发育过程中的功能研究进展孙宏亮，许美花，王　瑶，鲁文赓（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆１６３３１９）摘　要：胎盘是哺乳动物在妊娠期间胎儿和母体之间的联系枢纽，因此，胎盘发育是否正常在妊娠中起着关键的作用。

Ｗｎｔ信号通路在胚胎发育和胎盘形成的过程中有着重要的作用，作者通过回顾几条已经研究较为清楚的Ｗｎｔ信号通路和牛早期胚胎和胎盘的形成过程，介绍了Ｗｎｔ信号通路的组成部分在体细胞核移植（ｓｏｍａｔｉｃｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｆｅｒ，ＳＣＮＴ）牛和正常人工授精的牛的胚胎早期表达，提出了ＤＫＫ１和Ｆｚｄ４的表达对于早期胎盘形成和发育有特殊的作用。

此外，抑制ＭＡＰ２Ｋ和ＧＳＫ３信号可以激活Ｗｎｔ信号通路，增加内细胞团和滋养层细胞的数量，加速囊胚的发育。

ＳＣＮＴ牛和正常人工授精的牛早期胎盘中Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ和β ｃａｔｅｎｉｎ蛋白的磷酸化程度相似，所以对于Ｗｎｔ信号通路在牛胎盘的早期形成和发育中的作用还需进一步的了解和研究。

关键词：牛；胎盘；Ｗｎｔ信号通路中图分类号：Ｓ８１４．６文献标识码：Ａ文章编号：１６７１７２３６（２０１７）０１０１６１０６收稿日期：２０１６０６０８基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（２０１３２３０５１２０００３）作者简介：孙宏亮（１９９１），男，黑龙江佳木斯人，硕士，研究方向：奶牛繁殖障碍，Ｅｍａｉｌ：１５９４４３５１８２＠ｑｑ．ｃｏｍ通信作者：鲁文赓（１９７３），吉林公主岭人，副教授，硕士生导师，研究方向：动物繁殖障碍疾病及胎盘发育，Ｅｍａｉｌ：Ｌｗｇ１７１２＠ｂｙａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ犚犲狊犲犪狉犮犺犘狉狅犵狉犲狊狊狅狀狋犺犲犉狌狀犮狋犻狅狀狅犳犠狀狋犛犻犵狀犪犾犻狀犵犘犪狋犺狑犪狔犻狀狋犺犲犇犲狏犲犾狅狆犿犲狀狋狅犳犅狅狏犻狀犲犘犾犪犮犲狀狋犪ＳＵＮＨｏｎｇｌｉａｎｇ，ＸＵＭｅｉｈｕａ，ＷＡＮＧＹａｏ，ＬＵＷｅｎｇｅｎｇ（犆狅犾犾犲犵犲狅犳犃狀犻犿犪犾犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔，犎犲犻犾狅狀犵犼犻犪狀犵犅犪狔犻犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犇犪狇犻狀犵１６３３１９，犆犺犻狀犪）犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｐｌａｃｅｎｔａｉｓｔｈｅｌｉｎｋｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｆｅｔｕｓａｎｄｔｈｅｍａｔｅｒｎａｌｂｏｄｙｄｕｒｉｎｇｐｒｅｇｎａｎｃｙ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｐｒｅｇｎａｎｃｙｏｕｔｃｏｍｅｏｆｔｈｅｋｅｙｗａｓｒｅｌａｔｅｄｂｙｔｈｅｎｏｒｍａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｐｌａｃｅｎｔａ．Ｗｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｅｍｂｒｙｏａｎｄｐｌａｃｅｎｔａｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｓｅｖｅｒａｌＷｎｔｐａｔｈｗａｙｓｗｈｉｃｈｈａｖｅｂｅｅｎｃｌｅａｒｓｔｕｄｙａｎｄｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｅａｒｌｙｅｍｂｒｙｏａｎｄｐｌａｃｅｎｔａｉｎｃａｔｔｌｅａｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ，ｔｈｅｅａｒｌｙｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＷｎｔｐａｔｈｗａｙｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｔｈｅｓｏｍａｔｉｃｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｆｅｒ（ＳＣＮＴ）ｃａｔｔｌｅａｎｄｎｏｒｍａｌｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂｏｖｉｎｅｅｍｂｒｙｏｓｉｓｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＤＫＫ１ａｎｄＦｚｄ４ｈａｖｅａｓｐｅｃｉａｌｒｏｌｅｉｎｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｅａｒｌｙｐｌａｃｅｎｔａ，ｂｕｔｉｔｓｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｓｎｏｔｃｌｅａｒ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｓａｃｔｉｖａｔｅｄｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅＭＡＰ２ＫａｎｄＧＳＫ３，ｌｅｄｔｏｔｈｅｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓａｎｄｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｎｕｍｂｅｒｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｐｅｅｄ．ＢｕｔｉｔｉｓｓｉｍｉｌａｒｔｏｔｈｅｅｘｔｅｎｔｏｆｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆＥｃａｄｈｅｒｉｎａｎｄｂｅｔａｃａｔｅｎｉｎｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｅａｒｌｙｐｌａｃｅｎｔａｏｆｃｏｗｓｗｉｔｈＳＣＮＴａｎｄｎｏｒｍａｌｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｒｏｌｅｏｆＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｔｈｅｅａｒｌｙｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｂｏｖｉｎｅｐｌａｃｅｎｔａｓｈｏｕｌｄｂｅｆｕｒｔｈｅｒｕｎｄｅｒｓｔｏｏｄａｎｄｓｔｕｄｉｅｄ．犓犲狔狑狅狉犱狊：ｂｏｖｉｎｅ；ｐｌａｃｅｎｔａ；Ｗｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ胚胎移植是胚胎工程的重要组成部分，能充分发挥优秀母畜的繁殖潜力，提高利用率和繁殖效率，现在已是一项比较成熟的生物技术。

O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｒｂｉｎ１５０００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｍｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｓｅｒｏｔｙｐｅ０ｆｏｏｔ・－ａｎｄ・・ｍｏｕｔｈｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ
试验（ＩＦＡ）检测表明，获得的重组杆状病毒在Ｓｆ９细胞中能够表达０型ＦＭＤＶ衣壳蛋白。Ｗｅｓｔｅｎｒｂｌｏｔ分析显示，ＦＭＤＶ的衣壳蛋白和３ｃ蛋白酶均获得表达，并且３ｃ蛋白酶对结构蛋白进行了正确切割。重组蛋白表达的动力
了实验基础
关键词：０型口蹄疫病毒；衣壳蛋白；杆状病毒表达
中图分类号：￥８５２．６５文献标识码：Ａ文章编号：１００８－０５８９（２０１３）０３－０１８５－０４
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｓｅｒｏｔｙｐｅ０ｆｏｏｔ－－ａｎｄ — －ｍｏｕｔｈｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓｉｎｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓ

13454822_东串猪FUT2基因CDS扩增、序列分析及组织表达谱检测

中国畜牧兽医　２０１７，４４（１）：１１１犆犺犻狀犪犃狀犻犿犪犾犎狌狊犫犪狀犱狉狔牔犞犲狋犲狉犻狀犪狉狔犕犲犱犻犮犻狀犲ｄｏｉ：１０．１６４３１／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１７２３６．２０１７．０１．００１东串猪犉犝犜２基因犆犇犛扩增、序列分析及组织表达谱检测钦伟云１，甘丽娜１，赵呈祥１，喻礼怀１，包文斌１，２，吴圣龙１，２（１．扬州大学，江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州２２５００９；２．江苏省种猪繁育和健康养殖工程技术研究中心，扬州２２５００９）摘　要：猪α （１，２）岩藻糖转移酶２（ＦＵＴ２）基因为鞘糖脂生物合成—球系列通路中的重要基因，可能在断奶仔猪抵抗大肠杆菌Ｆ１８侵染过程中发挥着调控作用。

为探究猪犉犝犜２基因的序列结构及其生物学功能，试验采用ＰＣＲ扩增得到地方猪品种东串猪犉犝犜２基因的ＣＤＳ全序列，进而预测和分析犉犝犜２基因的蛋白质序列及其功能区域，同时对其在８头３５日龄东串断奶仔猪１１个组织中的表达水平进行检测与分析。

结果显示，犉犝犜２基因的ＣＤＳ序列全长为１０２３ｂｐ，共编码３４０个氨基酸，ＦＵＴ２蛋白为脂溶性的亲水蛋白，蛋白结构不稳定，该蛋白存在１个跨膜螺旋结构，但不存在信号肽，表明ＦＵＴ２蛋白为膜蛋白；ＦＵＴ２蛋白存在２个Ｎ糖基化位点（１８５和３０５位氨基酸），无Ｏ糖基化位点，此外该蛋白还存在１４个潜在的磷酸化位点，包括６个Ｓｅｒ、２个Ｔｈｒ和６个Ｔｙｒ，对其功能区域进行分析发现，ＦＵＴ２蛋白存在１个超级家族保守结构域：ＦＵＴ１ＦＵＴ２ｌｉｋｅ（５８－３１９位氨基酸）；系统进化树结果显示，猪与牛的亲缘关系相对较近，与人、黑猩猩、大鼠和小鼠等亲缘关系相对较远；犉犝犜２基因在东串断奶仔猪１１个组织中均有表达，在消化道和免疫组织中表达水平较高。

试验结果推测犉犝犜２基因在断奶仔猪抵抗大肠杆菌Ｆ１８中可能具有一定的作用，且可能是通过合成岩藻糖转移酶间接发挥其抵抗大肠杆菌Ｆ１８的作用。

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收稿日期：２００８０２２０基金项目：国家重大基础研究发展规划 “ （）９７３项目 ” ２００５ＣＢ５２３２０１作者简介：曹轶梅（），女，甘肃会宁人，博士生，主要从事动物病毒分子生物学研究，：１９７６Ｅｍａｉｌｃａｏｍ５１８＠１２６．ｃｏｍｙ刘在新，：：Ｔｅｌ０９３１８３４２５８７，Ｅｍａｉｌｌｉｕｋｅｕｂｌｉｃ．ｌｚ．ｓ．ｃｎ通讯作者：＠ｐｙｇ
［］体再组装成７５Ｓ的空衣壳１。非结构蛋白３Ｃ是一个
的基因可得到表达。这样在获得目的蛋白后，改变离子强度等条件后，再加入３溶液ｐＨ值、Ｃ蛋白酶，以期能够在体外组装成完整的空衣壳。
１材料与方法
１１材料／／１．１．１细胞和毒株及实验动物Ａｓｉａ１ＪＳ０５ＦＭＤＶ适应细胞毒及Ｓｆ９细胞由作者实验室保存。Ｏ型、Ａｓｉａ Ⅰ 型二价灭活疫苗由兰州兽医研究所疫苗车间提供。３由兰州００～５００ｇ健康豚鼠２０只，试验期间饲养于兽医研究所实验动物养殖场提供，隔离间。１．１．２主要试剂和仪器ＲＮｅａｓｉｎｉＫｉｔ购自ｙＭ公司，载体、连接酶为ＱｉａｅｎＧＥＭＴＴ４ＤＮＡｇｐＰｒｏｍｅａ公司产品，ＴａＫａＲａＲＮＡＰＣＲＫｉｔｇ（）、感受态细胞、ＡＭＶＶｅｒ．３．０ＤＨ５ＮＡＭａｒｋ αＤ、低分子量蛋白Ｍ、ｅｒａｒｋｅｒＤＮＡ片段纯化试剂盒、质粒快速提取试剂盒、 ˈ Ｄ限制性内ＮＡ聚合酶、切酶
畜牧兽医学报２（）：００９，４０１８３８８
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全衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达与免疫活性分析
曹轶梅，孙甲川，卢曾军，孙普，郭建宏，刘在新
（中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，农业部畜禽病毒学重点实验室，兰州７）３００４６摘要：将ＡＭｅｌｓｉａＶ全衣壳蛋白 ∢ １２Ａ基因插入到带有蜂毒溶血肽信号序列的杆状病毒转移载体ｐ Ⅰ 型ＦＭＤ构建重组转移载体ｐＮＡ共转染Ｓｆ９细Ｂａｃ中，ＭｅｌＰ１２Ａ。然后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒Ｄ胞，获得重组杆状病毒。以感染复数（）经Ｗ、间ＭＯＩ１０的重组病毒感染Ｓｆ９细胞，７２ｈ后收获细胞，ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ结果表明 ∢ 相对分子质量约８，与预测蛋白大小一致，且能接免疫荧光检测，１２Ａ基因在昆虫细胞中获得表达，２ｋｕ被ＦＭＤＶ阳性血清所识别。免疫荧光检测表明表达蛋白主要集中在细胞膜部分。夹心ＥＬＩＳＡ检测结果表明一部而有一部分蛋白仍在细胞中未能分泌。表达蛋白加入等量佐剂乳化后免疫豚鼠，间分表达蛋白分泌至培养基中，接ＥＬＩＳＡ检测结果表明豚鼠免疫后１５ｄ即产生了特异性ＦＭＤＶ抗体。本研究为空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究进行了有益的探索。关键词：衣壳蛋白基因 ∢ 杆状病毒；表达ＦＭＤＶ；１２Ａ；Ｓｆ９细胞；中图分类号：（）Ｓ８５２．６５９．６文献标识码：Ａ文章编号：０３６６６９６４２００９０１００８３０６
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８４
畜牧兽医学报
４０卷
ｉｎｄｕｃｅａｎｔｉＦＭＤＶａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｗｅｅｋａｆｔｅｒｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ．ＴｈｉｓｓｔｕｄｌａｉｄａｇｏｏｄｆｏｕｎｄａｙｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｈｅａｓｓｅｍｂｌｆＦＭＤＶｅｍｔａｓｉｄｓ ∳ ∰ˊ ∳ ˇ ∑ ａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｙｏｐｙｃｐｐｓｕｂｕｎｉｔｖａｃｃｉｎｅ．：；； ˙ ∑ ‟ ＦＭＤＶ；ｃａｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ∢ １２Ａ；ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｓｆ９ｃｅｌｌｅｘｒｅｓｓｉｏｎｐｐ æ ，ｆｏｏｔａｎｄｍｏｕｔｈｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ口蹄疫病毒（是小Ｒ病毒ＦＭＤＶ）ＮＡ病毒科口蹄疫病毒属成员，粒子无囊膜，呈二十面体对称，直径为２３ｎｍʃ２全长约８ＦＭＤＶ的基因组为单股正链ＲＮＡ，．５ｎｍ，，可以ｋｂ。基因组含有一个大的开放阅读框（ＯＲＦ）从２个不同的起始位点开始编码聚蛋白，聚蛋白被病毒蛋白酶裂解成几种成熟的多肽和一些中间产物。ＦＭＤＶ衣壳在感染细胞中的组装要求非结构蛋白３Ｃ或３ＣＤ将Ｐ１聚蛋白裂解成几种单独的结构蛋白。每一个衣壳亚单位由１个分子的Ｖ、Ｐ０ＶＰ１和ＶＰ３组成５Ｓ原体，ＶＰ０是ＶＰ２和ＶＰ４的前体。５Ｓ原体随后组装成１２Ｓ的五聚体亚单位，１２个五聚