实验三 一次给药皮肤刺激实验

实验三一次给药皮肤刺激实验

一、实验目的

掌握皮肤染毒技术，了解受试物对皮肤是否有刺激或腐蚀作用。

二、实验器材

1、实验动物：

小鼠24只，每组4只

2、材料

共用：剃毛器1把、剪毛剪2把、记号笔1支、透明胶1卷、纯桉叶油素10 mL、50%桉叶油素10 mL、25%桉叶油素10mL、3%吐温80 10mL、清洁温水500 mL 每组：长镊子1支、医用手套2双、、注射器（1 mL）1支、烧杯（50 mL）1个、纱布（1.5 cm×1.5 cm）8张。

三、实验内容与步骤

1、保定：一人用一手抓住小鼠颈部皮肤，另一手抓住小鼠尾部，轻轻按住固定在操作台面上。

2、剃毛：小鼠保定后，一人用电动剃毛剪将小鼠背部脊柱两侧的毛剃净，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约2 cm×2 cm。注意需将皮肤绷紧，把剪刀贴紧皮肤剪，但不可用手提起被毛，以免剪破皮肤；依次剪毛，不要乱剪；剪下来的被毛集中在一个装水的烧杯内，勿遗留在和操作台周围。

3、破损皮肤的制备：给药前24 h，用75%酒精消毒小鼠裸露皮肤部位，用消毒针头在剃毛部位做“井”字状划划痕，划破皮肤，以有组织液和血液渗出为度。

3、染毒：吸取1 mL受试物滴于两层灭菌纱布（1.5 cm×1.5 cm）上，将浸有受试物的纱布覆盖在左侧裸露皮肤区域，用透明胶布固定，右侧皮肤以3%吐温80为对照。

4、观察：一次给药4 h后，以温水洗去残留受试物，观察1 h，24 h、48 h、72 h涂抹部位的红斑和水肿等反应。按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，将观察结果填入表3中。

5、结果判定：根据24、48和72 h各观察时点最高积分均值，按表2判定皮肤刺激强度。

6、实验分组：见表4

四、注意事项

在实验操作过程中，注意安全，以免被小鼠咬伤，防止小鼠丢失；实验使用的有毒化学药品妥善处理；做好实验观察记录。

五、思考题

皮肤刺激实验与皮肤毒性实验有何区别？

表 1 皮肤刺激反应评分

表3 皮肤刺激强度分级

表 3 桉叶油素对小鼠急性皮肤刺激性试验结果

动物编号

1 h 24 h 48 h 72h

样品对照样品对照样品对照样品对照

红

斑

水

肿

总

分

红

斑

水

肿

总

分

红

斑

水

肿

总

分

红

斑

水

肿

总

分

红

斑

水

肿

总

分

红

斑

水

肿

总

分

红

斑

水

肿

总

分

红

斑

水

肿

总分

1

2

3

4

总积分均值

刺激强度分级

表4 实验分组情况

组别ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ完整皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 完整皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 破损皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 破损皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25%