转录组测序技术的应用及发展综述

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转录组测序技术在疾病诊断中的应用

转录组测序技术在疾病诊断中的应用

转录组测序技术在疾病诊断中的应用一、转录组测序技术概述转录组测序技术是一种高通量测序方法,它通过分析细胞或组织中的RNA分子,来研究基因表达的模式和变化。

这项技术在疾病诊断中扮演着越来越重要的角色,因为它能够揭示疾病状态下基因表达的异常,为疾病机理的理解和诊断提供重要信息。

1.1 转录组测序技术的核心原理转录组测序技术基于RNA的测序,通过提取样本中的RNA,将其转化为cDNA,然后利用高通量测序技术进行测序。

测序结果可以反映出样本在特定条件下的基因表达谱。

1.2 转录组测序技术的应用领域转录组测序技术的应用领域非常广泛,包括但不限于以下几个方面:- 疾病机理研究:通过比较健康与疾病状态下的基因表达差异,揭示疾病发生的分子机制。

- 疾病诊断标志物的发现:识别疾病特异性的基因表达模式,作为诊断标志物。

- 药物研发:分析药物对基因表达的影响,为药物靶点的发现和药物效果评估提供数据支持。

- 个体化医疗:根据个体的基因表达特征,制定个性化的治疗方案。

二、转录组测序技术的发展历程与技术进步转录组测序技术自20世纪末以来经历了快速的发展,从最初的微阵列技术到现在的高通量测序技术,技术的进步极大地提高了测序的效率和准确性。

2.1 微阵列技术微阵列技术是早期的转录组分析方法,通过使用含有数千个已知基因序列的芯片,可以同时检测大量基因的表达水平。

尽管微阵列技术在早期的研究中发挥了重要作用,但其局限性在于只能检测已知基因,且动态范围有限。

2.2 高通量测序技术高通量测序技术,又称为下一代测序(NGS),允许对整个转录组进行无偏的测序分析。

这种技术可以检测到新的转录本和剪接变体,提供更全面的基因表达信息。

2.3 单细胞转录组测序技术单细胞转录组测序技术是近年来的突破性进展,它能够在单个细胞水平上分析基因表达,揭示细胞异质性和复杂生物过程中的细微变化。

2.4 转录组测序技术的关键技术转录组测序技术的关键技术包括:- RNA提取和纯化:确保RNA的质量,为后续的测序提供基础。

生命科学中的转录组测序技术研究

生命科学中的转录组测序技术研究

生命科学中的转录组测序技术研究随着现代生命科学的不断发展,转录组测序技术也得到了广泛应用。

在研究生命的基本过程、探究疾病的发生机制等方面,转录组测序技术发挥了重要作用。

本文将从测序技术的发展历程、主要应用领域及其应用前景等方面进行论述。

一、测序技术的发展历程转录组测序技术的发展一直紧密跟随测序技术的发展,历经Sanger测序、荧光串联测序、下一代测序(NGS)等几个阶段。

Sanger测序是最早应用的测序技术,在20世纪70年代首次提出。

它通过DNA聚合酶在模板DNA上合成新链,然后使用核苷酸的二进制混合测序对新链进行测序。

此技术极具突破性,但效率极低,每个碱基需要一个步骤才能测定。

随着荧光串联测序技术(也称根据基质扩增荧光技术,pyrosequencing)的发展,测序速度取得了很大提升。

2005年左右,NGS技术的问世,继而占据转录组测序市场的主导地位,并一直领跑至今。

二、主要应用领域转录组测序技术是生物信息学的重要组成部分,其应用领域包括基因功能研究、基因表达谱分析、疾病诊断及药物筛选等。

最常见的一项应用便是基因表达谱分析,它可以使我们了解在特定条件下,生物体内基因转录的状态,即对特定生境的适应性,例如疾病状态下转录的改变,或是肿瘤进展中基因的表达变化等。

透过剖析这些差异,我们可以深入了解各种生命过程的基本机理。

在疾病的诊断及治疗中,转录组测序技术可以帮助我们深入了解相关的基因表达模式,进而针对特定基因的表达谱开发相应的基因测序产品。

这些产品可以帮助开展肿瘤和其他疾病的筛查、诊断及基因治疗研究。

此外,其他未来可能的应用还包括心血管、代谢性疾病、新药研发等方面。

三、应用前景未来转录组测序技术的应用前景将更广泛。

NGS技术不断升级,甚至还有更快、更稳定的技术,在全球各地开展了数百项基因组及转录组学的大规模研究,这些研究将推动生命科学领域的进一步发展,并加速创新型药物的开发。

此外,科技公司正在开发各类应用软件,以提取转录组数据中的重要信息,这些信息将被进一步用于开发治疗手段,以及选择适合于特定治疗方案的患者。

全转录组测序技术在人类疾病研究中的应用进展

全转录组测序技术在人类疾病研究中的应用进展

全转录组测序技术在人类疾病研究中的应用进展随着基因测序技术的不断发展,全转录组测序技术日益成为疾病研究领域中的热门话题。

全转录组测序是一种高通量基因表达分析技术,可以同时检测所有转录本。

其在人类疾病的分类、治疗和预防方面具有重要的应用价值。

本文将探讨全转录组测序技术在人类疾病研究中的应用进展。

全转录组测序技术的基本原理全转录组测序,又称RNA测序,是从全体细胞RNA中同步测序所有基因的方法。

它通过逐个检测RNA序列,—旦转录因子结合到DNA上,该DNA片段即被转录成RNA,从而确定细胞目前所表达的基因型。

全转录组测序技术的流程包括RNA提取、制备文库、测序和数据分析。

其中RNA提取是关键步骤,如何保证RNA的完整性和纯度,是获得可靠结果的关键。

应用全转录组测序技术探索人类疾病全转录组测序技术在人类疾病探索中已经应用广泛,因为它可以检测到所有的RNA转录物而不受任何限制,从而可以发现大量的脱髓鞘疾病、神经系统疾病、关节炎、糖尿病等重要疾病相关基因。

以下分别介绍一下应用全转录组测序技术探索人类疾病的研究进展。

1. 脱髓鞘疾病多发性硬化症(MS)是一种自身免疫性疾病,其组织特征为中枢神经系统的炎性损伤和脱髓鞘。

研究表明,全转录组测序分析有助于了解MS中那些基因会发生关键变化,从而推动对MS的诊断和治疗的进展。

同时,全转录组测序还是关于深入了解髓磷酸酯酶基因家族中的基因变化的研究的必要与有力工具。

2. 神经系统疾病阳性患者的抑郁症状是近年来极为关注的一个问题。

通过全转录组测序技术的应用,已经发现在疾病的过程中许多的基因会发生关键变化,进一步揭示出神经系统疾病的发病机制。

3. 关节炎类风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫性疾病,常伴随有疼痛、肿痛和体重下降。

目前采用全转录组测序已经发现自噬作为机体应对膜损伤的重要机制,揭示了调控自噬基本机制的分子交互进展,新发现的分子为类风湿性关节炎治疗提供了一个新的理论和实践基础。

转录组测序技术在植物基因表达分析中的应用

转录组测序技术在植物基因表达分析中的应用

转录组测序技术在植物基因表达分析中的应用植物基因表达分析是研究植物基因转录和表达水平的一个重要领域,充分了解植物基因表达模式对于揭示植物的生长发育、逆境响应等重要生物学过程具有重要意义。

随着高通量测序技术的迅猛发展,转录组测序技术应运而生,成为揭示植物基因表达的有效工具。

本文将探讨转录组测序技术在植物基因表达分析中的应用,并介绍其在植物科研中的重要性和发展前景。

一、转录组测序技术简介转录组测序技术又称RNA-seq技术,是一种高通量测序技术,通过直接测定RNA分子序列,可以实现对所有转录本的定量和定序。

相对于早期的芯片技术,转录组测序技术具有更高的准确性和灵敏度,并且能够检测到新的转录本和剪接变体。

转录组测序技术包括样品制备、测序、数据分析等步骤,其整体流程相对复杂,但随着技术的成熟和商业化的进一步推广,已经变得越来越简便易行。

二、转录组测序技术在植物基因表达分析中的应用1.鉴定和分析植物基因转录组测序技术可以高效地鉴定和分析植物基因。

通过对植物基因组的全转录本进行测序,可以得到准确的基因序列信息,并且能够检测到新的转录本。

利用转录组测序技术,研究人员可以全面了解植物的基因组结构和转录组组成,进而研究基因的功能和调控方式。

2.揭示植物基因表达模式转录组测序技术能够全面揭示植物的基因表达模式。

通过对不同组织、不同发育阶段或不同环境条件下的植物进行转录组测序,可以获得宏观和微观水平上的基因表达谱。

研究人员可以利用转录组测序数据,进行基因表达差异分析、基因调控网络构建等,从而了解植物的生长发育和逆境响应机制。

3.预测基因功能与代谢途径转录组测序技术可以帮助预测植物基因的功能和参与的代谢途径。

通过将转录组测序数据与已有的基因组数据库进行比对和注释,可以鉴定出已知基因的功能,并预测未知基因的功能。

此外,通过分析基因的表达模式和相关性,可以预测基因参与的代谢途径和生物学过程,为后续研究提供有价值的线索。

三、转录组测序技术在植物科研中的重要性和发展前景转录组测序技术在植物科研中具有重要的应用价值和广阔的发展前景。

转录组测序技术在生命科学中的应用

转录组测序技术在生命科学中的应用

转录组测序技术在生命科学中的应用转录组测序技术是一种高通量的基因表达分析方法,其可以快速地测定给定组织或细胞类型的RNA表达谱,为生命科学研究提供了很多有用的信息。

本文将介绍转录组测序技术的原理、应用和发展趋势。

一、转录组测序技术原理转录组测序技术基本原理是基于对RNA序列的生成和定量测定进行研究,在这种技术中,研究人员首先通过提取细胞RNA,随后将RNA转录成cDNA,然后对cDNA进行序列测序,并利用计算机技术将所有序列比对到参考基因组上,最后进行差异表达分析。

二、转录组测序技术应用转录组测序技术可以用于解决很多生命科学领域的问题,例如:1. 基因表达和调控机制研究通过对不同组织或细胞类型的RNA表达谱进行测定,可以深入了解特定基因的表达方式和调控机制,从而研究基因功能和生物学过程。

2. 疾病诊断和治疗利用转录组测序技术可以鉴定疾病相关的基因或基因组表达差异,为疾病的早期诊断和治疗提供基础研究依据。

3. 新药开发和生物技术应用通过转录组测序技术可以鉴定新的生物标志物或靶点,为新药开发提供基础研究支持。

此外,该技术也可以用于鉴定新的生物工程应用和研究。

三、转录组测序技术的发展趋势1. 单细胞RNA测序传统的RNA-seq技术是基于从组织层面提取RNA,但这种方法可能掩盖了单个细胞内表达水平的差异。

单细胞RNA-seq技术可以快速准确地测定单个细胞的RNA表达级别,从而更好地了解细胞异质性。

2. 亚型和异构体表达的鉴定RNA-seq技术可以直接从RNA样本中测定不同亚型和异构体的表达信息。

这种信息可以帮助研究人员深入了解基因表达的复杂性和多样性。

3. 基因组编辑和治疗的潜在应用随着CRISPR/Cas9技术的快速发展,RNA-seq技术可以结合CRISPR/Cas9技术来研究基因编辑和治疗的潜在应用,例如基因敲除和插入等。

结论总之,转录组测序技术是一种强大的基因表达分析技术,其已在生命科学领域中取得了突破性进展。

单细胞转录组测序技术的发展及其应用

单细胞转录组测序技术的发展及其应用

单细胞转录组测序技术的发展及其应用单细胞转录组测序技术是一种能够对单个细胞进行测序和分析的技术。

它的出现彻底改变了我们对细胞的认识和了解。

有了这项技术,我们能够更加深入地研究细胞的特性、功能、亚细胞结构等等,从而更好地了解生物体的运作原理和机制。

一、技术发展及其历程单细胞转录组测序技术的发展早在上世纪90年代就开始了。

当时,研究人员使用微操纵器将单个细胞吸管至小管中,然后将其与反转录剂等试剂一起反应,最后进行PCR扩增。

尽管这项技术具有很大的前景,但是由于其操作过于复杂、耗时、并且存在很大的误差,因此并未得到广泛应用。

直到近年来,随着高通量测序技术不断升级和普及,单细胞转录组测序技术才得以快速发展和广泛应用。

目前,市面上已有多家公司推出了单细胞转录组测序的商用设备和试剂盒,如10x Genomics、Mission Bio、Fluidigm等。

二、技术原理及流程单细胞转录组测序技术的基本原理是将单个细胞中的mRNA通过反转录转换为cDNA,然后进行二代测序。

一般来说,其基本流程如下:首先,需要对单个细胞进行取样,并且在抽取过程中要避免细胞的损伤或降解。

然后,通过某种方式对细胞内的mRNA进行拷贝,并且在其中添加一串barcode,用于区分不同细胞的RNA。

接下来,反转录生成cDNA,并将这些cDNA进行PCR扩增,并进行二代测序。

最后,使用某种软件将得到的数据进行拼接和解码,从而得到每个细胞的RNA序列信息。

三、技术应用单细胞转录组测序技术可以广泛应用于包括癌症、胚胎发育、免疫系统、神经系统等领域中。

以下是技术应用的几个例子:1. 癌症诊断:利用单细胞转录组测序技术,可以快速、准确地检测癌症细胞的转录组变化,从而对患者进行个性化诊断和治疗。

2. 胚胎发育:单细胞转录组测序技术可以帮助我们更好地了解胚胎发育中各种细胞类型的转录组特性和功能,从而更好地探究胚胎发育的规律和机制。

3. 免疫系统:通过对单个细胞进行转录组测序,可以深入了解各种免疫细胞的表达谱和功能,从而更好地研究免疫系统中的信号传递、发炎反应等过程。

单个细胞转录组测序技术的发展与应用

单个细胞转录组测序技术的发展与应用

单个细胞转录组测序技术的发展与应用随着现代科技的不断发展,人们对于单个细胞的研究日益深入。

单个细胞转录组测序技术便是其中一项重要的技术手段。

本文将从单个细胞转录组测序技术的概念入手,探讨其发展历程及其在生命科学研究中的应用。

一、概念及发展历程单个细胞转录组测序技术就是利用高通量测序技术对单个细胞内的RNA进行测序,从而获得该单个细胞内全部基因的表达情况。

单个细胞转录组测序技术的发展可以追溯到20世纪末。

1993年,一项名为"single blastomere analysis"的研究首次利用PCR技术对小鼠早期胚胎单细胞进行了基因表达分析。

但当时的PCR技术仍存在很多缺陷,难以为单个细胞提供足够的RNA量进行分析。

2006年,一篇名为“Single cell expressed gene analysis with single cell protocol”发表于Nature Immunology的文章首次介绍了单个细胞分析的方法,并应用于对免疫系统内的单个细胞进行表达谱的分析。

2011年,Nature Methods上发表了一篇题为"Single-cell sequencing analysis characterizes common and cell-lineage-specific mutations in a muscle-invasive bladder cancer"的文章。

该研究首次使用NGS技术对单个细胞的基因组和转录组进行分析,并揭示了肌层浸润性膀胱癌的发生机制。

近年来,单个细胞转录组测序技术已逐渐成为单个细胞研究领域内的重要技术。

二、技术原理单个细胞转录组测序技术的原理与常规的RNA测序有些不同。

对于RNA测序而言,常规的测序器内部会将细胞内所有RNA片段并成一个大的RNA库。

而单个细胞转录组测序技术则需要在细胞内合成cDNA,并在后续步骤中将其放大到一定程度,然后进行测序。

转录组测序技术的研究和应用进展

转录组测序技术的研究和应用进展

转录组测序技术的研究和应用进展一、本文概述随着生命科学的飞速发展,转录组测序技术(RNA-Seq)已成为研究基因表达、转录调控、非编码RNA挖掘等领域的重要手段。

本文旨在全面概述转录组测序技术的原理、发展历程,以及其在生命科学研究中的应用进展。

我们将首先简要介绍转录组测序的基本概念和技术原理,然后重点综述近年来在样本制备、测序平台、数据分析等方面的技术革新,以及这些技术进步如何推动转录组测序在疾病诊断、药物研发、农业生物技术等领域的广泛应用。

我们将讨论当前面临的挑战和未来的发展趋势,以期为读者提供一个全面而深入的理解转录组测序技术的视角。

二、转录组测序技术的基本原理和类型转录组测序技术,也称为RNA测序(RNA-Seq),是一种基于下一代测序(Next-Generation Sequencing, NGS)技术的高通量分析方法,用于研究生物体在特定状态下的所有转录本的集合,即转录组。

该技术的核心原理是将RNA样本转化为适合测序的cDNA文库,然后通过高通量测序平台进行测序,最终获得海量的序列数据。

根据测序策略的不同,转录组测序技术主要分为两种类型:基于总RNA的测序和基于mRNA的测序。

基于总RNA的测序方法可以同时获取编码RNA和非编码RNA的信息,包括mRNA、rRNA、tRNA和miRNA 等。

而基于mRNA的测序则主要关注编码蛋白质的mRNA,通过去除rRNA 等非编码RNA,提高测序的深度和准确性。

根据建库方式的不同,转录组测序还可以分为有参考基因组和无参考基因组两种类型。

对于有参考基因组的生物,可以将测序得到的序列与参考基因组进行比对,分析基因的表达情况、变异情况等。

而对于无参考基因组的生物,则需要通过从头测序(de novo sequencing)的方式,构建该生物的转录组序列,再进行后续的分析。

随着技术的不断发展,转录组测序技术已经广泛应用于生命科学研究的各个领域,包括基因表达分析、基因结构分析、转录本变异分析、非编码RNA研究等。

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转录组测序技术的应用及发展综述摘要:转录组测序(RNA-Seq)作为一种新的高效、快捷的转录组研究手段正在改变着人们对转录组的认识。

RNA-Seq利用高通量测序技术对组织或细胞中所有RNA 反转录而成cDNA文库进行测序,通过统计相关读段(reads)数计算出不同RNA的表达量,发现新的转录本;如果有基因组参考序列,可以把转录本映射回基因组,确定转录本位置、剪切情况等更为全面的遗传信息,已广泛应用于生物学研究、医学研究、临床研究和药物研发等。

文章主要比较近年来转录组研究的几种方法和几种RNA-Seq的研究平台,着重介绍RNA-Seq的原理、用途、步骤和生物信息学分析,并就RNA-Seq技术面临的挑战和未来发展前景进行了讨论及在相关领域的应用等内容,为今后该技术的研究与应用提供参考。

关键词: RNA-Seq;原理应用;方法;挑战;发展前景Abstract:Transcriptome sequencing (RNA-Seq) is a kind of high efficiency, quick transcriptome research methods are changing our understanding of transcriptome. RNA-Seq to use high-throughput sequencing of tissues or cells of all RNA reverse transcription into cDNA library were sequenced, through statistical correlation read paragraph (reads) numbers were calculated from the expression of different RNA transcripts, find new; if the genome reference sequence, the transcripts mapped to genomic, determine the position of the transcription shear condition, more genetic information, has been widely used in biological research, medical research, clinical research and drug development. This paper compared several methods of platform transcriptome studies and several kinds of RNA-Seq in recent years, RNA-Seq focuses on the principle, purpose, steps and bioinformatics analysis, and discusses theRNA-Seq technology challenges and future development prospect and the application in related field and other content, provide the reference for the research and application of the technology future.Key word:RNA-Seq ;application; principle; method; challenge; development prospects前言:转录组是特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的集合。

转录组研究能够从整体水平研究基因功能以及基因结构,揭示特定生物学过程以及疾病发生过程中的分子机理。

转录组测序(RNA-Seq)是指利用第二代高通量测序技术进行cDNA测序,全面快速地获取某一物种特定器官或组织在某一状态下的几乎所有转录本。

随着后基因组时代的到来,转录组学、蛋白质组学、代谢组学等各种组学技术相继出现,其中转录组学是率先发展起来以及应用最广泛的技术[1]。

遗传学中心法则表明,遗传信息在精密的调控下通过信使RNA(mRNA)从DNA传递到蛋白质。

因此,mRNA被认为是DNA 与蛋白质之间生物信息传递的一个“桥梁”,而所有表达基因的身份以及其转录水平,综合起来被称作转录组(Transcriptome)[2]。

转录组是特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的总和,主要包括mRNA和非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)[2, 3]。

转录组研究是基因功能及结构研究的基础和出发点, 了解转录组是解读基因组功能元件和揭示细胞及组织中分子组成所必需的,并且对理解机体发育和疾病具有重要作用。

整个转录组分析的主要目标是:对所有的转录产物进行分类;确定基因的转录结构,如其起始位点,5′和3′末端,剪接模式和其他转录后修饰;并量化各转录本在发育过程中和不同条件下(如生理/病理)表达水平的变化[2,3]。

在过去的十几年里,杂交技术的发展,再加上以标签序列为基础的方法的应用,第一次使研究人员对这一领域有了深入的了解,但毋庸置疑,随着新一代测序(Next-generation sequencing,NGS)平台的市场化,RNA-Seq(RNA sequencing)技术的应用已经彻底改变了转录组学的思维方式。

RNA-Seq,即RNA 测序又称转录组测序,是最近发展起来的利用深度测序技术进行转录组分析的技术[3],该技术能够在单核苷酸水平对任意物种的整体转录活动进行检测,在分析转录本的结构和表达水平的同时,还能发现未知转录本和稀有转录本,精确地识别可变剪切位点以及cSNP(编码序列单核苷酸多态性),提供更为全面的转录组信息。

相对于传统的芯片杂交平台,RNA-Seq无需预先针对已知序列设计探针,即可对任意物种的整体转录活动进行检测,提供更精确的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的强大工具,已广泛应用于生物学研究、医学研究、临床研究和药物研发等。

本文在扼要介绍支持RNA-Seq的新一代测序平台的基础上,对RNA-Seq原理、特点以及到目前为止在研究真核生物转录特征方面的进展做一个较为全面的综述,并对其中有待进一步研究的问题进行了展望。

1、转录组测序基本原理及平台[4]随着后基因组时代的到来,转录组测序成为率先发展且应用相对广泛的技术[5]。

最早广泛应用测序技术为70 年代的Sanger 法,这也是完成人类基因组计划的基础,因其测序通量低、费时费力,科学家们一直在寻求通量更高、速度更快、价格更便宜、自动化程度更高的测序技术。

自2005 年以来,以Roche 公司的454 技术、Illumina 公司的Solexa 技术以及ABI 公司的SOLiD 技术为标志的高通量测序技术相继诞生[6]。

相较于传统方法,该技术主要特点是测序通量高、测序时间和成本显着下降,可以一次对几十万到几百万条DNA 分子序列测定,这使某物种全基因组和转录组的全貌细致分析成为可能,又称为深度测序,很多文献中称其为新一代测序技术,足见其划时代意义[7]。

利用深度测序技术进行对某物种转录组分析的技术即RNA 测序(RNA-Seq),该项技术能够在单核苷酸水平对任意生物种的整体转录进程检测,不仅可以分析转录本的结构和表达水平,还能够发现未知转录本和稀有转录本,准确地识别可变剪切位点以及cSNP(编码序列单核苷酸多态性),使得到的转录组信息更为全面,便于进一步注释分类[8]。

与基因芯片相比,RNA-Seq 无需预先设计探针即可对特定条件下任意物种生长发育阶段整体转录活动进行检测,提供更精确的数字化信号、更高的检测通量以及更广泛的检测范围,因而其成为目前深入研究转录组复杂变化活动的强大且颇具优越性的技术手段。

一般来说,上述所有的高通量测序技术都能进行转录组测序,但不同平台和机型的测序方法及效果差异决定了各种高通量测序仪具有不同的应用侧重(表1),这就要求在熟悉各种高通量测序仪内在技术特点的基础上进行选择应用;另一方面,也可尝试结合其他生物技术以获得更好的数据覆盖度和更为廉价的成本[9]。

表1 几种主要测序平台的比较[10]2、目前研究转录组的方法主要有(l)基于杂交技术,如CDNA芯片和寡聚核昔酸芯片;(2)基于测序技术,如早先基于Sange:测序的SAGE(SerialAnalysisofGeneExpression)和MpSS(Massivelypara-llelSignaturesequeneing)。

全长DNA文库和EST文库的测序分析。

现在对CDNA、EST等的测序工作已升级为第二代测序技术新一代测序技术较sange测序技术通量更高、运行时间更短、测序片段更长现在通常将基于第二代测序技术的转录组测序分析称为RNA-Seq。

、种主要的转录组研究方法的比较见表2,其中RNA一Seq具有以下优势:(l)通量高,运用第二代测序平台可得到几个到几百亿个碱基序列,可以达到覆盖整个基因组或转录组的要求;(2)灵敏度高,可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录本;(3)分辨率高,RNA一Seq的分辨率能达到单个碱基,准确度好,同时不存在传统微阵列杂交的荧光模拟信号带来的交叉反应和背景噪音问题;(4)不受限制性,可以对任意物种进行全转录组分析,无需预先设计特异性探针,能够直接对任何物种进行转录组分析。

同时能够检测未知基因,发现新的转录本,并准确地识别可变剪切位点及SNP、UTR区域[3,4]。

表3是转录组测序技术与其他转录组学技术的比较,通过比较可以看出该技术应用的范围。

3、RNA一Seq的主要用途[11]RNA一seq技术能够在单核昔酸水平对特定物种的整体转录活动进行检测,从而全面快速地获得该物种在某一状态下的几乎所有转录本信息。

由于转录组测序可以得到全部RNA转录本的丰度信息,加之准确度又高,使得它具有十分广泛的应用领域。

主要应用于:(l)检测新的转录本,包括未知转录本和稀有转录本;(2)基因转录水平研究,如基因表达量、不同样本间差异表达;(3)非编码区域功能研究,如microRNA、非编码长RNA (IncRNA)、RNA编辑;(4)转录本结构变异研究,如可变剪接、基因融合;(5)开发SNPs和SSR等。

表2 三种转录组研究方法的比较[10]表3 RNA-Seq与其他转录组学技术比较3、RNA一Seq的主要用途[11]RNA一seq技术能够在单核昔酸水平对特定物种的整体转录活动进行检测,从而全面快速地获得该物种在某一状态下的几乎所有转录本信息。

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