生物制品工艺学疫苗制品共102页
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《生物制品学》20131022课件.
葛兰素史克 默沙东 赛诺菲巴斯德 默沙东 默沙东 葛兰素史克 默沙东 葛兰素史克 赛诺菲巴斯德 辉瑞
2
2012年最畅销的15种疫苗
疫苗名称 疾病/病原体 肺炎 宫颈癌 白百破+脊灰+ 乙流 乙肝 流感 2012年销售额 37.18 亿美元 19.00 亿美元 15.22 亿美元 2011年销售额 36.57 亿美元 $14.45 亿美元 14.96 亿美元 年均增长率 1.70% 31.50% 1.70% 开发商 辉瑞 默沙东 赛诺菲巴斯德
– DNA疫苗 – Adeno based疫苗
疫苗 – 公共卫生的最有效手段
• 近年来的重大传染性疾病/明显社会影响
– SARS/非典 – 2003 – H5N1禽流感 – 1998-2012- on-going – H1N1新甲流/猪流感 – 2009 – EV71手足口病 – 2008-2012 -on-going – （均为病毒性传染病）
16/18
8
How Do We Show Cancer Efficacy?
Definitive Efficacy
0 to 1 Year
0 to 5 Years Continuing Infection CIN 2/3
Up to 20 Years Cervical Cancer
11.83 亿美元 11.52 亿美元
10.53 亿美元 10.77 亿美元
12.30% 7.00%
葛兰素史克 赛诺菲巴斯德
肝炎 水痘 脑膜炎 带状疱疹 轮状病毒 链球菌 肺炎 轮状病毒 白百破 肺炎
9.86 亿美元 8.46 亿美元 7.35 亿美元 6.51 亿美元 6.48 亿美元 5.87 亿美元 5.80 亿美元 5.49 亿美元 4.69亿美元 3.99 亿美元
生物制品工艺学---疫苗制品
第一个重组疫苗——重组乙型肝炎疫苗获准生产
推荐使用二剂型麻疹疫苗 第一个多糖结合疫苗——B型流感嗜血杆菌疫苗获准生产 西半球报道最后一例野毒株脊髓灰质炎病例 乙型肝炎免疫纳入全球计划免疫 美国消灭脊髓灰质炎得到证实 水痘疫苗获准生产 用于婴儿的无细胞型百日咳疫苗获准生产 推荐进行扫荡式脊髓灰质炎免疫 推荐单一使用脊髓灰质炎灭活疫苗 用于婴儿的结合肺炎球菌疫苗获准生产
Salmon和Smith、法国Chamberlai和Roux的伤寒、霍
乱和鼠疫），以及疫苗学的一些基础概念，如 Metchnikoff的的细胞免疫（1884年），Ehrlich的受 体理论（1897年）及毒素-抗毒素作用。
进入20世纪前30年，疫苗学在三个方面取得
了重大进展：
首先，法国科学家Calmette和Guerin在1906年从牛 体分离到1株结核菌，经过13年在牛胆汁中传递230代， 获得1株减毒株，制成疫苗，于1927年上市，即所谓 卡介苗（BCG）。
1991年
1994年 1995年 1996年 1997年 1999年 2000年
引自：CDC：Epidemiology and Prevention of Vaccine-preventable Disease. 6 Edition，2000
17965.14英国乡村医生爱德华· 琴纳（Edward Jenner） 进行了人类历史上的第一次疫苗接种试验。Jenner从一位 感染了牛痘的年轻挤奶农妇的手上挑取了痘苗接种到一名 8岁男孩的手臂上。经过几个月的严密观察，发现小男孩 获得了免疫保护，一直没有感染天花。 1798年9月，Jenner发表了接种“牛痘”预防天花的论
本疫苗免疫接种后，刺激机 兰州所、长春所、 体产生抗乙型脑炎病毒的免 天坛生物、上海所 疫力，用于预防乙型脑炎。
疫苗生产技术简介ppt课件
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•（一）鸡胚选择
受精卵应来自SPF鸡群，至少源于未用 抗生素药物的非免疫鸡群，以免受母源 抗体的干扰和残留抗生素的影响。
从受精卵入孵开始至培养全过程都 应保持无菌，要求一定的温度和湿度， 且需不断翻动，然后选择。选择一定日 龄、发育正常的胚用于接毒培养。
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（二）种毒与毒种继代
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病毒性禽胚培养疫苗制造
鸡胚选择
• 痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和疱疹病毒等 一类生物制品，目前仍然利用禽胚特别是鸡胚制 备，如鸡新城疫苗、禽流感疫苗、犬瘟热鸡胚弱 毒疫苗等。 • 禽胚疫苗生产的原材料来源方便、质量比较 容易控制，制造程序简单，不需要过高的设备条 件，生产的疫苗质量可靠。
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（三）接毒与收获
•1.接毒
• 鸡胚接毒涉及接毒途径和接毒量两方面。根据不同的病毒与不同疫
苗生产程序，选择最佳接种途径和接种量。
• 接种途径：绒毛尿囊膜接种 11~12日龄胚
•
尿囊腔接种
9~11日龄胚
•
羊膜腔接种
10~12日龄胚
•
卵黄囊接种
5~8日龄胚
• 如鸡新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接种10-3稀释毒种
• 甲醛灭活剂的使用：甲醛能使病毒灭活，但仍保持其抗 原性，因此普遍用来制备灭活病毒疫苗，但要控制含量。
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Thank you !
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目前适应于鸡胚的种毒多系弱毒，包括自 然弱毒与人工培育的弱毒两类。各种制苗用的 种毒多数由国家菌毒种保藏部门或指定单位保 存，保存的种毒多为冻干毒。
冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通 常继代3代以上，经检定符合标准后方可作力生 产疫苗的毒种，毒种检定内容包括无菌检验、 毒价测定和其他项目的检定等。
生物制品目录
已实施国家批签发的生物制品品种目录一、疫苗制品目录细菌类疫苗：1.伤寒Vi多糖疫苗2.口服重组B亚单位/菌体霍乱菌苗（肠溶胶囊）3.钩端螺旋体疫苗4.皮上划痕用鼠疫活疫苗5.皮上划痕人用炭疽活疫苗6.皮上划痕人用布氏菌活疫苗7.皮内注射用卡介苗型流感嗜血杆菌结合疫苗9.吸附百白破联合疫苗10.吸附无细胞百白破联合疫苗11.吸附破伤风疫苗12.吸附白喉疫苗13.吸附白喉疫苗（成人及青少年用）14.吸附白喉破伤风联合疫苗（成人及青少年用）15.吸附白喉破伤风联合疫苗群C群脑膜炎球菌多糖疫苗群脑膜炎球菌多糖疫苗价肺炎球菌多糖疫苗病毒类疫苗：1.森林脑炎灭活疫苗2.黄热减毒活疫苗3.乙型脑炎灭活疫苗4.乙型脑炎减毒活疫苗5.Ⅰ型肾综合征出血热灭活疫苗6.Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗7.双价肾综合征出血热灭活疫苗8.人用狂犬病疫苗（Vero细胞）9.冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）10.人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）11.重组乙型肝炎疫苗（酵母）12.重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）13.冻干甲型肝炎减毒活疫苗14.甲型肝炎减毒活疫苗15.甲型肝炎灭活疫苗16.甲、乙型肝炎联合疫苗17.口服轮状病毒活疫苗18.麻疹减毒活疫苗19.脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸（人二倍体细胞）20.口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（猴肾细胞）21.脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸（猴肾细胞）22.风疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）23.风疹减毒活疫苗（兔肾细胞）24.腮腺炎减毒活疫苗25.冻干水痘减毒活疫苗26.麻疹腮腺炎联合减毒活疫苗27.麻疹风疹联合减毒活疫苗28.麻疹-腮腺炎-风疹三联减毒活疫苗29.流感全病毒灭活疫苗30.流感病毒裂解疫苗31.流感病毒亚单位疫苗二、血液制品目录1.人血白蛋白2.冻干人血白蛋白3.静注人免疫球蛋白（pH4）4.冻干静注人免疫球蛋白（pH4）三、体外诊断试剂目录1.梅毒快速血浆反应素诊断试剂2.梅毒甲苯胺红不加热血清诊断试剂3.梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）4.乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）5.丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）6.人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）7.抗A、抗B血型定型试剂（人血清）8.抗A、抗B血型定型试剂（马血清）9.抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）。
生物制品生产工艺介绍ppt课件
7
❖生产工艺介绍
尽管在过去的 20 年里 , 开发出了许多新疫苗 , 但是 , 仍然有许多的疾病尚没有疫苗预防 ,即便是已经开发出 的新疫苗 ,其能够提供的保护仅限于个别血清型的感染 。
8
❖生产工艺介绍
安全性
遗传稳定性
菌毒种
免疫原性
9
其他
❖生产工艺介绍
1、细菌性灭活疫苗制造 菌种的选择 菌液培养
和表达的技术。如下页图。
17
❖生产工艺介绍 基因工程基本过程
18
❖生产工艺介绍
四、其他用生物制品产生一般工艺 由有关生物材料或特定方法制成,不属于上述的其他生物制 剂,用于治疗或预防疾病。如治疗用Ａ型肉毒素制剂、微生
态制剂和卡介菌多糖、核酸机构 ❖技术人员 ❖设备
毒力强、免 疫原性优良
配苗
应充分混匀，及 时塞塞、贴签或 印字
灭活剂、灭 活条件
灭活
浓缩
氧化铝胶吸附沉淀 法、离心沉降法、 羧甲基纤维沉淀法
10
❖生产工艺介绍
2、细菌性活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养
吸附剂吸附沉降法、 离心沉降法
浓缩
加入保护剂，分
装量必须准确
配苗
细菌性活疫苗多指弱毒菌苗，尽管种类甚多，但基本制造 程序相同。
一、定义 生物制品（biological product）是应用普通的或以基因
工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获 得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生 物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
二、分类 按用途分
1.预防用生物制品 2.治疗用生物制品 3.诊断用生物制品 4.其他用生物制品
13
❖生产工艺介绍
❖生产工艺介绍
尽管在过去的 20 年里 , 开发出了许多新疫苗 , 但是 , 仍然有许多的疾病尚没有疫苗预防 ,即便是已经开发出 的新疫苗 ,其能够提供的保护仅限于个别血清型的感染 。
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❖生产工艺介绍
安全性
遗传稳定性
菌毒种
免疫原性
9
其他
❖生产工艺介绍
1、细菌性灭活疫苗制造 菌种的选择 菌液培养
和表达的技术。如下页图。
17
❖生产工艺介绍 基因工程基本过程
18
❖生产工艺介绍
四、其他用生物制品产生一般工艺 由有关生物材料或特定方法制成,不属于上述的其他生物制 剂,用于治疗或预防疾病。如治疗用Ａ型肉毒素制剂、微生
态制剂和卡介菌多糖、核酸机构 ❖技术人员 ❖设备
毒力强、免 疫原性优良
配苗
应充分混匀，及 时塞塞、贴签或 印字
灭活剂、灭 活条件
灭活
浓缩
氧化铝胶吸附沉淀 法、离心沉降法、 羧甲基纤维沉淀法
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❖生产工艺介绍
2、细菌性活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养
吸附剂吸附沉降法、 离心沉降法
浓缩
加入保护剂，分
装量必须准确
配苗
细菌性活疫苗多指弱毒菌苗，尽管种类甚多，但基本制造 程序相同。
一、定义 生物制品（biological product）是应用普通的或以基因
工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获 得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生 物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
二、分类 按用途分
1.预防用生物制品 2.治疗用生物制品 3.诊断用生物制品 4.其他用生物制品
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❖生产工艺介绍
第九章生物制品-106页PPT精选文档
是用编码病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建的重 组体直接免疫机体，转染宿主细胞，使其表达保护性抗原， 从而诱导机体产生特异性免疫的疫苗。 优点：体内可持续表达，免疫效果好，维持时间长。 缺点：其机制和安全性尚不完全清楚，一些问题有待解决。
重组抗原疫苗(recombinant antigen vaccine) 是利用DNA重组技术制备的只含保护性抗原的纯化疫苗。
体，再进行纯化处理使之完全失去感染性， 保留病原体的免疫原性。 如甲肝灭活疫苗、乙脑灭活疫苗、脊髓灰 质炎灭活疫苗等。
脊髓灰质炎灭活疫苗
1953年由美国Salk制成并在美国欧洲国家应用。 能产生高的血清中和抗体,但防止野毒株病人发生 的效果不如活疫苗。
20世纪80年代后制成增效脊髓灰质炎灭活疫苗， 接种3个剂量后中和抗体达99-100%。
分类 1）死疫苗（death vaccine）:选用免疫原性强的微生物标准株 经大量培养后，用物理或化学方法将其杀死或灭活而制成的 预防制剂。如霍乱、百日咳、伤寒、钩端螺旋体疫苗。
优点：主要诱导特异性抗体产生，安全 缺点：不能繁殖，需多次刺激，注射局部和全身反应严重
2）减毒活疫苗（live-attenuated Vaccine） 用人工定向变异或从自然界筛选得到的毒力高度减弱或
易保存，较稳定，有效期一 不易保存，4度数周失效
年
较差，维持数月至一年
较好，维持1-5年或更长
3）类毒素（Toxid） 细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒性减弱而保留
其免疫原性。 白百破：白喉类毒素+ 百日咳杆菌死疫苗+破伤风类毒素
4）新型疫苗 （1）亚单位疫苗（Subunit Vaccine）
是去除病原体中与激发保护性免疫无关的甚至有害的成 分，保留有效免疫原成分制作的疫苗。 优点：免疫效果高， 不良反应少
重组抗原疫苗(recombinant antigen vaccine) 是利用DNA重组技术制备的只含保护性抗原的纯化疫苗。
体，再进行纯化处理使之完全失去感染性， 保留病原体的免疫原性。 如甲肝灭活疫苗、乙脑灭活疫苗、脊髓灰 质炎灭活疫苗等。
脊髓灰质炎灭活疫苗
1953年由美国Salk制成并在美国欧洲国家应用。 能产生高的血清中和抗体,但防止野毒株病人发生 的效果不如活疫苗。
20世纪80年代后制成增效脊髓灰质炎灭活疫苗， 接种3个剂量后中和抗体达99-100%。
分类 1）死疫苗（death vaccine）:选用免疫原性强的微生物标准株 经大量培养后，用物理或化学方法将其杀死或灭活而制成的 预防制剂。如霍乱、百日咳、伤寒、钩端螺旋体疫苗。
优点：主要诱导特异性抗体产生，安全 缺点：不能繁殖，需多次刺激，注射局部和全身反应严重
2）减毒活疫苗（live-attenuated Vaccine） 用人工定向变异或从自然界筛选得到的毒力高度减弱或
易保存，较稳定，有效期一 不易保存，4度数周失效
年
较差，维持数月至一年
较好，维持1-5年或更长
3）类毒素（Toxid） 细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒性减弱而保留
其免疫原性。 白百破：白喉类毒素+ 百日咳杆菌死疫苗+破伤风类毒素
4）新型疫苗 （1）亚单位疫苗（Subunit Vaccine）
是去除病原体中与激发保护性免疫无关的甚至有害的成 分，保留有效免疫原成分制作的疫苗。 优点：免疫效果高， 不良反应少
生物制品制造工艺
第十五章生物制品制造工艺第一节生物制品的基本概念生物制品biologicalproduct是应用普通的或以基因工程细胞工程蛋白质工程发酵工程等生物技术获得的微生物细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备用于人类疾病预防治疗和诊断的药品
第十五章 生物制品制造工艺
第一节 生物制品的基本概念
生物制品（biological product）是应用普通的或 以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生 物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织 和液体等生物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和 诊断的药品。
3、残余毒力和毒性物质的检查
（1）残余毒力试验 用作活菌苗及活疫苗检定。
（2）无毒性试验（一般安全试验） 。
（3）毒性试验 死菌苗、经杀菌、灭活后，其本身可 能仍具有毒性。
（4）防腐剂试验 除用化学方法作定量测定外，还应 做动物试验。
4、过敏性物质的检查
（1）过敏性试验（变态反应试验） 一般采用豚鼠试 验。
（2）体内诊断制品 由变态反应原或有关抗原材料制 成的免疫诊断试剂，用于皮内接种，以判断个体对病 原的易感性或免疫状态。用于体内免疫诊断。
4、其他制品
由有关生物材料或特定方法制成，不属于上述几 类的其他生物制剂，用于治疗或预防疾病。如治疗用 Λ型肉毒素制剂、微生态制剂、核酸制剂等。
二、生物制品的质量要求
不同疫苗的制备方法各异，图15－1为一般疫苗的 制备工艺流程。
(一)、毒种的选择和减毒
用于制备疫苗的毒株，一般需具备以下几个条件， 才能获得安全有效的疫苗。
（1）毒种必须持有特定的抗原性，能使机体诱发特 定的免疫力，足以阻止有关的病原体的入侵或防止机 体发生相应的疾病。
（2）毒种应有典型的形态和感染特定组织的特性， 并在传代的过程中，能长期保持生物学特性。
第十五章 生物制品制造工艺
第一节 生物制品的基本概念
生物制品（biological product）是应用普通的或 以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生 物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织 和液体等生物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和 诊断的药品。
3、残余毒力和毒性物质的检查
（1）残余毒力试验 用作活菌苗及活疫苗检定。
（2）无毒性试验（一般安全试验） 。
（3）毒性试验 死菌苗、经杀菌、灭活后，其本身可 能仍具有毒性。
（4）防腐剂试验 除用化学方法作定量测定外，还应 做动物试验。
4、过敏性物质的检查
（1）过敏性试验（变态反应试验） 一般采用豚鼠试 验。
（2）体内诊断制品 由变态反应原或有关抗原材料制 成的免疫诊断试剂，用于皮内接种，以判断个体对病 原的易感性或免疫状态。用于体内免疫诊断。
4、其他制品
由有关生物材料或特定方法制成，不属于上述几 类的其他生物制剂，用于治疗或预防疾病。如治疗用 Λ型肉毒素制剂、微生态制剂、核酸制剂等。
二、生物制品的质量要求
不同疫苗的制备方法各异，图15－1为一般疫苗的 制备工艺流程。
(一)、毒种的选择和减毒
用于制备疫苗的毒株，一般需具备以下几个条件， 才能获得安全有效的疫苗。
（1）毒种必须持有特定的抗原性，能使机体诱发特 定的免疫力，足以阻止有关的病原体的入侵或防止机 体发生相应的疾病。
（2）毒种应有典型的形态和感染特定组织的特性， 并在传代的过程中，能长期保持生物学特性。
第五章 生物制品制造工艺2
琥珀酸脱氢酶
MTT
formazan
干扰素类蛋白：可用细胞毒抑制试验来测定干扰 素的体外活性。
五、重要的重组DNA药物
（一）利用重组大肠杆菌生产医用蛋白或多肽
代表产品：重组人胰岛素、重组人生长激素、重组人干扰素、 重组人白细胞介素、重组人集落刺激因子、重组抗体及其片 断等。
• 效率高、产量大
• 周期短、成本低
链霉菌：分泌能力强；不致病，安全；有糖 基化能力。
真核
酵母：研究基因表达调控最有效的单细胞真核 微生物；基因组小，仅为大肠杆菌4倍；传代 时间短；无毒；有分泌功能和修饰功能；已用 于干扰素、乙肝表面抗原等重组DNA药物的生 产。
丝状真菌：有很强的蛋白质分泌能力，能正确 加工，糖基化方式与高等生物相似，有成熟发 酵和后处理工艺
产品
首次克隆 表达时间
人生长激素释放抑制素（SRM) 1977
人胰岛素
1978
人生长激素（HGH) 人α干扰素（ α－IFN)
1979 1980
乙肝疫苗
1983
人白细胞介素－2
1984
人促红细胞生成素
人粒细胞集落刺激因子
人组织纤溶酶原激活剂 （t-PA)
国家
日本 美国 美国 美国 美国 日本
用途
首次进入 市场时间 国家/地区
采用包涵体型战略表达重组蛋白，应先离心回收包 涵体；
采用融合型战略表达重组蛋白，一般是胞内可溶性 的，拟首先选用亲和层析进行纯化
表达在细胞膜和细胞壁之间的间隙中的蛋白质，应 用低浓度的溶菌酶处理，然后再用渗透压休克法释放 重组蛋白。
◎针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型
等电点处于极端区域（大于8或小于5）的重组蛋白应首选 离子交换法进行分离，这样很容易除去几乎所有的杂蛋白；
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45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
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生物制品工艺学疫苗制品
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
Thank you
生物制品工艺学疫苗制品
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒