安捷伦液相色谱柱键合相说明
安捷伦1260高效液相操作规程
安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。
如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项：①避免使用高粘度的溶剂作为流动相；②所选用的流动相一定要与样品相溶；③各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
b.反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
2.准备工作①用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；②流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。
注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。
安捷伦高效液相色谱仪操作规程
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）翻开计算机，登陆windows操作系统。
（2）翻开主机各模块电源〔从上至下〕，待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机〞图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制〞画面。
（3）进展仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
（4）编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项〔四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认〕，完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。
（5）排气。
旋开排气阀〔逆时针〕，右单击“四元泵〞图标出现快捷键，点击“方法〞设置泵流速，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。
一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。
关泵，关闭排气阀〔顺时针〕。
〔注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀〕。
（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
（7）换流动相，待柱前压力根本稳定后，翻开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品〞小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。
（2）编辑好样品信息前方可进样。
三、数据处理（1）翻开桌面“仪器1脱机〞，单击“数据分析〞进入数据分析画面。
（2）从“文件〞菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。
（3）谱图优化。
从“图形〞菜单中选择“信号选项〞从范围中选择“自动量程〞及适宜的显示时间，或选择“自定义量程〞调整，反复进展，直到图比例适宜为止。
（4）积分。
从“积分〞中选择“自动积分〞，假设积分结果不理想，从菜单中选“积分事件〞，更改数据为适宜的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高〞，从“积分〞中选择积分选项，那么数据被积分，如积分结果不理想那么修改相应的积分参数直到满意为止。
安捷伦高效液相操作方法
安捷伦高效液相操作方法
安捷伦高效液相操作方法（Agilent High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种用于分离、定量和分析化合物的常见技术。
下面是一般的HPLC操作方法：
1. 样品准备：将待测试的样品准备成溶液状。
可以用溶剂、酸或碱来溶解固体样品，并用适当的容器过滤以去除杂质。
2. 选择合适的柱：根据待测样品的性质和分离要求选择合适的色谱柱。
常见的柱包括反相柱、阳离子交换柱、阴离子交换柱等。
3. 设置流动相：准备好适合待测试样品的流动相。
流动相一般由溶剂和缓冲液组成，根据需要可以调整溶剂比例和缓冲液pH值。
4. 建立方法：设置进样样品量、流速、柱温等参数。
根据待测样品的特性，选择合适的检测波长进行检测。
5. 运行实验：将样品注入进样器，并设置流动相的流速。
开始运行实验，记录数据。
6. 数据分析：根据实验结果进行数据分析和解释。
可以通过峰高、峰面积、保留时间等指标对样品进行定量分析。
7. 清洗和维护：在实验结束后，定期清洗HPLC系统的各个部件，以保持仪器的良好运行状态。
可以用纯水、有机溶剂等进行清洗。
以上是一般的HPLC操作方法，具体的操作步骤和条件可能因不同的仪器和样品而有所不同。
在进行HPLC实验时，应根据实际情况进行调整和优化，确保准确的分离和分析结果。
安捷伦高效液相色谱法
(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而 高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。 总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱 与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改 进，因此得到迅猛的发展。目前高效液相色谱 法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重 大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨 基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药 物等物质的分离和分析。 高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作 严格，这是它的主要缺点。
3．流动相
在液液色谱中为了避免固定液的流失。对 流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固 定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越 显著越好。根据所使用的流动相和固定相的极 性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配 色谱。如果采用流动相的极性小于固定相的极 性，称为正相分配色谱，它适用于极性化合物 的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性 大的后流出。如果采用流动相的极性大于固定 相的极性，称为反相分配色谱。它适用于非极 性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好 相反。
（l）紫外检测器 （2）荧光检测器 (3) 示差折光率检测器
几乎所有物质都有各自不同的折射率，因此差示折 光检测器是一种通用型检测器。灵敏度可达10-7g· -3。主 cm 要缺点是对温度变化敏感，并且不能用于梯度淋洗。
（4）电导检测器 (5) 附属系统
它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集 以及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置是高压液相色谱 仪中尤为重要的附属装置 .
柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料 （＜20μm）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆， 然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱 内，经冲洗后，即可备用。
4．检测系统
在液相色谱中，有两种基本类型的检 测器。一类是溶质性检测器，它仅对被分 离组分的物理或化学特性有响应，属于这 类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器 等。另一类是总体检测器，它对试样和洗 脱液总的物理或化学性质有响应，属于这 类检测器的有示差折光，电导检测器等。 现将常用的检测器介绍如下:
色谱柱填料键合-概述说明以及解释
色谱柱填料键合-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容应该简要介绍色谱柱填料键合这个主题，为读者提供一个整体背景，并引起读者的兴趣。
以下是可能的概述内容：概述：在现代色谱分析中，色谱柱是至关重要的工具之一。
而色谱柱的填料则是决定其分离性能和分析效果的关键因素之一。
填料的键合技术是对填料表面进行高效化学处理的过程，旨在提高填料的稳定性、选择性和分析能力。
正因为填料的键合技术对色谱柱具有如此重要的影响，研究人员们不断探索着新的填料键合方法和应用领域。
本文将深入探讨色谱柱填料键合的相关内容。
首先，我们将介绍色谱柱填料的概念、作用和重要性。
其次，我们将对目前常用的填料分类和特点进行详细讨论。
在结论部分，我们将重点探讨填料键合对色谱柱性能的影响以及填料键合技术的发展和应用前景。
通过本篇长文的阅读，读者将对色谱柱填料键合有更深入的了解，并能够认识到其在色谱分析中的重要性和潜在应用价值。
文章结构部分的内容如下所示：1.2 文章结构本文共分为引言、正文和结论三个部分。
下面将对各个部分的内容进行简要介绍。
引言部分主要概述了本篇文章的研究背景和意义。
首先介绍了色谱柱填料键合的重要性和应用领域，以引起读者的兴趣和注意。
然后对文章的整体结构和主要内容进行了概述，包括正文部分将详细介绍色谱柱填料的概念、分类和特点，以及填料键合对色谱柱性能的影响。
最后提出文章的目的，即通过深入研究填料键合技术的发展和应用前景，为相关领域的研究和应用提供参考。
正文部分将详细介绍色谱柱填料的概念和作用，包括填料的定义、功能和基本原理等。
然后对色谱柱填料的分类进行了详细介绍，包括常见的包括液相色谱柱、气相色谱柱和固相色谱柱等。
针对不同类型的色谱柱填料，对其特点和应用进行了分析和总结，为读者提供了详细的了解和参考。
结论部分主要总结了填料键合对色谱柱性能的影响。
首先对填料键合技术的原理和方法进行了概述，然后分析了填料键合对色谱柱分离效率、分辨率和稳定性等性能的影响。
安捷伦高效液相色谱知识收藏
Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。
2、打开 1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow：5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purge valve。
11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump 编辑画面，设Flow：1.0ml/min。
12、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积。
单击Ok。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：●从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。
2、方法信息：●在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。
安捷伦液相色谱柱选择指南
安捷伦液相色谱柱选择指南000什么是色谱柱1.简介英文名chromatographiccolumn装填有固定相用以分离混合组分的柱管。
多为金属或玻璃制作。
有直管形、盘管形、U形管等形状。
色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。
液相色谱通常均采用填充柱。
色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。
色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。
对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。
柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。
即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。
这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。
在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。
2.色谱柱的构造色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。
柱管多用不锈钢制成，压力不高于70kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。
为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。
也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。
还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。
色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20µm(5~10µm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。
安捷伦液相色谱柱键合相说明Word版
80
L1
Agilent TC-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
130
L1
Agilent TC-C18 (2)
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
170
L1
Agilent HC-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
300
L1
Zorbax Sil
球形全多孔硅胶颗粒
5
70
L3
Zorbax Rx-Sil
球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5
80
L3
Lichrosorb Sil
球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L3
Zorbax EclipsePlus-C8
双封端的辛烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.
L1
Agilent HC-C18 (2)
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
170
L1
LiChrosphere RP-C18
十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L1
LiChrosphere RP-C18 封端
封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L1
苯基键合且封端的球形全多孔硅胶颗粒
5
70
L11
SampliQ Si-SAX (固相萃取)
季胺盐键合的阴离子交换硅胶填料，30~50 um粒径
/
/
L12
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)
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80
L7
Zorbax C8
辛烷基硅烷键合相的封端的球形全多孔硅胶颗粒
5, 7
70
L7
Zorbax Poroshell 300SB-C18
侧基有立体保护基团的辛烷基硅烷化学键合相的球形薄壳型硅胶颗粒
5
300
L7
Zorbax Poroshell 300Extend-C18
双齿键合的辛烷基硅烷化学键合相的球形薄壳型硅胶颗粒
5
300
L7
Zorbax NH2
氨丙基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5，7
70
L8
LiChrosphere NH2
氨丙基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
100
L8
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
Zorbax SCX
芳香族磺酸基团键合的球形全多孔硅胶颗粒
3.5, 5
300
L9
Zorbax XDB-CN
70
L1
Zorbax ODS-封端
单封端的十八烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5,7
70
L1
Zorbax Rx-C18
十八烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
3.5, 5, 7
80
L1
Zorbax SB-C18
侧基有立体保护基团的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
3.5，5
300
L56
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
Zorbax Poroshell 300SB-C3
丙基硅烷键合且
L56
Ultron ES-OVM
手性识别蛋白质(卵类粘蛋白)化学键合到硅胶颗粒
5，10
120
L57
5
70
L14
Lichrospher Diol
二羟丙基键合的球形全多孔硅胶颗粒
5
100
L20
PL-Aquagel-OH
能够按分子量大小分离水溶性聚合物的聚甲基丙烯酸酯固定相
8
/
L25
SampliQ Sil (固相萃取)
30~50 um的多孔硅胶颗粒
/
/
L27
GF-250
通过分子大小用于分离蛋白的氧化锆稳定的球形硅胶颗粒
安捷伦液相色谱柱键合相说明表
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
Zorbax EclipsePlus-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5
95
L1
Zorbax Eclipse XDB-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
300
L1
Zorbax Sil
球形全多孔硅胶颗粒
5
70
L3
Zorbax Rx-Sil
球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5
80
L3
Lichrosorb Sil
球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L3
Zorbax EclipsePlus-C8
双封端的辛烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5
95
L7
Zorbax Eclipse XDB-C8
双封端的辛烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
80
L7
Agilent HC-C8
双封端的辛烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
130
L7
LiChrosphere RP-C8
辛烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L7
色谱柱名称
80, 300
L1
Zorbax Extend-C18
双齿键合的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
80，300
L1
Zorbax Bonus-RP
嵌入酰胺基团的十八烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
80
L1
Zorbax SB-Aq
侧基有立体保护基团的极性增强的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
苯基己基键合且双封端的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5
95
L11
ZorbaxEclipse XDB 苯基柱
苯基键合且双封端的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
80
L11
ZorbaxSB 苯基柱
苯基键合且侧基带立体保护基团的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
80
L11
Zorbax苯基柱
5
130
L1
Agilent HC-C18 (2)
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
170
L1
LiChrosphere RP-C18
十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L1
LiChrosphere RP-C18 封端
封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L1
氰基键合的双封端球形全多孔硅胶颗粒
3.5, 5
80
L10
Zorbax CN
氰基键合的球形全多孔硅胶颗粒
5
70
L10
Lichrospher CN
氰基键合的球形全多孔硅胶颗粒
5,10
100
L10
Zorbax SB-CN
氰基键合且侧基有立体保护基团的球形全多孔硅胶颗粒
1.8,3.5,5,7
80
L10
Zorbax EclipsePlus苯基己基柱
LiChrosorb RP-C18
键合十八烷基硅烷化学键的不规则多孔硅胶颗粒
5,10
100
L1
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
Eclipse AAA
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
3.5, 5
80
L1
Zorbax ODS
十八烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5,7
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
LiChrosorb RP-C8
键合辛烷基硅烷的不规则多孔硅胶颗粒
5,10
100
L7
Zorbax SB-C8
侧基有立体保护基团的辛烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
80
L7
Zorbax Rx-C8
辛烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
80
L1
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
Zorbax Poroshell 300SB-C18
侧基有立体保护基团的十八烷基硅烷化学键合相的球形薄壳型硅胶颗粒
5
300
L1
Zorbax Poroshell 300Extend-C18
双齿键合的十八烷基硅烷化学键合相的球形薄壳型硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7
80
L1
Agilent TC-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
130
L1
Agilent TC-C18 (2)
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
170
L1
Agilent HC-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
苯基键合且封端的球形全多孔硅胶颗粒
5
70
L11
SampliQ Si-SAX(固相萃取)
季胺盐键合的阴离子交换硅胶填料，30~50 um粒径
/
/
L12
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
Zorbax TMS
三甲基硅烷键合且封端的球形全多孔硅胶颗粒
5
70
L13
Zorbax SAX
季胺盐键合的球形全多孔硅胶颗粒
4
150
L33, L33
GF-450
通过分子大小用于分离蛋白的氧化锆稳定的球形硅胶颗粒
6
300
L35
Chiradex
β-环糊精键合到多孔硅胶
5
100
L45
Zorbax SB-C3
丙基硅烷键合且侧基带保护基团的球形全多孔硅胶
5
80
L56
Zorbax 300SB-C3
丙基硅烷键合且侧基带保护基团的球形全多孔硅胶