植物体内硝态氮含量的测定教学总结
植物中硝态氮的测定方法
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
实验12 植物体内硝态氮含量的测定
实验12 植物体内硝态氮含量的测定植物对氮的吸收与利用，对于其生长发育和产量形成具有重要的影响。
氮素如果以亚硝酸盐或硝酸盐的形式被植物吸收，则称为植物体内的硝态氮(N-NO3-)含量。
在植物体内量测硝态氮含量，不仅可以为揭示植物氮素代谢的特点和生理机制提供数据，还可以指导植物耐受性研究和农业生产。
1 实验原理硝态氮是植物生长发育和产量形成的重要因素，在不同发育阶段的植物中，其含量也相应发生变化。
硝态氮含量可采用摄谱光度法和电化学法测定，其中电化学法的准确性更高且应用范围更广。
本实验是利用电化学法，根据硝酸与还原剂还原成亚硝酸或氨态氮时的电离电流大小的差异，测定植物体内的硝态氮含量。
2 实验步骤2.1 样品处理取适量新鲜样品，如茄子、番茄等，去皮、去籽并洗净。
将样品碾磨成泥状，加入特定的醋酸钾(KCH3COO)提取液(醋酸钾10 g/L)，摇匀，封口密封24 h在4℃下提取。
离心后，取上清，用玛瑙瓶收集。
将所需植物红单色隐花苣、矮生豌豆、楸树等的种子按5 g每袋加入15 mL的海绵培养体，在恒温箱中翻转培养6 d至10 d。
2.3 制备电极制备硝酸电极(NH4NO3-SCE单接)和参比电极，使用前需打磨至光亮。
取同样量的植物提取液和硝酸标准溶液，加入还原剂及缘草酸进行反应。
反应完毕后，测量1 min内的电流，计算硝态氮含量。
2.5 数据处理及统计按照硝态氮含量公式计算并汇总数据，进行ANOVA方差分析及t检验。
3 注意事项3.1 样品应尽量新鲜，提取液操作要快，以避免样品中硝态氮被还原。
3.2 试剂应准确、无杂质、无缺损，若出现异常，应立即更换。
3.3 电极应保持干燥、光洁，并调整标定。
3.4 电化学池应密封，避免气泡干扰或溢液现象。
4 结果分析实验结果如下表所示：在统计学分析中，各组数据的p值均小于0.05，表明差异极显著，比较表明楸树叶片硝态氮含量最高，其次是红单色隐花苣和矮生豌豆，而茄子和番茄中硝态氮含量最低。
植物体内硝态氮含量的测定
植物体内硝态氮含量的测定【实验目的】伤流是植物根系主动吸水的证明，不同植物或同一种植物在不同季节的伤流强度均不同，伤流强度反应根系生理活动强弱和根系又吸收面积大小。
伤流除含有大量水分外，还含有各种无机盐及根部合成有机物包括植物激素。
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
【原理】硝态氮与硝酸试粉作用，生成粉红色的偶氮化合物，其颜色深浅与硝态氮的浓度成正相关，将样品显示的颜色与标准比色阶进行比较，可快速求得硝态氮的浓度。
硝酸试粉主要是由锌粉、柠檬酸、ɑ-萘胺、对氨基苯磺酸混合而成，硝态氮与硝酸试粉反应如下：【实验材料】接骨木伤流液【实验试剂】硝酸试粉、50%醋酸、50mg/L氮流液【实验步骤】在比色盘的五个孔中加入如表所示溶液：5min后即成5个不同浓度20、40、60、80、100mg/mL硝态氮的比色阶。
再用6号孔中加入伤流液5滴及硝酸试粉1勺，搅拌，5min后，将其所显粉红色与标准比色阶比较确定样品液中硝态氮的浓度。
【实验结果及处理】1.经过比色样品溶液的颜色介于2~3之间。
2.根据结果，伤流液中硝态氮的浓约为（10/5+20/10）/2=2mg/mL原理及方法如下：— 1 —硝态氮在经过硫酸2过氧化氢消煮的植物消煮液中，硝态氮和亚硝态氮以硝酸根离子（NO3-）存在，利用NO3-在紫外光区220nm处有特征吸收峰，可以直接测定试液的吸光度来定量硝态氮。
测定时，吸取5mL 消煮液于50mL比色管中，无氨水稀释至刻度，摇匀，在波长210nm处，用1cm石英比色皿，以无氨水作参比，在紫外分光光度计进行硝态氮测定。
3.通过伤流法测定植物中硝态氮含量中，伤流法需要收集伤流液，此环节消费时间长。
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实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。
5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
连续流动分析法测定土壤硝态氮实验综述报告
连续流动分析法测定土壤硝态氮实验综述报告一、引言土壤氮素是影响农作物生长的重要因素之一，其中硝态氮是植物最主要的氮源。
准确测定土壤中的硝态氮含量对于科学合理地施肥和提高农作物产量具有重要意义。
目前，连续流动分析法是一种用于分析土壤中硝态氮含量的常用方法之一。
本综述将对连续流动分析法测定土壤硝态氮的原理、实验方法、优缺点以及在土壤肥料科学研究中的应用进行综述，旨在为相关研究提供参考。
二、原理连续流动分析法是一种自动连续进行样品分析的分析技术。
该方法利用连续流动的方式，通过预处理、分析和清洗模块，将样品溶液送入光谱仪或电化学分析仪进行分析。
对于土壤硝态氮的测定，连续流动分析法通常采用离子选择电极、分光光度计等设备，通过特定的反应和测量原理，实现对土壤中硝态氮的快速、准确测定。
三、实验方法采集土壤样品在进行土壤硝态氮的测定前，首先需要采集土壤样品。
通常选择代表性的田间土壤样品，通过深度取样或表层取样的方式收集样品。
然后将土壤样品送样至实验室，进行初步处理。
样品处理土壤样品处理是测定土壤硝态氮的关键步骤。
在处理样品时，通常需要将土壤颗粒和有机物质与水混合，并进行振荡、过滤等操作，以获得适合连续流动分析仪器分析的土壤提取液。
连续流动分析将经过处理的土壤提取液置于连续流动分析仪器中，设置合适的参数（如温度、流速等），进行土壤硝态氮的测定。
在测定过程中，连续流动分析仪器会自动进行进样、反应和检测，并输出相应的数据结果。
数据处理获取硝态氮含量数据后，进行相应的统计分析和处理，得出样品中硝态氮的含量，并进行结果的准确性和可靠性验证。
优点1. 高效快速：连续流动分析法具有快速自动分析的特点，能够对大批量样品进行高效分析。
2. 灵敏度高：该方法对硝态氮具有较高的灵敏度，可以准确测定样品中较低浓度的硝态氮。
3. 自动化程度高：连续流动分析法采用自动化仪器进行分析，大大降低了人为误差。
缺点1. 仪器设备成本高：连续流动分析仪器设备成本相对较高，对于一些小型实验室可能不太容易承担。
植物体内硝态氮含量的测定
原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应， 生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在 碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸 收峰的波长为量呈正比，可直接比 色测定。
材料、仪器与试剂
植物材料：菠菜 仪器：分光光度计；天平（感量0.1 mg）； 试管；刻度吸量管0.1 ml、0.5 ml、5 ml、10 ml各1支；50 ml容量瓶；小漏斗（ø 5cm）3个； 玻棒；洗耳球；水浴锅；封口膜；7 cm 定量 滤纸若干；
• 在标准曲线上查得或用回归方程计算出 硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含 量。 V NO3 -N含量= (C× 1000 )/W • 式中 C—标准曲线上查得或回归方程计 算得NO3- —N浓度； • V—提取样品液总量； • W—样品鲜重。
注意事项：
1、一定不要将5%水杨酸-硫酸溶液溅到桌面、
实验步骤 1. 标准曲线的制作
（1）吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml分别放入50 ml 容 量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、 40、60、80、100mg/L的系列标准溶液。
(2)吸取上述系列标准溶液0.1 ml，分别放入烘干的 试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。再 分别放入0.4 ml 5%水杨酸-硫酸溶液，摇匀，在室 温下放置20 min后，再加入8% NaOH 溶液9.5 ml， 摇匀冷却至室温。则显色液总体积为10 ml。 (3)绘制标准曲线：以空白作参比，在410 nm 波长 下测定吸光度。以吸光度为横坐标，硝态氮浓度 为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2.样品中硝酸盐的测定
(1)样品液的制备： 取一定量的植物材料，剪碎混匀， 用天平精确称取材料2 g 左右，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。到 时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容 量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。 (2)样品液的测定： 吸取样品液0.1 ml放入烘干的试管 中，然后加入5%水杨酸-硫酸溶液0.4 ml，混匀后置室 温下20 min，再慢慢加入9.5 ml 8% NaOH溶液，待冷 却至室温后，以空白作参比，在410 nm 波长下测其吸 光度。
植物对硝态氮的吸收、同化及其含量测定
植物对硝态氮的吸收、同化及其含量测定硝态氮是高等植物可直接利用的最重要的氮素形态之一，硝态氮和铵态氮是高等植物根系吸收无机氮的主要形态，在通气良好的旱地土壤上，即使施用的是铵态或酰铵态氮肥，NH4+在土壤中也能容易地被微生物经硝化作用很快转化为硝态氮，因此，硝酸盐对旱生植物来说尤其重要，Marschner认为植物氮素营养中硝酸盐的还原和同化与光合作用中CO2的还原和同化对植物生长发育具有同样的重要性。
植物体内硝态氮的含量往往能在一定程度上反映土壤中硝态氮的供应情况，通过测定植物体内硝态氮含量，对了解氮代谢机制及其土壤中无机氮素的丰缺有重要意义。
1 植物对NO3--N的吸收和同化1.1 植物对NO3--N的吸收根系对NO3-的吸收和运输是大多数植物氮素营养代谢的第一步。
基于H+/NO3-共运机制，即植物吸收一分子NO3-进入细胞质的同时协同吸收2个H+，维持H+梯度的ATP主要由线粒体呼吸作用提供。
对不同高等植物如玉米，大麦，烟草等的吸收动力学分析表明，不同植物中存在着两种NO3-转运系统：①高亲和吸收转运系统，这类植物在低NO3-浓度的营养介质中能保持生长。
②低亲和吸收转运系统，这类植物在较高NO3-浓度的营养介质中才能保持高的氮素吸收。
NO3-浓度对植物吸收硝态氮能力有重要影响：外界NO3-浓度较低时,植物对硝酸盐的吸收符合米切里希动力学方程，此时通过细胞膜载体上的NO3-/H+共运和NO3-/OH-逆运系统完成；当外界NO-3浓度较高时,吸收速率随浓度变化的趋势呈直线型，此时主要通过依赖于硝酸盐的专一性离子通道进行的逆电化势的运输系统完成。
植物对硝态氮的吸收与温度和pH密切联系，低温能降低植物对NO3-的吸收。
主要是由于低温影响根系呼吸和能量供给，以及细胞膜的透性减弱导致NO3-吸收缓慢。
根部介质的pH也显著影响植物对NO3-的吸收，pH值低时NO3-吸收较快。
随着pH值的升高，NO3-的吸收减少。
植物体内硝态氮含量的测定
植物体内硝态氮含量的测定
测定植物体内硝态氮含量的方法可以通过以下步骤进行：
1. 样品准备：选择一定数量的植物组织或器官作为样品，如根、茎、叶等。
将样品收集并保持新鲜。
2. 样品处理：将样品在离子交换树脂柱中进行前处理，使用硝化态氮还原剂将硝态氮还原为氨。
3. 反应体系：将还原后的样品与含有硫酚酸、过硫酸铵等试剂的反应体系混合，形成可测定的化合物。
4. 反应媒介：选择合适的反应媒介来测定反应产生的化合物，如使用紫外光谱法、分光光度法、电化学法等。
5. 检测与测量：使用相应的仪器或设备进行测量和记录，根据每种方法的特点和原理，选择合适的测量方式。
值得注意的是，硝态氮含量的测定方法可能因不同的植物物种和研究目的而有所差异，因此建议在实施前进行相关的文献调研和方法优化。
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植物体内硝态氮含量
的测定
二、植物体内硝态氮含量的测定
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下
（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具
（1）722型分子光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20cm326支；（4）刻度吸管0.1cm3. 0.5cm3. 5cm3. 10cm3各1支；（5）容量瓶50cm38个；（6）容量瓶25cm33个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：
500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200cm3。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100cm3,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤
1. 标准曲线的制作
（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1cm3. 2cm3. 3cm3. 4cm3. 6cm3. 8cm3. 10cm3. 12cm3分别放入501cm3容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11cm3，分别放入刻度试管中，以0.11cm3无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4cm3水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入
8%NaOH溶液9. 51cm3摇匀冷却至室温，显色液总体积为101cm3。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
以NO3-N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中硝酸盐的测定
（1）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克分别放入三支刻度试管中，加入10cm3无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分钟，到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到25cm3容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。
（2）样口液的测定吸取样品0.1 cm3分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液0.4 cm3，混匀后置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 cm3 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测期吸光度。
在标准曲线上查得或用回归方程计算出NO3--N 浓度，再用下公式计算其含量。
旱作物组织中硝态氮的测定——硝酸试粉比色法
1. 目的
作物根系从土壤吸收的硝态氮，一部分很快参加蛋白质的合成但仍有相当数量的硝态氮是在向地上部分转运途中逐步转化的。
特别是某些旱作物叶柄硝态氮的水平，在一定范围内反映了当时体内的氮素营养水平和土壤供氮状况。
定期检测作物适当部位的硝态氮含量的水平，可以为作物的施肥和促控措施等提供一些依据。
本方法是基二锌在酸性条件下产生氢气，将硝酸根还原成亚硝酸根，亚硝酸根对氨基苯磺酸和a-萘胺作用，形成红色偶氮染料，在一定范围内可按颜色（玫瑰红）深浅估测NO3-N含量。
灵敏度范围为0.5-20ppm，其反应一定要在PH5左右条件下进行，在碱性条件下不显色或显色不明显。
2. 材料和试剂
（1）硝酸试粉称硫酸钡50g，分成数份，分别与硫酸锰（Mnso4?H2o）5g，锌粉1g，对氨基苯磺酸2g，a-萘1g，在研钵中研细混匀，最后与37. 5g柠檬酸一起研磨均匀，贮于暗色瓶中，防潮避光。
此试粉灰白色，若变为粉红色，则不能使用。
（2）PH5柠檬酸缓冲液称取化学纯柠檬4. 31g，柠檬酸钠6. 86g，溶于500ml蒸馏水中（溶液必须新鲜酸置）。
（3）硝态氨标准溶液称取7. 22g分析纯硝酸钾加水定容到1000ml，即为1000ppmNo2-N。
3. 方法与步骤
（1）取样清晨在待测田块中，选取有代表性的植株10-20株的敏感部位，用湿布擦净，剪碎，榨汁备用。
（2）测定于15ml刻度试管中，加入5mlPH5. 0的柠檬酸缓冲液，滴入一滴组织汁液，摇匀加入0.2g硝酸试粉，塞紧，纵向摇动试管1分钟（200次/分），静置15分钟后，与硝态氮试管法比色卡或标准色阶溶液进行比较，目测硝态氮ppm数。
（3）结果计算
其中：V1-显色溶液的ml数；
V2-所取汁的ml数（按每毫升20滴计）。