天然药物化学实验
实验指导
天然药物化学实验指导一、前言天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
其主要目的是：通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。
使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。
通过试验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。
天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：提取分离方面要求掌握常用的经典方法的原理及操作。
其中包括液-固提取法（浸渍、渗漉、回流提取等）、液-液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、反流分布法）、重结晶法等。
掌握纸色谱、柱色谱（包括吸附柱、离子交换柱等）的原理和基本操作。
鉴定方面化学方法①掌握一般定性反应在鉴定中的用②掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
③了解重要降解反应的原理及应用。
光谱方法了解UV、IR、NMR、MS在天然物结构测定中的应用。
目前要求学员能了解黄酮类化合物的UV、NMR波谱、蒽醌的IR以及麻黄生物碱的NMR谱特征。
二、天然药物化学实验须知在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，试验操作又常在加温加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。
但只要加强爱护国家财产和保障人民生民安全的责任心，提高警惕，消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。
实验规则试验前必须预习实验内容，了解原理和操作规程。
随时记录试验应记的项目，以作正式报告。
试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行试验。
试验时不准做无关的事情，严禁吸烟，不得擅自离开，并应随时注意反应情况，仪器有否漏气，破裂等。
药品仪器都是国家财产，须节约爱护使用，公用物品，用完后立即放回原处。
不可调错瓶塞，以免污染，仪器要洗刷干净。
操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要放沸石或一端封死的毛细管，若在加热时发现无沸石则应冷却后再加，防止爆沸冲出。
天然药物实验报告.docx
天然药物化学实验实验报告实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（一）实验目的要求1.制备芦丁，供药用。
2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
3.熟悉重结晶技巧。
4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
（二）实验的基本原理1.芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。
也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。
2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。
(三) 实验内容1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。
2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。
3. 溶剂重结晶精制芦丁。
4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 实验药材仪器与试剂1. 实验药材槐米20g。
2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml 烧杯，250ml园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml 锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。
3. 试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。
（五）实验方法与注意事项1. 芦丁的提取（2）方法二（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，（注意小心沿侧边放入磁子），加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，（设定温度为105°C，当加热到103°时，观察到：液体开始沸腾，有气味，有泡沫产生。
天然药物化学实验报告
天然药物化学实验报告实验报告：天然药物化学实验摘要：本实验采用天然药物提取法，以姜黄素为目标化合物，通过溶剂提取、分离纯化和结构鉴定等步骤，成功地从姜黄中提取出姜黄素。
利用紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析，并对其结构进行了确认。
实验结果表明，本实验方法可用于姜黄素的提取和纯化。
引言：天然药物在中药领域有长久的历史，并且越来越被广泛应用于药物研究和治疗中。
本实验旨在利用化学方法从天然药物中提取目标化合物，以姜黄素为例进行研究。
姜黄素是姜黄根茎中的有效成分，具有抗氧化、抗炎和抗癌等多种生物活性。
实验材料与仪器：1.实验材料：鲜姜黄，无水乙醇，乙酸，氯仿，丙酮等。
2.实验仪器：电子天平，恒温槽，高速离心机，紫外可见分光光度计等。
实验步骤：1.预处理姜黄样品：将鲜姜黄切碎并研磨成细粉，加入无水乙醇溶液中，将其置于40℃的恒温槽中提取一段时间。
2.溶剂提取：将提取液过滤，所得过滤液用氯仿萃取，重复该步骤两次，所得的有机相合并，并经旋转蒸发机蒸发浓缩。
3.分离纯化：将提取液溶解在正己烷中，通过硅胶柱层析法进行分离纯化。
首先用正己烷进行洗脱，之后用氯仿-甲醇（20:1）溶液进行洗脱。
4.结构鉴定：通过紫外-可见光谱法进行姜黄素的定性和定量分析，利用相对滴定法测定含量，并与标准品对照鉴定。
实验结果：1.提取纯化：通过溶剂提取和硅胶柱层析法，成功地从姜黄中提取出纯化的姜黄素。
提取纯化过程中，利用纸色谱法监测样品的纯化情况。
2.结构鉴定：利用紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析。
通过比对标准品和实验样品的吸收峰位置和峰高，确认了所提取的化合物为姜黄素。
讨论与结论：本实验通过天然药物提取法和硅胶柱层析法成功地从姜黄中提取纯化了姜黄素，并进行了结构鉴定。
实验结果显示，本实验方法可用于姜黄素的提取和纯化，并通过紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析。
本实验为天然药物的提取和纯化研究提供了一种有效的方法，对于深入研究姜黄素的药理作用和临床应用具有重要意义。
天然药物化学实验教程
天然药物化学实验教程天然药物化学实验是研究和分析天然药物化学成分和活性的关键领域之一。
下面是一些关于天然药物化学实验的参考内容：1. 实验目的：天然药物化学实验的目的通常是研究和分析天然药物的化学成分、药效和药理活性，探索其潜在的药物作用机制，为药物研发和临床应用提供理论依据。
2. 实验步骤：天然药物化学实验的一般步骤包括药材采集、样品制备、化学成分分离和鉴定、活性测试等。
具体步骤根据研究对象和实验目的的不同而有所差异。
3. 药材采集和样品制备：药材的采集应根据其生长季节和部位选择合适的时间和地点。
采集后要进行鉴定和干燥处理，以保证样品的纯度和质量。
4. 化学成分分离和鉴定：常用的化学成分分离方法有溶剂萃取、柱色谱、薄层色谱等。
分离得到的化合物可以通过质谱、核磁共振等方法进行结构鉴定，以确定其化学成分和结构特征。
5. 活性测试：常用的活性测试方法包括抗氧化活性、抗炎能力、抗菌活性、抗肿瘤活性等。
这些测试可以通过体外实验、细胞实验和动物实验等手段进行。
6. 分子模拟和药效预测：结合计算机辅助药物设计技术，可以进行分子模拟和药效预测，探究天然药物的可能结合靶点和作用机制，以指导后续的药物研发工作。
7. 质量控制和质量标准：天然药物化学实验还需要考虑质量控制和质量标准的建立，包括原料药的质量评价、指纹图谱的建立、有效成分的含量测定等，以保证药材的质量和药物的稳定性。
8. 毒理学评价和安全性研究：天然药物的安全性评价是非常重要的一步，包括毒理学评价、长期毒性实验、代谢动力学研究等。
实验过程中需要遵循伦理和安全的要求，确保实验结果的准确性和可靠性。
9. 文献研究和结果分析：天然药物化学实验还包括对相关文献的研究和结果的分析，以对已有研究成果进行总结和归纳，为进一步的研究提供参考依据。
10. 结论和展望：实验结果的结论和展望是天然药物化学实验中的重要部分，通过对实验结果的分析和解释，得出实验结论，并对未来的研究方向和应用前景进行展望。
天然药物化学实验
石蜡油
--------------------------------------------------------------1000g
【质量要求】 1）水分 2）重量差异 3）装量差异
4）溶散时限
5）微生物限度
【鉴别】
取本品乙醚提取液作为供试品溶液，另取丹皮对照 药材作成对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005年 版一部附录ⅥB)试验，供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。
rutinose
芦丁(rutin)
对酸性、碱性或两性化合物，可加入酸或碱以调 节溶液的PH值，改变分子的存在状态（游离型或离 解型），从而改变溶解度而实现分离。包括酸/碱法、 碱/酸法。
一些酚酸性类物质如黄酮、蒽醌类等用碱性水从药 材中提出后，加酸调至酸性，酚酸性成分可以从水中 析出。（碱/酸法）
出；
3）未加水到适当位置前，切勿接通电源； 4）温度控制器不可随意拆卸；
5）外壳必须接地；
6）控制箱内部应保持干燥，以防因受潮而导致漏电；应随
时注意水箱是否有渗漏现象。
2．实验报告要求 ①旋转蒸发仪的基本操作方法及注意事项。 ②水浴锅的基本操作方法及注意事项。
3．思考题
① 中药材提取液的浓缩一般有那些方法，采用减压浓 缩有什么好处？
2. 与硅胶混合：CMC－Na溶液与硅胶的比例为3：1。 具体方法如下：先将CMC－Na溶液倒入自动搅拌器或研钵
中，然后加入硅胶，搅匀即可。若是在研钵中研磨，按一
个方向研磨，自下而上，然后自上而下，以赶尽气泡为佳。
3. 铺板：手动或机械。手动铺出的板的薄厚与所加 的混合后的硅胶量有关，而机械铺出的板的薄厚与机械所
再用。 3） 调正主机角度：只要松开主机和立柱连结螺钉。主机 即可在0-45度之间任意倾斜。
天然药物化学实验
5％ N aH C O 3
N aH C O 3液 酸化
提乙醚取液 液
5％ N a 2C O 3
沉淀 重结晶
N a2C O 3液 酸化
结晶 （ 含 COOH 或
二个 β O H )
沉淀 重结晶
结晶 （ 含一个 β O H )
（含
提乙醚取液 液
1％ N aO H
N aO H 液 酸化
沉淀 重结晶
结晶 二个 α O H ）
化30min 展开剂：石油醚—醋酸乙酯(8:2) 显色剂：365nm下观察荧光、5%氢氧化钾甲醇
液或氨气薰
实验四 穿心莲中穿心莲内酯的提取、分离与鉴别
目的要求
1.掌握从穿心莲药材中提取亲脂性成分的原理和 方法。
2.掌握除去叶类药材中叶绿素的原理和方法。 3.掌握内酯类成分的主要理化性质及鉴别方法。
碘化铋钾( Dragendorff )试剂 碘化汞钾( Mayer )试剂 碘化碘钾( Wagner )试剂 硅钨酸( Bertrand )试剂
鉴别
特殊鉴别反应
取盐酸小檗碱少量，加稀盐酸2ml溶解后，加漂 白粉（或次氯酸钠）少许，振摇后观察颜色变 化。
取盐酸小檗碱50-100mg，溶于50ml热水中，加 入10%氢氧化钠2ml，混合均匀后，于水浴中加 热至50℃，加热丙酮5ml，放置，观察有无沉淀 析出及颜色变化。
水解
大黄粗粉100g
置500ml圆底烧瓶，20%H2SO4150ml，加热 回流，水解2h，抽滤过。
药渣
水洗至pH≈7，抽干
药渣（60℃干燥）
提取
干燥药渣
装索氏提取器，用石油醚、乙酸乙酯各 200ml，回流提取至色浅 提取液(含总游离蒽醌)
天然药物化学实验报告(槲皮素的提取与鉴别)
17 玻璃漏斗
18
研钵
19 胶头滴管
20 薄层板
21 展开缸
22
紫外光谱 仪
23
熔点测定 仪
24 真空泵1个 1个 1个 1个 1个 1个
1个
1个 2条 1个 1个 1个 1个 1个 1张 1个 1套 1个 10个
1个
1台
1台
1台
1台
型号
IM-B2002
GG-17 1000ml GG-17 1000ml
（3）紫外光谱：槲皮素在 375nm 和 255nm 有两个吸收峰，分别属
(A
环)电子跃迁和
(B 环)电子跃迁，分别对应两个生色团组成：375nm
吸收带由肉桂酰生色团产生，为 I 带；250nm 吸收带由苯甲酰生色团产生， 为 II 带，将紫外光下的图谱与标准图谱对照； 实验记录:
八、结果与分析
（一）实验结果： 1、产率：实验所用槐米粗品300g,所得槲皮素晶体4.12g。 产率%=4.12g/300g*100%=1.373% 2、熔点：利用显微熔点测定仪测得最后结果如下： 理论熔点：313.7℃ 所测熔点：312.9℃~314.0℃ 3、薄层色谱：利用薄层色谱法鉴定实验所得产品的纯度如下图：
2、由产量和产率知，我们所得的槲皮素产率偏低，由于浸泡液中基本没有 再析出结晶，而且槲皮素粗品不少，所以产率低的原因是在槲皮素重结晶的过程 中，我们使用大烧杯，使许多产物粘烧杯壁上，造成大量损失。
3、和另外两组相比，我们的的产品纯度更好一些，他们采用的是加入氢氧 化钠提取，而我们直接采用的蒸煮法，所以碱提取会影响产品的纯度； 实验记录：第一天，领取药材以及实验仪器；
第二天，药材粉碎及其蒸煮三次，过滤，滤液静置； 第三天，抽滤，滤液装入饮料瓶，滤渣放入烧杯，烧杯放入烘箱烘干，
天然药物化学实验讲义
天然药物化学实验讲义天然药物化学实验讲义重庆医科⼤学药学院⽬录⼀、黄柏中⽣物碱的提取、分离和鉴别⼆、槐⽶中芦丁、槲⽪素的提取、分离与鉴别三、穿⼼莲中穿⼼莲内酯的提取、分离与鉴别四、⼋⾓茴⾹挥发油的提取及鉴别五、⼤黄中蒽醌苷元的提取、分离与鉴别六、苦参⽣物碱的提取、分离与鉴别前⾔《天然药物化学实验》是⼀门实践性很强的课程，理论教学与实验教学是⼀个不可分割的完整体系。
通过实验课的学习使学⽣能印证并加深理解课堂讲授的理论知识，掌握由天然药物中提取、分离、精制有效成分，并对其进⾏鉴别的基本⽅法和技能，提⾼学⽣独⽴动⼿、观察分析、解决问题的能⼒，培养学⽣严谨的科学态度和良好的科研作风。
N +O O OMe OMe 实验⼀黄柏中⼩檗碱的提取、分离和鉴别【实验⽬的】1.掌握从黄柏中提取⼩檗碱的原理和⽅法。
2.掌握⼩檗碱的理化性质和鉴别⽅法3.熟TLC 的基本操作以及在中药有效成分提取分离中的应⽤。
【实验原理】 1.⼩檗碱(berberine)，含量为1.4%-4%(川黄柏含量较⾼)性状：黄⾊结晶，有5.5个结晶⽔，mp145℃。
溶解性：能缓缓溶于冷⽔中（1:20），微溶于冷⼄醇（1:100），易溶于热⽔和熱⼄醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，硝酸盐极难溶于⽔，盐酸盐微溶于冷⽔（1:500）但较易溶于沸⽔，硫酸盐和枸橼酸盐在⽔中溶解度较⼤（1:30），盐酸⼩檗碱为黄⾊结晶，含2分⼦结晶⽔，220℃时分解并转变为棕红⾊⼩檗红碱，285℃时完全熔融。
2.⼩檗碱为季铵碱，其游离型在⽔中溶解度较⼤，其盐酸盐在⽔中溶解度较⼩。
利⽤⼩檗碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，⾸先⽤⽯灰乳沉淀黏液质，⽤碱⽔提出⼩檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸⼩檗碱沉淀析出。
【实验仪器与试剂】1.1000、500、100、10ml 烧杯，10ml 试管，试管架，托盘天平，量筒，三⾓漏⽃，洗瓶，布⽒漏⽃，电炉，10×20cm 薄层板，10×20cm 薄层⾊谱缸，点样⽑细管，紫外灯（仪），玻棒，⽜⾻匙，纱布，脱脂棉。
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实验一 大黄中蒽醌苷元的提取、分离与鉴别
一、实验目的
1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握用pH 梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。
3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。
4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。
5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
二、实验原理
1.大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄R.tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄R. officinale Baill.的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄蒽醌及其苷。
（1）大黄酸(rhein) 分子式C 15H 8O 6，分子量284.21。
黄色针状结晶（升华法），mp.321～
322℃，330℃分解。
能溶于碱水、吡啶，溶于乙醇、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。
（2）大黄素(emodin) 分子式C 15H 10O 5，分子量270.23。
橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～
257℃，能升华。
易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。
（3）芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C 16H 10O 5，分子量270.23。
橙色针状结晶（甲
苯），mp.223～224℃。
易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。
（4）大黄酚(chrysophanol) 分子式C 15H 10O 4，分子量254.23。
橙黄色六方形或单斜
结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。
易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。
（5）大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。
砖红色单斜针状结晶，
mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。
2.本实验是根据大黄中的羟基蒽醌苷经酸水解成游离羟基蒽醌，而游离羟基蒽醌不溶于水，可溶于氯仿、乙醚等亲脂性有机溶剂的性质，用氯仿从水解液中将游离羟基蒽醌提取出来，再利用各游离羟基蒽醌的酸性不同，采用pH 梯度萃取法将其分离。
其中大黄酚和大黄素甲醚的酸性十分近似，用pH 梯度萃取法难以分离，可利用两者的极性不同，采大黄酚 R 1=CH 3 R 2=H 大黄素 R 1=CH 3 R 2=OH 大黄酸 R 1=COOH R 2=H 大黄素甲醚 R 1=CH 3 R 2=OCH 3 芦荟大黄素 R 1=CH 2OH R 2=H O O OH R 2
OH
R 1
用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验仪器与试剂
1.索氏提取器，500、100、10ml烧杯，1000、500ml分液漏斗，10ml试管，试管架，托盘天平，量筒，三角漏斗，洗瓶，布氏漏斗，水浴锅，10×20cm薄层板，10×20cm薄层色谱缸，点样毛细管，紫外灯（仪），玻棒，牛骨匙，脱脂棉，显色剂喷瓶，小型空压机，层析柱（Ф1.5cm）
2.大黄粗粉，滤纸，pH试纸，乙酸乙酯，石油醚（60～90℃），氯仿，20％硫酸，pH8缓冲液，pH9.9缓冲液，浓盐酸，5％碳酸钠，5％氢氧化钠，丙酮，10％氢氧化钠，0.5%醋酸镁乙醇试剂，薄层用硅胶H，0.2%CMC-Na，甲醇，大黄酸、大黄素、芦荟大黄素对照品，展开剂：石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上层溶液，浓氨水。
四、实验步骤
1. 提取与分离
大黄粗粉100g
水洗余酸至中性
氯仿提取液
2）5%碳酸氢钠溶液萃取数次
20%盐酸调pH3300ml萃取或（2）5%碳酸钠溶液萃取数次沉淀（水洗至中性）
冰醋酸精制氯仿提取液碱水层
大黄酸20%盐酸调pH3，滤过
沉淀
（9丙酮精制
大黄素
氯仿提取液碱水层
分两次萃取20%盐酸调pH3，滤过
沉淀
碱水层氯仿提取液醋酸乙酯精制
20%盐酸调pH3，滤过芦荟大黄素
沉淀
2．检识
（1）碱液试验分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴10％氢氧化钠试剂振摇，观察颜色变化，羟基蒽醌应显红色。
（2）乙酸镁试验分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴0.5％乙酸镁乙醇试剂，观察颜色变化，羟基蒽醌应显橙、红、紫等颜色。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶H-CMC-Na
试样：自制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素的乙醇溶液。
对照品：上述各成分对照品乙醇溶液（约1mg/ml）。
展开剂：石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上层溶液。
显色：在可见光下观察，记录黄色斑点的位置。
然后再用浓氨水熏蒸或喷雾5％乙酸镁甲醇溶液，斑点应显红色。
五、基本操作注意事项
1.大黄中蒽醌类化合物的种类、含量与大黄的品种、采集季节、炮制方法及贮存时间均有关系，实验用药材应注意。
2.为了验证分离所采用的萃取液是否合理，作如下缓冲纸色谱试验：取层析滤纸3 cm ×12 cm，距下端2 cm处划一起始线，向上每隔1.5 cm划一平行线，在各条带上依pH由低至高顺次涂布实际所用的各缓冲液及碱液，涂布完后，将湿滤纸夹在两片干滤纸中吸至半干。
取样品总蒽醌苷元氯仿提取液点在起始线上，用氯仿上行展开，将结果绘制在下面图中，并确定选择的萃取剂是否合理。
3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醌，是利用羟基蒽醌的酸性不同，可溶于不同pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的次数不宜过多，否则被分离的成分间回游混杂，最好同时用薄层对照。
所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8，5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。
一般萃取大黄酸用pH7～8范围的，萃取大黄素用pH9.5～11范围的。
4.若用缓冲液进行萃取时，采用一次性加入的方法，实验证明，如将缓冲液分次萃取，分离效果不理想。
5.本实验也适应于以虎杖为原料的提取，但虎杖中不含大黄酸，故直接由大黄素开始分离。
6.硅胶柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚
装柱：用石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）浸泡200～300目硅胶约20 g，搅拌均匀，尽量赶出气泡。
一次性倒入1.8 cm * 28 cm 的层析柱中，轻轻敲打使硅胶均匀下沉，至硅
胶界面不再下降为止。
上样：将离大黄酚和大黄素-6-甲醚的混合物用乙醇加热溶解，伴入少量硅胶，水浴60℃左右烘干，加到已装好的硅胶柱顶端，最后在样品带上盖上一层硅胶或棉花，以保护样品界面不受干扰。
洗脱：先用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）洗脱，至第一条黄色色带洗下来，再换用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脱下第二条色带。
先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下的化合物为大黄素甲醚。
各流分经硅胶-CMC-Na板，氯仿－醋酸乙酯(8∶2)展开，用大黄酚和大黄素甲醚作对照，合并斑点相同流分，分别浓缩、放置析晶，即可获得大黄酚及大黄素甲醚。
六、思考题
一、大黄游离蒽醌的提取分离方法还有哪，同时注意实验成本、仪器、安全、环保等多因素思考。
二、（1）大黄中5种羟基蒽醌化合物的酸性和极性大小应如何排列？为什么？
（2）pH梯度萃取法的原理是什么？适用于哪些中药成分的分离？
（3）蒽醌类化合物及其苷的薄层色谱用什么作吸附剂、展开剂和显色剂？
（4）蒽醌类与乙酸镁显色反应的必要条件是什么？其颜色反应与羟基所在的位置有何关系？。