建立全脑缺血再灌注动物模型的实验研究进展
全脑缺血再灌注动物模型建立方法
全脑缺血再灌注动物模型建立方法引言全脑缺血再灌注是一种临床上常见的危重症，常见于心脏骤停、溺水等情况下，出现全脑缺血缺氧，随后通过复苏措施进行再灌注。
建立全脑缺血再灌注动物模型对于深入研究相关疾病的发病机制，评估治疗方法具有重要意义。
本文将介绍一种常用的全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。
动物模型选择建立全脑缺血再灌注模型时，主要选择小鼠或大鼠作为实验动物。
一般情况下，小鼠更为常用，因其易于操作、成本较低，且其脑血管结构与人类相似，因此具有较高的可比性。
对于大鼠，其相对较大的体积能够更好地模拟人体情况，但操作相对较为复杂。
手术操作准备在进行全脑缺血再灌注动物模型的建立前，需要进行手术操作的准备工作。
首先需要进行动物的麻醉和固定，确保手术操作的安全性。
其次需要准备全脑缺血再灌注模型所需的仪器和设备，包括导管、监测仪器等。
在手术操作前，还需要对实验动物进行术前处理，包括禁食、定时给予抗生素等。
手术操作步骤1. 麻醉和固定：将实验动物置于麻醉箱内，使用合适的麻醉药物使其达到麻醉状态。
随后将其固定在手术台上，以确保手术操作的稳定性。
2. 手术部位暴露：在麻醉状态下，对实验动物进行皮肤消毒，随后进行手术部位的切开，暴露出颅骨表面。
3. 血管结扎：通过显微外科手术操作，对实验动物的颅骨表面的动脉和静脉进行结扎，以模拟全脑缺血的状态。
4. 缺血时间控制：根据实验设计的需要，控制全脑缺血的时间，一般为15至20分钟。
5. 再灌注：在全脑缺血一定时间后，通过解开血管结扎，使血液重新灌注至大脑。
6. 术后处理：对实验动物进行术后处理，包括给予液体、保暖、饲养等。
检测指标和评价方法建立全脑缺血再灌注模型后，需要对实验动物进行一系列的检测和评价，以评估其神经功能恢复情况。
常用的评价指标包括神经行为学评分、脑组织病理学检测、神经元凋亡检测、脑组织炎症因子检测等。
通过对这些指标的检测和评价，可以全面地评估全脑缺血再灌注模型的建立效果，为后续的实验研究提供可靠的依据。
脑缺血动物模型检测指标研究进展
ＬＳ ＩＨ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ Ｓ Ａ Ｃ ０８ Ｏ ．９Ｎ ．１ ＩＨＺ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ ＥＥ Ｒ Ｈ２０Ｖ Ｌ １ Ｏ １
脑 缺 血 动 物模 型检 测 指标 研 究进 展
周 霞 ， 军 ， 国钧 董振 国 万 黄 ，
（． １西南 交通 大学生命 科学 与工程 学院 ， 四川 成 都 ６０３ ； ２ 成都 中医药大学 ， １０ １ ． 四川 成都 ６０７ ） １０ ２
摘 要 ：综述了脑缺血动物模型常用的检测指标研究概况， 为研究脑缺血机制及动物模型评价提供依据， 同时便于实验
研 究 时选 择使 用 。
关键词 ： 脑缺血； 动物模型； 检测指标
Hale Waihona Puke 中 图分 类号 ：２ ５５ Ｒ ８ ．
文 献标识码 ： Ｂ
文 章编号 ：０ ８００ （０ ８ １－８２０ １０ －８５ ２０ ）１２０ －１
脑缺血是 以脑循环血流量减少为特征的 中枢神经 系统疾病 ， ７ 兴奋性氨基酸毒性及含量 具有发病率高 、 残率高和死亡 率高 的特 点 ， 致 严重地 影响人类 的 氨基酸作 为重要 的神经递质 ， 对正常大脑 的生理活动有调节 生 存 质 量 。选 用 准 确 的脑 缺 血 检 测 指 标 是 脑 缺 血 机 制 研 究 及 动 作用 。脑缺血 时， 神经元释放 的谷氨酸是引起神经元死亡的重要 Ｇｕ 具有损 伤效应外 ， 甘氨 酸 （ ｌ） 有协 同 Ｇｙ 也 物模型建立 的关键环节之一 。本文 就脑 缺血动物模 型常用 的检 原 因。除谷氨酸（ ｌ） 作用 ， 释放增加能扩 大脑缺血损 害。 一 基丁酸 （ Ａ Ａ） 其 氨 Ｇ Ｂ 能 测指标作一总结 。 抑制兴奋性氨基酸释放或对抗 氨基酸毒性 。傅 建华 等” 采用结 １ 血 小 板 聚 集 性 血液 内血小板 的高聚性是 脑缺血 的主要致病机制之 一。对 扎小 鼠双侧颈总动脉进行反复缺血再灌注 ， 造成小 鼠血管性学习 采用花生 四烯酸诱导 的大 鼠急性 脑缺 血模型 研究 表明 ， 型 记忆 障碍模型 ， 模 测定小 鼠大脑皮 层和海马 区递质性 氨基酸含量的 组加入诱导剂 Ａ Ｐ 终浓度 ２ｔ ｏ Ｌ ， Ｄ（ ｍ ｌ ） 分别在 １２４ｈ后测定 ５ 变化 。结果表 明， ｘ ／ ， ， 与对照组相 比 ， 模型组 海马区天 门冬 氨酸含量 ａ ｒｎ最大 聚 集 率 （ Ａ Ｔ ａ％）和 １ ｎ最 大 聚集 速 度 （ Ａ Ｖ 降低 ， ｉ Ｐ ｇｍ ｘ ｍｉ Ｐ ｇ— 脑皮层的 一氨基丁酸的含量升高。 ｍ ｘ ） 较对 照 组 升 高 。 ａ％ 均 ８ 血液流变学指标 ２ 脑 梗 塞部 分 百 分 比 血液粘稠度较高 、 血流 速度缓慢致血栓 形成 ， 缺血性脑血 是 采用线栓法制作 大鼠局灶性脑缺血再灌 注模 型， 模拟人类缺 管疾病发病 的又一重要机制。殷 凤等 采用高 分子右旋糖酐制 血性脑血管病的状态 ， 通过红四氮唑 （ Ｔ ） Ｔ Ｃ 染色的方法计算缺血 成大 鼠血瘀症模型 ， 测定结果表 明， 模型组全血粘度 、 血浆粘度 、 面积。结果大 鼠造模后 ２ ｈ内出现程度不 同的神经损伤症状 ， ４ 与 血细胞 比容及红细胞 电泳时问均有所升高 。 对照组相 比， 缺血部分 占整个脑组织切片 面积的百分比有极显著 ９ 脑能荷 （ Ｃ） Ｅ 及磷酸肌酸（ Ｃ ） Ｐ ｒ 的含量 差 异 ， 。 脑缺血后 ， 能量衰竭 主要 表现 在高 能磷 酸化 合物 Ａ Ｐ Ｐ ｒ Ｔ ， Ｃ ３ 脑 含 水 量 的耗竭上 ， 为检测缺 血早 期脑 组织 的 Ａ Ｐ Ａ Ｐ， ＭＰ及 Ｐ ｒ Ｔ ，Ｄ Ａ Ｃ 含 脑血管堵塞后 ， 缺血 中心 区神经细胞很快 发生死亡 ， 而缺血 量 ， 可采用 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ仪观察 大脑 的能荷值 ， 以下公 式计算 ： Ｃ＝ 用 Ｅ 后再灌注可挽救濒死细胞。脑组织含水量 测定可观 察脑缺血损 （ 一 ． Ｐ／ Ｃ ｆ ＡＰ ＡＰ 。王秋华 等 阻断雄性 Ｃ ０ ５Ｃ ） （ ＭＪ ＋Ｃ Ｄ ＋Ｃ Ｍ） 伤后胶原组织 水肿 情况 ， 般用 以下公 式 计算 ： 水 量 （ 一 含 ％）＝ 小 鼠双侧颈总动脉血流 ， 复制低血压伴 急性脑缺 血模 型 ， 现在 发 （ 重 一干 重 ） 湿 重 ×１０ 。 湿 ／ ０％ 缺血 １ ，０ ３ ｍｎ时模型组 Ｅ Ｐ ｒ Ｏ ２ ，０ ｉ Ｃ，Ｅ 含量均较假手术组 降低 。 ４ 线 粒 体 呼 吸 功 能 １ 超 氧化 物歧 化 酶 （ Ｏ 及 丙二 醛 （ Ｄ 水 平 Ｏ Ｓ Ｄ） Ｍ Ａ） 局灶性脑缺血引起脑损伤 的重要 原因之一 即脑能量代谢 功 脑缺血后生成 的大量氧 自由基攻击细胞膜和亚细胞膜， 引发 能障碍 ， 因此 ， 检测线粒体功能对 于评 价药物 的脑保护作用具 有 脂质过氧化反应 ， 导致细 胞代谢及 功能 障碍 。张博生等 发现 重要意义。采用插线 法 制备 大 鼠脑 缺血再 灌注 模型后 ， 出 脑缺血和再灌注后 鼠红细胞 、 取 脑组 织及线粒 体 中的 Ｓ Ｄ水 平降 Ｏ 缺血 区脑组织制备线粒体 ， 进行呼吸功能测定 。结果表明模型组 低 ； 鼠血浆 、 而 脑组织和亚细胞器 中红细胞 内的 Ｍ Ａ水平升高。 Ｄ 线粒体功能受 到明显损 伤 ， 表现为 ３态呼 吸速率 降低 ， 呼吸 １ Ｎ ４态 １ Ｏ及 一 氧 化氮 合 酶 （ Ｏ ） 性 Ｎ Ｓ活 速率 提 高 。 脑缺血晚期 ， 机体代谢生成大量 的 Ｎ 且 Ｎ Ｓ活性 升高 ， Ｏ， Ｏ 可 ５ 脑 组织 结 构 诱导谷氨酸兴奋毒性 ， 重缺血再 灌注损伤 。李 建生等… 究 加 研 脑缺血后 ， 内神 经细胞代谢紊 乱 ， 脑 以致神 经细胞损 伤。在 发现 Ｎ Ｏ含量 降低和 Ｔ Ｆ增高与老龄 大鼠脑缺血再灌 注脑 组织 Ｎ 形态学上表现为体积变小 ， 细胞质 和细胞 核 固缩 ， 胞浆和 血管周 损伤有关 ； 大黄提 高血清 Ｎ Ｏ含量 和脑 组织 Ｎ Ｓ活 性的作 用可 Ｏ 围空化 ； 另外还可因毛细血管通透性增加 ， 导致血浆渗出 ， 出现脑 能是 其拮抗脑组织损伤的机制之一 。 水肿 。可采用 光学显微镜 、 电子显微镜研究镜下 的组织细胞形态 １ Ａ Ｐ酶 活 性 ２ Ｔ 学改 变 。 能量 的衰竭首先是离子泵 的功能受 到影响 ， ａ Ｋ Ｎ ， 一Ａ Ｐ Ｔ ６ 脑 电 图 ］ 酶主要存在于细胞膜上 ， 对维 持细胞 的机能 、 代谢 和细胞内外 的 通过脑电图波幅的改变可判断脑 缺血症状 。在大 鼠冠状缝 离子平 衡 中起 重要作 用。脑缺 血时 ， 能量 匮乏 ， ａ Ｋ Ｎ ， 一Ａ Ｐ Ｔ 前相 当于皮层感觉运动 区（ 额顶 区） 部位和顶叶后部 （ 顶枕 区） 的 酶不能正常运行 。而 Ａ Ｐ依赖 的 ｃ “ 一Ａ Ｐ酶也在 Ａ Ｐ减少 Ｔ ａ Ｔ Ｔ 左右两侧对称地分别 放置脑 电极各 一 ， 连接 多道生 理记 录仪记 时活性降低 ， 不能将 ｃ “泵出胞外 ， ａ 造成细胞 内 Ｃ “超载。刘志 ａ 录 ， 以反映阻断侧大脑 中动脉供 血区和非供血 区 ， 可 以及对侧相 龙等 采用沙土鼠双侧 颈总动脉夹 闭脑缺血再 灌注模 型， 于缺 应部位的脑 电变化。缺血 区脑 电图出现波幅降低 ， 频率减慢 。 血再灌注后 ４ ｈ取脑组织测定 Ｎ ， 一Ａ Ｐ酶 、 ａ 一 Ｔ ８ ａ Ｋ Ｔ ｃ Ａ Ｐ酶 活性 ， 果 发现 脑 缺 血再 灌 注后 脑 组 织 Ｎ ， 一Ａ Ｐ酶 和 结 ａ Ｋ Ｔ ｃ “ 一Ａ Ｐ酶 活性均降低。 ａ Ｔ 作者简介 ： 周 霞（９ ０） 女（ １８ ． ， 汉族） 黑龙江勃利人 ， ， 现任 西南交通 大学 １ 神经 肽 Ｙ（ Ｐ 与 神 经 降 压 素 （ Ｔ） 量 ３ Ｎ Ｙ） Ｎ 含 药学院助教 ， 博士学位 ， 从事中药教学与研 究工作． 主要 血小 板 合 成 释 放 的 Ｎ Ｙ 可 引 起 血 管 收 缩 、 肌 抑 制 和 血 栓 Ｐ 心 通讯作者简介 ： 万 军（ ９０ ） 男（ １８ － ， 汉族 ） 四川 自贡人 ， ， 现任 西 南交通 形成 ， Ｎ 而 Ｔ在体 内可拮抗 Ｎ Ｙ 的生物 学效应 ， 于两者含量异 Ｐ 对 大学药学院助教， 士学位 ， 博 主要从事 中药教学与研 究工作． 常在老年脑梗塞发病 中所起的作 用不容忽视 。杨风杰等 通过
全脑缺血再灌注动物模型建立方法
全脑缺血再灌注动物模型建立方法一、引言脑缺血再灌注模型是研究脑缺血再灌注损伤的重要手段，对于深入理解缺血性脑损伤的病理生理机制，探索新的治疗方法具有重要意义。
本文将详细介绍全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。
二、准备工作1. 实验动物：选择健康成年小鼠、大鼠或兔，确保其无疾病、无遗传性疾病。
2. 设备：准备好手术器械、显微镜、止血钳、无创血压计、冰冻浴盆、恒温湿毛巾等。
3. 药物：准备适量麻醉剂、抗生素、输液用品等。
三、全脑缺血模型的建立1. 麻醉：使用麻醉剂对实验动物进行全身麻醉。
2. 暴露手术部位：对实验动物进行全身消毒，打开腹腔，暴露手术部位。
3. 制作全脑缺血：使用特制的夹子将实验动物的脑血管夹闭，制造全脑缺血。
具体夹闭部位和时间需要根据实验需求进行调整。
四、再灌注过程的控制1. 解除血管夹闭：缺血时间结束后，缓慢解除血管夹闭，恢复血流。
2. 观察再灌注情况：在再灌注过程中，密切观察实验动物的神态、行为变化，以及脑部颜色、肿胀等情况。
五、模型评估与结果记录1. 评估再灌注效果：再灌注过程结束后，评估实验动物的全脑缺血再灌注效果，记录相关数据。
2. 观察病理变化：对实验动物的大脑组织进行病理学检查，观察缺血再灌注损伤后的病理变化。
3. 结果记录与分析：将观察到的结果进行记录，并对结果进行分析，为后续研究提供基础数据。
六、注意事项1. 麻醉剂的使用要适量，避免对实验动物造成过大的伤害。
2. 手术过程中要保持无菌操作，避免感染。
3. 制作缺血模型时，要确保夹闭的血管部位准确，时间适当，避免影响实验结果。
4. 再灌注过程要缓慢，确保血流的恢复不会对实验动物造成过大的刺激。
5. 病理学检查要取样准确，切片处理要规范，确保检查结果的准确性。
七、总结本文详细介绍了全脑缺血再灌注动物模型的建立方法，包括准备工作、缺血模型的建立、再灌注过程的控制和结果记录等。
该模型可用于研究脑缺血再灌注损伤的病理生理机制和探索新的治疗方法。
脑缺血再灌注损伤治疗的研究进展
脑缺血再灌注损伤治疗的研究进展向军同济大学医学院，上海（200433）E-mail: Chelsea_JX@摘要：缺血性脑血管是现代社会致死致残的最主要疾病之一，其治疗原则及时恢复缺血区的血液再灌注，而随之而来的再灌注损伤又成为一大难题。
笔者对近年来脑缺血再灌注损伤的治疗研究综述如下。
关键词：脑缺血再灌注损伤；治疗；进展缺血性脑血管病是现代社会致死、致残的最主要疾病之一，其治疗原则是及时的恢复缺血区的血液灌注。
然而在某些情况下缺血后再灌注不仅没有使组织功能恢复，反而使缺血所致的功能障碍和结构破坏进一步加重，这种现象即缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury），抑制再灌注损伤已成为缺血性中风治疗的重要环节。
近年来针对脑缺血再灌注损伤的治疗研究取得一定成果，现将其综述如下。
1．自由基研究自由基（free radical）是外层轨道上有单个不配对价电子的原子、原子团和分子的总称，其化学性质极为活波，可与各种细胞成分（膜磷脂、蛋白、核酸）发生反应，导致细胞功能障碍和结构破坏。
在脑缺血再灌注时，机体的自由基产生和清除系统遭到破坏，导致大量自由基的存在，造成脑组织损伤和功能障碍。
由于再灌注治疗窗十分短暂(仅1-3小时)，因此清除自由基应在再灌注前或者再灌注早期即开始。
自由基的清除主要靠自由基清除剂，包括酶性自由基清除剂，如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、Prion蛋白（PrPc）等;低分子自由基清除剂，如维生素C、维生素E、谷胱甘肽等；其他如甘露醇、糖皮质激素等。
有研究表明，褪黑素（Melatonin MT）能够清除羟自由基、过氧亚氮阴离子、降低单线态氧毒性和自由基引起的脂质过氧化反应，是有效的自由基清除剂和间接抗氧化剂，具有较好的神经元保护作用[1-2]。
Cesario等[3]通过体内外实验观察发现，褪黑素的减轻脑缺血再灌注损伤作用，还与其对胶质细胞的保护作用有关，且胶质细胞对治疗比神经元更敏感。
自噬与脑缺血_再灌注损伤的研究进展_李春明
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81202759）作者单位：200433上海，第二军医大学长海医院中医系通信作者：周爽，Email：zhoushuang8008@163．com ·综述·自噬与脑缺血-再灌注损伤的研究进展李春明舒适钱小路尤艳利宋慧敏周爽关键词：自噬；再灌注损伤；综述；脑缺血再灌注doi：10.3969/j.issn.1672-5921.2015.06.0121955年，比利时科学家Christian deDuve通过透射电子显微镜观察到了自噬体结构，并在1963年的溶酶体国际会议上首先提出了细胞自噬的概念，认为自噬在脑缺血-再灌注损伤（ischemia-reperfution injury，I/Ｒ）中发挥重要作用［1-2］。
然而，在I/Ｒ发生的过程中，自噬究竟是发挥保护性作用还是损害作用一直存在争议。
笔者就自噬在I/Ｒ中的作用综述如下。
1自噬概述自噬是广泛存在于真核细胞生物中的一种细胞自我吞噬现象，是细胞在生理或病理因子作用下，由内质网或高尔基体等来源的双层膜包裹蛋白质和细胞器降解物形成自噬体［3-4］，与溶酶体结合形成自噬溶酶体并进行多种酶的消化及降解，分解的氨基酸、核苷酸、游离脂肪酸等可被细胞再利用，以满足代谢需要和实现某些细胞器的更新［1］。
根据其生理功能以及底物进入溶酶体途径的不同，可将细胞自噬分为巨自噬（macroautophagy）、微自噬（microautophagy）和分子伴侣介导的自噬（chaperone-mediated autophagy）3种类型，它们在分子机制和功能方面各不相同，巨自噬在真核细胞中普遍存在，学者们对巨自噬的研究也最为全面和深入，因此巨自噬即通常所说的“细胞自噬”。
自噬的发生过程可以划分成4个独立而又连续的步骤：（1）接受自噬诱导物的刺激并诱导自噬；（2）自噬体的形成；（3）自噬体与溶酶体膜的融合；（4）自噬体的降解。
《2024年丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及机制研究》范文
《丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及机制研究》篇一一、引言脑缺血再灌注损伤是临床常见的神经系统疾病，其病理机制复杂，涉及多种细胞因子和信号通路的相互作用。
丁苯酞作为一种具有广泛药理活性的化合物，近年来在神经保护领域备受关注。
本研究旨在探讨丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及其潜在机制。
二、材料与方法1. 实验动物与分组实验选用健康成年SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、丁苯酞预处理组和对照组。
2. 脑缺血再灌注模型建立采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型。
3. 丁苯酞预处理及给药方式在模型建立前，丁苯酞预处理组大鼠接受丁苯酞预处理。
4. 神经功能评分及指标检测通过观察大鼠的神经功能评分、脑组织病理学检查、神经元凋亡检测等指标，评估各组大鼠的神经功能恢复情况。
5. 实验设计与统计学分析实验设计遵循随机、对照、重复的原则，数据采用SPSS软件进行统计分析。
三、实验结果1. 神经功能评分丁苯酞预处理组大鼠的神经功能评分明显低于模型组，提示丁苯酞预处理能够显著改善大鼠的神经功能。
2. 脑组织病理学检查丁苯酞预处理组大鼠的脑组织病理学改变较模型组轻微，提示丁苯酞预处理对脑组织具有保护作用。
3. 神经元凋亡检测丁苯酞预处理组大鼠的神经元凋亡率较低，表明丁苯酞预处理能够抑制神经元凋亡。
4. 机制研究通过检测相关信号通路及细胞因子的表达，发现丁苯酞预处理可能通过抑制炎症反应、抗氧化、调节细胞凋亡等途径发挥神经保护作用。
四、讨论本研究结果表明，丁苯酞预处理能够显著改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能，减轻脑组织病理学改变，抑制神经元凋亡。
机制方面，丁苯酞可能通过抑制炎症反应、抗氧化、调节细胞凋亡等途径发挥神经保护作用。
这些发现为丁苯酞在神经保护领域的应用提供了理论依据。
然而，本研究仍存在一定局限性。
首先，实验样本量较小，可能影响结果的稳定性。
其次，实验未对丁苯酞的最佳预处理时间及剂量进行深入探讨。
改良式大鼠全脑缺血再灌注模型的制作及海马回核因子-κB的表达研究
ｈ海马 Ｃ １区苏木精 一伊红 （ Ｅ 染 色的病理改变 ；免疫组织化学法检 测 Ｎ Ａ Ｈ ） Ｆ—Ｋ Ｂ的表达 。结果
５％，Ｂ组成功率为７％ ， ５ ０ Ｃ组成功率为９％，３ ０ 组造模成功率间差异有统计学意义 （２ ６０ ，Ｐ＜ ．５ ，ｃ组的 Ｘ ＝ ．７ ００ ）
造 模 成 功 率 高于 Ａ、Ｂ组 ，差 异 有 统 计 学 意 义 （ ０ ０ ） Ｅ 染 色显 示再 灌 注后 海 马 区神 经 元 大量 坏 死 ；Ｓ Ｐ＜ ． ５ 。Ｈ Ｏ组 Ｎ Ｆ—
Ｙ Ｎ ｈｎ ｇ ａ ｇ ＵＫ ， Ａ ＧＳ ｅｇ— ｕ ｎ ，Ｓ ｅ
ｈ ｎ ５１ ０３， Ｃｈｉａ ｅ ８１ ｎ
Ｙ ｈ— ｉ ｔ １ Ｄｐ ｒ ｅｔｆＥ ｒｅｃ ，Ｆ ｙｎ ｅｐｅ ｏ ｉ ｌｆＳｅｚｅ ，Ｓ ｅｚ ａ ｘ，ｅ ａ． ｅａｔ ｎ ｏ ｍ ｇｎｙ ｕｏｇＰ ｏｌＳ ｓ ｔ ｈｎｈｎ ｈｎ— ｍ ｅ Ｈ ｐ ａｏ
Ｋ ｐ５表达在胞质 中，ＩＲ组 ３ｈ胞核 中就有表 达，１ 高峰 ，到 ２ ４ 都 表达在胞核 中，与 ｓ Ｂ６ ／ ２ｈ达 ４ｈ和 ８ｈ ０组 比较差异有
统计 学意 义 （ ０ ０ ） Ｐ＜ ． １ 。结 论 改 良后 的 四血 管 阻塞 建 模 法 简单 、经 济 、成 功 率 高 ，值 得 推 广 。 通 过 成 功 模 型 证 实全
ｃｅｓ ｅＳ ＣＥ Ｓ ａ ｆ ｏ ｅｉ ｎ ｅ ｒ ｉｅｔｅｅ ｐｅｓ ｎ ｏ ｎ ｃ ａ ｃ ｒ ａ ｐ Ｂ （ Ｆ—Ｋ ）ｉ ｉ ｏａ ｕ ． Ｍｅｈ ｒａｅｔ Ｕ Ｃ Ｓ ｒｔ ｏ ｄ ｌ ｇａ ｄｄ ｔ ｍ ｎ ｘ ｒｓｉ ｆ ｕ ｌ ｒ ａｔ —ｋ ｐ ａ Ｎ ｈ ｅ ｍ ｎ ｅ ｈ ｏ ｅ ｆ ｏ Ｂ ｎｈｐ ｃｍｐ ｓ ｐ ｔ－ ｏ ｓ Ｎ ｎ ｔ ａ ｕ Ｄ ｒｔ ｗ ｒ ｉｉ ｄ ｉｔ ｇｏ ｐ ｅｔ ｒｌ ｒ ｒ ｅ ｃ ｏ ｏ ｇ ｌｔ ｎ （ ｒｕ ，ｖｒ ｂａ ａ ｅ ａ ａ ｅ ｄ ｉｅ ｌ ｈ Ｓ ａｓ ｅｅ ｄ ｄ ｎｏ ｒｕ ｓｖ ｒ ｂ ａ ａ ｅ ｌ ｔ ｃ ａ ｕａ ｏ ｇｏ ｐ Ａ） ｅ ｅ ｒｌ ｒ ｒ ｄ ｍ ｇ ｙ ｄ ｖ ｅ ｅ ｔ ｙ ｅ ｒ ｉ ｔ ｔｙ
缺血再灌注的实验原理
缺血再灌注的实验原理缺血再灌注是指在一段时间内，组织或器官遭受缺血（血液供应不足）后，再次供应血液的过程。
这个过程中会引起一系列的病理生理学变化，对于研究机体的对缺血和再灌注的适应和损伤机制具有重要的意义。
缺血再灌注的实验原理主要包括以下几个方面：1. 缺血模型的建立：缺血再灌注实验的第一步是建立缺血模型。
常用的方法包括结扎、缩窄或堵塞供应血管等手段，使组织或器官在一段时间内得不到足够的血液供应。
常用的实验动物包括小鼠、大鼠和兔子等。
2. 缺血时间的控制：缺血的时间是实验中的关键因素之一，不同的缺血时间会引起不同程度的损伤。
通常情况下，短时间的缺血（如15分钟）可以模拟暂时性缺血，而长时间的缺血（如1小时以上）则会导致严重的缺血损伤。
在实验过程中，可以通过监测血流或组织氧分压等指标来控制缺血的时间。
3. 再灌注的时间和方式：在缺血一定时间后，再灌注是恢复组织或器官正常功能的关键步骤。
通常，再灌注可以通过解除结扎、放松或恢复供应血管等方式进行。
再灌注的时间和方式也会对实验结果产生影响，因此需要根据实验目的进行合理选择。
4. 生理指标的监测：在缺血再灌注实验过程中，可以通过监测一系列生理指标来评估实验结果。
包括血流量、血液氧分压、血液乳酸水平、组织或细胞损伤指标（如丙氨酸氨基转移酶、肌酸激酶等）等。
同时，还可以通过组织病理学检查来观察组织结构的变化和损伤程度。
5. 病理生理学变化的分析：通过对实验结果的分析，可以了解缺血再灌注对组织和器官的损伤程度以及机体的适应能力。
例如，长时间的缺血再灌注可以引起严重的组织坏死和炎症反应，而短时间的缺血再灌注则可以触发组织保护性的适应机制，如激活细胞凋亡、抗氧化反应等。
综上所述，缺血再灌注实验是一种常用的研究手段，通过建立缺血模型及控制缺血时间和再灌注方式来模拟缺血再灌注损伤，通过监测各种生理指标和分析病理生理学变化来研究机体对缺血再灌注的适应和损伤机制。
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总动脉， 套线备用。 同时枕部切口（ 颈部前倾 ３。利于手术部 ０， 位的暴露）借助手术显微镜分离暴露第一颈椎横突翼并找 ，
多 ， 国外四血管阻断法、 二血管阻断加低血压法均有应用
・６ ８ ・ ８
Ｐ ｏ ｅ ｄ ｎ ｆＣｌ ｉａ ｅ ｉｉ ｅ， ｅ ． ０ １ Ｗｏ ０ Ｎｏ ９ ｒ ｃ ｅ ｉ ｇ ｏ ｉ ｃ ｌＭ ｄ ｃｎ Ｓ ｐ ２ １ ， ｌ２ ． ｎ
缺血性脑损伤的机制进行了大量的研究， 脑是一个血流量
大、 代谢旺盛的器官， 其功能几乎全靠葡萄糖的氧化代谢。 心
脏骤停后引起的脑损害的病理生理主要是缺血缺氧性脑损 伤以及自主循环恢复后的大脑缺血再灌注损伤， 其中涉及兴 奋性氨基酸的神经毒性、 钙离子稳态失调、 神经元凋亡等机
制＿ 。所以心肺复苏的最终目的是脑复苏。 ４ ］
左右横突孔（ 椎动脉在人脑前从此孔下通过）将灼热的电烙 ，
铁尖头（ 直径 ０ ５ ｍ） ． ａ ｒ 直接插入翼突孔， 深度以 ２ ｍ为 ～３ ｍ
血流。经 Ｈ Ｅ染色后在光镜下观察海马组织及顶叶皮质， 正
常大鼠神经元细胞排列规则 ， 胞质丰富， 核呈圆形， 核仁清
楚； 实验大鼠病理改变明显， 可见大量神经元坏死变性 ， 排列
产生和钙超载导致了缺血再灌注损伤。 所以近年来围绕心肺 脑复苏的保护机制及其方法成为专家学者们研究的热门， 而 建立有效、 稳定的全脑缺血再灌注模型是实验研究的基础。
夹， 去除双侧颈总动脉的夹闭， 回输血液， 此为再灌注期。
１４ ｕ ｉ ｌ 四血管法及改良的四血管法建立大鼠全脑缺 ． Ｐ ｌｎ ｌ ｓ ｅｉ 针对建立全脑缺血再灌注模型的实验方法有多种， 包 血再灌注模型 括： 二血管阻断加低血压法、 四血管阻断法、 三血管阻断法、 四血管阻断法［ ］ ８ 主要是在颈前正中切口， 分离双侧颈
髓腹侧面上的基底动脉 ， 通过双侧颈总动脉的关闭和开放实
现全脑缺血再灌流。 １６ 颈动脉负压分流法制作大鼠全脑缺血再灌注模型 ． 颈动脉负压分流法Ｅ ，］ １１ 制模： ３４ 采用水合氯醛腹腔麻醉 （５ ｇｋ ）取颈部正中切 口， ３０ ／ｇ ， ｍ 分离左右颈总动脉及右颈外 动脉 ； 另取左侧腹股沟部切口， 分离左股静脉并置管与输液 器相连， 从左股静脉注入肝素（８ 后缓慢注入生理盐水 ； １０ｕ）
颈静脉回抽血液， 当平均动脉压达 ３￣４ ｍ Ｈ （ ｍ ｇ ５ ０ｍ ｇ １ ｍ Ｈ
一
０１３ Ｐ ） 用微型动脉夹夹闭双侧颈总动脉， ．３ ａ 时， ｋ 此为缺血
期开始。期间经颈静脉回抽放血或静脉注射回输血液保持平
均动脉压在 ３ ￣４ ｍ Ｈ 。１ ｉ缺血期后移去微型动脉 ５ ０ ｇ ５ ｎ ｍ ａ ｒ
２２３ 三血管阻断法 ．．
优点 ： 成功率高， 缺血指标的观察明确简单； 可根据实验
需要， 通过阻断 Ｃ Ａ时间的长短控制脑缺血的程度。 Ｃ 缺点 ： 手术难度较大， 对实验者的要求较高， 故可行性不
高； 在手术过程 中对周围组织牵拉严重， 在恢复血流时会受
影响。 优点： 不改变脑血管的主要解剖结构， 不影响基底动脉
用及报道 ， 但更偏向于后者。 ２２ 简述各种建模方法的特点 ．
１５ 三血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型 ． 采用三血管阻断法１ ． 建立全脑缺血再灌注模型：０ １ 。 ２％ 乌拉坦 １ ０ ｇｋ 腹腔麻醉， ０ｍ ／ｇ ０ 经颈正 中切 口， 分离双侧颈 总动脉备用， 剪去枕骨腹侧面部分颅骨， ５０ 用 － 丝线结扎延
用微动脉夹夹闭两侧颈总动脉， 从右颈外动脉向近心端插入
２２１ 二血管阻断加低血压法 ．．
优点： 操作简便 ， 用一次性手术即可完成 ， 阻断完全可 逆， 可人为控制动物呼吸； 可模拟临床上休克、 心功能不全、
脑血管严重狭窄或阻塞合并血液低灌流引起的脑循环障碍， 造成不同程度的脑组织缺血损伤， 对于探讨人类缺血性脑损
大量研究旨在寻找可减轻或预防脑缺血再灌注损伤的 方法或药物， 并且已经在动物模型上获得一定成功， 但是这
型：０ １ ％水合氯醛（５ ｇｋ ） ３０ ／ｇ 腹腔注射麻醉， ｍ 分离暴露右侧 股动脉， 行股动脉插管， Ｂ 一２ 生物机能记录系统监测动 接 Ｌ ４０ 脉血压。颈正中切Ｅ， ｌ分离双侧颈总动脉及作侧颈静脉， 经左
输， 注意保持抽血速度与输入速度相等。 持续抽血 ３ ｉ 后 ０ ｎ ａ ｒ 停止抽吸血液， 拔出套管并结扎颈外动脉， 去除两侧颈总动
脉上的微动脉夹， 此为再灌注开始。
供血和实验结果。 ２２２ 四血管阻断法 ．． 优点 ： 缺血完全， 具有较强的可复制性 ； 检验缺血是否成
功 的指标 明确 。
临床 医 药 实 践
２１ 年 ９ 第 ２ ０１ 月 Ｏ卷 第 ９ 期
・６ ７ ・ ８
建 立 全 脑缺 血 再 灌 注 动 物模 型 的 实验研 究进 展
武 钊 刘佩 仪 文锐玲 林梓 豪 黎 允诗 黄伟 青 欧 阳斌 ， ， ， ， ， ，
（． 州 医学 院 检 验 系 ， 东 广 州 ５ ０ ８ ；． 州 医 学 院 第一 附属 医院 ， 东 广 州 ５０ ２ ） １广 广 １１２２广 广 １ １ ０
１ 制作全脑缺血再灌注动物模型及效果的判定
循环停止 ４ ｉ ～６ ｎ脑组织即可出现不可逆性损害口 。面对 ａ ｒ ］ 突如其来的心脏骤停 ， 目前最有效的治疗方法是心肺复苏。
但是即使复苏后， 心脏恢复了搏动， 但脑功能的恢复是心肺
复苏成功的关键。一般心脏停止搏动， 脑缺血、 缺氧立即发 生， 如超过 ４ ｉ 就可以出现不可逆的大脑损害。 ～６ ｎ ａ ｒ 心脏停
搏时间长， 如＞８ ｉ ｎ以上 ， ａ ｒ 大脑功能很难恢复， 成功率极小。 有学者研究认为， 心脏停搏后， ５ ％左右患者死于中枢神 约 ０
１１ 全脑缺血再灌注模型模拟心搏骤停 ． 在心肺复苏过程中， 脑损害的病理生理主要是缺血缺氧 性脑损伤以及自主循环恢复后的大脑缺血再灌注损伤， 其中 涉及兴奋性氨基酸的神经毒性、 钙离子稳态失调、 神经元凋 亡等机制ｌ 。心脏停搏引起完全性全脑缺血， ＿ ４ ］ 急性缺血缺氧 可造成细胞损伤， 恢复血循环后又可引起再灌注损伤。因此 全脑缺血再灌注造成的结构破坏和功能障碍是脑复苏的重 要病理生理过程。 目前主要是通过全脑缺血再灌注模型来模 拟心搏骤停， 即将头部的主要动脉进行阻断， 从而导致全脑 缺血， 营造出脑组织缺血缺氧的状况。 １２ 全脑缺血再灌注动物模型要求 ． 手术操作简便 ， 致死率低， 重复性好； 缺血效果好， 慢 急、 性缺血实验均可应用 ； 再灌注方便、 完全、 充分； 尽量能够保 持颅脑的完整性； 血液的流变性变化尽量要小ｌ 。 ＿ ７ ］ １３ 二血管阻断加低血压法建立大鼠全脑缺血再灌注模型 ．
正常大鼠大脑无肿胀， 脑沟脑回清晰， 皮质颜色较红润 ；
回变浅， 皮质颜色苍白； 表面血管塌陷， 血流少 ， 部分基本无
浅表血管丰富， 充盈好 ， 鲜红。实验组大脑肿胀明显， 脑沟脑 ２２４ 颈动脉负压分流法 ．．
临 床 医药 实 践
２１ ０ １年 ９月 第 ２ Ｏ卷 第 ９ 期
・６ ８９ ・
全 。
体形态、 脑沟脑回是否清晰、 皮质的颜色、 浅表血管的状态及
血管内的血流情况。在此基础上经苏木精一 伊红染色（ Ｅ ， Ｈ） 在光镜下观察海马组织及顶叶皮质， 主要观察神经元细胞的
形态及排列情况、 胞质的状态、 细胞核的形状及核仁； 光镜下 观察海马区神经元细胞密度。 １８ 实验大鼠与正常大鼠脑组织对比 ．
伤的发病规律， 评价抗脑缺血药物的疗效等有价值； 成模效
套管针至颈内动脉与颈外动脉的分叉处， 取出针芯， 套管接
三通与注射器相连， 持续抽吸颈总动脉内血液 ， 此为脑缺血
率较典型、 稳定， 可重复性好。 缺点： 模型不能在清醒动物上复制， 无法研究血管狭窄 后行为学的变化； 常因存在侧支循环而造成缺血不完全 ， 部 位不确定 ； 脑缺血时限长， 有时导致脑缺血后抽搐、 癫病等并
采用二血管阻断加低血压建立大鼠全脑缺血再灌注模
经系统损害， 即脑死亡。 即使心、 肺复苏成功， 生命保留， 仍约
有 ２ Ｏ ｏ Ａ～５ 左右存在着不同程度的脑功能障碍， ｏ 成为植物
状态（ 植物人） 或痴残等＿ 。 ２ ］ 在成功进行心肺复苏后有 ２％～４ 的患者遗留下永 ０ Ｏ 久性神经损害 。鉴于脑保护和脑复苏的重要性， ］ 近年来对
大鼠（ 也可在清醒状况下手术）颈部常规消毒， ， 打开颈前正 中切 口， 将套在双侧颈总动脉下的备用线结扎， 根据实验需 求可阻断血液流动 ｌ～６ ｉ， Ｏ ０ ｎ 松开结扎线后可实行再灌注 ａ ｒ
研究 。
２１ 建立全脑缺血再灌注模型的方法 ． 脑复苏中存在全脑缺血再灌注损伤， 而对脑缺血再灌注 损伤的研究仍然是急诊医学中的重点， 脑缺血再灌注模型的 制作则是研究工作的重要环节。 全脑缺血再灌注模型制作方 法有很多种： 四血管阻断法， 二血管阻断加低血压法， 三血管 阻断法， 颈动脉负压分流法。国内文献报道用四血管阻断法 比较多， 国外四血管阻断法、 二血管阻断加低血压法均有应
侧颈静脉插管， 建立给药途径， 静脉注射肝素 １０Ｕ／ｇ经左 ５ ｋ 。 Ｉ
些方法和药物很少能成功用于临床。 缺血预处理对心脏和神
经系统缺血再灌注损伤具有明显的保护作用， 但是在临床实 践中预处理只适用于缺血再灌注可预期的情况 。 尽快恢复灌
注是减轻缺血导致的损伤和行为障碍的最有效方法， 然而再 灌注也可能加重损伤。在再灌注早期， 大量活性氧自由基的
１７ ． 全脑缺血再灌注后开颅取脑组织进行观察 将完成缺血再灌注实验的大鼠进行开颅并取其完整的
大脑组织 ， 进行形态学观察。 主要观察项如下： 大脑组织的整