目的基因PCR扩增产物的克隆
扩增目的基因实验报告
扩增目的基因实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是通过聚合酶链式反应（PCR）技术扩增特定的目的基因，以便后续的基因分析、克隆和表达等研究工作。
二、实验原理PCR 技术是一种在体外快速扩增特定 DNA 片段的方法。
其基本原理基于 DNA 半保留复制的机制，通过高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤的循环进行。
在高温下，双链 DNA 模板解链成为单链；在低温下，引物与单链模板结合；在适温下，DNA 聚合酶以引物为起始点，沿着模板链合成新的 DNA 链。
经过多次循环，目的基因得以大量扩增。
三、实验材料与设备1、材料模板 DNA：含有目的基因的基因组 DNA 或 cDNA 片段。
引物：根据目的基因的序列设计的一对特异性寡核苷酸引物。
dNTPs（脱氧核糖核苷三磷酸）：包括 dATP、dCTP、dGTP 和dTTP。
Taq DNA 聚合酶。
PCR 缓冲液。
无菌去离子水。
2、设备PCR 仪。
微量移液器。
离心管。
电泳仪。
琼脂糖凝胶。
四、实验步骤1、反应体系的配制在无菌的离心管中，依次加入以下成分：模板 DNA：＿____ng上游引物：＿____μM下游引物：＿____μMdNTPs：各_____mMTaq DNA 聚合酶：＿____U10×PCR 缓冲液：＿____μL无菌去离子水补足至总体积_____μL2、 PCR 反应条件设置预变性：95°C 5 分钟变性：95°C 30 秒退火：根据引物的退火温度，一般为 55 65°C 30 秒延伸：72°C 30 秒 1 分钟（根据目的基因的长度而定）循环次数：一般为 30 35 个循环终延伸：72°C 5 10 分钟3、 PCR 产物的检测配制 1 2%的琼脂糖凝胶。
取适量的 PCR 产物与上样缓冲液混合，点样于琼脂糖凝胶的加样孔中。
以适当的电压进行电泳，观察 PCR 产物的条带。
五、实验结果与分析1、电泳结果经过电泳，在凝胶成像系统中观察到了预期大小的条带，表明目的基因成功扩增。
同源序列法克隆目的基因
同源序列法克隆目的基因同源序列法克隆是一种常用的基因克隆方法，用于获取目的基因的DNA序列。
同源序列法克隆的主要步骤如下：1. 设计引物：根据已知目的基因的序列，设计一对引物（即寡核苷酸片段），其中一个引物具有与目的基因的5'端相互匹配，另一个引物具有与目的基因的3'端相互匹配。
2. 提取模板DNA：从包含目的基因的源生物体中提取总DNA 或特定组织/细胞中的DNA作为模板。
3. 聚合酶链反应（PCR）扩增：在PCR反应中使用设计的引物和模板DNA来扩增目的基因的DNA序列。
PCR反应通过多次循环加热和冷却来产生大量DNA复制品。
4. 凝胶电泳分析：将PCR扩增产物与分子量标记物一起加载在琼脂糖凝胶上进行电泳分离。
通过比较扩增产物与标记物在凝胶上的迁移距离，可以确定是否成功扩增了目的基因。
5. 纯化目的基因：从PCR反应中纯化目的基因的扩增产物，一般使用凝胶切片、DNA纯化试剂盒等方法。
6. 连接到载体：将纯化的目的基因DNA与适当的载体（如质粒）进行连接。
这通常涉及酶切目的基因和载体的DNA，然后使用连接酶将它们连接在一起。
7. 转化宿主细胞：将连接的DNA导入宿主细胞中，使其自行复制和表达。
这可以通过转染、电穿孔或热激冲等方法实现。
8. 筛选与鉴定：通过对转化后的细胞进行选择性培养或检测，筛选出带有目的基因的克隆。
常用的筛选方法包括抗生素筛选、荧光筛选等。
9. 验证目的基因：最终需要验证克隆中是否成功插入了目的基因。
这可以通过DNA测序、限制性酶切、PCR等方法来进行。
同源序列法克隆是一种有效的基因克隆技术，可用于获得感兴趣的基因序列并进一步研究其功能、表达和调控机制等。
基因克隆的一般程序
基因克隆的一般程序
基因克隆通常包括以下步骤：
1.选择一个目标基因，并设计引物：在开始之前选择要克隆的
基因，并设计引物。
引物通常包括两个寡核苷酸序列，它们与目标基因的两端相匹配，并且在引物的末端含有限制性内切酶识别位点。
2.将目标基因PCR扩增：使用引物进行PCR扩增，从而扩增
目标基因。
PCR扩增过程中，添加限制性内切酶识别位点的
引物，则可以获得含有限制酶切割位点的PCR产物。
3.剪切PCR产物：将PCR产物用限制性内切酶进行切割，因
为PCR产物含有限制性酶切割位点，因此可以选择正确的限
制性内切酶来切割。
4.连接载体：将PCR产物和质粒（或其他载体）用T4 DNA
连接酶连接在一起。
质粒通常被用作载体，因为它们可以在细胞内稳定复制。
5.转化：将连接好的质粒导入大肠杆菌等推动器中，并将其生
长在培养基上，以让它们自我复制。
6.筛选克隆：使用蓝白斑筛选法确定哪些细菌含有转化的基因。
该方法利用质粒上的LacZ基因，这可以使含有原核素三硝基
甲酸的菌落变成蓝色，而不含此基因的细菌则是白色的。
7.确定序列：将可能的克隆 DNA 提取出来，然后将其进行测序，从而确定克隆基因的精确序列。
8.表达蛋白质：克隆基因的表达，可以用来表达蛋白质。
这可以通过让此基因插入到一个表达载体中来完成，然后将其转化至宿主细胞中，也可对其进行人工表达分析。
基因克隆具体实验报告
一、实验目的1. 学习基因克隆的基本原理和方法。
2. 掌握PCR扩增、酶切、连接等基因克隆实验技术。
3. 验证目的基因的克隆是否成功。
二、实验原理基因克隆是指将目的基因片段从基因组中分离出来，并插入到载体中，使其在宿主细胞中复制、表达的过程。
实验过程中，主要涉及PCR扩增、酶切、连接、转化、筛选等步骤。
三、实验材料1. 模板DNA：含有目的基因的基因组DNA。
2. 引物：根据目的基因序列设计的上下游引物。
3. Taq DNA聚合酶：用于PCR扩增。
4. 酶切体系：限制性内切酶、缓冲液、连接酶等。
5. 连接载体：线性化载体。
6. 转化宿主菌：大肠杆菌DH5α。
7. 筛选培养基：含抗生素的LB培养基。
8. PCR扩增试剂：10×PCR缓冲液、dNTPs、MgCl2等。
四、实验方法1. PCR扩增（1）设计引物：根据目的基因序列设计上下游引物，长度约为20-30bp，分别位于目的基因的上下游。
（2）PCR反应体系：取模板DNA 1μl，上下游引物各1μl，10×PCR缓冲液5μl，dNTPs 4μl，MgCl2 2μl，Taq DNA聚合酶0.5μl，加ddH2O至50μl。
（3）PCR反应程序：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环，最后延伸10min。
2. 酶切连接（1）酶切：取PCR产物5μl，加限制性内切酶（如EcoRI）1μl，10×酶切缓冲液2μl，ddH2O 2μl，混匀后置于37℃水浴酶切2h。
（2）连接：取线性化载体5μl，酶切产物5μl，10×连接缓冲液2μl，T4 DNA 连接酶1μl，混匀后置于16℃连接过夜。
3. 转化（1）制备感受态细胞：将大肠杆菌DH5α在LB培养基中培养至对数生长期，按照1:100的比例加入CaCl2，混匀后冰浴30min。
（2）热激转化：将连接产物加入感受态细胞中，混匀后置于42℃水浴45s，迅速转移至冰浴中。
目的基因T载体克隆实验步骤
目的基因T载体克隆实验步骤目的基因T载体克隆实验步骤PCR产物的T载体克隆一. 重组质粒的构建：重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg切的载体分子与外源DNA分子进行连接。
DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。
两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。
但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。
T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。
连接反应通常将两个不同大小的片断相连。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。
pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。
这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。
但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。
因此采取折中的温度，即12-16℃，连接12-16h（过夜），这样既可最大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。
2 、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶二. 感受态制备原理细菌在0 C CaCl2低渗溶液中胀成球形，丢失部分膜蛋白，成为容易吸收外源DNA的状态。
三. β-半乳糖甘酶显色反应选择法（蓝白筛选）原理 LacZ基因是大肠杆菌乳糖操纵子中的一个基因，可以编码β—半乳糖核苷酶。
同源序列法克隆目的基因 -回复
同源序列法克隆目的基因-回复同源序列法克隆目的基因，是一种通过引入同源序列来克隆特定目的基因的方法。
在这篇文章中，我们将逐步回答什么是同源序列法克隆目的基因，为什么使用同源序列法克隆目的基因，以及如何利用这种方法来克隆目的基因。
一、什么是同源序列法克隆目的基因同源序列法克隆目的基因是一种利用已知的同源序列来寻找和克隆特定目的基因的方法。
同源序列指的是在不同物种或同一物种中不同基因间具有部分相似性的DNA序列。
这些同源序列在进化过程中保留下来，其存在可以起到指导相同或类似基因的功能和表达的作用。
因此，通过利用已知的同源序列，研究人员可以迅速准确地寻找并克隆目的基因。
二、为什么使用同源序列法克隆目的基因1. 提高克隆效率：同源序列法可以利用已知的同源序列来辅助基因寻找和克隆，大大提高了克隆的效率。
相比于传统的克隆方法，同源序列法可以节省大量的时间和实验成本。
2. 降低错误率：由于同源序列在不同物种或同一物种中不同基因间具有部分相似性，利用同源序列进行克隆可以降低基因寻找的错误率。
同源序列可以帮助确定目的基因的大致位置，并提供设计引物和克隆步骤的依据，从而减少寻找目的基因过程中可能出现的错误。
3. 拓宽研究领域：同源序列法可以跨物种进行基因克隆，使得研究人员可以从其他物种中寻找和克隆目的基因。
这种方法可以为研究人员提供更多资源，丰富研究内容，拓宽研究领域。
三、如何利用同源序列法克隆目的基因1. 寻找同源序列：首先，研究人员需要确定目的基因所在的物种，然后在已知的同源序列数据库中寻找与目的基因相似或相关的同源序列。
常用的数据库包括GenBank、EMBL和DDBJ等。
2. 序列比对和分析：将寻找到的同源序列与目的基因的参考序列进行序列比对和分析，确定相似性和相关性的程度。
根据比对结果，可以选择最相似或相关的同源序列作为目的基因的起始点。
3. 引物设计：根据已选择的同源序列，在目的基因的起始点和末端设计引物，以便进行PCR扩增。
PCR产物克隆步骤以及注意事项
基因的克隆测序步骤以及注意事项一、DNA目的片段的扩增反应体系：cDNA（gDNA）2.0μL10×Buffer 2.0μLMg2+ 1.6μLdNTPs 1.2μL引物F 0.6μL引物R 0.6 μLTaq polymerase 0.3μLddH2O 11.7μLTotal 20μL加适量石蜡油，扩增反应在PTC-220 Tetrad Thermal Cycler (MJ Research)上进行。
PCR反应程序：94℃ 3 min94℃30 s55℃*40 s 33cycles72℃1kb/1 min72℃10 min4℃保存*：PCR退火温度由引物序列（GC含量）决定。
二、琼脂糖凝胶电泳检测（1）1g的琼脂糖倒入装有100mL NEB的三角瓶中。
（一般0.2g琼脂糖加20ml 水可以倒1/4面平板）（2）微波炉加热至澄清无气泡，稍微冷却加1-2滴EB染色液（）（3）将胶倒入装置好的电泳托盘中，冷凝后放入电泳槽。
（4）点样，90V-120V，20min左右。
（5）电泳结束后置于凝胶成像仪下观察拍照。
三、片段的回收（1）在紫外灯下切下含目的DNA的琼脂糖胶块，放入1.5mL的管中。
（2）按每100mg琼脂糖加入300μL DE-A液（溶胶液）的比例加DE-A液，置75℃6~8min，每2min颠倒一次离心管，直至胶块完全溶化（当目的片段小于400bp时，加入1/3 DE-A体积异丙醇。
当目的片段大于400bp时，可省略此步骤）。
（3）加入1/2 DE-A体积的DE-B溶液，混合后转入吸附柱，12000g离心30s，倒去下管中的液体。
（4）在吸附柱中加入500μL W1液（洗涤液），12000g离心30s，倒去下管的液体。
（5）再在吸附柱中加入700μL W2液，静置1min，12 000g离心30s，倒去下管中的液体。
重复一次。
（6）12000g离心1min。
（7）将吸附柱取出放入一个干净的1.5mL的离心管中，在吸附膜中央加入20μL TE，静置1min后（或稍长），12000g离心1min。
目的基因扩增实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景聚合酶链式反应（PCR）是一种体外扩增特定DNA序列的方法，广泛应用于分子生物学领域。
目的基因扩增实验是分子生物学实验中的一项基本技能，通过PCR技术可以将微量的目的基因片段扩增到足够数量，便于后续的基因克隆、基因表达、基因测序等研究。
本实验旨在通过PCR技术扩增目的基因片段，并对扩增结果进行鉴定。
二、实验目的1. 掌握PCR技术的基本原理和操作步骤；2. 学会设计引物和优化PCR反应条件；3. 通过琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行鉴定。
三、实验材料1. 实验试剂：PCR试剂盒、dNTPs、Taq DNA聚合酶、DNA模板、上下游引物、10×PCR缓冲液等；2. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、移液器、恒温水浴箱等；3. 实验耗材：无菌离心管、DNA纯化柱、琼脂糖凝胶、电极等。
四、实验方法1. 引物设计：根据目的基因序列，设计特异性引物，确保扩增片段长度适中，避免非特异性扩增。
2. PCR反应体系配置：按照PCR试剂盒说明书配置PCR反应体系，包括模板DNA、上下游引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶、10×PCR缓冲液等。
3. PCR反应程序：根据实验目的和引物Tm值，设计合适的PCR反应程序，通常包括预变性、变性、复性、延伸等步骤。
4. PCR反应：将配置好的PCR反应体系放入PCR仪中，按照预定的PCR反应程序进行扩增。
5. 琼脂糖凝胶电泳：将PCR扩增产物与DNA Marker进行琼脂糖凝胶电泳，观察扩增产物条带。
6. 结果分析：根据电泳结果，判断目的基因是否成功扩增，并分析扩增产物的大小和纯度。
五、实验结果1. 电泳结果：在琼脂糖凝胶电泳中，观察到目的基因片段的条带，其大小与预期结果相符。
2. 结果分析：根据电泳结果，可以确定目的基因成功扩增，扩增产物大小为预期值。
六、实验讨论1. 引物设计：引物设计是PCR实验成功的关键因素之一，需要根据目的基因序列设计特异性引物，避免非特异性扩增。
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目的基因PCR扩增产物的克隆
[实验原理]
1.PCR产物回收
在高离子盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗、离心的步骤去蛋白液和漂选液，将引物、核苷酸、蛋白酶等杂质去除，最后用低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
2.T载体与PCR产物的连接
源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。
重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。
DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。
两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA 分子连接起来。
但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。
T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。
连接反应通常将两个不同大小的片断相连。
因为DNA片断有两个端点，所以切割时出现两种可能，一种是单酶切，另一种是双酶切，这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。
对于单酶切来说，载体与供体的末端都相同，连接可以在任何末端之间进行，这样就导致了大量的自连接产物。
为了减少自环的高本底，可对载体进行5’除磷酸处理，原理是连接酶只能连接DNA 片断的3’OH末端与5’端，所以除磷后载体不会自环。
一旦有外源片断插入时，由外源片断提供5’端就能与载体进行连接。
通过这种方法可大大减少由载体的自身成环造成的高本底。
对于双
酶切来说，无论载体与供体同一片段上都有不同的末端，这样就避免了载体与供体的自环，能使有效连接产物大大增加。
双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。
连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。
但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。
因此采取折中的温度，即12-16℃，连接12-16h（过夜），这样既可最大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。
Taq DNA酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基，可以与T -Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。
[实验材料、试剂和仪器]
PCR扩增相关试剂、PCR仪、移液枪、低温离心机、琼脂糖凝胶电泳系统、凝胶成像系统、PCR产物回收试剂盒、pUCm-T载体。
[实验步骤]
1．PCR扩增
PCR反应体系：
注：每组做5管，其中4管用于PCR产物回收，1管作电泳检测时的对照
PCR反应程序：
2．目的基因PCR扩增产物的琼脂糖电泳检测
（1）制备琼脂糖凝胶
称取0.2g琼脂糖，放入锥形瓶中，加入20ml 1.0×TBE缓冲液，置微波炉或水浴加热至完全溶化，取出摇匀，则为1%琼脂糖凝胶液。
（2）取有机玻璃内槽，洗净，晾干，用橡皮膏将有机玻璃内槽的两端边缘封好（一定封严，不能留缝隙）。
（3）将有机玻璃内槽放置于一水平位置，并放好样品梳子。
（4）将冷到60℃左右的琼脂糖凝胶液，缓缓倒入有机玻璃内槽，直至有机玻璃板上形成一层均匀的胶面（注意不要形成气泡）。
（5）待胶凝固后，取出梳子，取下橡皮膏，放在电泳槽内。
（6）加入电泳缓冲液至电泳槽中。
（7）用移液枪将已加入上样缓冲液的DNA样品加入加样孔中（记录点样顺序及点样量）。
（8）接通电泳槽与电泳仪的电源（注意正负极，DNA片段从负极向正极移动）。
DNA的迁移速度与电压成正比，最高电压不超过5V/cm。
当溴酚蓝染料移动到距凝胶前沿1~2cm处，停止电泳。
3．产物回收
（1）在紫外光下将琼脂糖凝胶上的目的片段切下，放入1.5 mL Eppendorf离心管中；加入500μl溶胶/结合液DB，充分混匀。
（2）将上一步所得溶液加入吸附柱AC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1 min，12000rpm 离心30-60s，倒掉收集管中的废液。
（3）加入700μl漂洗液WB，12000rpm离心1min，弃掉废液。
（4）加入500μl漂洗液WB，12000rpm离心1 min，弃掉废液。
（5）将吸附柱AC放回空收集管中，12000rpm离心2 min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
（6）取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热效果更好），室温放置2 min，12000rpm离心1 min。
如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱，离心1 min。
4．PCR产物与T载体的连接
对于常规的DNA ligase连接反应，请参考下面的连接反应体系，或按DNA ligase的说明书进行操作。
每个连接反应使用1μl pMD 18-T载体，约0.2pmol PCR产物，在10μl连接体系中4℃连接过夜或室温连接1h。
T4 DNA Ligase Buffer(2X) 5μl
Purified PCR Product 1μl
pMD 18-T Vector 1μl
T4 DNA Ligase (5-10U/微升) 1μl
ddH2O up to 10μl
5. 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)
① 挑取新鲜的E.coli.DH5α单菌落接种于一个含有10 ml LB液体培养基（不含抗生素）的试管中，于37℃恒温振荡（200 rpm）培养约4h(OD=0.2~0.4)，取出后立即将其冰浴10min。
② 在无菌条件下将冰浴后的菌液吸取1ml到冰冷的1.5ml无菌离心管中，于4℃下10000g 离心1min，回收细菌。
③ 每管中加入500 μl于4℃下预冷的CaCl2重悬沉淀，冰浴30min，于4℃下10000g离心1min，回收细菌沉淀物。
④ 每管加入200 μl冰预冷的CaCl2，混匀即为感受态细胞，置4℃冰箱备用。
6. 重组质粒转化大肠杆菌
① 取10 μl连接产物，加入内装100 μl感受态细胞的离心管中，轻弹管壁混匀，冰浴30 min。
② 42℃热击90s后，迅速将离心管冰浴3~5min。
③ 加入1 ml不含抗生素的LB液体培养基，混匀，于37 ℃下振荡培养（180 rpm）45 min。
④ 4℃下，10000 g，离心1 min，吸出500 μl上清液弃去，再混匀，取200 μl涂布于含有100 μg/ml氨苄青霉素的LB培养基平板上（事先涂布4μl浓度为200 mg/mg IPTG和20μl浓度为40 mg/ml X-gal），待菌液被培养基完全吸收后，倒置平板于37℃培养12~16h，直至出现单菌落。
再将培养皿置于4℃，使其完全显色（即出现蓝、白斑）。
⑤ 连接产物转化实验的同时，以等体积的ddH2O代替连接产物，其操作同上，分别涂布于含抗生素和不含抗生素的LB平板上，分别作为阴性对照和阳性对照。
7. 重组子克隆的鉴定（本部分视实验进程而定）
挑取可能含有目的片段的白斑，接种到5 ml LB/Amp液体培养基中，37℃ 220 rpm摇床培养过夜。
采用碱裂解法小量提取菌液质粒DNA，进行PCR扩增，检测PCR产物是否连接到载体中。
附：TBE电泳缓冲液的配制
5×TBE（5倍体积的TBE贮存液）
配1000ml 5×TBE：
Tris 54g
硼酸27.5g 0.5mol/l EDTA 20ml（pH 8.0）。