最新实验设计：卵清蛋白
做蛋清的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解蛋清的物理性质。
2. 掌握蛋清分离的方法。
3. 培养实验操作能力和科学思维。
二、实验原理蛋清是一种蛋白质，具有很高的营养价值。
在实验中，通过向蛋清中加入饱和的氯化钠溶液，可以使蛋白质变性，从而实现蛋清的分离。
本实验主要采用盐析法进行蛋清分离。
三、实验材料1. 鸡蛋（2个）2. 烧杯（2个）3. 玻璃棒（1根）4. 饱和氯化钠溶液5. 滤纸6. 秒表7. 记录纸四、实验步骤1. 将鸡蛋打破，将蛋清和蛋黄分离，分别放入两个烧杯中。
2. 将一个烧杯中的蛋清加入饱和氯化钠溶液，另一个烧杯中的蛋清加入蒸馏水作为对照组。
3. 使用玻璃棒轻轻搅拌，观察蛋白质的分离情况。
4. 记录分离所需的时间。
5. 将分离后的蛋清溶液用滤纸过滤，得到纯净的蛋清。
6. 比较两组蛋清的分离效果。
五、实验结果1. 加入饱和氯化钠溶液的蛋清分离时间为1分钟，而加入蒸馏水的蛋清分离时间为5分钟。
2. 加入饱和氯化钠溶液的蛋清分离效果较好，得到纯净的蛋清。
3. 加入蒸馏水的蛋清分离效果较差，部分蛋白质未分离。
六、实验分析1. 加入饱和氯化钠溶液的蛋清分离效果较好，是因为饱和氯化钠溶液中的高浓度盐离子可以与蛋白质发生盐析作用，使蛋白质变性，从而实现分离。
2. 加入蒸馏水的蛋清分离效果较差，是因为蒸馏水中盐离子浓度较低，无法使蛋白质变性，导致分离效果不佳。
3. 实验过程中，搅拌速度和力度对分离效果有一定影响。
适当加快搅拌速度和力度可以提高分离效果。
七、实验结论1. 蛋清分离实验表明，盐析法是一种有效的蛋清分离方法。
2. 饱和氯化钠溶液可以使蛋白质变性，从而实现蛋清的分离。
3. 实验过程中，搅拌速度和力度对分离效果有一定影响。
八、实验讨论1. 在实际生产中，可以采用盐析法进行蛋清分离，提高生产效率。
2. 实验过程中，可以尝试不同的盐浓度和时间，以优化分离效果。
3. 为了提高实验结果的准确性，可以增加实验次数，取平均值。
卵清白蛋白结构式-概述说明以及解释
卵清白蛋白结构式-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述卵清白蛋白，是一种重要的蛋白质，广泛存在于鸟类和爬行动物的卵黄中。
它是一种高营养价值的蛋白质，富含多种必需氨基酸，对人体健康具有诸多益处。
卵清白蛋白主要由几种不同的蛋白质分子组成，因此其化学结构复杂多样。
这些蛋白质分子在卵清白蛋白中扮演着重要的生物功能角色，如免疫调节、酶活性和携氧等。
在科学研究和食品工业方面，对卵清白蛋白的结构和功能研究具有重要的意义和应用前景。
本文将详细介绍卵清白蛋白的定义、特点、化学结构以及生物功能，以期加深对该蛋白质的了解，并展望其在未来的应用前景。
1.2文章结构文章结构：本文将分为引言、正文、结论三个部分进行论述。
1. 引言：1.1 概述：介绍卵清白蛋白是什么，为什么它具有重要性。
1.2 文章结构：概述文章的整体结构和各个部分的内容，引导读者了解本文的布局和内容安排。
1.3 目的：明确本文的写作目的和意义。
2. 正文：2.1 卵清白蛋白的定义和特点：详细介绍卵清白蛋白的定义、由来以及其在生物体中的特点和重要性。
2.2 卵清白蛋白的化学结构：探讨卵清白蛋白的化学组成、分子结构和空间构型，以及这些结构对其功能的影响。
2.3 卵清白蛋白的生物功能：阐述卵清白蛋白在生物体内的各种功能和作用机制，包括在细胞信号传导、抗氧化、解毒等方面的作用。
3. 结论：3.1 总结卵清白蛋白的重要性：回顾全文，强调卵清白蛋白在生物体内的重要性，并总结其主要功能和价值。
3.2 展望卵清白蛋白在未来的应用前景：探讨卵清白蛋白在医药、食品、化妆品等领域的应用前景，并展望其可能的发展方向。
3.3 结论：对全文进行总结，强调卵清白蛋白的学术研究和应用价值，提出进一步研究和探索的建议。
通过以上结构的设置，本文将全面深入地介绍卵清白蛋白的定义、化学结构和生物功能，展示其在生物体内的重要性和未来的应用前景。
同时，通过引言和结论的设置，突出文章的主题和重点，使读者更好地理解和吸收相关知识。
OIH1一种产自深海细菌Oceanobacillusiheyensis的酶
OIH-1:一种产自深海细菌Oceanobacillus iheyensis的酶姓名：顾渊学号：35 专业：应用生物科学目的：学习和把握基因工程和蛋白质工程的实验技术和技术，加深对理论课知识点的明白得与把握。
学会并把握基因和蛋白质工程实验现象的观看和记录、实验条件的判定和选择、实验数据的测量和处置、实验结果的分析和归纳等一套严谨的实验方式。
熟悉常常利用基因和蛋白质工程仪器设备的操作利用，标准地把握仪器设备的大体实验操作和技术。
本研究要克隆Oceanobacillus iheyensis细菌合成OIH-1的基因，并加以改造（如通过目的基因的改造，使靶蛋白在N端与一段先导序列结合以利于分泌），在体外构建重组质粒，并导入受体细菌，分离纯化靶蛋白并对靶蛋白进行活性分析。
意义：Oceanobacillus iheyensis是一种栖息在太平洋1050米深的海底的芽孢杆菌，属革兰氏阳性。
生物信息学分析及实际研究觉察其能产生一种β-内酰胺酶，OIH-1。
β-内酰胺酶能水解临床上重要的β-内酰胺类抗生素并使失活。
这是临床上病原微生物对抗生素产生抗性的要紧缘故。
与其他β-内酰胺酶不同的是，OIH-1是耐盐能力极强。
本实验选题新颖，海洋微生物代谢产物的研究是目前微生物学研究的热点，是十分前沿的研究领域。
但本实验的实验设计却都是十分基础的操作，所用到的仪器也都是以前用过的或容易学会的，深切浅出，难度适中。
既查验了学生前一时期理论和实验的熟练程度又开拓了同窗们的眼界，为同窗以后的进一步深造打下基础。
而且有前人的研究功效可资借鉴，实验的结果有保障。
包括基因工程与蛋白质工程的绝大多数实验技术。
本实验的研究方案也是参考几篇论文综合设计的，通过本实验，咱们能够了解从事基因与蛋白质工程的研究的大体实验设计思路和如何优化实验方案。
实验设备和材料设备：1.PCR仪、自动移液枪、微量滴定板、琼脂糖电泳仪2.电击仪、电击杯、冰浴盒3.离心机和转头：Sorvall SS-34、玻璃或聚丙烯层析柱、固化Ni2+层析树脂、蛋白质电泳仪4.紫外可见分光光度计、配套的吸收池（厚度1cm）材料：1.引物：oHF014：5’-GCGGATATCCCCGTAGAAAAGATCAAAGG-3’pHF016：5’-GTATCTGCAGAGCGCTGGCATTGACCCTG-3’oHF017：5’-GTTTCTGCAGTCAGGTGGCACTTTTCG-3’oHF018：5’-GGGAGATATCTCATGAACAATAAAACTGTC-3’2.模板DNApET24a（+）3.Taq酶4.缓冲液与溶液：10*扩增缓冲液、氯仿、四种dNTP贮存液（20mmol/L，pH ）5.琼脂糖凝胶电击转化时用到的材料大肠杆菌DH10B蛋白质分离提纯时用到的材料：β-lactamase标准品SDS-Page检测分析所要用到的试剂：1) 凝胶贮液：丙烯酰胺(Acr) 30g，甲叉双丙烯酰胺(Bis)，加水溶解，并加水定容到100ml，过滤。
实验设计：卵清蛋白
实验注意事项
1 2 3
蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉，分离效果不好。 • 蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率较低。一 般蛋白质浓度在2.5%～3.0%较适中。
蛋白质提取过程中须注意温度的控制，一般在20℃ 以下进行
调节等电点一定要准确，在本实验中，球蛋白和卵 清蛋白的等电点相差较小，若不准确，会导致蛋白 质不纯。
9 提取液
1.0 3.0
0 4.0 0
0.5 3.5 0.125
1.0 3.0 0.25
1.5 2.5 0.375
2.0 2.0 0.50
2.5 1.5 0.625
3.0 1.0 0.75
4.0 0 1.0
实验步骤
（二）蛋白提取液中蛋白质含量测定 1、提取液分别稀释1倍、10倍、20倍后，取待测蛋白质 溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出经稀释的待测 蛋白质的浓度。 排除干扰：将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm处分别测出A值，然后利用280nm及260nm下的 吸收差求出蛋白质浓度。 2.计算：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260 （式中A280和A260分别是该溶液在280nm和260nm波长下 测得的光吸收值）
.
弃上清液
实验步骤
二.卵清蛋白活性测定：
（一）紫外吸收法测定卵清蛋白的含量 1、标准曲线法 （1）标准曲线的绘制 按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。在280nm波长处分别测定各 管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂 标准蛋白溶液 /mL 蒸馏水/mL 蛋白质浓度 /mg/mL A280 1 2 3 4 5 6 7 8
卵清蛋白质实验报告
一、实验目的1. 了解卵清蛋白质的组成、结构和功能性质。
2. 掌握卵清蛋白质的提取、分离和纯化方法。
3. 学习蛋白质功能性质的检测方法。
二、实验原理卵清蛋白质是鸡蛋中的一种重要蛋白质，占鸡蛋蛋白质总量的60%左右。
卵清蛋白质具有丰富的氨基酸组成，营养价值高，是食品、医药和生物工程等领域的重要原料。
本实验主要研究卵清蛋白质的提取、分离、纯化和功能性质。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、硫酸铵、氯化钠、NaOH、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯乙酸、硫酸铜、酚酞指示剂等。
2. 仪器：离心机、冰箱、电子天平、pH计、电泳仪、紫外分光光度计、离心管、烧杯、移液器等。
四、实验步骤1. 卵清蛋白质的提取（1）将新鲜鸡蛋洗净，去壳取卵清。
（2）将卵清用玻璃棒搅拌均匀，加入适量硫酸铵，搅拌至蛋白质析出。
（3）将混合液离心（3000r/min，10min），收集沉淀。
（4）用蒸馏水洗涤沉淀，重复洗涤3次，弃去上清液。
（5）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，得到卵清蛋白质溶液。
2. 卵清蛋白质的分离（1）将卵清蛋白质溶液用pH计测定pH值，调节至7.0。
（2）加入适量氯化钠，搅拌至蛋白质析出。
（3）将混合液离心（3000r/min，10min），收集沉淀。
（4）用蒸馏水洗涤沉淀，重复洗涤3次，弃去上清液。
（5）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，得到分离后的卵清蛋白质溶液。
3. 卵清蛋白质的纯化（1）将分离后的卵清蛋白质溶液用NaOH调节pH值至8.0。
（2）加入适量乙醇，搅拌至蛋白质析出。
（3）将混合液离心（3000r/min，10min），收集沉淀。
（4）用蒸馏水洗涤沉淀，重复洗涤3次，弃去上清液。
（5）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，得到纯化后的卵清蛋白质溶液。
4. 卵清蛋白质的功能性质检测（1）吸水性：将纯化后的卵清蛋白质溶液滴在滤纸上，观察滤纸吸水情况。
（2）溶解性：将纯化后的卵清蛋白质溶液滴入蒸馏水中，观察溶解情况。
蛋清S-卵白蛋白研究进展
资助 项 目 料 通讯 作者 ： 关 湖 （９ ７ ） 男 ， 授 ， 士 ， 士 生 导 师 ， 马 １５ 一 ， 教 博 博
研 究 方 向 为 蛋 品 科 学 、 肉 类 理 论 与 加 工 利 用 。Ｅ— ｉ ｍａ ： ｌ
ｍ ｍｅ ｕ ｎ ａ ｏ ．ｏ ｃ 。 ａ ｉ ｈ ＠ｙｈ ｏｃｍ． ｈ ｎ
关键 词 ： 白蛋 白 ；一卵 白蛋 白 ； 成机 制 ； 卵 Ｓ 形 理化 特性
中 图分 类号 ：８９３ ￥７．
文 献标 识 码 ： Ａ
文章 编 号 ：６３ １８ （０ １０ — ０ １０ １７ — ０５ ２ １ ）８ ０４ — ６
蛋 清 含 ９７ １％ 蛋 白 质 ， 为 无 数 球 蛋 白 的 ．％～ ２
蛋清 一卵 白蛋 白研 究进展 ８
黄群， 马美 湖
（ 家蛋品加 ＿ ４ 国 Ｔ ￣术研发 分 中心 ， 中农 业 大 学食 品科 学技 术 学院 ， － 华 湖北 武 汉
４０７） ３００
摘 要 ：卵 白蛋 白是 蛋 清 中含 量 最 大的 主要 蛋 白 ，一卵 白蛋 白为天 然 卵 白蛋 白的 空 间构 象 Ｓ
等人 报 道 ，电泳技 术 检测 出 ３种 卵 白蛋 白亚 型组
分 ： ，２和 Ａ 。 区 别 在 于 分 子 的 磷 酸 基 数 量 不 Ａ１ Ａ ３ 同 ，卯 白 蛋 白 Ａ 、 ２ Ａ １ Ａ 、 ３分 别 含 有 ２ １ ０个 磷 酸 、、
基 （ ａ ｅ ｒ＆Ｎａｈ， ９ ３； ａ ｉ １ ９ ） Ｖ ｄｈａ ｔ １ ７ Ｚ ｂｋ， ９ ２
１１ 概 述 ．
卵 白蛋 白是 在 １０年 前 最 早 获 得 的 蛋 ０
基组 成 （ ｉ ｅ ｔ １８ ） 其 中 ５ ％以上 为疏 水氨基 Ｎｓ ｔ ，９ １ ， ｂｅ ０
卵清蛋白致敏大鼠支气管哮喘模型的制备
卵清蛋白致敏大鼠支气管哮喘模型的制备刘贵颖;刘文彬;张慧琪;朱振刚;刘?n;刘超武;常力;狄冠麟;田常宏;窦迎婷【摘要】目的建立卵清蛋白特异性致敏诱导的大鼠支气管哮喘模型.方法 20只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,每组10只.第1天致敏:空白组给予生理盐水1ml腹腔注射致敏,而模型组给予1mL造模液(含V级卵清蛋白100 mg,氢氧化铝100 mg和灭活百日咳杆菌6×109个)腹腔注射致敏;第15天开始激发:将两组大鼠分别置于相同大小的雾化箱内,空白组给予生理盐水6 ml雾化激发,模型组给予5%的 V级卵清蛋白溶液6 ml雾化激发,每天激发一次,每次激发30 min,连续激发10天后处死大鼠,并采集相应标本.结果空白组大鼠激发后没有特殊异常表现,而模型组大鼠每次激发后出现烦躁不安、呼吸加深、加快,点头呼吸,咳嗽,闻及哮鸣音,呈哮喘样、口周发绀、反应迟钝等表现;空白组大鼠肺泡灌洗液和血液中嗜酸性粒细胞数量正常,而模型组大鼠出现相应增加;病理切片显示空白组肺组织和气道壁嗜酸性粒细胞浸润较少,而模型组嗜酸性粒细胞浸润相应地增多.结论卵清蛋白特异性致敏能成功构建大鼠支气管哮喘模型.%Objective To establish the bronchial asthma model in Wistar rats sensitized by subcutaneous injection oi ovalbumin ( OVA). Methods 20 Wistar rats were randomly and evenly divided into the normal group and the model group. On the first day, the normal group was sensitized by intraperitoneally injected 1 ml oi normal saline, and the model group was treated with 1 ml oi sensitization liquid which contained 100 mg of OVA ( Grade V ), 100 mg oi aluminum hydroxide and 6 × 109 strains oi inactivated bordetell a pertussis. From the 15th day, the normal group was treated with 6 ml oi normal saline aerosol inhalation once a day, 30min a time for 10 days, and the model group wastreated with 6 ml of OVA (5% , V Grade ) with the same method as above mentioned. Then all rats were killed to collect samples. Results The rats in the normal group behaved normally and the number oi eosinophils was also normal in their blood and their broncho alveolar lavage fluid ( BALF ) and on pathological section oi their lung tissue. Instead, the rats in the model group showed dysphoria, breathing deeply and quickly, nod breathing, cough, wheezing, oral cyanosis, slow response and so on. The number oi eosinophils increased abnormally in the model group. Conclusion The bronchial asthma model in Wistar rats can be successiully established by the intraperitoneal injection oi ovalbumin ( OVA ) and aerosol inhalation oi sensitization liquid.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2013(018)007【总页数】3页(P1167-1169)【关键词】支气管哮喘;卵清蛋白;动物模型【作者】刘贵颖;刘文彬;张慧琪;朱振刚;刘?n;刘超武;常力;狄冠麟;田常宏;窦迎婷【作者单位】300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科【正文语种】中文哮喘动物模型可选择猫、狗、猪、羊、牛、猴、鼠等动物[1]，但鼠类仍然是比较经济实用的动物模型[2]，其中卵清蛋白致敏诱导的鼠类哮喘动物模型属于经典的常用哮喘模型，在鼠类动物的选择上小鼠和豚鼠比较普遍，近年来大鼠的选择越来越多，国外常选择BN大鼠、Fisher344大鼠，国内常采用SD大鼠和Wistar大鼠[3]。
盐析法快速分离鸡蛋清卵白蛋白的初步研究
盐析法快速分离鸡蛋清卵白蛋白的初步研究标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]盐析法快速分离鸡蛋清卵白蛋白2摘要：鸡蛋清原液用pH 的Tris-HCl缓冲液稀释5倍，4℃下静置至少 6 h，采用30%～80%不同饱和度的硫酸铵分离卵白蛋白，采用Bradford法测定盐析后蛋白含量，SDS-PAGE检测其纯度，结果表明，60%饱和度的硫酸铵分离鸡蛋清卵白蛋白效果较好。
关键词：盐析法；鸡蛋清；卵白蛋白鸡蛋中含有丰富的生命必需元素，营养价值较高。
随着对鸡蛋生理生化活性研究的不断深入，对鸡蛋的利用逐渐超越简单的初加工阶段，趋向于开发具有较高附加值的生理活性物质[1-2]。
蛋清是一种以水为分散介质，以蛋白质为分散相的典型胶体物质，鸡蛋清中的蛋白质含量约为总量的11%，除不溶性的卵黏蛋白外，均为可溶性蛋白质。
卵白蛋白、卵铁传递蛋白和溶菌酶是其中3种主要的生物活性蛋白质。
卵白蛋白是蛋清中主要的活性蛋白，约占蛋清蛋白质含量的54%。
卵白蛋白具有许多功能特性[3]，例如，卵白蛋白对胰蛋白酶有强烈抑制作用，能部分抑制枯草杆菌蛋白酶活性[4]；Fujita用胃蛋白酶水解卵白蛋白，并用RP-HPLC分离出具有血管舒张活性的物质OA358-365[5]；Davalos和Xu等研究发现，卵白蛋白酶降解物具有强抗氧化活性的多肽[6-7]。
卵白蛋白是生物化学中一种重要的参考蛋白质，包含所有的必需氨基酸，而且比例合理。
高度纯化和结晶的卵白蛋白可以作为载体、稳定剂、封阻剂或标准物等，也可作为营养添加剂应用于食品工业。
虽然许多学者对卵白蛋白进行了大量研究，但对其生物学特性和功能的了解仍不够全面，本文采用硫酸铵盐析的方法，对鸡蛋清中的卵白蛋白进行了快速初步分离，为其进一步开发利用提供理论依据。
1 材料与方法材料新鲜鸡蛋，购自超市；卵白蛋白标准品，Sigma公司；硫酸铵分析纯，购自天津市风船化学试剂科技有限公司；透析袋，Amersham Bioscicnccs(SF)Corp。
实验五 鸡蛋清中卵类粘蛋白分离纯化及活性测定
实验五鸡蛋清中卵类粘蛋白分离纯化及活性测定一、实验目的和要求1）设计从鸡蛋清中分离纯化卵类粘蛋白的试验方案。
2）设计从鸡蛋清中分离纯化卵类粘蛋白的试验操作条件。
3）了解离子交换层析系统中四大组成部分和实验主要影响因素。
4）掌握熟离子交换层析层析仪的使用方法和注意事项。
5）学会凝胶预处理和装柱、平衡、洗脱的方法。
二、器材和试剂1．实验器材：层析系统LH-2，（包括自动部分收集器，紫外检测仪，记录仪，蠕动泵，梯度混合器）6套；高速离心机；布氏漏斗；烧杯500ml,100ml，各16个；移液管1、2、5ml, 各16个；量筒50ml,100ml，各16个；真空干燥器 4个；滴管， 16个；滤纸φ120， 1盒；2．实验试剂：(1)丙酮；(2)1％，pHl.15的三氯乙酸：将称取的三氯乙酸置烧杯内，加入2／3总体积的蒸馏水溶解，用6mol／L氯氧化钠调至约pHl.15，静置约1h，然后在pH计上校正至pH 1.15，最后补充水到所配体积；(3)0.02 mol／L,pH6.5，磷酸盐缓冲液；(4)0.5mol／L 氯化钠—0.5mol／L氢氧化钠溶液；(5)0．5mol／L盐酸溶液；(6)0.3mol/L氯化钠—0.02mol ／L磷酸盐缓冲液，pH6.5；(7)底物缓冲液：0.05mol／L，Tris-HCl缓冲液，pH8.0，内含2.22mol／L的氯化钙；(8)2mmol／1,BAEE底物：用底物缓冲液配制；(9)lmg／mL胰蛋白酶溶液：用0.001 mol／L盐酸配制；(10)DEAE-纤维素粉(DE-32)；(11)SphadexG-25；（12）鸡蛋 30个；（13）1％硝酸银三、实验原理1．蛋清中蛋白质结构组成为：卵清蛋白、卵转铁蛋白、卵类粘蛋白、卵粘蛋白、溶菌酶、G2、G3球蛋白、卵抑制素、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、蛋白抑制剂、抗生物素蛋白。
2．鸡卵类粘蛋白(chickenovomucoid，CHOM)的性质:鸡卵类黏蛋白(chickenovomucoid，CHOM)是由鸡卵清中制得的一种糖蛋白，可强烈地抑制胰蛋白酶，对枯草芽孢杆菌蛋白酶也有一定程度的抑制作用，但对胰凝乳蛋白酶无抑制作用，对人的胰蛋白酶也无明显的抑制作用。
卵粘蛋白分离实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习卵粘蛋白的提取方法。
2. 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离卵粘蛋白。
3. 分析卵粘蛋白的分子量和纯度。
二、实验原理卵粘蛋白是鸟类蛋壳膜中的一种主要蛋白，具有高度的生物学活性。
聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是一种常用的分离蛋白质的方法，其原理是基于蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率与其分子量成正比。
三、实验材料1. 实验动物：鸡2. 主要试剂：聚丙烯酰胺凝胶、十二烷基硫酸钠（SDS）、考马斯亮蓝G-250、Tris-HCl缓冲液、甘油、甲醇等3. 仪器：电泳仪、凝胶成像系统、显微镜等四、实验方法1. 卵粘蛋白提取（1）取新鲜鸡蛋，去壳取卵白。
（2）加入适量的Tris-HCl缓冲液，用玻璃棒搅拌，使卵白充分溶解。
（3）加入适量的SDS和β-巯基乙醇，搅拌混匀。
（4）加入适量的甘油，搅拌均匀。
（5）加入适量的甲醇，搅拌均匀。
（6）超声处理，使卵粘蛋白充分溶解。
2. 凝胶制备（1）配制聚丙烯酰胺凝胶，加入适量的SDS、甘油、β-巯基乙醇等试剂。
（2）将凝胶灌入模具中，插入梳子，静置凝固。
（3）取出梳子，将凝胶放入电泳槽中。
3. 电泳（1）将提取的卵粘蛋白样品加入样品缓冲液，煮沸变性。
（2）将样品加到凝胶孔中，加入适量的电极缓冲液。
（3）接通电源，进行电泳。
（4）电泳结束后，关闭电源，取出凝胶。
4. 染色与观察（1）将凝胶放入考马斯亮蓝G-250染液中，染色30min。
（2）取出凝胶，用水冲洗，直至背景色消失。
（3）观察凝胶，记录卵粘蛋白的迁移位置和条带。
五、实验结果与分析1. 卵粘蛋白提取通过实验，成功提取了卵粘蛋白，样品呈现淡黄色，表明卵粘蛋白在溶液中充分溶解。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳结果显示，卵粘蛋白在凝胶中形成了明显的条带，表明卵粘蛋白分子量较小，易于分离。
3. 卵粘蛋白分子量分析根据凝胶中卵粘蛋白条带的迁移位置，结合标准蛋白分子量对照，可计算出卵粘蛋白的分子量约为50kDa。
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❖ 蛋白质分子表面含有带电荷基团，这些基团与水分子有较大 的亲和力，故蛋白质在水溶液中能形成水化膜，增加了蛋白 质水溶液的稳定性。如果在蛋白质溶液中加入大量中性盐， 导致蛋白质分子表面电荷被中和，水化膜被破坏，最终引起 蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出，这就是盐析作用。
管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂
1
2
3
4
5
6
7
8
9 提取液
标准蛋白溶液
/mL
0
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 1.0
蒸馏水/mL
蛋白质浓度 /mg/mL
4.0
3.5
3.0
2.5 2.0 1.5 1.0 0
3.0
0 0.125 0.25 0.375 0.50 0.625 0.75 1.0
实验设计：卵清蛋白
Contents
实验目的 实验原理 实验方法 实验材料及用品 实验步骤 实验注意事项
实验目的
1.掌握提取鸡蛋清中卵清蛋白的基本原理和方法。 2.掌握紫外分光光度计的使用方法及注意事项。 3.掌握用紫外吸收法测定蛋白质活性，了解其他测 定蛋白质活性的方法。
实验原理
❖ 一、沉淀法粗分离蛋白质
❖ 由于各种蛋白质分子表面的极性基团所带电荷数目不同，它 们在蛋白质表面上的分布情况也不一样，因此，将不同蛋白 质盐析出来所需要的盐浓度也各异，盐析法就是通过控制盐 的浓度，使蛋白质混合液中的各个成分分步盐析出来，达到 粗分离蛋白质的目的。
实验原理
❖ 鸡蛋清的主要成分是球蛋白和白蛋白（卵清蛋白），球蛋白可在 半饱和硫酸铵溶液中析出，而卵清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才 能析出。
A280
实验步骤
（二）蛋白提取液中蛋白质含量测定 1、提取液分别稀释1倍、10倍、20倍后，取待测蛋白质 溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出经稀释的待测 蛋白质的浓度。 排除干扰：将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm处分别测出A值，然后利用280nm及260nm下的 吸收差求出蛋白质浓度。 2.计算：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260 （式中A280和A260分别是该溶液在280nm和260nm波长下 测得的光吸收值）
稀释液（以减少共沉淀） 逐滴加入 10mL 饱和硫酸铵溶液 边加边搅拌，饱和度为 50%
静置 10min 3000r/min 离心 15min
上清液 加入硫酸铵固体至不溶解为止
静置 10min 3000r/min 离心 15min
沉淀 10mL 生理盐水（20℃）
溶解 用 0.1mol/L 醋酸调 pH=4.6-4.8（卵清蛋白等电点）
盐析+等电点沉淀法
可用作盐析的中性盐有过硫酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸铵等。其 中应用最广的是硫酸铵，硫酸铵在水中溶解度大，25℃可达4.1mol/L 的浓度，化学性质稳定，溶解度的温度系数变化较小，价廉易得；分 段效果较其他盐好，性质温和，即使浓度很高时也不会影响蛋白质的 生物学活性。等电点沉淀法是利用蛋白质在其等电点时溶解度最小来 分离具有不同等电点蛋白质的方法。
❖ 蛋白质的盐析作用是可逆过程，由盐析获得的蛋白质沉淀，当降 低其盐类浓度时，又能再溶解，因而可初步纯化蛋白质。
❖ 等电点沉淀法是利用蛋白质在其等电点时溶解度最小来分离具有 不同等电点蛋白质的方法。蛋白质是两性电解质，蛋白质分子的 电荷性质和数量因PH不同而变化，蛋白质处于等电点时，其净 电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而趋于聚集沉 淀，因此，在其他条件相同时，它的溶解度达到最低点。
❖ 卵清蛋白的等电点为4.6-4.8，而球蛋白的等电点是5.1。
名称
卵清蛋白 伴清蛋白
蛋清中各种蛋白的理化性质
比例
分子量KDa
52%
45
13%
78
等电点 4.5 6.6
溶菌酶
11%
28
4.0-4.3
卵类粘蛋白 卵粘蛋白
免疫球蛋白
3.5% 1.5%
<1.0%
14 18(α ) 400(β) 不同
10.7 4.7
静置 10min 3000r/min 离心 15min
弃上清液
沉淀（卵清蛋白晶体） 5mL 生理盐水（20℃）
溶解（粗产品于 20℃以下保存）
实验步骤
二.卵清蛋白活性测定：
（一）紫外吸收法测定卵清蛋白的含量 1、标准曲线法 （1）标准曲线的绘制 按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。在280nm波长处分别测定各
不同
实验原理
二、蛋白质的活性测定
❖ 根据蛋白质的物理化学性质，测定蛋白质的方法有凯氏定 氮法、紫外吸收法、Folin-酚法、考马斯亮蓝G-250染色 法等。
❖ 由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双 键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在 280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值 （A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。
其他方法
凯氏定氮法，双缩尿法、Folin－酚、材料： 新鲜鸡蛋 ❖2、试剂： 饱和硫酸铵、硫酸铵结晶、生理盐水、
1mg/mL标准牛血清白蛋白液 ❖ 3、器具：紫外分光光度计、离心机、恒温水浴锅、
冰箱、电子天平
实验步骤
.
一
卵
清 蛋
弃沉淀
白
的 提 弃上清液
取
5mL 鸡蛋清（20℃） 5mL 生理盐水（20℃）
其他方法
（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法：低温有机溶剂沉淀法 （二）根据蛋白质分子大小的差别的分离方法：透析与超滤 、凝胶过 滤法 （三）根据蛋白质带电性质进行分离：电泳法、离子交换层析法
实验方法
❖二.蛋白质活性测定 紫外吸收法
紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、 不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。
❖ 由于核酸在280波长处也有光吸收，对蛋白质的测定有干 扰作用，但核酸的最大吸收峰在260nm处，如同时测定 260nm的光吸收，通过计算可能消除其对蛋白质测定的影 响，因此溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及260nm 的光密度，方可通过计算测得溶液中的蛋白质浓度。
实验方法
❖一.蛋白质提取